Prepráctica 3
Prepráctica 3
Prepráctica 3
INMUNOLOGÍA
Pre-reporte 3: Examen
coproparasitoscópico de concentración
por flotación
Fecha: 26/02/2023
Examen coproparasitoscópico de concentración por flotación
INTRODUCCIÓN
Esta técnica fue desarrollada por el distinguido parasitólogo el Dr. Ernest Carroll
Faust y sus colaboradores en 1938 en virtud de que los procedimientos disponibles
en aquella época provocaban una destrucción muy elevada de estructuras
parasitarias, particularmente de los quistes. La combinación del procedimiento y los
reactivos empleados permitió seleccionar al menos 13 variantes probadas, el
sistema con los mejores resultados en cuanto a capacidad para detección y
preservación estructural de la mayoría de los quistes y huevos que comúnmente se
presentaban en las heces humanas. Se complementó el planteamiento al usar un
esquema de procesamiento de tres muestras seriadas que permitió detectar hasta el
96% de los individuos parasitados. Durante un lapso muy prolongado el uso de esta
técnica se enfocó a laboratorios de diagnóstico en humanos y hace relativamente
poco tiempo ha sido adoptada en el procesamiento de muestras fecales de perros y
gatos debido a que aumenta la probabilidad de detección del protozoario Giardia
lamblia aunque también pueden detectarse huevos de cestodo y nematodo (no
permite detectar huevos de trematodo) y su uso puede extenderse a muestras de
todas las especies domésticas (Faust et al., 1938; Martínez y Morales, 1995).
Estos métodos aumentan las posibilidades de resultados positivos. El método de
Faust consiste en mezclar parte de la muestra de heces con una sustancia más
densa que los huevos o parásitos que se quieren concentrar. Esto provoca que, al
ser menos densos, flotan en la superficie. El líquido sobrenadante se recoge y se
observa al microscopio para la identificación y la cuantificación.
Técnica de Faust
MATERIAL
Material de laboratorio:
Microscopio
2 portaobjetos
2 cubreobjetos
1 pipeta Pasteur desechable
Aplicadores de madera
Material biológico:
Heces frescas
Reactivos
Solución salina
Lugol
MÉTODO
1. Tomamos un vaso y lo llenamos con agua común a una tercera parte de este o 60
ml aproximadamente.
2. En seguida, tomamos muestra con ayuda de la cuchara y disolvemos muy bien
en el vaso con agua.
3. Tomamos nuestro segundo vaso, y colocamos el colador encima.
4. Colamos nuestra muestra ya disuelta, dando unos pequeños golpecitos contra el
colador.
5. Posterior a eso, tomamos nuestros tubos y los llenamos con nuestra muestra a
dos terceras partes (en caso de que nuestros tubos no hayan quedado igual
de llenos, tomamos una pipeta de plástico para nivelarlos).
6. Una vez listos, los llevamos a la balanza para nivelarlos y que nuestros tubos
pesen lo mismo.
7. Pasamos nuestros tubos a la centrífuga (uno en frente del otro) y los dejamos ahí
por 3 minutos aproximadamente, a 2000 revoluciones por minuto.
8. Pasado el tiempo, retiramos los tubos y observamos que se formó un
sobrenadante con un color turbio y hasta el fondo se formó como un botón/pastilla.
9. Desechamos el líquido con color turbio, dejando únicamente la pastillita que se
formó en el fondo.
10. Una vez hecho eso, resuspendemos con agua para lavar la muestra y continuar
quitando los detritos y grasa que pudiese estar presente.
11. Llenamos un poco nuestros tubos, y con la varilla de vidrio vamos a resuspender
nuestro botón.
12. Nivelamos nuestras muestras y llevamos a centrifugar nuevamente a 2000
revoluciones por minuto.
13. Sacamos nuestros tubos y nuevamente desechamos del sobrenadante.
14. Se repite este proceso de lavado, hasta que el sobrenadante se observe
totalmente limpio.
15. Una vez teniendo nuestros tubos limpios, decantamos el sobrenadante.
16. Pasamos a nuestra segunda etapa, que es inducir el proceso de flotación.
17. Agregaremos un poco de solución de saturada de sulfato de Zinc a 33% con una
densidad mínima de 1.18° en nuestros tubos.
18. Resuspendemos con ayuda de la varilla y volvemos a llenar con sulfato de Zinc,
el cual inducirá el proceso de flotación.
19. Nivelamos nuestros tubos, y pasamos a centrifugar nuestros tubos por última
vez durante 3 minutos.
20. Una vez concluida la última centrifugada, ya no decantaremos, ahora pasaremos
nuestros tubos a la gradilla de manera vertical.
21. Tomamos el tubo A y lo llenamos con la solución saturada de Zinc, hasta formar
un menisco.
22. El segundo tubo B igual lo llenaremos, pero sin que este se salga, para facilitar
la toma de muestra y así lo dejamos reposar por 15 minutos.
23. En seguida, tomaremos un cubreobjetos y lo colocaremos encima del menisco
del tubo A, y dejamos reposar por 15 minutos, para que los quistes y huevos de
helmintos floten y así se queden adheridos al cubreobjetos 2
24. Transcurrido el tiempo, tomaremos un portaobjetos y colocamos una gota
pequeña de Lugol y pasaremos cuidadosamente el cubreobjetos sobre nuestra gota
de Lugol.
25. Observar al microscopio
Diagrama de flujo
CUESTIONARIO
1.- ¿Para qué clase de parásitos es sensible la técnica de Faust ? ¿Por qué?
Es sensible para quistes de protozoarios, especialmente Giardia lamblia debido a
que su densidad es menor que 1.18 (la densidad del sulfato de zinc)
2.- ¿La técnica de Faust es útil para detectar huevos de trematodo?
La prueba puede ser apta para la detección de huevos del trematodo cuando la
densidad se incrementa a 1.250 e incluso algunas personas la han convertido en
semicuantitativa usando cantidades definidas de heces diluidas en volúmenes
conocidos de solución
REFERENCIAS
Centers for Disease Control and Prevention. 2010. Stool Specimens. Centers for
Ash LR & Orighel, TC. 1997. Atlas of Human Parasitology. 4° ed. American Society
INSTRUCCIONES
Revisar las actividades que se solicitan y marque en los apartados “SI” cuando la evidencia se cumple; en caso contrario
marque “NO”. En la columna “OBSERVACIONES” indicaciones que puedan ayudar al alumno a saber cuáles son las
condiciones no cumplidas, si fuese necesario.
CUMPL
Valor del OBSERVACIONES
Característica a cumplir (Reactivo) E
reactivo
SI NO
5% Portada: Logo de la UP, nombre de la asignatura,
nombre del alumno, identificación del reporte,
fecha de entrega, matricula.
10% Objetivo: Redacta el objetivo del reporte
10% Introducción: Revisión documental que sustenta
el marco teórico de la actividad. Mínimo 2
cuartillas.
Cuestionario
10% Materiales y métodos: Detalla la metodología
realizada, diagrama de flujo y los materiales
utilizados.
15% Resultados y discusión: Resume y presenta los
resultados obtenidos de la actividad práctica,
discute los mismos, presenta cuadros o
esquemas y observaciones.
20% Conclusión: Resume los principales puntos y
resultados de la actividad práctica.
5% Bibliografía: Menciona la bibliografía consultada.
20% Entrega a tiempo, en la fecha solicitada.
5% El reporte está ordenado, limpio y sin faltas de
ortografía.
100% CALIFICACIÓN: