Biología Tema 4 Libreta

Biología molecular y citogenética 1ºLAB
EJERCICIOS 1 - 3, PÁG 103-104
Sara Caro López
1. Define en tu cuaderno los siguientes conceptos y utilízalos para completar el mapa

conceptual situado debajo.
1. Desnaturalización: Consiste en la separación de las dos cadenas de una molécula

bicatenaria de ADN por ruptura de los puentes de hidrógeno entre las bases
nitrogenadas complementarias.
2. Renaturalización: Consiste en la reasociación de las dos cadenas de una molécula
bicatenaria de ADN, previamente desnaturalizada.
3. Hibridación: Unión de dos moléculas monocatenaria de ácidos nucleicos por
complementariedad de su secuencia de bases nitrogenadas, originando una
molécula híbrida bicatenaria.
4. Sonda: Es una cadena de nucleótidos cuya secuencia de bases nitrogenadas es
complementaria de una secuencia que queremos detectar mediante hibridación.
5. Secuencia diana: Es aquella que se quiere detectar en una muestra problema
mediante una técnica de hibridación con una sonda marcada.
2. Contesta las siguientes preguntas y razona la respuesta:
a) Entre dos moléculas de ADN con la misma composición de bases , una con
una longitud de 100 pb y otra con una longitud de 200 pb, ¿cuál tendrá mayor
punto de fusión (Tm) ? Al tener las dos moléculas la misma composición de bases
y una longitud inferior a 500 pb, sólo influye en la tm la longitud. Por lo tanto, la
molécula de 200 pb tendrá mayor tm.
b) Entre dos moléculas de ADN con una longitud de 5000 pb, una con un 30% de
AT y 70% de GC y otra con un 45% de AT y 55% de GC,¿cuál tendrá menor
punto de fusión? Al tener las dos moléculas más de 500 pb, el parámetro que más
influye en la tm es la proporción de GC. Por lo tanto, la molécula con el 55% de GC
tendrá menor tm.
c) En un tubo tenemos una solución de una molécula de ADN con una
concentración de 5 MM. En otro tubo tenemos una solución de la misma
molécula de ADN con una concentración 8 M. Si usamos estos tubos para
sendos experimentos de desnaturalización, aumentando la temperatura y
midiendo la absorbancia a 260 nm, ¿en qué tubo obtendremos un valor de
7mmayor? Al ser la misma molécula en ambos casos, se obtendrá el mismo valor
de m en los dos tubos, porque la Tm no depende de la concentración de la molécula
de ADN en el tubo, si no de la composición de bases.
3. En la gráfica siguiente se representan las curvas de renaturalización de

tres microorganismos procariotas:
● Haemophilus influenzae, cuyo genoma tiene una longitud de 1,8 × 106 pb.
● Mycoplasma genitalium, cuyo genoma tiene una longitud de 580 × 103 pb.
● Fago λ, cuyo genoma tiene una longitud de 48,5 × 103 pb.
¿Qué gráfica corresponde a cada microorganismo? Razona la respuesta.
En los organismos procariotas, cuyos genomas no tienen secuencias repetidas, el valor

Cot1/2 es proporcional a la longitud de su genoma. Es decir, a mayor longitud de genoma
mayor Cot1/2.
La curva 1 corresponde al fago λ.

La curva 2 corresponde al Mycoplasma genitalium.
La curva 3 corresponde al Haemophilus influenzae.
5. Empareja cada método de marcaje de sondas con las enzimas utilizadas en cada
uno de ellos
MÉTODO DE MARCAJE ENZIMA/S UTILIZADAS
Desplazamiento en mella ADNasa I y ADN polimerasa
Cebado al azar Fragmento Klenow de ADN polimerasa
Marcaje termina TdT
Marcaje de sondas de ARN durante su ARN polimerasa

síntesis
6. Completa en tu cuaderno la tabla siguiente sobre las características de las sondas

de ADN y PNA utilizando las palabras correspondientes de la columna derecha.
SONDAS ADN SONDAS PNA
Esqueleto externo Azúcar fosfato Aminoetil - glicina
Solubilidad Mayor Menor
Degradación por nucleasas Se degradan no se degradan
Estabilidad de sus híbridos Menor mayor
Carga eléctrica neta tienen no tienen

Obtención varios métodos síntesis química
Sensibilidad al mismatch mayo menor
7. Di si son verdaderas o falsas las siguientes afirmaciones
a) verdadero
b) verdadero
c) falso
d) falso
8. Para cada uno de los marcadores citados a continuación, indica el tipo de

marcador que es y cómo detectarías un híbrido formado por una sonda marcada con
él:
a) Digoxigenina
i) Haptenos. Método inmunohistoquímico
b) FITC
i) Fluorocromo. Visualización microscopio de fluorescencia
c) 32p
i) Isótopo radiactivo. Autorradiografía
d) Cy3
i) Fluorocromo. Visualización microscopio de fluorescencia
e) Biotina
i) Hapteno. Método inmunohistoquimico

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1. Desnaturalización: Consiste en la separación de las dos cadenas de una molécula

2. Contesta las siguientes preguntas y razona la respuesta:

3. En la gráfica siguiente se representan las curvas de renaturalización de

¿Qué gráfica corresponde a cada microorganismo? Razona la respuesta.

En los organismos procariotas, cuyos genomas no tienen secuencias repetidas, el valor

La curva 1 corresponde al fago λ.

MÉTODO DE MARCAJE ENZIMA/S UTILIZADAS

Desplazamiento en mella ADNasa I y ADN polimerasa

Cebado al azar Fragmento Klenow de ADN polimerasa

Marcaje termina TdT

Marcaje de sondas de ARN durante su ARN polimerasa

6. Completa en tu cuaderno la tabla siguiente sobre las características de las sondas

SONDAS ADN SONDAS PNA

Esqueleto externo Azúcar fosfato Aminoetil - glicina

Solubilidad Mayor Menor

Degradación por nucleasas Se degradan no se degradan

Estabilidad de sus híbridos Menor mayor

Carga eléctrica neta tienen no tienen

Sensibilidad al mismatch mayo menor

7. Di si son verdaderas o falsas las siguientes afirmaciones

8. Para cada uno de los marcadores citados a continuación, indica el tipo de

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