PRÁCTICA DE LABORATORIO - Ciclo Celular en Cebolla

PRÁCTICA DE LABORATORIO – BIOLOGÍA CELULAR
OBSERVACIÓN DE LAS FASES MITÓTICAS EN RAICES DE CEBOLLA
Temas a desarrollar: Función celular y ciclo celular.

Objetivos específicos: Al finalizar el ejercicio el estudiante podrá
- Identificar las etapas de mitosis en laminillas de meristemo radicular de Allium cepa
- Describir los eventos característicos del ciclo celular
- Calcular el índice mitótico de la raíz de cebolla
Materiales y equipos:
- Raíces de cebolla en diferenciación
- Microscopio óptico
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Tubo de ensayo
- Orceína Acética
- Mechero de alcohol
- Pinzas
- Bisturí o escarpelo
Introducción:
La práctica consiste en la observación de células radiculares de cebolla ( Allium cepa) que se
encuentran en estado de división mitótica. En las plantas, esta división se mantiene a lo largo de
toda su vida, en los denominados tejidos meristemáticos, es decir en los tejidos formados por células
indiferenciadas (células meristemáticas) situadas en aquellas partes de la planta en donde se
produce el crecimiento de la misma. Las células meristemáticas, son análogas a las denominadas
células madre de los tejidos animales. Dado que en las células de la cebolla existen pocos
cromosomas, resulta bastante fácil de observar las distintas fases de la mitosis, de ahí que
utilicemos este modelo para estudiar la mitosis.
La mitosis o la división mitótica es una de las diferentes formas que las células tienen para “realizar
copias de si mismas” o de reproducirse. La reproducción celular generalmente consiste en la división
de una célula en dos células hijas.
Este tipo de división es la forma más común de división celular. Se da tanto en células procariotas,
donde recibe el nombre de fisión binaria (Figura 1A), como en eucariotas, donde se denomina
mitosis (Figura 1C). La mayoría de las células procariotas realizan su división por fisión binaria,
mediante la cuál una célula se divide en dos células hijas de igual tamaño y con idéntica dotación
genética.
Figura 1. Diferentes tipos de división celular. A Fisión binaria de células procariotas. OriC, punto de
origen de la replicación del cromosoma bacteriano en E. coli. B División meiótica. C División mitótica,
cada célula da lugar a dos células hijas con el mismo número de cromosomas y de dotación
genética.
En el caso de las células eucariotas el mecanismo habitual para la división celular es la mitosis, en
donde una célula da lugar a dos células hijas de características similares. Esta división celular
requiere la división del material nuclear (cariocinesis) y del citoplasma (citocinesis). Cuando la
división del material genético se hace mediante la división de las dotaciones cromosómicas en dos
mitades que son transportadas a cada célula por un aparato formado por microtúbulos, estamos ante
la división por mitosis.
La mayoría de las células eucariotas, a lo largo de su vida, pueden entrar en división dando lugar a
dos células hijas. Una vez formadas, las células hijas también pueden volver a dividirse, cerrando de
esta manera un ciclo que recibe el nombre de ciclo celular (Figura 2).
Figura 2. El ciclo celular, a lo largo de su existencia, las células eucariotas pueden entrar en división
mitótica (Fase M). Al periodo de tiempo en el que la célula no se está dividiendo se le denomina
interfase, la cual a su vez se encuentra dividida en tres fases bien diferenciadas (Fase G1, Fase S y
Fase G2).
El ciclo celular consiste en una secuencia de eventos en la vida de una célula y se compone de dos
etapas principales: interfase y mitosis. La etapa de no-división de la célula se conoce como Interfase
y se caracteriza por que el núcleo está intacto y es fácilmente visible. En el interior del núcleo
pueden identificarse la cromatina y el nucleolo. Es durante la interfase que las células lleven a cabo
procesos relacionados al mantenimiento de su homeostasis. Para que la división celular tenga lugar,
es necesario que las células dupliquen su ADN (Fase S) y que sus cromosomas se separen en dos
dotaciones similares (segregación cromosómica), una para cada célula hija.
La Mitosis, se divide en cuatro fases fácilmente identificables: profase, metafase, anafase y telofase.
Las células que se encuentran en profase temprana se observa, que la red de cromatina comienza a
condensarse para formar los cromosomas. Así mismo, la membrana nuclear no está completa
porque comienza a desaparecer. En la profase tardía ya se ven formados los cromosomas y
desaparece por completo el nucleolo y la membrana nuclear. Se puede observar el uso mitótico
formado. En la Metafase (Figura 3) los cromosomas están bien condensados y se encuentran todos
alineados en el plano ecuatorial. En esta fase se pueden contar los cromosomas, las células de
cebolla tienen 16 cromosomas. En la Anafase, los cromosomas han migrado hacia los polos y ha
desaparecido parte del uso mitótico. En la telofase ya se observan las dos células hijas, el
citoplasma se divide cuando se forma la pared celular, se reorganiza el núcleo y pueden verse la
membrana nuclear y el nucleolo.
Figura 3. Descripción de las diferentes fases de la mitosis.
La palabra mitosis se deriva del griego mitos que significa hilo, y hace referencia al aspecto de
filamentos de los cromosomas, es la fase del ciclo celular más corta y el momento en el que cada
célula va a dividirse en dos células hijas. Por su parte las Fases G1 y G2 son las fases de
preparación para la Fase S, la letra S es la abreviatura de Síntesis; G por su parte lo es de la palabra
Gap (espacio o hendidura) y M de Mitosis.
DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
- Preparación:
El material base para el desarrollo de la práctica son raíces de cebolla en
división constante, por lo que 5 días antes al desarrollo de la práctica se
debe colocar un bulbo de cebolla, tapando la boca de un tarro de boca
ancha, con la base de la cebolla hacia abajo, y en contacto con el
agua durante 5 días. Al cabo de ese tiempo tendremos numerosas
raicillas en condiciones de ser estudiadas.
- En el laboratorio:
1. Con un escarpelo o bisturí, sobre un portaobjetos, cortar cuidadosamente las raíces de
la cebolla que se encuentran en crecimiento, de una medida de alrededor 2 cm, lo que
estamos cortando es una estructura llamada caliptra.
2. Las raíces se colocan en un tubo de ensayo que contiene aproximadamente de 5 a 10
ml de Orceína Acética. Las raíces deben sumergirse dentro del colorante.
Nota: Colocar todas las raíces en un solo tubo de ensayo.
3. Agarrar el tubo de ensayo con pinzas y acercarlo al mechero encendido, empezar a
calentar el tubo, con precaución acercando y alejándolo constantemente del mechero,
SIN QUE EBULLA (si ebulle, las raíces se desintegrarán con la solución y tendremos
sopa de raíz de cebolla).
4. Ahora con unas pinzas, cuidadosamente agarramos una raíz (esta raíz sirve para dos
montajes) y lo colocamos en un porta objetos, identificamos la punta de la raíz y
hacemos un punto en el portaobjetos para reconocer en que extremo ha quedado la
punta de la raíz.
5. Ahora colocamos otro portaobjetos limpio encima del montaje anterior formando una
cruz y aplastamos cuidadosamente haciendo Squash.
6. Separamos las láminas portaobjetos, y agregamos una gota de colorante sobre el
Squash, colocamos una lámina cubreobjetos y observamos al microscopio.
NOTA: Cada estudiante debe tener una muestra para poder realizar la visualización en el
microscopio.
- Análisis:
1. A la hora de visualizar en el microscopio bajo diferentes aumentos, se deben tomar
fotografías de cada una de las fases de la mitosis que se observaron.
2. Al identificar cada una de las fases, describirlas y explicar que ocurre en la célula.
Mencione dos características que distinguen a cada fase.
3. Se determinará el índice mitótico de la siguiente forma:
Selecciona un área del meristemo apical de la raíz. Para calcular el índice mitótico se
debe contar un total de 100 células. Del total de 100 células determinar cuántas se
encuentran en cualquiera de las fases de mitosis y cuántas se encuentran en interfase.
Registrar los resultados en una tabla.
Para calcular el índice mitótico utilizaremos la siguiente fórmula:
Número de células en mitosis
Índice mitótico =
Número total de células
Repetimos el paso anterior en la parte superior de la raíz.
Comparen los resultados entre los montajes realizados en todo el grupo. ¿Qué
conclusión podemos sacar?
¿Existe alguna diferencia en el índice mitótico entre el área del meristemo (extremo
inferior) y la parte superior de la raíz?

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OBSERVACIÓN DE LAS FASES MITÓTICAS EN RAICES DE CEBOLLA

Temas a desarrollar: Función celular y ciclo celular.

Repetimos el paso anterior en la parte superior de la raíz.

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