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EFECTO DE DIFERENTES LONGITUDES DE ONDA LUMINOSAS

EN LA GERMINACIÓN DE SEMILLAS IN VITRO
Alejandra Gómez Reynoso (sexto semestre en Ingeniería en Biotecnología)1; Yareni Mariana Ramírez Santoyo (sexto
semestre en Ingeniería en Biotecnología)2,*; Victoria Liceaga Sarmiento (sexto semestre en Ingeniería en Biotecnología)3,*;
Alexa Ross García (sexto semestre en Ingeniería en Biotecnología)4, María Jose Rivas Arreola (profesor responsable)1
1Universidad Iberoamericana Puebla, México, [email protected]; 2Universidad Iberoamericana Puebla,

México, [email protected]; 3Universidad Iberoamericana Puebla, México, [email protected];

4Universidad Iberoamericana Puebla, México, [email protected]

Resumen

El cultivo de plantas in vitro es una técnica de propagación que requiere un control de condiciones físicas y químicas
sumamente cuidadas. El objetivo de esta práctica fue determinar la longitud de onda más eficiente en la germinación in vitro
de semillas de Manzanilla (Chamaelum nobile). La iluminación es uno de los principales factores morfogénesis en la
micropropagación. Se preparo una solución de 3% de detergente líquido, se lavaron las semillas envueltas en gasa durante 5
minutos, posteriormente se enjuagaron y se colocaron en una solución de alcohol al 70% por un minuto, y se transfirieron 10
minutos a la solución de cloro, se hizo un enjuague en agua destilada. Con pinzas se colocaron entre 10 y 15 semillas en cada
frasco con medio MS y se sellaron. Se cubrieron 2 frascos con papel celofán verde, dos con papel celofán azul, dos con papel
celofán amarillo, y 6 con papel celofán transparente, de los cuales 3 permanecieron en la luz y 3 en la oscuridad dentro de la
incubadora.
Después de dos semanas en observación 1 semilla en la incubadora germinó y otra en luz natural con papel celofán
transparente. El frasco con luz natural se tiñó de rosa alrededor de la semilla lo que indicó oxidación fenólica.

Palabras Clave: Germinación, longitud de onda, semilla, in vitro, Manzanilla.

Introducción

Las semillas son el principal mecanismo de reproducción

de las plantas fanerógamas, las semillas son constituidas
por un embrión y una reserva de energía como glúcidos,
proteínas y lípidos; ambas partes se encuentran rodeadas
por las cubiertas seminales. Algo verdaderamente
interesante y relevante para el desarrollo de las plantas es
que las semillas no van a germinar hasta que las
condiciones sean favorables, mientras no lo sean se
encontraran en un estado de “reposo” o “dormancia” [1].

La germinación de la semilla se puede definir como una

serie de procesos metabólicos y morfogenéticos que en
conjunto dan como resultado la transformación de un Fig. 1. Germinación epigea con las partes señaladas.
embrión a una plántula que logrará ser capa de valerse por Obtenido de: “Por Semilla,” Propagación Vegetal, 2016.
si misma y poder madurar hasta alcanzar a ser una planta [Online]. Disponible:
adulta. Existe más de un solo tipo de germinación que van https://propagacionvegetal.wordpress.com/por-semilla/.
en relación con el crecimiento de la parte aérea de la [Citado el: 23-Feb-2023].
planta; está la germinación epigea (Fig. 1.) donde el Por otro lado se tiene la germinación hipogea (Fig. 2.)es
hipocótilo se alarga y eleva los cotiledones por encima de aquella donde el hipocótilo no eleva a los cotiledones por
la superficie del suelo, después dichos cotiledones actúan encima del suelo haciendo que estos se mantengan
como órganos fotosintéticos (no son hojas) y finalmente se enterrados, esto sucede debido a que dicho hipocótilo es
da lugar al epicótilo de donde se desarrollaran las primeras demasiado corto o prácticamente nulo, después el
hojas [2]. epicótilo se alarga y apareces las primeras hojas
verdaderas las cuales son los primeros órganos
fotosintetizadores de la planta [2].

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Metodología (Experimentación o Desarrollo de

prototipo)
Los materiales, equipos y/o reactivos que se utilizaron se
presentan de manera de lista en la siguiente:
Materiales:
• 1 Vaso de precipitado de 100ml
• 4 Vasos de precipitado de 100 ml
• 1 Probeta de 150 ml
• 2 Pinzas de disección
• 2 Tijeras de disección
• 2 Mangos de bisturí
• 2 Varillas de vidrio para agitar
• 4 Paquetes de gasas
• 2 Cajas de Petri de vidrio
Fig. 2. Germinación hipogea con las partes señaladas. • Papel celofán de 5 colores (Rojo, Amarillo,
Obtenido de: “Germinación Epígea e hipógea,” Verde, Azul, Blanco)
Agronomía, 2015. [Online]. Available: https://www.xn-- • 1 Marcador indeleble
agronoma-i2a.com/2015/02/germinacion-epigea-e- • 1 Sobre con semillas de manzanilla
hipogea.html. [Citado el: 24-Feb-2023]. • 2 Ligas
Reactivos:
Sea una germinación epigea o hipogea, el desarrollo de la • Frascos de medio de cultivo MS (1X)
semilla cuenta con diferentes fases definidas para facilitar • 500ml de agua destilada
su estudio; dichas fases son histodiferenciación, expansión • Agua corriente (de la llave)
y maduración y desecación. Durante la fase de • 100ml de cloró comercial
histodiferenciación, también llamado período
• Tween 80
embriogénico temprano o inicial, se encuentra una alta
• Alcohol etílico comercial al 96%
tasa de divisiones nucleares y la formación concomitante Equipos:
de paredes celulares; aquí las auxinas y citoquininas son • Campana de flujo laminar
las fitohormonas predominantes. Después durante la fase
de expansión ya no se encuentra división nuclear, pero en El medio de cultivo no fue preparado nuevamente para
cambio se aprecia un crecimiento debido a la elongación esta práctica, sino que se utilizó el preparado durante la
celular, aunque se debe recalcar que en la mayoría de las práctica anterior. Como tal durante la metodología lo
semillas de cereales el endospermo sigue creciendo por primero que se realizó fue preparar una solución al 2% v/v
mitosis y/o elongación; esta fase tiene una presencia de tween 80 y agua de la llave en un vaso de 100ml no
elevada de auxinas. En la última fase, maduración y estéril. Mientras se preparaba la solución también se
prepararon cinco pequeñas bolsas de gasa estéril llenas de
desecación, se estimula la inhibición de una quinasa
aproximadamente 20 semillas de manzanilla de la marca
dependiente de la ciclina que provoca la parálisis del ciclo “ViveroHome”, dichas bolsas se lavaron dentro de la
celular, se ve un descenso del peso fresco de la semilla ya solución de tween y enjuagadas con el chorro de agua de
que se pierde agua y la semilla adquiere una dormición la llave. Acto seguido se llevó todo el material a la
primaria; se detectan niveles elevados de ABA-libre [3]. campana de flujo laminar, dentro de aquí se prepararon dos
soluciones la primera siendo 200ml de una solución de
Una vez explicado el proceso de germinación de la semilla alcohol al 70%, mezclando 60ml de agua destilada estéril
se debe demostrar cómo es que esta se relaciona con la y 140ml de alcohol al 96%; la segunda fueron 200ml de
longitud de onda luminosa. Como un concepto previo, la una solución de cloro comercial al 3%, mezclando 100ml
longitud de onda (𝜆) se define como la a la que se repite la de hipoclorito de sodio con 100ml de agua destilada
forma de la onda. En cuanto a las ondas de radiación estéril. Después las gasas con semillas se colocaron en la
electromagnéticas que forman la luz visible, se tiene que solución de alcohol al 70% por un minuto con agitación
estas van de 380nm, que es luz violeta, a 770nm, que es constante, seguido se transfirieron a la solución de cloro
luz roja [4]. Finalmente, la relación radica en que las comercial al 3% durante 5 minutos con agitación
plantas fotosintetizan dentro del mismo rango de la luz constante, luego se realizaron 3 enjuagues con agua
visible, es decir aproximadamente de 400nm a 700nm, destilada estéril con agitación constante para lograr retirar
especialmente dentro de los rangos de luz azul (430- el exceso de cloro. Posteriormente se sembraron entre 10-
15 semillas de manzanilla sobre el medio de cultivo de los
500nm) y roja (630 a 770nm) y justo como absorben muy
frascos con ayuda de las pinzas. Finalmente se marcaron
poca luz verde esta se ve reflejada [5]. los frascos con la cantidad de semillas, nombre, fecha y

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especie para por último ser cubiertos con plástico 3.33% de las semillas en papel transparente germinaron y
autoadhesivo, su color de celofán correspondiente y 1 sola semilla sin ningún tipo de daño ni contaminación
asegurado con una liga. Se repartieron los frascos entre los (Fig.6).
colores de celofán para que quedaran 2 frascos con celofán
rojo, 2 con verde, 2 con azul, 2 con amarillo y 6 con
transparente. Los frascos con celofán de color se dejaron
en la ventana con exposición a la luz solar junto con 3
transparentes y los 3 transparentes restantes se dejaron en
la sombra dentro de la incubadora.
Resultados y Discusión

El medio MS (Murashige y Skoog) es el medio más

utilizado para el cultivo de plantas in vitro, esto por su alto
contenido de nutrientes esenciales para el desarrollo de los
cultivos. Se observaron los 14 frascos con semillas de
manzanilla que se dejaron en el laboratorio a temperatura
ambiente después de 20 días; de los cuales casi ninguno
logró germinar las semillas.
Según (García-López et al., 2018), el porcentaje total de
germinación de las semillas se calcula con la siguiente
ecuación;
% 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠
𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠 𝑔𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑑𝑎𝑠
= × 100
𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠 𝑠𝑒𝑚𝑏𝑟𝑎𝑑𝑎𝑠
Fig. 1. Germinación de semilla de Manzanilla
Sustituyendo nuestros datos en la fórmula se obtuvo que,
de todas las sembradas en los diferentes frascos, sólo el
2.14% aproximadamente germinó en el periodo se los 20
días, esto teniendo en cuenta que se sembraron alrededor
de 10 semillas por frasco [7].
3
% 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠 = × 100
140
% 𝑑𝑒 𝑔𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑠𝑒𝑚𝑖𝑙𝑙𝑎𝑠 ≈ 2.14%

Según Moreira, et al. (2019), los compuestos fenólicos

individuales influyen significativamente en el desarrollo
de la germinación de semillas, ya que estos inhiben la
actividad de enzimas en la glucólisis y la vía oxidativa del
fosfato pentosa que son primordiales para iniciar el
proceso de germinación. Así mismo, se menciona que la
germinación de las semillas de manzanilla de diversas
especies depende de la época de colección y de su
procedencia [6]. Fig. 2. Germinación de semilla en papel transparente
De los 14 frascos que se utilizaron, en 3 se logró la
germinación. Un frasco de la incubadora germinó una
semilla sin ningún tipo de contaminación, mientras que el
frasco que tiene dos semillas germinadas presenta señales
de un tono rojizo alrededor de las semillas, lo que nos
indica oxidación fenólica, que es causada por la acción de
la enzima polifenol oxidasa que se libera o sintetiza
cuando el tejido sufre alguna lesión. Los frascos cubiertos
con celofán de diferentes colores no presentaron ningún
crecimiento.

El 1.42% de las semillas que se sembraron en el medio MS

germinaron (Fig.1, Fig.2), el 0% de las semillas cubiertas
con celofán de color germinaron (Fig.3, Fig.4, Fig.5), el

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Fig. 3. Semillas en medio MS con papel amarillo

Fig. 6. Semilla germinada en incubadora

Como se puede observar en anteriormente, los frascos

envueltos en papel celofán de color no tuvieron
germinación; sin embargo, se pudo observar en uno de los
cultivos MS envueltos en papel celofán azul una
coloración rosada que corresponde a la oxidación fenólica
y un crecimiento, que por su morfología indica ser una
espora. Mientras que, en los que estaban envueltos en
papel transparente o sin envolver y se mantuvieron en el
laboratorio a temperatura ambiente sí tuvieron una
germinación; únicamente dos semillas de los 6 frascos sin
papel celofán de color germinaron, por lo que se determinó
que la longitud de onda luminosa más eficiente para el
Fig. 4. Semillas en medio MS con papel azul crecimiento de la manzanilla es la luz blanca, está dada por
la luz del sol y está constituida la combinación de ondas
que tienen energías semejantes [5].

Los diferentes colores en la luz afectan en el crecimiento

de las plantas, estos pueden beneficiar o perjudicar su
crecimiento dependiendo de la especie. De acuerdo con
Meisel et al. (2011) la luz azul influye en procesos como
la diferenciación de órganos, en presencia de esta luz la
planta inhibe la elongación del tallo, carece de clorofila y
es incapaz de expandir sus cotiledones; por lo que es
probable que por estas razones no hayan germinado las
semillas en los frascos envueltos con papel azul [8].

Por otro lado, la luz verde o amarilla tiene un efecto mucho

menor en las plantas debido a que este se refleja en ella, de
igual manera, la luz verde se suele utilizar para provocar
ciertas respuestas específicas en la plata[9].
Fig. 5. Semillas en medio MS con papel amarillo
Conclusiones, perspectivas y recomendaciones
La longitud de onda influye de manera significativa en el
desarrollo y germinación de las semillas de manzanilla

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(Chamaelum nobile), después del tiempo indicado se pudo 25/334/1/Técnicas%20Para%20Evaluar%20Germinación

observar que sólo el 2.14% de las semillas germinó en el ,%20Vigor%20y%20Calidad%20Fisiológica%20de%20S
periodo se los 20 días, una de las semillas tiene una emillas%20Sometidas%20a%20Dosis%20de%20Nanopa
elongación larga de la radícula, mientras que el otro rt%C3%ADculas.pdf. [Citado el: 27-Feb-2023].
destaca por observarse las primeras hojas, por tanto, se [8] Meisel, L., Urbina, U., & Pinto, M. E.
puede concluir que la mejor longitud de onda para la “Fotorreceptores y Respuestas de Plantas a Señales
germinación de semillas de manzanilla es el blanco, es Lumínicas”, 2011.[Online pdf].Disponible
decir, una mezcla proporcionada de todas las longitudes de en: http://www.biouls.cl/librofv/web/pdf_word/Capitulo
onda entre 400 y 500 nm. %2018.pdf. [Citado el: 27-Feb-2023].
El efecto que tiene la longitud de onda luminosa sobre la [9] California Lightworks Argentina “Espectro de luz y
germinación de semillas es ampliamente recomendado a crecimiento de plantas”, 2018. [Online]. Disponible
nivel industrial, pues puede suponer una germinación más en: http://www.californialightworks.com.ar/espectro-de-
rápida que reduzca costos y optimice procesos. luz-y-crecimiento-de-plantas_4_22582_2327_1.html.
Así mismo se recomienda un análisis profundo del efecto [Citado el: 27-Feb-2023].
de compuestos fenólicos en la germinación de las semillas
de manzanilla y determinar si estas tienen un efecto que
inhiba la germinación in vitro en el medio de cultivo MS
(Murashige y Skoog).

Referencias
[1] Pita Villamil Manuel José and García Félix Pérez,
Germinación de Semillas. Madrid: Ministerio de
Agricultura, Pesca y Alimentación, 1998.
[2] “El Proceso de la Germinaci,” Agricultura. Directorio
de empresas, artículos, cultivos y negocios agrícolas.
[Online]. Disponible en:
https://www.infoagro.com/documentos/el_proceso_germi
nacion_semillas__conceptos_y_tipos_germinacion.asp.
[Citado el: 23-Feb-2023].
[3] J. Azcón-Bieto, M. Talón, and Á. J. Matilla,
“Desarrollo y germinación de las semillas,” en
Fundamentos de Fisiología Vegetal, 2nd ed., Madrid,
Spain: McGraw-Hill Interamericana, 2001, pp. 537–558.
[4] Artedinamico, “QUE ES LA LONGITUD DE
ONDA,” Equipos y laboratorio de Colombia, 2022.
[Online]. Disponible en:
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-
ampliado/que-es-la-longitud-de-onda. [Citado el: 24-Feb-
2023].
[5] J. Chen Lopez, “La Influencia de la Luz en el
crecimiento del cultivo,” La influencia de la luz en el
crecimiento del cultivo | PRO-MIX, 2022. [Online].
Disponible en: https://www.pthorticulture.com/es/centro-
de-formacion/la-influencia-de-la-luz-en-el-crecimiento-
del-
cultivo/#:~:text=La%20luz%20visible%20se%20divide,r
adiaci%C3%B3n%20fotosint%C3%A9ticamente%20acti
va%20(RFA). [Citado el: 24-Feb-2023].
[6] Moreira, P, M, Cabrera, H, Armijos, R, Cueva, A, A.
“Germinación y multiplicación in vitro de Matricaria
recutita L.: los fenoles totales determinan su
germinación”. Revista Colombiana de Biotecnología. Vol.
21 (no.2), 2019, Págs 6-11.
[7] García-López, J. I., Ruiz-Torres, N. A., Lira-Saldivar,
R. K., & Vera-Reyes, I. “Técnicas Para Evaluar
Germinación, Vigor y Calidad Fisiológica de Semillas
Sometidas a Dosis de Nanopartículas”, 2018. [Online].
https://ciqa.repositorioinstitucional.mx/jspui/bitstream/10

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