Taller #2 Curvas de Crecimiento

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
PROGRAMA DE MICROBIOLOGÍA
PROCESOS INDUSTRIALES II
Docente: Gloria Carolina Prieto Correal
Taller Nº 2 Curvas de crecimiento
Las bacterias ácido láctica (BAL) (Lactic acid bacteria, LAB) son un grupo de
microorganismos no esporulados, catalasa negativos, Gram positivos, que
presentan morfologías cocáceas y bacilares y son estrictamente fermentativos.
Su principal producto final de la fermentación de azúcares es el ácido láctico.
Actualmente, este grupo comprende los siguientes géneros: Carnobacterium,
Enterococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Oenococcus,
Pediococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Vagococcus y Weissella. Se
pueden encontrar en diferentes hábitats como el suelo, el agua, el tracto
gastrointestinal animal y humano, así como en alimentos y productos
fermentados.
Muchos de estos microorganismos son considerados probióticos, un probiótico

es una preparación o un producto que contiene microorganismos viables en
número suficiente que alteran la microbiota (por implantación o colonización) en
un compartimento del huésped provocando efectos beneficiosos para la salud.
En general, las características probióticas dependen de múltiples aspectos que
generalmente no son específicos de una sola cepa. Algunos de los efectos
probióticos reportados in vitro son la producción de enzimas, vitaminas y
aminoácidos, la capacidad de adherencia, el efecto antagónico sobre los
microorganismos patógenos, la tolerancia a las sales biliares, la producción de
bacteriocinas, la resistencia a los jugos gástricos, la reducción de los niveles de
colesterol y estimulación del sistema inmune entre otros.
Para evaluar la producción de biomasa por parte de una bacteria ácido-láctica

aislada previamente de yogurt, usted realizó una curva patrón de proteínas con
el fin de evaluar el desarrollo del microorganismo en el tiempo, lo anterior, como
respuesta a los elementos nutricionales aportados por un medio de cultivo que
usted se encuentra evaluando.
1. Explique por que se evaluará la biomasa de la cepa obtenida empleando

una curva patrón de proteínas. Justifique
A continuación, se detalla la metodología para la obtención de la curva patrón

de biomasa de la bacteria, en cada paso describa con un diagrama la
metodología.
2. En un Erlenmeyer de 125 mL con caldo leche estéril se reactivó la cepa

de BAL se incubó por 48 horas a 35 ± 2°C en agitación constante a
100rpm. Posteriormente, este cultivo lo transfirió a 200 mL para producir
biomasa en el caldo y lo incubó durante 22 horas tomando muestras cada
2 horas desde la hora 10. Determine el VET de la reactivación de la
cepa, determine cual es el porcentaje de inóculo transferido al cultivo
para producir biomasa y el volumen del Erlenmeyer para mantener
una relación geométrica de ½. Adicionalmente, realice los cálculos
de la preparación del medio de cultivo.
3. Posteriormente, usted realiza un recuento de bacterias ácido-lácticas por

medio del recuento en placa realizando diluciones hasta 10-7 y
sembrando por superficie 0,1 mL en agar MRS. Realice los recuentos
respectivos de acuerdo con los resultados, adicionalmente
transforme los datos a LOG para poder visualizar mejor el
comportamiento. Escriba para que sirve transformar los datos a Log.
4. Finalmente, usted realizó la determinación de proteínas: para esto usted

realizó una curva patrón de proteínas usando el método de Bradford.
Para la elaboración de la curva tenga en cuenta lo siguiente:
Elaboración de la Curva Patrón para Cuantificación de Proteínas

• Preparar 50mL de una solución 100µg/mL de albúmina de huevo. Usar
como solvente agua destilada.
• A partir de la solución de albúmina, preparar las siguientes soluciones en
tubos de 13 x 100: 10 µg/mL, 20 µg/mL, 40 µg/mL, 60µg/mL, 80 µg/mL y
100µg/mL. Como concentración 0 (blanco) usar agua destilada.
• Tomar 0.1mL de cada una de las soluciones y adicionarlas en un tubo de
13 x 100.
• Adicionar 5mL del reactivo de Bradford a cada uno de los tubos.
• Dejar reaccionar por 2 minutos.
• Ajustar el cero de absorbancia del espectrofotómetro a una longitud de
onda de 595nm.
• Realizar la lectura de absorbancia de los tubos de reacción.
• Realizar la regresión lineal de los datos de absorbancia en función de la
concentración (absorbancia vs concentración) y determinar la ecuación
de la recta.
Donde:
Y = Lectura de absorbancia
m = Pendiente
𝐘 = 𝐦𝐱 + 𝐛 x =
Concentración de proteina
(µg/mL)
b = Intercepto
Realice los cálculos para preparar las concentraciones conocidas de la

curva, lea la absorbancia de cada una y grafique la curva patrón con los
datos de absorbancia en función de la concentración (absorbancia vs
concentración) y determiné la ecuación de la línea recta.
Describa el fundamento del método de Bradford para cuantificación de

proteínas.
5. Finalmente, usted realizó la cuantificación de proteínas en fermentación

con el cultivo de BAL. A partir de la línea recta obtenida con la curva
patrón de Bradford, despejar las absorbancias obtenidas en la curva
de crecimiento de BAL y determinar la concentración proteínas en

función del tiempo en el archivo en Excel compartido.
Representar gráficamente la absorbancia en función del tiempo,

identificando las fases de crecimiento del microorganismo.
Realice una gráfica integrada de la biomasa y proteínas. Discuta los

resultados obtenidos.

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Muchos de estos microorganismos son considerados probióticos, un probiótico

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