SEP TecNM

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TIJUANA

“MORFOLOGÍA COLONIAL Y CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO, MORFOLOGÍA

MICROSCÓPICA, TINCIÓN DIFERENCIALES Y SELECTIVAS, PARÁMETROS DE
LETALIDAD TÉRMICA, VALORES D Y Z, EFECTO DE FACTORES FÍSICOS Y
QUÍMICOS SOBRE EL CRECIMIENTO MICROBIANO, PRUEBAS BIOQUÍMICAS Y
METABÓLICAS Y CULTIVO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS.”

PRÁCTICA V, VI, VII, VIII, IX & X

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

ELABORADO POR:
EQUIPO #5 – GRUPO A

20212664 – HERNÁNDEZ SALAZAR AXXEL

20211732 – MORALES MILLÁN OMAR ADRIÁN

20211734 – PACHECO PLASCENCIA ANGEL RAMÓN

MICROBIOLOGÍA – BQ6A

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA

Docente:
M.C. MARTHA MARGARITA PORRAS LANZAGORTA

Tijuana B.C. Abril-Mayo de 2023

1. OBJETIVOS
 Describir la morfología de una colonia bacteriana en un medio de cultivo sólido,
así como la morfología microscópica y realizar un cultivo en medio líquido.
 Aplicar una técnica de tinción diferencial; la tinción de Gram y conocer la
morfología microscópica de las bacterias, así como su desarrollo en medios
líquidos.
 Aplicar y determinar el efecto térmico sobre la actividad microbiana.
 Determinar la sensibilidad microbiana a diferentes agentes físicos y químicos,
evaluando su crecimiento.
 Realizar una serie de pruebas bioquímicas y características del metabolismo de
la colonia microbiana para determinar ciertas características que nos permitan
orientar la identificación del microorganismo en cuestión.
 Aplicar algunas técnicas básicas para el cultivo de microorganismos
anaerobios.

2. MARCO TEÓRICO
2.1 Cultivos en medio sólido y liquido
Los medios de cultivo microbiológico deben proporcionar condiciones de
crecimiento óptimas para todos los microorganismos o para tipos específicos de
microorganismos. La composición precisa de un medio depende de la especie que
vaya a cultivarse y del objetivo de la aplicación. El pH del medio debe ajustarse en
función de los microorganismos. Los medios de cultivo microbiológico se clasifican
en función de diversos parámetros, como los componentes químicos, su
característica física y su función. (Merck KGaA, 2023).

En los medios sólidos se utiliza agar-agar al 1-7 % o gelatina al 10-20 %

para solidificar el caldo líquido. Los medios sólidos se utilizan para aislar diferentes
microorganismos entre sí, aislar cultivos puros, realizar agares inclinados y agares
para siembra por punción en profundidad. Los medios líquidos no contienen
productos solidificantes. Después de la inoculación y la incubación, las células se
hacen visibles en forma de una pequeña masa o de un enturbiamiento del caldo.
(Merck KGaA, 2023).

2
2.2 Morfología colonial

Las colonias son la manera macroscópica de observar la morfología que

constituye una agrupación de bacterias, que se constituyen en agrupaciones
formadas por la reproducción de las bacterias en un medio en el cual son
incubadas por espacio de 24 horas aproximadamente; algunas bacterias requieren
semanas de incubación para su desarrollo y pueden estar formadas por millones
de bacterias, de esta manera el tamaño de las colonias puede variar desde 0,5 a
4,0 mm de diámetro. La morfología de una colonia dependerá del borde y la forma
en que se eleva sobre el medio de cultivo. (Vargas, 2014).

Una célula de morfología esférica u ovoide se conoce como coco. Una de

forma cilíndrica es un bacilo. Algunos bacilos forman espirales y se llaman
espirilos. Las células de algunas procariotas se unen en grupos tras la división
celular y a menudo forman disposiciones características. Por ejemplo, algunos
cocos forman cadenas largas (como la bacteria Streptococcus), otros se disponen
formando cubos tridimensionales (Sarcina), mientras que otros se agrupan en
racimos (Staphylococcus). (Vargas, 2014).

2.3 Tinciones diferenciales

2.3.1.1 Tinción de Gram
La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar donde
se sospecha una infección, como la garganta, los pulmones, los genitales o las
lesiones en la piel. Las tinciones de Gram también se pueden usar para detectar
bacterias en ciertos fluidos corporales, como la sangre o la orina. (Medline plus,
2022)

La tinción de Gram es de color violeta. Cuando se combina con las

bacterias en una muestra, la tinción seguirá siendo violeta dentro de la bacteria
(grampositiva) o se tornará rosa (gramnegativa). Los ejemplos de bacterias
grampositivas incluyen Streptococcus y Staphylococcus aureus, así como
bacterias que causan ántrax, difteria y síndrome de shock tóxico. Los ejemplos de
bacterias gramnegativas incluyen Escherichia coli (E. Coli), Salmonella,

3
Hemophilus influenzae, así como muchas bacterias que causan infecciones
urinarias, neumonía o peritonitis. (Medline plus, 2022)

2.3.1.2 Tinción de esporas

La tinción mediante Verde de Malaquita permite detectar la presencia de
microorganismos con esporas. La localización de las esporas, así como la
proporción entre esporas y células vegetativas proporciona información acerca del
microorganismo en estudio. (Cromakit, 2016).

La gruesa pared externa de queratina de la espora es resistente al calor y a

la tinción con diversos colorantes. Para forzar la tinción con el Verde de Malaquita
se utiliza calor. Una vez el colorante ha penetrado en el interior de la espora, se
retira la preparación de la fuente de calor y se elimina el colorante de las células
vegetativas por un simple lavado con agua. La espora retiene el colorante y queda
teñida de color verde. Como colorante de contraste, para la tinción de las células
vegetativas, se utiliza Safranina. (Cromakit, 2016).

4
 3. MATERIAL Y EQUIPO

PRÁCTICA No. 5 MORFOLOGÍA COLONIAL Y CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO

 Asa bacteriológica.  Incubadora.
 Medio de cultivo Agar  3 cajas Petri con colonias
Cuenta Estándar. aisladas.
 Microscopio estereoscopio.  6 tubos inclinados.

PRÁCTICA No. 6 MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA, TINCIONES

DIFERENCIALES Y SELECTIVAS
 3 cultivos bacterianos.  Tinta china.
 3 portaobjetos.  Safranina de Gram.
 Asa bacteriológica.  Aceite de inmersión.
 Mechero.  Cultivo de 24 h. de cada
 Microscopio. una de las colonias
 6 portaobjetos. aisladas de la práctica No.

 Colorante cristal violeta. 3.

 Solución de yodo de Gram.  Colorante verde de

 Solución decolorante malaquita.

(alcohol-acetona).  Puente de tinción metálico.

PRÁCTICA No. 7 PARÁMETROS DE LETALIDAD TÉRMICA Valores D y Z

 Cultivo microbiano.  Baño metabólico a 50, 60,
 Tubos con 7 mL de caldo 70 y 80oC.
BHI.  Autoclave.
 10 tubos de hemólisis  11 cajas Petri con ACE
estériles. (agar cuenta estándar).
 2 pipetas de 1 mL  1 varilla de vidrio acodada.
estériles.  Incubadora a 370C.

5
PRÁCTICA No. 8 EFECTO DE FACTORES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE EL
CRECIMIENTO MICROBIANO
 Tubos con 3 ml de BHI.  Pipetas Pasteur o pipetas de
 Baños metabólicos para 1mL.
incubar a 4 º, 28 º,37 º,55 º y  Discos con antibióticos o
800C. impregnados con
 Pipetas Pasteur. desinfectantes comunes
 Medio de Knop. (cloro, yodo, violeta de

 5 cajas Petri con agar genciana, merthiolate).

nutritivo.  Cajas Petri con agar cuenta

 11 tubos de ensayo con caldo estándar.

nutritivo.  Lámpara de luz ultra violeta.

PRÁCTICA No. 9 PRUEBAS BIOQUÍMICAS

 Papel filtro.  1 caja con agar almidón y 1
 1 tubo con Medio de SIM. caja con almidón Lugol.
 1 tubo con Medio de ECMug.  1 caja con agar Petri film.
 Reactivo de Indol y Oxidasa.  3 portaobjetos.
 1 tubo con Caldo Urea.  Antisuero salmonella.
 1 tubo con Hierro Lisina.  Agua oxigenada al 3%.
 1 caja Petri con agar sangre.  Asa recta.
 Pipeta de 2 mL estériles.

PRÁCTICA No. 10 CULTIVO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

 1 tubo con 3 mL de agua  1 tubo con tres pipetas
destilada estéril. Pasteur.
 2 cajas Petri con agar  Jarra de anaerobiosis.
anaeróbico de Brewer.  Sobres para anaerobiosis.
 3 tubos con ¾ partes de  Incubadora.
caldo tioglicolato.  Muestra de materia fecal.
 Vortex.

6
  Asa esterilizada.
4. METODOLOGÍA

 PRÁCTICA No. 5 MORFOLOGÍA COLONIAL Y CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO.

Morfología colonial.
1. Seleccionar 3 colonias aisladas (obtenidas de la práctica anterior) bajo
condiciones asépticas y marcarlas.
2. Realizarles su morfología colonial.
3. Al determinar la consistencia, resembrar en un tubo con agar cuenta
estándar inclinado. Dos tubos inclinados por colonia.
4. Incubar a 37 oC durante 24 a 48 h.
Cultivo en medio líquido.
1. Con el asa estéril tomar un poco de la colonia bacteriana aislada (sembrar 3
diferentes).
2. Inclinar el tubo con medio líquido.
3. Tocar con el asa la pared del tubo.
4. Incubar los tubos a 37 ºC durante 24 horas en posición vertical.
 PRÁCTICA No. 6 MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA, TINCIONES
DIFERENCIALES Y SELECTIVAS.
Desarrollo en cultivos líquidos:
1. En los cultivos inoculados en medio líquido, determinar el tipo de desarrollo
presentado en cada uno de ellos.
2. Anotar sus resultados en una tabla
PREPARACION DE FROTIS:
Frotis de un medio sólido.
1. Con la ayuda de un plumón realizar un circulo en el centro del portaobjetos
de aproximadamente 1 cm de diámetro.
2. Con un asa estéril colocar una gota de agua en el centro del portaobjetos,
del lado contrario al que se dibujó el circulo.
3. Esterilizar el asa y tomar un poco de la colonia bacteriana, homogeneizarla
con el agua, extendiéndola en el circulo marcado, formando una película
delgada.

7
 4. Dejar secar al aire, cerca del mechero.
5. Por último, se fijará con calor, pasando rápidamente el portaobjetos por
arriba de la flama de 2 a 3 veces. NOTA: ya que este seco, de lo contrario
el procedimiento no será llevado adecuadamente.
Frotis de un medio líquido.
1. Con la ayuda de un plumón realizar un circulo en el centro del portaobjetos
de aproximadamente 1 cm de diámetro.
2. Con un asa estéril, tomar una asada del cultivo líquido y colocarlo en el
centro del portaobjeto.
3. Dejarlo secar al aire.
4. Repetir los pasos 1 y 2, por lo menos 4 o 5 veces colocando una gota sobre
la otra.
5. Fijar con calor, con las mismas especificaciones del frotis en medio sólido,
para este paso.
Tinción diferencial: Tinción de Gram.
1. Utilizar los frotis de sus cultivos puros.
2. Teñir mediante la técnica de Gram que consiste en los siguientes pasos:
a) Colocar el portaobjetos con el frotis sobre el puente de tinción (Frente al
fregadero).
b) Adicionar Cristal violeta sobre el frotis, dejarlo actuar 1 min. Y lavar con
agua.
c) Adicionar Lugol, dejarlo actuar 1 min. Y lavar con agua.
d) Decolorar con Alcohol acetona hasta que se vea transparente el
portaobjetos y lavar con agua.
e) Adicionar Safranina, dejarla actuar 30 seg, y lavar con agua.
f) Importante: Lavar con Agua después de cada paso.
g) Dejar secar al aire, cerca del mechero y observar.
h) Los microorganismos Gram positivos se observan de color morado y los
Gram negativos de color rojo.
Tinción selectiva: Tinción de Esporas.
1. Utilizar un frotis hecho a partir de medio sólido.

8
 2. Teñir mediante la técnica de Sheaffer y Fulton que consiste en los
siguientes pasos:
a) Cubrir el frotis, totalmente, con verde de malaquita y dejarlo actuar
durante 1 min.
b) Calentar la preparación a emisión de vapores durante 5 min. EL
COLORANTE NO DEBE HERVIR NI SECARSE.
c) Lavar la preparación con agua de la llave.
d) Cubrir la preparación con safranina y dejarla actuar 1 min.
e) Lavar la preparación.
f) Dejar secar al aire y observar.
g) Las esporas se observan de color verde y el microorganismo de color
rojo.
Tinción simple: Tinción de Tinta China.
1. Con un asa estéril colocar una gota de agua destilada en el centro del
portaobjetos.
2. Esterilizar el asa y tomar un poco de la colonia bacteriana, homogeneizarla
con el agua, formando una película.
3. Dejar secar bajo el mechero.
4. Fijar con calor, con las mismas condiciones anteriormente descritas en este
reporte.
5. Poner 2 gotas de tinta china en el portaobjetos hasta que se vea un tanto
oscuro.
6. Observar al microscopio.
 PRÁCTICA No. 7 PARÁMETROS DE LETALIDAD TÉRMICA Valores D y Z
1. Bajo las condiciones asépticas adecuadas, tomar inóculo a partir de un
cultivo puro.
2. Resuspender en un tubo con medio de enriquecimiento (BHI), hasta que se
observe turbidez.
3. Homogeneizar perfectamente.
4. Con una pipeta estéril tomar 0.5 mL del medio con inóculo y colocar en un
tubo limpio y estéril.

9
 5. Repetir el mismo procedimiento hasta completar una serie de 10 tubos.
Tiempo de muerte térmica.
1. Rotular los tubos con los siguientes tiempos: 5´, 10´, 15´, 20´, y 30 min,
respectivamente.
2. Colocar los tubos en baño termostático a 70 0C.
3. Retirar uno a uno los tubos con inóculo, dependiendo del tiempo (min.)
indicado.
4. Vaciar cada tubo en cajas Petri que contienen Agar Cuenta Estándar
solidificado.
5. Realizar la dispersión con varilla acodada, en condiciones asépticas.
6. Tapar e invertir todas las cajas, marcarlas e incubar a 37 oC por 24 horas.
7. Contar el crecimiento obtenido en las placas.
Punto de muerte térmica.
1. Rotular los tubos: 500C, 600C, 700C, 800C y 121oC, respectivamente.
2. Colocar los tubos en los distintos baños termostáticos o en la autoclave
dependiendo de la temperatura indicada en cada uno, previamente
marcados.
3. Mantener los tubos a la temperatura indicada durante 10min.
4. Retirar del baño termostático y de la autoclave.
5. Vaciar cada tubo en cajas Petri que contienen Agar Cuenta Estándar
solidificado.
6. Realizar la dispersión con varilla acodada, en condiciones asépticas.
7. Tapar e invertir todas las cajas, incubar a 37oC por 24 horas.
8. Contar el crecimiento obtenido en las placas.

10
 PRÁCTICA No. 8 EFECTO DE FACTORES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE EL
CRECIMIENTO MICROBIANO
Factores Físicos.
 Temperatura.
1. En un tubo con 3 ml de caldo nutritivo, resupender varias asadas de su
cultivo aislado.
2. Inocular con 2 gotas cada uno de los tubos que se incubarán a las
diferentes temperaturas. Marcar cada tubo.
3. Incubar durante 24 horas a las diferentes temperaturas. 4, 28, 37, 55 y
80oC.
4. Registrar el grado de turbidez en cruces, anotando sus resultados en una
tabla.
5. Hacer una gráfica indicando crecimiento y temperatura de cada uno de sus
microorganismos.
 Radiación ultravioleta.
1. Marcar 3 cajas Petri con agar nutritivo de acuerdo a los siguientes tiempos
de exposición: 0, 60 y 180 segundos.
2. Depositar dos gotas de inóculo, bajo condiciones asépticas.
3. Sembrar masivamente con una varilla acodada al microorganismo en las
cajas de Petri.
4. Dejar una caja sin irradiar (es la de 0 seg).
5. Las cajas restantes destaparlas e irradiarlas con luz ultra violeta durante el
tiempo indicado.
6. Tapar las cajas e incubarlas a 37oC durante 24 horas.
Factores Químicos.
 Efecto del pH.
1. En un tubo con 3 ml de caldo nutritivo, resuspender varias asadas del
cultivo de 24 h.
2. Inocular con 2 gotas a cada uno de los tubos con los diferentes pH que se
utilizaran: 3, 5, 7,9 y 11.
3. Incubar a 37ºC por 24 horas.

11
 4. Anotar en una tabla sus resultados, registrando el grado de turbidez en
cruces.
5. Hacer una gráfica para cada uno de sus microorganismos respecto a su
crecimiento en las diferentes concentraciones de pH.
 Antibióticos y desinfectantes.
1. En una caja Petri con agar nutritivo, adicionar cinco gotas de la suspensión
del microorganismo en el centro.
2. Realizar la dispersión con una varilla acodada.
3. Con unas pinzas estériles colocar en la superficie de la caja el multidisco
impregnado con antibióticos, tratando de que quede colocado en el centro
de la misma, presionar suavemente.
4. Después de 15min de haber colocado el disco, invertir la caja y pasar a la
incubadora de 35–370C por 18 a 24Hrs.
5. Observar el crecimiento obtenido en la placa.
6. La medición de los halos de inhibición se hace con una regla, por el fondo
de la caja la cual se ilumina con luz reflejada.
7. En el caso de utilizar discos de papel filtro impregnados con desinfectantes
comunes, colocar los discos de tal manera que estén bien distribuidos en la
caja y que no queden cerca de los extremos de la misma.
8. Seguir los pasos 5 y 6.
9. Todos estos pasos deben seguirse bajo condiciones asépticas.
 PRÁCTICA No. 9 PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Prueba de Indol y Oxidasa
1. Tomar dos tiras de papel filtro.
2. Manteniendo condiciones apropiadas de asepsia y esterilidad, con un asa
tomar inóculo del crecimiento en el tubo de agar inclinado.
3. Colocarlo sobre un extremo de ambas tiras de papel.
4. Tomar el reactivo de Indol y presionar fuerte para romper la ampolleta de
vidrio que se encuentra en el interior y dejar libre el contenido.
5. Colocar una gota sobre el extremo de la tira impregnado con el
microorganismo, si vira a color verde, indica prueba (+).

12
 6. En la segunda tira, realizar el mismo procedimiento utilizando la ampolleta
de oxidasa; un vire a color a morado, indica prueba (+).
7. Anotar resultados.
Medio de SIM y Medio de ECMug
PREPARACIÓN
Suspender 30 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos.
Calentar con agitación frecuente y hervir durante un minuto para disolución total.
Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

1. Con un asa recta, tomar una asada del cultivo con la colonia y realizar una
inoculación por picadura, metiendo el asa de forma recta hasta un poco
más de la mitad del medio.
Caldo urea
PREPARACIÓN
1. Suspender 24 g del polvo en 950 ml de agua purificada.
2. Dejar reposar 5 minutos.
3. Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición para disolución total.
4. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C
durante 15 minutos.
5. Enfriar a 50°C y agregar 50 ml de una solución de urea al 40%
previamente esterilizada por filtración o cloroformo.
6. Fraccionar en tubos de ensayo.
7. Con un asa estéril, tomar una asada del cultivo líquido y colocarlo en el
centro del portaobjeto.
Hierro lisina
PREPARACIÓN
Suspender 35 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5 minutos.
Calentar agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución
completa. Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15
minutos. Enfriar y dejar solidificar en posición inclinada.

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 1. Con un asa recta, tomar una asada del cultivo y realizar una inoculación
por picadura.
2. Después de inocular se realizará una estría cruzada.

Agar sangre
PREPARACIÓN
Suspender 40 gramos de medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien
y disolver con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver
completamente. Esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45-
50 ºC y añadir asépticamente 5 mL de sangre desfibrilada esterilizada,
homogenizar y verter en placas de Petri.
1. Con un asa estéril, tomar una asada del cultivo y realizar una estría
abierta.
Agar Petrifilm
1. Con un asa estéril, tomar una asada del cultivo y colocarlo en un tubo de
ensayo con agua.
2. Con una pipeta, cargar 1 mL de agua del tubo de ensayo y descargar en la
caja Petri film.
3. Se toma un aplicador Petri film y se aplasta en el centro de la caja para
extender el inoculo.
Agar almidón y almidón Lugol
PREPARACIÓN
1. Con un asa estéril, tomar una asada del cultivo y realizar una estría
abierta.
Antisuero Salmonella
1. Con un asa estéril se agregan 2 gotas del cultivo liquido en un
portaobjetos una será el testigo.
2. Se le agrega a una de las gotas el antisuero y mezclar.
3. Anotar resultados, en caso de ser salmonella se formará una aglutinación.
Catalasa

14
 1. Con un asa estéril se agregan 2 gotas del cultivo liquido en un
portaobjetos una será el testigo.
2. Se agrega una gota de agua oxigenada al 3%.
3. Por último, anotar resultados, si se observan burbujas es debido a que la
bacteria presenta catalasa.
 PRÁCTICA No. 10 CULTIVO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS
1. Tomar 1g de materia fecal o de suelo.
2. Depositarlo en el tubo con 3mL de H2O destilada estéril.
3. Homogeneizar.
4. Hervir durante 5 min.
Cultivo en medio sólido
1. Con el asa esterilizada tomar un inóculo de la muestra previamente hervida.
2. Sembrar por estría cruzada en las cajas con medio de Brewer.
3. Rotular las cajas marcado una para anaerobiosis y la otra para aerobiosis.
4. Realizar tinción de Gram para condiciones de anaerobiosis y otra para
aerobiosis.
5. Anotar resultados.
6. Incubar una de las cajas en condiciones aeróbicas.
7. La segunda caja depositarla en una jarra de anaerobios y cerrar
perfectamente.
8. Incubar ambos cultivos a 37o C durante 48 horas.
Cultivo en medio líquido
1. Con una pipeta Pasteur tomar un inóculo de la muestra hervida.
2. Depositar 2 gotas en el fondo de un tubo conteniendo caldo tioglicolato.
3. No agitar los tubos
4. Hacer lo mismo con los cultivos proporcionados, todo el procedimiento bajo
condiciones asépticas.
5. Colocarlos en una gradilla e incubar a 37 oC durante 48 horas.

15
 5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Para la detección del microrganismo con el que trabajamos se realizaron
varias prácticas y pruebas que se detallarán a continuación. En primer lugar, se
tomaron 3 colonias de la práctica antes realizada #4 “Cultivo puro y aislamiento de
bacterias aerobias”.

PRÁCTICA No. 5: MORFOLOGÍA COLONIAL Y CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO

La tabla contiene las características y morfología macroscópica de las
colonias que se seleccionaron. Cada alumno seleccionó una colonia y la sembró
como se describe en la metodología.

Característ
Colonia 1 Colonia 2 Colonia 3
ica
Tamaño 5 mm 9 mm 4 mm

Color/fermenta Fermenta Amarillo Blanca

Forma Circular Circular Circular

Elevación Convexa Convexa Plana

Borde Entera Entera Entera

Superficie Lisa Lisa Lisa

Aspecto Húmeda Húmeda Húmeda

Transmisión de
Opaca Opaca Traslucida
la luz
Consistencia Blanda Blanda Blanda
Tabla 1. Morfología colonial macroscópica.

La colonia 1 se tomó de un cultivo en agar EMB (Estría cruzada) por lo que,

en el apartado de color, se sustituye con la característica de fermentación, la cual
indica la capacidad del microorganismo de fermentar la fuente de carbono

16
(lactosa) que se le está proporcionando. La colonia 2 y 3 se tomaron de distintos
cultivos en agar cuenta estándar (Vaciado en caja).

Después de registrar la morfología macroscópica colonial, se realizaron los

cultivos bacterianos en medios inclinados que contenían medio de cultivo Agar
Cuenta Estándar y también se realizó el cultivo en medio líquido donde el medio
de cultivo era BHI ,en ambos casos se inocularon las distintas colonias y posterior
a ello, se incubó a 37°C por 48 hrs aproximadamente, previamente marcadas para
poder distinguirlas.

Pasado el tiempo de incubación se observaron los resultados donde se

visualizó el crecimiento bacteriano en medios sólidos inclinados y medios líquidos,
donde en el caso de estos últimos se podía ver cierta turbidez en el medio de
cultivo, lo que indica que hubo crecimiento bacteriano, donde en la siguiente tabla
se registró el tipo de desarrollo que podían tener (anillado, membranoso,
peliculado, floculento).

Tipo de Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

desarrollo
Turbio Turbio Turbio

Tabla 2. Desarrollo que presentó el microorganismo cultivado en medio líquido caldo BHI.

PRÁCTICA No. 6: MORFOLOGÍA MICROSCÓPICA, TINCIONES

DIFERENCIALES Y SELECTIVAS

Una vez observado el tipo de desarrollo microbiano en cada caldo, se

tomaron frotis de los medios solidos y líquidos para realizar la morfología colonial
microscópica y tinciones diferenciales y selectivas. En la tabla podemos ver las
distintas tinciones que se hicieron a cada una de las colonias y su resultado:

17
 Tinción Colonia 1 Colonia 2 Colonia 3

Gram Positivo Positivo Positivo

Bacilo Bacilo Bacilo

Tinta china Sin cápsula Sin cápsula Sin cápsula

Esporas ✘ ✔ ✔

Tabla 3. Tinciones hechas a los frotis de cada colonia.

Las 3 colonias resultaron una tinción positiva en la tinción de Gram, se

vieron fondos claros y al microorganismo de color morado, las 3 colonias
resultaron ser de una población de bacilos sin capsula, donde la primera colonia
no producía esporas, mientras que la colonia 2 y 3, sí.

Fig. 1. tinción de Gram del microrganismo 3 observada bajo el microscopio.

PRÁCTICA No. 7: PARÁMETROS DE LETALIDAD TÉRMICA Valores D y Z

Posterior a lo antes mencionado, se realizó la metodología antes descrita

para determinar los parámetros de letalidad térmica, pero a partir de aquí se
selecciono solo un microorganismo, aquel que presentara un mayor crecimiento, el
cual fue el tubo o colonia 3, de donde se tomó inoculo para resuspender el
microorganismo en un medio de cultivo caldo BHI, a partir de esta muestra se
colocaron 0.5 mL en 10 diferentes tubos de hemólisis estériles.

Parámetros de letalidad térmica - Tiempo

18
Temperatura 5 min 10 min 15 min 20 min 25 min 30 min
70 °C
Incontable Incontable Incontable Incontable Incontable Incontable
Para la determinación del tiempo de muerte térmica se colocaron 5 tubos de
hemólisis con muestra en un baño metabólico de 70°C a tiempos de 5, 10, 15, 20
y 30 minutos, respectivamente. Pasados los distintos tiempos, se vaciaron las
muestras que contenían los tubos de hemólisis en cajas Petri con agar cuenta
estándar solidificado y se llevaron a incubación por un periodo de 24 hrs a 37°C.
Los resultados se muestran a continuación:

Tabla 4. Tiempo de muerte térmica.

Parámetros de letalidad térmica - Punto

Tiempo 50°C 60°C 70°C 80°C 121°C
10 min Incontable Incontable Incontable Incontable Incontable
En cuanto al punto de muerte térmica los otros 5 tubos de hemólisis
restantes se colocaron en baño metabólico durante 10 minutos a las temperaturas
de 50, 60, 70, 80 y 121°C, respectivamente. Para el caso de 121°C se utilizó el
autoclave. Pasado el tiempo, se vaciaron las muestras que contenían los tubos de
hemólisis en cajas Petri con agar cuenta estándar solidificado y se llevaron a
incubación por un periodo de 24 hrs a 37°C. Se muestran a continuación los
resultados de crecimiento:

Tabla 5. Punto de muerte térmica.

19
 Fig. 2. Cajas Petri con el cultivo bacteriano que se sometió
a las pruebas térmicas para determinar su punto y tiempo
de muerte por efecto de la temperatura.

Tal y como está reportado, las colonias fueron incontables a pesar de que
se hayan sometido a distintas condiciones de tiempo-temperatura, esto nos deja
en manifiesto que el microorganismo de la colonia 3 es resistente a altas
temperaturas aun en periodos extendidos de tiempo. Por esta razón no es posible
realizar graficas para determinar el valor D y Z.

PRÁCTICA No. 8: EFECTO DE FACTORES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE EL

CRECIMIENTO MICROBIANO

El microorganismo se sometió a distintas pruebas físicas y químicas para

ver el efecto que estos impactaban en el crecimiento microbiano.

Tabla 6. Efecto de la temperatura

Temperatura Crecimiento Crecimiento microbiano a distintas

temperaturas de incubacion
4°C - 6
5
28°C +
Crecimiento

4
3
37°C ++ 2
1
55°C + 0
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
80°C - Temperatura °C

El microorganismo se cultivó en tubos con caldo nutritivo y se dejó incubado

por 24 hrs a las temperaturas tabuladas. Con los resultados que se registraron
podemos ver que la temperatura optima del crecimiento es de 37°C mientras que
la temperatura mínima y máxima son 28 y 55°C, respectivamente.

20
Tabla 7. Efecto de la luz ultravioleta
Crecimiento microbiano a distin-
Tiempo de tas tiempo de radiacion UV.
Crecimiento
irradiación 3.5
3
2.5
+++

Crecimiento
Testigo (0 seg) Se le 2expuso a radiación UV con
1.5
60 seg ++ 1
una lampara cuadrada en un cuarto
0.5
180 seg + obscuro a 02.5
distintos
3 3.5 tiempos,
4 4.5 5 para
5.5 6 ello
6.5 7 7.5
previamente se hizo una siembra en 3 distintas cajas dondeTíempo
los (Seg)
resultados
obtenidos se reportan arriba. El microorganismo es resistente a la exposición de
radiación UV, sin embargo, si muestra un déficit en cuanto al crecimiento en
relación a mayor tiempo expuesto.

Fig. 3. Cultivos microbianos expuestos a

radiación UV a distintos tiempos. 60, 0 y 180
segundos respectivamente.

pH Crecimiento Crecimiento microbiano a distintos

Tabla 8. Efecto de pH
3 -- pH
6
5 - 5
7 + 21 4
Crecimiento

9 ++ 3

11 +++ 2
 1

0
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
pH

Se tomó inoculo del microorganismo 3 y se resuspendió en 5 tubos distintos

con caldo nutritivo a distintos pH, se llevo a la incubadora por 24 hrs a 37°C. Con
los resultados obtenidos y registrados en la tabla de arriba, podemos ver que el
microrganismo en cuestión es basófilo, es decir, se desarrolla de mejor manera en
medios básicos.

Tabla 9. Efecto de desinfectantes

Halo de
Desinfectante Clasificación
inhibición
Cristal violeta 20 mm Sensible

Yodosan 0 mm Resistente

Scope 12 mm Resistente

Merthiolate 16 mm Intermedio

Plata coloidal 12 mm Resistente

El efecto de desinfectantes hacia el microorganismo seleccionado, se

muestra en la tabla. El microrganismo es resistente a 3 de 5 desinfectantes que se
colocaron en la caja Petri cultivada en agar cuenta estándar, además 1 se clasifica
como intermedio, este desinfectante es el “Merthiolate”, los demás desinfectantes
inhiben el crecimiento del mismo, siendo el cristal violeta el que mostro mayor halo
de inhibición.

Tabla 10. Efecto de antibióticos

Halo de
Clasificaci
Antibiótico inhibici
ón
ón
Ciprofloxacina (CI 5µg) 21 mm Sensible

Penicilina (P 10µg) 12 mm Resistente

22
 Amoxicilina ( AMX 10µg) 22 mm Sensible

Amoxicilina/ácido clavulánico (AC/AMC 20/10µg) 20 mm Sensible

Cotrimoxazol (SXT 25µg) 18 mm Resistente

Cefalexina (CFM 30µg) 25 mm Sensible

Cefazolin (CFZ 30 µg) 18 mm Sensible

Cefuroxima (XM 30µg) 26 mm Sensible

Eritromicina (EM 15µg) 13 mm Resistente

Cloranfenicol (C 30µg) 22 mm Sensible

Tetraciclina (TE 30µg) 26 mm Sensible

Ofloxacina (OF 5µg) 16 mm Sensible

Azitromicina (AZ 15µg) 28 mm Sensible

Piperacilina (PI 100µg) 16 mm Resistente

Para esta prueba se sembró al microorganismo con la técnica de vertido en

placa y dispersión con varilla acodada, al igual que en la prueba de arriba, la caja
Petri tenia agar cuenta estándar como medio de cultivo en el cual se le colocó un
disco que contenía una serie de antibióticos específicos para microorganismos
Gram positivos, dando halos de inhibición mostrados arriba.

23
 Fig. El antibiograma para Gram positivos se analizó
4.
Antimediante esta fuente: (BIO-RAD 2011).
biog
ram Como se observa el microorganismo es
a
delresistente a Penicilina (P 10µg), Cotrimoxazol (SXT
micr
oorg25µg), Eritromicina (EM 15µg), Piperacilina (PI
anis
mo
100µg). Con esta información recabada y la anterior,
en podremos comparar más parámetros para la
cues
tión.identificación del microorganismo.

PRÁCTICA No. 9: PRUEBAS BIOQUÍMICAS

A continuación, se muestran una serie de pruebas metabólicas que se

realizaron al microorganismo en cuestión, que, hasta este punto, sabemos que es
un bacilo Gram positivo, es esporulado, lo que le da resistencia a parámetros de
temperatura, pH, radiación UV y algunos desinfectantes.

En esta tabla, se puede encontrar la discusión del resultado obtenido,

donde se explica y detalla el resultado que se manifiesta.

Además, debajo de esta tabla se especificará la composición de los medios

de cultivo utilizados que son nuevos para nosotros, de donde se pudo respaldar
para la discusión de los resultados, por lo que en cada cuadro no vendrá la
referencia, sino que vendrá en los componentes de los medios de cultivo.

Prueba Resultado Discusión

Antisuero contra No sufrió cambio alguno al momento de agregar el antisuero, por lo que el
Negativo
salmonella microorganismo no pertenece al género Salmonella.
La presencia de burbujas indica que el microorganismo es capaz de
Detección de catalasa Positivo degradar el peróxido de hidrogeno, siendo el oxígeno quien se manifiesta en
forma de gas, formando así la burbuja.
El microorganismo no posee enzimas oxidasas, por lo que no tiene la
Detección de oxidasa Negativo
capacidad de usar el oxígeno en la cadena de transferencia de electrones.

24
 Se le añadió reactivo de Kovacs el cual demuestra la producción de indol
Detección de indol Negativo por bacterias que poseen la enzima triptofanasa, la cual es capaz de
degradar el triptófano a indol.
A pesar de que el medio de cultivo utilizado, estaba caducado, la siembra
Prueba de movilidad por picadura permitió al microorganismo desarrollarse, pero solo en la parte
Inmóvil donde el asa paso, es decir no es móvil. Cabe destacar que el medio debe
en medio SIM ser semisólido, pero por las condiciones en que se encontraba, nos tocó
solidificado.
Con esta prueba se determinaba la descarboxilación de la lisina,
desaminación de la lisina y producción de ácido sulfhídrico. El resultado
Prueba en medio negativo se mostraba con superficie rojiza o violeta-fondo amarillo. Como la
Negativo
Hierro lisina superficie no está rojiza demuestra la incapacidad de desaminación de lisina
y como no hubo ennegrecimiento del medio de cultivo, la producción de
ácido sulfhídrico era negativo también .
Esta prueba se hizo en el medio SIM, donde se debía observar un
Producción de ácido precipitado de color negro indicando que es capaz de utilizar el tiosulfato de
Negativo sodio para generar ácido sulfhídrico, y también se realizó en el medio de
sulfhídrico hierro lisina donde el resultado se consideraba positivo si el medio de cultivo
viraba a un color obscuro, lo cual no fue así.
El color que tomó el medio de cultivo es amarillo, tal cual es al momento de
prepararlo, es decir, no hubo un cambio de color. El manifiesto positivo se
Prueba en caldo urea Negativo
vería de color rosado o rojizo. Como el resultado fue negativo significa que
el microorganismo no hidroliza la urea.

Prueba en agar El microorganismo degrada la hemoglobina y esta degradación libera un

Hemolisis Alpha producto llamado bili-verdina, la cual produce un halo verdoso alrededor de
sangre la siembra, lo que indica que existe una lisis parcial de eritrocitos.

Prueba en Petri film En la caja Petri film no hubo crecimiento alguno, lo que quiere decir que no
Negativo se trata de un coliforme, ya que esta caja contenía medio de cultivo
de coliformes especifico (selectivo) para microorganismos coliformes.
Se le añadió Lugol al medio de cultivo de agar cuenta estándar con almidón,
Prueba degradación de tal forma que cubriera toda la caja Petri, lo que observo fue que no se
Negativo presentaba un halo alrededor de la siembra microbiana, lo que indica un
de almidón resultado negativo; quiere decir que el microorganismo no hidroliza el
almidón.
El resultado positivo se dio ya que el medio de cultivo no estaba en
condiciones óptimas (estaba vencido), el resultado que tuvo que
Prueba en medio presentarse era negativo, ya que este medio es solo selectivo para
Positivo
ECmug coliformes Gram negativos y E. Coli, como se atestiguo en pruebas
anteriores, el microorganismo en cuestión no es un coliforme y es Gram
positivo.
Tabla 11. Pruebas metabólicas realizadas al microorganismo seleccionado

Medio SIM

Medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y

de sulfuro de hidrógeno por los microorganismos. Es útil para diferenciar
miembros de la familia Enterobacteriaceae. Medio de cultivo en el cual la tripteína
y la peptona aportan nutrientes para el desarrollo microbiano. El triptófano es un
aminoácido constituyente de muchas peptonas y particularmente de la tripteína y

25
puede ser metabolizado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso
interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se
combina con el aldehído del reactivo de Ehrlich (Indol Reactivo REF B1550361) o
de Kovac´s, para originar un compuesto de color rojo. A partir del tiosulfato de
sodio los microorganismos pueden generar ácido sulfhídrico que reacciona con el
hierro presente formándose un compuesto de color negro.(Britania, 2021).

Medio Hierro Lisina

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente

Salmonella spp., basado en la descarboxilación y desaminación de la lisina y en la
producción de ácido sulfhídrico. En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de
levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el
hidrato de carbono fermentable y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la
presencia de las enzimas decarboxilasa y desaminasa. El citrato de hierro y
amonio y el tiosulfato de sodio son los indicadores de la producción de ácido
sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH (su color es amarillo
a pH igual o menor a 5.2 y violeta a pH igual o mayor a 6.8) y el agar es el agente
solidificante. Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio y
provocan el viraje del color púrpura al amarillo. El ambiente ácido favorece la
actividad enzimática decarboxilasa y se metaboliza la lisina a cadaverina elevando
el pH del medio de cultivo y tornándolo al color púrpura o violeta. Los
microorganismos fermentadores de glucosa que no tienen actividad lisina
decarboxilasa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al color
amarillo. (Britania Lab, 2021b).

26
Caldo Urea

Medio utilizado para diferenciar microorganismos en base a la actividad

ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que hidrolizan urea, tales como
Proteus spp. otras enterobacterias y estafilococos. En el medio de cultivo, la
tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de
fenol es el indicador de pH. El agar es el agente solidificante. Las bacterias
hidrolizan la urea por medio de la enzima ureasa liberan amoníaco y dióxido de
carbono. Estos productos alcalinizan el medio de cultivo haciendo virar el indicador
rojo de fenol del color amarillo al rojo. (Britania Lab, 2021d)

Agar sangre

La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto

valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante. El agregado de
5-10 % sangre ovina desfibrilada estéril (Britasheep) promueve el desarrollo de
bacterias exigentes en sus requerimientos nutricionales y la adecuada observación
de las reacciones de hemólisis. (Britania Lab, 2021c).

27
 Para este medio de cultivo, se le realizo una flebotomía a un compañero de
la mesa 4, donde la sangre extraída se vacío en el medio de cultivo.

Petri Film

La placa de recuento coliformes de 3M™ Petrifilm™ proporciona resultados

confirmados en solo 24 horas. Esta placa es un medio de cultivo listo para usar
con las muestras que contiene nutrientes Rojo Bilis Violeta (RBV), un agente
gelificante soluble en agua fría y un indicador de tetrazolio que facilita la
enumeración de colonias en muestras de alimentos y bebidas. Estas placas
proporcionan información de recuento total de coliformes con resultados
confirmados en solo 24 horas. (3M, 2015)

La digestión péptica de tejido animal y extracto de levadura sirven como

fuentes de carbono, nitrógeno, vitaminas y otros nutrientes esenciales para el
crecimiento. La lactosa es el carbohidrato fermentable, cuya utilización conduce a
la producción de ácidos. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico. El
medio contiene sales biliares y violeta cristal que actúan como agentes inhibidores
de algunos microorganismos grampositivos, especialmente estafilococos. El rojo
neutro se emplea como indicador de pH. Los microorganismos que fermentan la
lactosa producen colonias de color rosa a rojo que generalmente están rodeadas
por una zona rojiza de bilis precipitada. Los microorganismos que no fermentan la
lactosa dan como resultado colonias incoloras.  (3M, 2015)

Agar Almidón

28
 La molécula del almidón es muy compleja y para su asimilación por las
bacterias, estas deben descomponerla(hidrolizarla) en sustancias más simples y
fácilmente asimilables. Un gran número de bacterias son capaces de elaborar una
enzima amilasa que hidroliza el almidón con formación de maltosa. La maltosa
puede ingresar a la célula para ser utilizada. La enzima amilasa es también una
enzima extracelular, por lo tanto, la demostración de la hidrólisis del almidón
puede hacerse tanto en medio líquido como en medio sólido. (MICROBIOLOGÍA
MÉDICA, 2013)

Medio ECmug

Para la detección rápida de Escherichia coli en agua, alimentos, leche y

otras aplicaciones. Las sales biliares actúan como un agente selectivo que inhibe
las bacterias Gram positivas, los bacilos y los enterococos, pero permite que se
desarrolle E. coli. Las sales de potasio tienen una alta capacidad tamponadora. La
triptosa proporciona los nutrientes para el crecimiento y la lactosa es el
carbohidrato fermentable que aporta carbono y energía. El cloruro sódico
mantiene el equilibrio osmótico. (Britania Lab, 2021a)

Agar anaeróbico de Brewer. (Para práctica 10) .

Agar Anaeróbico se utiliza para el cultivo de microorganismos anaeróbicos.

Las bacterias anaeróbicas no pueden usar oxígeno como un aceptor de electrones
terminal. La peptona de caseína y la peptona de soja proporcionan nitrógeno,
vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. La dextrosa es
el carbohidrato fermentable que proporciona carbono y energía. El tioglicolato
sódico y el formaldehído sulfoxilato sódico actúan como agentes reductores que
29
generan un bajo potencial de oxidación-reducción, asegurando así buenas
condiciones anaeróbicas. El azul de metileno actúa como el indicador redox, el
color azul indica la presencia de oxígeno. (Condalab, 2019)

PRÁCTICA No. 10: CULTIVO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

Las cajas Petri en que se sembró la muestra fecal y que fueron incubadas
en aerobiosis y anaerobiosis ,ambas a 37°C por un periodo de 48 hrs, presentaron
una contaminación de un hongo, se pudo diferenciar el crecimiento microbiano del
microorganismo sacado de la muestra fecal ya que las colonias de dicho hongo
fueron vistas bajo el estereoscopio, donde se pudo observar que la colonia era
filamentosa. Se hizo una comparación a las colonias bacterianas, y estas
presentaban una forma puntiforme y homogénea. Esta contaminación se presento
en cada una de las mesas, incluyendo la caja Testigo, lo que indica que el medio
de cultivo estaba contaminado, pero aun así se pudo realizar la practica donde se
hizo una comparación del crecimiento en ambas condiciones (aéreas y
anaerobias), cultivo en caldo tioglicolato, morfología colonias macroscópica y
tinción de Gram.

El crecimiento bacteriano se presento en ambas condiciones, sin embargo,

existió mayor desarrollo en la caja que se sometió a condiciones anaeróbicas a
comparación de la que se sometió a condiciones aeróbicas. Si bien, el crecimiento
fue extremadamente pequeño, pero si hubo.

A continuación, se presenta una tabla donde podemos ver características

obtenidas en la práctica de laboratorio, de la muestra fecal:

30
 Característ
Muestra fecal
ica
Tamaño Puntiforme

Color Blanca

Forma Puntiforme

Elevación Convexa

Borde Entera

Superficie Lisa

Aspecto Húmeda

Transmisión de
Traslucida
la luz
Consistencia Blanda

Tinción
Discusión
Gram
+ El microorganismo resulto ser Gram
positivo, se miraba un fondo claro con
Esporas coloración del m.o morado con un
halo en el centro, lo que indicaba
+ presencia de endosporas

Tabla 12. Características morfológicas del microorganismo

aislado de la muestra fecal

También se realizaron las lecturas de los resultados del crecimiento en los

tubos con caldo tioglicolato. En esta prueba s trabajo con el microorganismo
aislado que se ha venido trabajando en todo este compendio de prácticas y
también con el de la muestra fecal.

En esta prueba se determino el tipo de crecimiento que presentaban los

microorganismos y con esto saber qué tipo de microorganismo era cada uno de
ellos:

31
 A continuación, se presentan el tipo de microorganismos de acuerdo a su
tolerancia al oxigeno:

Microorganism
Muestra fecal
o3

Anaerobio
Aerotolerante
estricto

Tabla 13. Resultados de los tubos con caldo

tioglicolato

Fig. 5. Crecimiento microbiano Fig. 6. Crecimiento microbiano

en caldo tioglicolato para la en caldo tioglicolato para el
muestra fecal. 32 microorganismo aislado (m.o
#3).
 El microorganismo de la muestra fecal es aerotolerante, lo que indica que
su respiración es anaeróbica, sin embargo, pueden sobrevivir en presencia de
oxígeno. (Fox 2015).

Por otra parte, el microorganismo que hemos estado analizando, mostro

tener una respiración anaeróbica estricta, por lo que el oxigeno es letal para él.
(Fox 2015).

6. CONCLUSIÓNES

A lo largo de las practicas realizadas se concluye que la morfología de un

microorganismo puede variar mucho dependiendo de la naturaleza de este, en
este caso el microorganismo analizado provino de un cultivo solido presentando
diferentes características distintivas.

Por otra parte, el uso de tinciones es de gran ayuda, debido a que nos
permiten realizar la morfología microscópica y así, clasificar las bacterias ya sea
Gram positivo o Gram negativo y a su vez sirven para determinar la forma de la
bacteria, como, por ejemplo, cocos, bacilos, entre otros.

Además, aplicar temperaturas nos son de mucha utilidad para saber los
efectos que las diferentes temperaturas tienen en la bacteria y poder conocer su
resistencia a los cambios de esta.

También, se concluye que las pruebas de efectos químicos son muy útiles
ya que nos permiten conocer las debilidades de la bacteria cultivada y conocer
cómo afectan los antibióticos y los desinfectantes a esta misma, a su vez que nos
permiten conocer qué tipo de químicos tienen efectos inhibidores y cuales no
afectan en lo absoluto.

De igual manera, el utilizar medios de cultivo anaeróbicos y aeróbicos nos

hizo capaces de comprender el tipo de bacteria que cultivamos, en este caso es
una bacteria anaerobia estricta, esto nos es de utilidad porque nos permite

33
determinar ciertas propiedades que nos harán más sencillo su cultivo en
situaciones posteriores.

Mediante todas las series de pruebas, se compilo la información y se trató de

clasificar al microorganismo lo mas fiel posible, hubo que hacer muchas más
pruebas para decir con mayor certeza que microorganismo es, sin embargo,
tenemos suficientes datos para concluir algo.

Recordemos que el microorganismo con el que trabajamos es un bacilo

Gram positivo anaerobio esporulado, resistente a altas temperaturas, además es
resistente a los antibióticos penicilina, cotrimoxazol, eritromicina y
piperacilina, a los desinfectantes yodosan, scope y plata coloidal. Además, su
crecimiento optimo es a las condiciones de 37°C y pH de 11, puede resistir a la
exposición de radiación UV. Presenta características generales que se mencionan
a continuación: Salmonela negativo; catalasa positiva; oxidasa, indol y almidón,
negativo, es inmóvil aparentemente, ya que como el medio estaba vencido, no es
tan certero el resultado observado, no produce acido sulfhídrico, solo por
mencionar algunas pruebas ya reportadas en este documento.

En base a esa información se discutió y encontró que el microorganismo

puede tratarse del genero Clostridum. Los Clostridium son bacilos Gram positivos,
esporulados y anaerobios estrictos. Los patógenos son productores de poderosas
exotoxinas las cuales por sí mismas provocan todos los síntomas y signos de las
infecciones. (Pérez, 2019).

En cuanto a la especie la información detallada, se comparte mayormente

por la especie septicum, por lo que se concluye que el microorganismo se trata de
Clostridum septicum que forma parte de la flora intestinal humana, pero puede ser
detectado también en diferentes ambientes carentes de oxígeno. Bajo condiciones
que le son desfavorables, forma esporas que le permiten sobrevivir a temperaturas
y sequedad extremas, además presenta las características de catalasa positiva y
oxidasa, indol, y almidón negativo (Colaboradores de los proyectos Wikimedia,
2013).

34
 Como anteriormente se comentó es limitada la información para ser preciso
en la identificación, sin embargo, con esta información el microrganismo más fiel a
los datos es Clostridum septicum.

7. ANEXO

7.1 Cuestionario

PRÁCTICA No. 5 MORFOLOGÍA COLONIAL Y CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO

1. Mencione porque es importante determinar la morfología colonial
bacteriana.
R- De esta forma se pueden conocer aquellas características descriptivas que
ayudan a los microbiólogos a determinar y completar el perfil de una especie
bacteriana cultivable (Cantón y Cercenado sin fecha).
2. Investigue que semejanzas y diferencias tiene la morfología colonial de
una bacteria, una levadura y un hongo.
R- La morfología colonial de las levaduras y bacterias es prácticamente parecida
ya que ambas cuentan con las mismas características, (tamaño, elevación,
aspecto, solo cambia el tamaño de la levadura ya que es más pequeña.
En cambio, en la morfología del hongo solo cuenta con las características de
aspecto, superficie, color y pigmento difusible al medio. (Flores Tatiana y Vargas
Alvin sin fecha).
PRÁCTICA No. 7 PARÁMETROS DE LETALIDAD TÉRMICA Valores D y Z
1. Explicar brevemente que es el valor D.
R- Es el tiempo necesario para destruir el 90% de la población microbiana de un
determinado microorganismo a una temperatura dada (botulinum –
Alimentologia, 2020).
2. Explique brevemente que es el valor Z.
R- Es la subida o el descenso de la temperatura que permite aumentar o reducir
en un 90 % los microorganismos, sobre un objeto determinado en un tiempo
concreto. (botulinum – Alimentologia, 2020).

35
PRÁCTICA No. 8 EFECTO DE FACTORES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE EL
CRECIMIENTO MICROBIANO
1. Haga una discusión de los resultados obtenidos con las diferentes
temperaturas y determine las temperaturas cardinales para su
microorganismo.
R- La temperatura mínima sería de 280C, la óptima de 370C y la máxima de 550C
2. Investigue y dé ejemplos del efecto y uso de las temperaturas sobre
los microorganismos.
R- Cuando asciende la temperatura por encima de los 50ºC, se dificulta el
desarrollo de microorganismos y por encima de los 65ºC la mayoría de los
gérmenes patógenos comienzan a disminuir. A los 100ºC, la mayoría de los
gérmenes patógenos no pueden subsistir durante más de 1 o 2 minutos.
(Nuttralia, s.f).
3. Diga que efecto tiene la luz ultravioleta sobre los microorganismos y
determine qué efecto tuvo en su cultivo en base a los tiempos de
exposición utilizados.
R- La radiación UV proporciona una inactivación rápida y eficiente de los
microorganismos mediante un proceso físico. Cuando las bacterias, los virus y
los protozoos se exponen a las longitudes de onda germicidas de la luz UV, se
vuelven incapaces de reproducirse e infectar. (Trojanuv, s.f).
4. Investigue y dé ejemplos del efecto y uso de los diferentes pH sobre
los microorganismos.
R- Cada microorganismo tiene un pH óptimo al cual debe de estar, en caso de
que existan cambios moderados en el pH que modifican la ionización de los
grupos funcionales de aminoácidos e interrumpen los enlaces de hidrógeno, lo
que a su vez promueve cambios en el plegamiento de la molécula, promoviendo
la desnaturalización y destruyendo la actividad. (Libretexts, 2022).
5. Investigue y explique el mecanismo de acción de tres antibióticos y
tres desinfectantes.

36
 R- La amoxicilina es una penicilina semisintética (antibiótico betalactámico) que
inhibe uno o más enzimas (a menudo referidos como proteínas fijadoras de
penicilinas, PBP) en la ruta biosintética de peptidoglicanos bacterianos que forma
parte integral de un compuesto de la pared celular bacteriana. La inhibición de la
síntesis de peptidoglicanos da pie a una debilitación de la pared celular que es
normalmente seguida por lisis celular y muerte. (Medline plus, s.f).

PRÁCTICA No. 10 CULTIVO DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS

1. Investigar la composición química de los medios de cultivo utilizados
en la práctica.
Caldo tioglicolato Medio de Brewer
Cloruro de sodio 2.5 g Agar bacteriológico 15 g
Peptona de caseína 15.0 g Peptona de caseína 17,5 g
Dextrosa 5.0 g Dextrosa 10 g
L-Cistina 0.5 g L-Cistina 0,4 g
Extracto de levadura 5.0 g Azul de metileno 0,002 g
Tioglicolato de sodio 0.5 g Cloruro sódico 2,5 g
(Lifeder, s.f). Tioglicolato de sodio 2 g
Peptona de soya 2,5 g
Sulfoxilato formaldehido de sodio 1g
(1515medrp: Medios para favorecer
el cultivo de bacterias anaerobias y
microaerofilas, s.f).
2. Indicar que función tiene cada uno de los componentes de estos
medios.
Caldo tioglicolato
La peptona caseína es la fuente de nitrógeno, vitaminas y aminoácidos
esenciales para el crecimiento. El extracto de levadura es una fuente de
vitaminas, especialmente del grupo B. La L-cistina y el tioglicolato de sodio
actúan como agentes reductores dando un bajo potencial en la tensión de
oxígeno. La dextrosa es el carbohidrato, fuente de energía que permite un

37
 crecimiento rápido y abundante, el cloruro de sodio mantiene el equilibrio
osmótico. (Lifeder, s.f).
Medio de Brewer
La peptona de caseína y la peptona de soja proporcionan nitrógeno,
vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. La
dextrosa es el carbohidrato fermentable que proporciona carbono y energía.
El tioglicolato sódico y el formaldehído sulfoxilato sódico actúan como
agentes reductores que generan un bajo potencial de oxidación-reducción,
asegurando así buenas condiciones anaeróbicas. El azul de metileno actúa
como el indicador redox, el color azul indica la presencia de oxígeno.
(1515medrp: Medios para favorecer el cultivo de bacterias anaerobias y
microaerofilas, s.f).
3. Explicar el funcionamiento de la jarra de anaerobiosis.
R- Las jarras para anaerobiosis consisten en una jarra con una tapa que
cierra herméticamente. La atmósfera anaerobia puede lograrse por dos
métodos diferentes. El más sencillo utiliza un sobre comercial generador de
hidrógeno y CO2 que es activado. El H2 se combina con el O2 del aire para
formar agua, generando la anaerobiosis. El segundo método consiste en la
extracción del aire contenido en la jarra haciendo vacío y sustituyendo el
mismo por otro gas libre de O 2 como el nitrógeno. Se utiliza como indicador
de anaerobiosis una tira de papel impregnada en azul de metileno
introducida en la jarra junto al material a estudiar. (JARRA DE
ANAEROBIOSIS – Quios, s.f).

38
 8. REFERENCIAS

 Merck KGaA. (2023). Preparación de los medios de cultivo microbiológico.

MERCK. https://www.sigmaaldrich.com/MX/es/applications/microbiological-
testing/microbial-culture-media-preparation.
 Vargas, T. (2014). MORFOLOGIA BACTERIANA. E-UAEM.
http://metabase.uaem.mx/bitstream/handle/123456789/1466/280_2.pdf?
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