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    Practica 11 Analisis de Flavonoides Por Cromatografia en Capa Fina

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    Este documento describe un procedimiento de laboratorio para el análisis de flavonoides utilizando cromatografía de capa fina y cromatografía líquida de alta resolución. Se extrajeron los flavonoides de pétalos de Caléndula usando hexano y etanol, y se purificaron mediante particiones sucesivas. Los flavonoides se identificaron y cuantificaron usando HPLC. El objetivo era familiarizar a los estudiantes con métodos de extracción, purificación y análisis cromatográfico de compuestos natural

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    Practica 11 Analisis de Flavonoides Por Cromatografia en Capa Fina

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    Este documento describe un procedimiento de laboratorio para el análisis de flavonoides utilizando cromatografía de capa fina y cromatografía líquida de alta resolución. Se extrajeron los flavonoides de pétalos de Caléndula usando hexano y etanol, y se purificaron mediante particiones sucesivas. Los flavonoides se identificaron y cuantificaron usando HPLC. El objetivo era familiarizar a los estudiantes con métodos de extracción, purificación y análisis cromatográfico de compuestos natural

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    Practica_11_Analisis_de_Flavonoides_por_cromatografia_en_capa_fina

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    Este documento describe un procedimiento de laboratorio para el análisis de flavonoides utilizando cromatografía de capa fina y cromatografía líquida de alta resolución. Se extrajeron los flavonoides de pétalos de Caléndula usando hexano y etanol, y se purificaron mediante particiones sucesivas. Los flavonoides se identificaron y cuantificaron usando HPLC. El objetivo era familiarizar a los estudiantes con métodos de extracción, purificación y análisis cromatográfico de compuestos natural

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    Facultad deCiencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas

    Escuela Profesional deFarmacia y Bioquímica

    FARMACOGNOSIA I

    PRÁCTICA N° 11 ANÁLISIS DE FLAVONOIDES


    POR CROMATROGRAFÍA DE CAPA FINA (CCF)
    Y CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
    PERFORMANCE (HPLC)
    OBJETIVOS

    ➢ Señalar la importancia que ofrece los flavonoides como un recurso de


    colorantes naturales.
    ➢ Familiarizar al estudiante con los diferentes métodos utilizados en extracción
    y purificación de productos naturales y manejar adecuadamente con criterio
    los materiales e instrumentos utilizados en el análisis.
    ➢ Adquirir destrezas preliminares en el manejo de un equipo de HPLC para la
    cuantificación de quercetina y rutina.
    GENERALIDADES
    Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los
    vegetales y que protegen al organismo del daño producido
    por agentes oxidantes, como los rayos ultravioletas, la
    polución ambiental, sustancias químicas presentes en los
    alimentos, etc.

    Estructura de quince carbonos, biogenéticamente


    compuesta por dos unidades de acetato (C6), y una unidad
    de fenilpropano (C6-C3).

    • La estructura contiene benzo.gamma-pirona y un anillo


    fenólico.

    • Los flavonoides están estrechamente relacionados con


    los taninos.
    Una de las fuentes de flavonoides de origen natural son las flores de Caléndula
    Officinalis Linne cuyo nombre común es Marigold que es ampliamente utilizada en
    la cosmética, concentrados (alimento para aves), etc.
    HPLC
    La Cromatografía líquida de alta resolución es la técnica cromatográfíca más avanzada
    (HPLC) y que ha tenido la mayor aplicación en el mundo científico y en la investigación de
    productos naturales. Un equipo de HPLC consta de las siguientes partes básicas:

    1. Reservorios para la fase móvil: desde donde la fase móvil será succionada por la
    bomba de impulsión.
    2. Una bomba de impulsión: de pistones y programable, capaz de mezclar diferentes
    solventes para realizar fases móviles isocráticas o en gradiente. La Bomba de impulsión
    toma los solventes de la fase móvil y los lleva por todo el sistema de HPLC.
    3. Inyector: es el sitio donde se puede introducir una muestra en el Sistema del HPLC. El
    Inyector tiene la capacidad de introducir un volumen exacto de muestra o soluciones
    estándares en el flujo de la fase móvil para poder efectuar el análisis correspondiente.
    4. Fase estacionaria: material insoluble empaquetado en una columna, que permite las
    interacciones con la muestra o los estándares a su paso por la columna e impulsados por la
    fase móvil. La Columna recibe el flujo continuo de la fase móvil y también recibe las
    muestras introducidas por el inyector.
    5. Detector: es un espectrofotómetro de flujo que mide la absorbancia de la fase móvil al
    salir de la columna de la fase estacionaria y por lo tanto puede detectar las sustancias
    separadas que fueron introducidas por el inyector.
    6. Integrador: es un equipo que imprime el cromatograma y calcula las áreas de los picos de
    cada sustancia detectada, para realizar los cálculos correspondientes.

    https://www.youtube.com/watch?v=hkKjfvd71n4
    PROCEDIMIENTO
    EXTRACCIÓN
    El extracto obtenido se evapora con
    calentamiento no superior a los 50°C y se le
    Evaporar a sequedad y suspender
    hacenen particiones sucesivas
    50 mL de agua destilada en con éter etílico,
    forma homogénea
    acetato de etilo y n-butanol
    Caléndula
    10 g. de pétalos Caléndula
    desengrasada

    150 mL de Hexano 150 mL de Etanol 96 °


    2 vueltas 6 vueltas

    Fase orgánica + cloroformo

    acetato de etilo x 3 veces Filtrar el precipitado y el residuo re-


    disolverlo en etanol para las pruebas
    de identificación

    1
    3
    ANÁLISIS CUALITATIVO
    IDENTIFICACIÓN
    Acetato de etilo, ácido acético, ácido fórmico, agua destilada, (100:11: 11: 27)

    1
    5
    IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN

    RESULTADOS Y DISCUSIÓN
    CUESTIONARIO
    1. Escriba un método de obtención de los flavonoides a escala de
    laboratorio diferente al usado.
    2. Indique 2 métodos de análisis para determinar la capacidad
    antioxidante de una planta.
    3. Usando reacciones químicas indique la capacidad antioxidante de
    los flavonoides.
    4. Realice una búsqueda en artículos científicos sobre el resultado
    obtenido en cuando a la identificación de flavonoides en plantas
    medicinales por HPLC

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