PRACTICO CROMATOGRAFIA Terminado

TRABAJO
PRÁCTICO
CROMATOGRAFIA
ALUMNO:
Bogado Jónatan Ariel.-
PROFESORA:
Velázquez Verónica.-
1ER AÑO CRIMINALISTICA

UNIVERSIDAD DE MORON
AÑO
La CROMATOGRAFIA es la técnica 2014físico de separación, basado en las
o método
diferentes velocidades con que se mueven los solutos disueltos en un disolvente llamado
eluente (fase móvil) a través de un medio estacionario o fijo.
Los componentes a separar se distribuyen entre la fase estacionaria y la fase móvil o
fluido que pasa a través o a lo largo de la fase estacionaria.
Según la IUPAC, “La cromatografía es un método usado primariamente para la
SEPARACION DE LOS COMPONENTES DE UNA MUESTRA, en la cual los
componentes se distribuyen en dos fases:
 Una de las cuales es estacionaria
 Mientras la otra se mueve.
La técnica cromatográfica aparece en el año 1850.

El químico F. F. Runge, que trabajaba con tintas, descubre que los cationes orgánicos se
podían separar por migración cuando se colocaba una solución que los contenía sobre
un material poroso como ser el papel.
La cromatografía se basa en un conjunto de técnicas asociadas al principio de retención
selectiva.
Permite separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes.
Posee:
 FASE MOVIL: Consiste en un fluido (gas, liquido o fluido supercrítico)

 FASE ESTACIONARIA: Se trata de un sólido o liquido fijado en un sólido.
Los componentes de la mezcla interaccionan en forma diferente con la fase estacionaria

y con la fase móvil.
Los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van
separando.
CLASIFICACION:
TIPOS DE CROMATOGRAFIA:
T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 1

 CROMATOGRAFIA PLANA: La fase estacionaria se sitúa sobre una placa
plana o sobre un papel.
Las principales técnicas son:
- Cromatografía en papel,
- Cromatografía en capa fina.
 CROMATOGRAFIA EN COLUMNA: La fase estacionaria se sitúa dentro de

una columna.
Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen:
- Cromatografía de líquido,
- Cromatografía de gases,
- Cromatografía de fluidos supercríticos.
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
Tiene como soporte un papel de celulosa.

Es una técnica sencilla y presenta la ventaja de poder utilizar cantidades pequeñas de
muestra (miligramos y microgramos).
Los procesos que se producen son los siguientes:
ADSORCION: Que es un fenómeno de interacción superficial por el cuela tomos, iones
o moléculas son retenidas en la superficie de un material.
ABSORCION: Es un fenómeno de retención que incluye la penetración de una especie
química en todo el volumen del material por lo cual se la considera como un fenómeno
másico y no superficial. Por ejemplo la disolución de una especie en un disolvente.
PASOS:
 FASE ESTACIONARIA: Una tira o circulo de papel de filtro.

 MUESTRA: Se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una
solución de la muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicación.
 FASE MOVIL: (Eluyente) se hace ascender por capilaridad.
Para esto se coloca una porción del papel en contacto con la fase móvil dentro de un
recipiente que la contiene. Después de unos minutos, cuando el disolvente deja de
ascender o ha llegado al borde extremo del papel, se retira el papel y se seca.
Es importante que el recipiente permanezca bien tapada durante el proceso para alcanzar
el equilibrio necesario entre el líquido y el vapor del líquido.
Si el disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio, se deberán
ver manchas de distinto color separadas a lo largo del papel.

Cromatografía en papel de clorofilas
CROMATOGRAFIA CAPA DELGADA (TLC)

Fue originada en el año 1938 por los trabajos de los investigadores Izmailov y
Schraiben, quienes lograron separar mezclas de tinturas farmacéuticas.
En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria se extiende sobre un soporte inerte
(silica).
Stahl estandarizo el método para elaborar capas finas por métodos mecánicos.
Los procesos que se producen son los siguientes:
ADSORCION: Es una adherencia selectiva, con desorciones diferentes, para los
componentes de la mezcla entre la fase solida del adsorbente y la fase liquida del
eluyente.

PARTICION: Es una disolución selectiva, con solubilidades diferentes para los
componentes de una mezcla entre las fases de dos solventes inmiscibles. El soluto se
reparte entre dos fases.
Procesos en cromatografía en capa delgada (TLC)
PLACA
TAMAÑO DEL GRANULO: Debe ser pequeño para que exista una menor distancia
entre ellos. Si el tamaño es grande, el equilibrio adsorción – desorción será lento porque
los sitios activos están lejos por lo que puede generar problemas de difusión, bandas o
ensanchamiento.
ESPESOR: Debe ser parejo. Capa irregular ocasiona recorridos más rápidos en las
zonas delgadas y más lentas en las zonas de mayor espesor.
TEMPERATURA: Debe ser constante porque afecta en la volatilidad y solubilidad.
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
Consiste en la aplicación de una muestra compleja a una columna de cristal.
Contiene una matriz solida porosa que está inmersa en el solvente.
Se bombea una gran cantidad de solvente a través de la columna.
Las diferentes mezclas se van retrasando de manera distinta según sus interacciones con
la matriz.
Se pueden separar de acuerdo a su carga, su hidrofobicidad, su tamaño o su capacidad
de unirse a grupos químicos particulares.
La pureza de las fracciones obtenidas se suele comprobar mediante la electroforesis en
geles de poliacrilamida.

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO
Esta técnica apareció durante la II Guerra Mundial. Tenía la finalidad de separar los
elementos alcalinotérreos y los elementos de transición.
Se realiza sobre matrices que tienen una carga neta.
Carga negativa: intercambio de cationes,
Carga positiva: intercambio de aniones.
La carga matriz de la columna así como la carga de la muestra dependerá del pH del
solvente y de su fuerza iónica.
Se usa en la separación de moléculas grandes (proteínas y ácidos nucleicos).
Cuando las separaciones exigen condiciones químicas fuertes se emplean
intercambiadores iónicos inorgánicos.

Las proteínas se separan según
su carga a un pH determinado.
Por ej. Intercambio catiónico.

su carga a un pH determinado.
Por ej. Intercambio catiónico.
CROMATOGRAFIA DE FILTRACION EN GEL O

EXCLUSION MOLECULAR
La cromatografía de exclusión molecular o de filtración en gel, separa las muestras en
base a su tamaño. La matriz de la columna está formada por un polímero entrecruzado
con poros de tamaños determinados. Las muestras de mayor tamaño migran a lo largo
de la columna con mayor velocidad que las de menor tamaño.
Las de tamaño pequeño entran en los poros y se mueven a lo largo de la columna
lentamente porque tienen que atravesar los laberintos que se encuentran en el interior de
las bolas de polímero en su marcha a lo largo de la columna.

su tamaño.
Hay diferentes tamaños de partícula para un gel:

A menor tamaño, mayor resolución y menor gasto en la columna.
Esta técnica se emplea en la separación de proteínas de alimentos, determinación de
glucosa y fructosa en zumos de fruta, etc.
CROMATOGRAFIA DE AFINIDAD
Permite la separación de mezclas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado

ligando.
Las muestras que se retienen en la columna son aquellas que se unen específicamente a
un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la columna.
Después de que las muestras que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a través de
la columna, la muestra de interés que ha quedado retenida en la columna se eluye (se
libera) mediante el empleo de una solución que contiene bien ligando libre u otro
compuesto que rompa la interacción entre el ligando y la proteína.

Las proteínas se separan en
función de la especificidad de
unión a un ligando.
PERICIA CROMATOGRAFICA
La pericia cromatográfica en cilicagel, se realiza para determinar la identidad de la tinta

de un elemento escritor.
La cromatografía es el método por el cual se utiliza para separar los distintos
componentes de una muestra.
Esta separación se realiza por medio de una corrida denominado “microcapilaridad” es
el proceso que se realiza dentro de la placa denominado “corrido cromatográfico”.
La placa cromatográfica está compuesto por polvo de cilicagel finamente tamizado y
carente de humedad lo que se halla asentada sobre un soporte de vidrio o de polietileno
duro.
La solución está compuesta por metanol, etanol y agua destilada la cual oficia como
solvente de la corrida.
Para fijar la muestra la placa cromatográfica es necesario contar con una solución de
piridina.
Para la extracción de la muestra del soporte necesario contar con un elemento
denominado “sacabocado”.
Para la realización de la corrida es necesario contar con una cuba con tapa para saturar
el soporte y así poder realizar la corrida.
En la placa cromatográfica sector inferior a 1 cm del borde se deberá pasar un trazo fino
de lápiz para colocar la muestra la cual se denomina “línea de siembra” y en la parte

superior de la placa en la tercera parte de la distancia de la línea de siembra se traza otra
línea de lápiz suavemente, la cual se denomina “frente del solvente”.

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TRABAJO

Bogado Jónatan Ariel.-

1ER AÑO CRIMINALISTICA

La técnica cromatográfica aparece en el año 1850.

 FASE MOVIL: Consiste en un fluido (gas, liquido o fluido supercrítico)

Los componentes de la mezcla interaccionan en forma diferente con la fase estacionaria

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 1

 CROMATOGRAFIA EN COLUMNA: La fase estacionaria se sitúa dentro de

Tiene como soporte un papel de celulosa.

 FASE ESTACIONARIA: Una tira o circulo de papel de filtro.

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 2

CROMATOGRAFIA CAPA DELGADA (TLC)

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 3

Procesos en cromatografía en capa delgada (TLC)

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 4

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 5

Las proteínas se separan según

CROMATOGRAFIA DE FILTRACION EN GEL O

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 6

Hay diferentes tamaños de partícula para un gel:

Permite la separación de mezclas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 7

La pericia cromatográfica en cilicagel, se realiza para determinar la identidad de la tinta

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 8

T.P. Química – 1er. Año Criminalística.- Pá gina 9

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