Biotecnología de La Reprod U2 - Procesamiento, Evasado y Almacenado y Conservación de Semen

Métodos de
conservación y dilución
de semen
Ing. M. Sc. Elvis Huamán Calixto

Métodos de conservación de semen
◼ Fresco
◼ Refrigerado
◼ Congelado
2.24
Semen Fresco
Mantener a 30 – 35°C
en baño maría
durante la evaluación
o uso.
3.24
Semen Fresco
.Ventajas:
◼ El semen fresco es más concentrado
◼ La fertilidad incrementa
.Desventajas:
◼ Su tiempo de vida es muy corto
◼ Dificulta su traslado en esta forma, solo
pudiendo ser utilizado en el mismo sitio.
4.24
Semen Refrigerado
◼ Tiene que ser utilizarlo

poco tiempo después de su
colección.
◼ Dependiendo del diluyente,
el semen refrigerado puede
conservarse hasta 24 horas
a 5°C post-dilución.
5.24
Semen Refrigerado
Ventajas:
◼ Permite prolongar la vida espermática y su uso
horas después de colectado.
◼ Es útil para programas de inseminaciones locales.
Desventajas:
◼ En ovinos, la fertilidad del semen desciende a un
ritmo de 10 – 35% por día de almacenaje.
◼ Requiere equipos para mantenerse a 5°C todo el
tiempo
◼ No se recomienda usarlo luego de las 24 h post-
colección.
6.24
Funciones de dilutor
◼ Los dilutores proveen de:
◼ Nutrientes
◼ Poder buffer
◼ Medio isotónico
◼ Protegen contra el shock del frío
◼ Evita e crecimiento de microorganismos

Composición de dilutores de semen
para uso en I.A. vaginal o cervical
Dilutor Tris Dilutor Citrato

Tris (g) 3,634 Citrato de Sodio (g) 2,90
Fructosa (g) 0,50 Fructosa (g) 0,080
Acido Cítrico (g) 1,99
ABD, enrasar a 100 ml ABD, enrasar a 100 ml
Fuente: Evans y Maxwell (1987)
Composición de dilutores de semen
refrigerado para uso en I.A. Cervical o
Vaginal
Dilutor Tris-Fructosa-Yema Dilutor Citrato-Glucosa-Yema
Tris (g) 3,634 Citrato de Sodio (g) 2,37
Fructosa (g) 0,50 Glucosa (g) 0,80
Acido Cítrico (g) 1,99 Yema de Huevo (ml) 20,00
Yema de huevo (ml) 14,00
ABD, enrasar a 100 ml ABD, enrasar a 100 ml
Fuente: Evans y Maxwell (1987)

Nota: Antes de inseminar, calentar el semen diluido en baño maría a 30 – 35 ºC
Dilutores usados en la refrigeración de
semen ovino
◼ Tris – yema (14%)
◼ Citrato – yema (20%)
◼ Leche descremada - glucosa
11.24
Los siguientes son volúmenes de
inseminación recomendados según el tipo
de inseminación artificial (Evans y
Maxwell, 1987):
Para inseminación vaginal 0,30 - 0,50 ml

Para inseminación cervical 0,05 - 0,20
Para inseminación intrauterina 0,05 - 0,10 ml
Número mínimo de espermatozoides mótiles
(millones) por inseminación en diferentes lugares del
tracto reproductivo
__________________________________________________________________
Tipo de semen
Método de inseminación fresco refrigerado congelado
__________________________________________________________________
Inseminación Vagina 300 no efectivo no efectivo
Inseminación Cervical 100 150 180
Inseminación intrauterina, por laparoscopía en dos cuernos uterinos
20 20 20
Dilutor comerciales (Laiciphos IMV—Francia) para trabajar con semen fresco.
Semen Congelado
Ventajas:
◼ Permite conservarse durante varios años.
◼ Permite ser comercializado internacionalmente
Desventajas:
◼ La fertilidad es más baja al descongelado, por lo
que se requiere de uso de técnicas de laparoscopía
para optimizar su uso.
◼ El procedimiento de congelado es una técnica
laboriosa y requiere tiempo.
◼ Es necesario contar con un suministro permanente
de nitrógeno líquido, tanto para congelar como
para conservar. 8.24
Semen Congelado
◼ En esta técnica, el
semen es congelado
a -196°C deteniendo
las reacciones
metabólicas de los
espermatozoides.
◼ Existen dos formas
de congelamiento:
pajillas y en pellets.
7.24
Composición del diluyente
Composición de dilutor para congelamiento de semen.
Dilutor Tris-Glucosa-Yema-Glicerina
Tris (g) 3,634
Glucosa (g) 0,500
Ácido cítrico (g) 1,990
Yema de huevo (ml) 15
Glicerina (ml) 5
Penicilina (UI) 100 000
Estreptomicina (mg) 100
Agua destilada enrasar a 100 ml
Fuente: Evans y Maxwell (1987) y Cueto et al. (1993)

Preparación de los dilutores
◼ Realizar el pesaje de los
ingredientes en balanza
analítica un día antes de
la colección.
◼ Para los dilutores que
contengan yema de
huevo, esta deberá
agregarse el mismo día
de la dilución.
◼ Los huevos a usarse no
deberán tener más de 3
días de puestos.
13.24
Congelación de semen en pellets
Congelación de semen en pellets
Completar el congelamiento sacudiendo los pellets

contenidos en el hielo seco directamente al nitrógeno
líquido (-196 oC).
Southrose 'Wonder-Boy' 011370
VERY HIGHLY RECOMMENDED

Sire: Lorelmo 442
Dam: Southrose Duchess
DOB: January 2002
Price: $40 per dose
Performance Figures:
Test Date Micron S.D. CV % Comfort GFW (kgs) BWt (kgs)
Sept '02 14.2 2.7 19.0 99.9 - 80
June '03 18.4 (PIN) 2.9 15.8 99.6 7.3 (6 mths) 130
Billa Burra
Burra 9.2
Price: $40 per dose

DOB: October 1999
Test Date Feb 2002 Aug 2001 June 2000

Flc Wt . 16.7 Kgs .
Yld . 75% .
F.D. (microns) 17.7 18.0 17.3
S.D. (microns) 2.8 2.8 2.7
CVD 15.8 15.6% 15.6%
CRV . 64°/mm .
C.F. 99.8% 99.7% 99.7%
B.Wt . 126 Kgs .
Southrose Longreach 011358
SHOWS POTENTIAL
Sire: Lorelmo 970442
Dam: Southrose 010012
DOB: January 2002
Price: $30/dose
Test Date Micron S.D. CV % Comfort GFW (kgs) BWt (kgs)
Sept '02 17.1 3.0 17.5 99.6 - -
June '03 20.8 3.4 16.3 99.0 16.0 119

Tasa de preñez de ovejas inseminadas con semen congelado
Tasa de preñez (día,

Inseminadas
Categoría 35)
n n %
Nulíparas
21 15 71,4 a
(Borreguillas)
Pluríparas
(borregas ≥ 1 17 11 64,7 a
parto)
Total 38 26 68,4
Semen congelado de 40 millones de espermatozoides y

20 millones en cada cuerno.
Tasa de preñez de ovejas inseminadas con semen congelado
Con Sin
detección de detección de
n celo n celo
Borrega 981 62,9 843 59,1
Borreguilla 231 54,5 249 48,6
Semen congelado de 50 millones de espermatozoides

Programa de inseminación del programa de Mejoramiento
Genético de Ovinos de raza Churra (1991 a 2000)
Semen congelado de 25 millones de espermatozoides y

12,5 millones en cada cuerno.

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Ing. M. Sc. Elvis Huamán Calixto

◼ Tiene que ser utilizarlo

◼ Los dilutores proveen de:

◼ Protegen contra el shock del frío

◼ Evita e crecimiento de microorganismos

Dilutor Tris Dilutor Citrato

Fuente: Evans y Maxwell (1987)

◼ Tris – yema (14%)

◼ Citrato – yema (20%)

◼ Leche descremada - glucosa

Para inseminación vaginal 0,30 - 0,50 ml

◼ Permite ser comercializado internacionalmente

Fuente: Evans y Maxwell (1987) y Cueto et al. (1993)

Completar el congelamiento sacudiendo los pellets

VERY HIGHLY RECOMMENDED

Test Date Micron S.D. CV % Comfort GFW (kgs) BWt (kgs)

Sept '02 14.2 2.7 19.0 99.9 - 80

Price: $40 per dose

Test Date Feb 2002 Aug 2001 June 2000

Test Date Micron S.D. CV % Comfort GFW (kgs) BWt (kgs)

Sept '02 17.1 3.0 17.5 99.6 - -

June '03 20.8 3.4 16.3 99.0 16.0 119

Tasa de preñez (día,

Semen congelado de 40 millones de espermatozoides y

Semen congelado de 50 millones de espermatozoides

Semen congelado de 25 millones de espermatozoides y

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