TIRAJES #2: TECNICAS

HISTOPATOLOGICAS

BIOPSIA:.............................................................................................................................................................. 2
TIPOS DE BIOPSIAS: .......................................................................................................................................... 2
➢ Endoscópicas ............................................................................................................................................... 2
➢ Por punción: ................................................................................................................................................. 2
➢ Incisionales .................................................................................................................................................... 3
➢ Excisionales ................................................................................................................................................... 3
➢ Piezas Quirúrgicas: ...................................................................................................................................... 3
Como manejar las biopsias desde el inicio: ............................................................................................ 4
TÉCNICA HISTOPATOLOGÍA .......................................................................................................................... 6
1) FIJACIÓN ....................................................................................................................................................... 7
2) DESHIDRATACION ........................................................................................................................................ 8
3) ACLARAMIENTO........................................................................................................................................... 9
4) INCLUSIÓN. .................................................................................................................................................... 9
5) CORTE........................................................................................................................................................... 10
6) TINCIÓN. ...................................................................................................................................................... 11
7) MONTAJE. .................................................................................................................................................... 11
 BIOPSIA:
Fragmento de tejido obtenido de un ser vivo para ser estudiado al microscopio por un
médico patólogo y la obtención de un diagnóstico preciso. En base A los elementos
que se identifiquen en cada una de las muestras.

Para que ese tejido pueda ser evaluado al microscopio debe ser un proceso lento,
bastante especial con una serie de líquidos y una serie de químicos, teniendo una
importancia fundamental.

TIPOS DE BIOPSIAS:
➢ Endoscópicas: Obtenidas por medio de instrumentos a través de cavidades
naturales: Ej. Gastroscópicas, broncoscópicas, colonoscópicas,
rectosigmoidoscopicas, cistoscópicas, colpóscopicas, etc.

Como se puede ver en esta imagen, están unas pinzas

que se adhieren a la mucosa y se toman las biopsias
dependiendo del sitio más representativo donde hay
una necesidad de investigar como una lesión o un
tumor.

➢ Por punción: Se utiliza en lesiones de tamaño grande o pequeño (ej. La piel). En

lesiones de órganos o tejidos profundos y generalmente obtenida a través de la
piel, por ejemplo: Pleura, hígado, riñón, próstata, mama, médula ósea, etc. Se
realizan con una aguja de cierto calibre que atraviesa la piel y dirigido con
técnicas radiológicas se hace llegar hacia el sitio de estudio. Su limitante radica
en la representatividad de la muestra, ya que el tejido que se obtiene con una
aguja es pequeño.

Aquí se puede ver un ejemplo de esta

biopsia, acá se ve un “Punch” que así es
como se le denomina, es como un lápiz que
tiene un borde filoso y como un
sacabocado se obtiene la biopisa y ya es
posible posteriormente observarla en el
microscopio y ver las características de la
lesión de la que se ha tomado la muestra.
➢ Incisionales: Se obtiene por medios quirúrgicos sólo una porción de la lesión con
fines diagnósticos. Es solo una parte de la lesión, NO ES COMPLETA, únicamente se
toma para identificar con que tipo de lesión es la que se está tratando.
Se recomienda en lesiones de gran tamaño, en las que será necesario programar
posteriormente una intervención quirúrgica de mayor extensión.

➢ Excisionales: Es cuando dentro de la muestra obtenida por medios quirúrgicos se

incluye la totalidad de la lesión que motivó el procedimiento. Ahí se va a estudiar
TODA LA LESIÓN.

En este caso hay una muestra de piel, y como la

lesión es completa, (es una lesión nodular
elevada que está en el centro) los bordes o
limites quirúrgicos se han tomado de forma que
cada uno viene identificado con una serie de
hilos de sutura, con hilos cortos o hilos largos de
forma que el cirujano identifica en la boleta que
llena correspondiente a la biopsia a que
corresponde cada borde, ej. Los hilos largos
representan al límite medial, los hilos cortos al límite inferior; dependiendo del sitio
de donde lo obtenga y de esa forma es mucho más precisa para identificar
exactamente los limites por si acaso estuviera presente la lesión en cierta zona es
y así el cirujano llega a realizar una ampliación del área donde haya afectación
por tumor u otra afectación.

➢ Piezas Quirúrgicas: Tejidos u órganos extirpados quirúrgicamente en mayor o

menor extensión con fines terapéuticos. Mediante su estudio anatomopatológico
podremos emitir, confirmar, precisar, o modificar un diagnóstico, así como
determinar la extensión de las lesiones y comprobar si estas han sido extirpadas en
su totalidad.
 Por ejemplo cuando se realiza una mastectomía
podemos confirmar si previamente se había
tomado una biopsia por punción o por aguja del
tumor de la mama, como recuerdan, su estudio
está limitado por la cantidad de tejido que se
toma, de esta forma si tuviésemos ya la pieza
quirúrgica pudiéramos confirmar si en dado caso
se ha dado un diagnóstico maligno, precisar con
un diagnóstico especifico o modificar un
diagnóstico si lo vemos de diferente forma, ya
teniendo la totalidad del tumor pudiese ser que tuviera elementos diferentes o
variantes diferentes, y así como determinar la extensión de la lesión hasta donde
llego, que ganglios linfáticos axilares afecto, si hay tumor o en el resto de los
cuadrantes de la mama también hay tumor, para eso se identifican todos los
elementos en las piezas quirúrgicas

Mastectomía, se puede observar una evidente masa tumoral donde también se

incluyen varios cortes de este tejido para poder ser estudiados y se va mostrando
también hasta donde ha llegado la extensión del tumor.

Como manejar las biopsias desde el inicio:

 inmediatamente el cirujano, medico, que este realizando la biopsia quite del
paciente la muestra, este debe ser colocada en líquido fijador, por excelencia
usualmente utilizada es la formalina al 10%.
 Frasco debe ser adecuado para una pieza grande como la mama mostrada
anteriormente, debe ser adecuado al tamaño de la muestra.
 El frasco donde se coloca la muestra debe estar debidamente identificado,
nombre del paciente, registro, edad, quien tomo la muestra, además en la
identificación debe de decir el sitio exacto de la toma del tejido,
 Todo frasco debe de venir identificado acompañado de una solicitud de
estudio histopatológico correspondiente donde también debe especificar
todos los elementos del tipo de biopsia (incisional excisional, pieza quirúrgica,
historia clínica todos los datos del paciente para que pueda tenerse una mejor
evaluación y análisis.)
 Boleta del hospital nacional rosales

Muestras enviadas

Colocar en orden, por número de muestra tomada, por ejemplo, si han tomado
biopsias de la piel, pero en zonas diferentes como de la cara, mano derecha y otra
de la pierna, no es lo mismo decir que se tiene un tumor en la pierna que en la cara
por lo cual se deben identificar completamente.

En el apartado de “Biopsias anteriores de este paciente”

▪ Son pacientes conocidos por algún tipo de lesión o que tuvieron recidivas
tumorales por lo tanto esta información es importante.

CAAF (histología por aspiración con aguja fina)

Después de colocar la muestra en el líquido fijador y que esté debidamente
identificado el frasco y las boletas, se va recibir la muestra en el servicio de patología
y se va proceder ya por parte del médico la descripción de la muestra y la selección
del material que va estudiar.

Ejemplo de muestra y su boleta

Al llegar al servicio de patología se coloca un numero en la muestra y la boleta y así

se tiene mucha mayor precisión cuando se evalúan los tejidos y no se tiene la
probabilidad de error de equivocaciones.

Las boletas deben ser siempre llenadas a lápiz, de esa forma se evita que si por
accidente se derrama algún liquido sobre la boleta se pierda la información.

Cuando el medico ya tiene el tejido a estudiar, se debe

empezar con una descripción macroscópica, es decir los
hallazgos evidentes que presenta la muestra, para ello se
utiliza un cuchillo, tijeras, pinzas, regla y báscula

Los cortes obtenidos deben ser colocados en el

receptáculo, el cual debe llevar el mismo número que la
boleta y el frasco de la muestra, llevando siempre una
identificación desde el inicio hasta el final
 TÉCNICA HISTOPATOLOGÍA

Comprende la preparación de los tejidos para su estudio microscópico sometiendo a

la totalidad o a una parte del tejido a estudiar a una serie de procesos (menciona
que lo siguiente siempre es pregunta de parcial)

Lleva el orden estricto

1. Fijación
2. Deshidratación
3. Aclaramiento
4. Inclusión
5. Corte
6. Tinción
7. Montaje

Para un adecuado procesamiento de la técnica histopatológica

1) FIJACIÓN
Es el proceso mediante el cual los tejidos o sus componentes celulares permanecen
estables en su estado físico y parcialmente en su estado químico, evitando así el
deterioro provocado por la autolisis y la putrefacción.

Los objetivos de la fijación son

 Evitar la descomposición
 Evitar la distorsión de los tejidos o la perdida de ellos
 Resistir el tratamiento sucesivo con los reactivos durante el procesamiento

La fijación debe comenzar inmediatamente se ha obtenido la muestra de tejido

La fijación es el paso más importante del proceso histopatológico por

✓ Puede ser iniciado por el personal médico o paramédico.

✓ Los cambios por autolisis y putrefacción no son reversibles.

Mecanismo de acción de los fijadores:

• La mayoría de ellos actúa a través de la desnaturalización o precipitación de

las proteínas
Principios generales para una fijación adecuada

− Recipiente adecuado, no colocar diferentes muestras en el mismo frasco, cada

muestra en su propio frasco.
− Volumen adecuado de fijador, de 10 a 20 veces el volumen de la muestra
− El fijador debe cubrir todas las caras de la pieza y estar completamente
sumergido en la formalina
− Señalar los límites de la muestra si es necesario
− Disección de la muestra si es necesario

Formaldehido. (formalina o formol)

o El formaldehido comercial es una solución saturada de gas que es

formaldehido en agua al 40% (formalina pura)(esta es pregunta de examen)
o Normalmente se utiliza al 10%, nunca usar formalina pura ya que puede causar
degradación de los tejidos (esta es pregunta de examen)
o Velocidad de penetración en los tejidos 1mm por hora

Ventajas de formol

✓ Bajo costo económico.

✓ Es fácil de preparar.
✓ Relativamente estable.
✓ Tiene buena penetración en los tejidos.
✓ No endurece demasiado los tejidos ni los vuelve quebradizos.

Desventajas del formol:

 Puede producir dermatitis en el personal que lo emplea.

 Es irritante para las fosas nasales

Otros fijadores utilizados (en dado caso no se cuente con formalina al momento, se
puede utilizar de forma TEMPORAL para evitar la putrefacción):

 Alcohol etílico 70%.

 Ácido acético

2) DESHIDRATACION
En este paso lo que se va a pretender es que salga toda el agua que está contenida
dentro del tejido intra como extracelular es eliminada para poder ser reemplazada
por la parafina

El mejor agente para deshidratar es el alcohol etílico (etanol).

 3) ACLARAMIENTO.
Proceso por el cual se consigue la sustitución del agente deshidratante por una
sustancia miscible con el medio de inclusión que va a utilizarse.

El aclaramiento permite que el alcohol de los tejidos sea reemplazado por parafina.

Pregunta de examen: El agente aclarante más utilizado es el xilol o xileno, un

derivado del petróleo.

Ventaja:

• Buen agente aclarante

• Barato
Desventajas:

• Vuelve a los tejidos excesivamente duros y quebradizos.

❖ EMPARAFINAMIENTO.
Luego que el tejido se encuentra debidamente aclarado se procede a su
impregnación en parafina. Para ello, se sumerge la muestra en parafina para que
esta ocupe el lugar del xilol. Para que salga todo el xilol y la parafina pueda llenar
todos los espacios.

4) INCLUSIÓN.
Es la impregnación de los tejidos con un medio que llene todas las cavidades
naturales, espacios e intersticios tisulares y aun los espacios intracelulares.

Objetivo de la inclusión: Proporcionar la consistencia firme necesaria para hacer

cortes bastante delgados sin provocar distorsión y sin alterar las relaciones espaciales
de tejido y los elementos celulares.

Medios de inclusión más utilizados:

• Parafina
• Mezcla de parafina y polímeros plásticos (Paraplast)

El resultado de la inclusión es un bloque de parafina que contiene la muestra del

tejido.

Cuando ya se va a incluir el tejido, se va a colocar con:

• Introducción del corte con pinzas.

• Solidificación.
 • Se colocará el bloque en un baño de hielo o agua fría, para que se endurezca.
• Eliminación del exceso de parafina en el microtomo (desbastado)

Tejido que ya paso todo el proceso (esta

emparafinado) siempre debe
acompañarse del número
correspondiente.

De esta forma termina el bloque de parafina, el

receptáculo está dando sostén al tejido, siempre
acompañado del número.

5) CORTE.
Una vez que se obtiene el bloque de tejido se procede a realizar los cortes del mismo,
para lo cual se utiliza un micrótomo.

Microtomo: Instrumento para cortar rebanadas muy delgadas de tejido a pocas

micras para estudio microscópico.

Hay diferentes tipos de micrótomos, sin embargo, el más usado en nuestro medio es el
micrótomo rotatorio.

• Se verifica el grosor adecuado del corte (4 a 6 micras.)

• Se enumeran los portaobjetos (con el mismo número desde el inicio) con un
lápiz de punta de diamante.
Se toman los cortes, se colocan sobre la lámina portaobjeto y la serie de cortes se
hace flotar luego sobre la superficie del agua del baño de flotación. La temperatura
del agua 45°C.
Imagen: Es un microtomo, el bloque se coloca en
el centro, tiene una manecita que rotar, por eso es
micrótomo rotatorio, así el tejido sube y baja,
posee una cuchilla super afilada que hará
rebanadas, el técnico lo colocará en baño maría
para que el tejido pueda flotar y distenderse, para colocarlo en una lámina.

6) TINCIÓN.

Objetivo: Permite estudiar y conocer las características físicas de los tejidos y las
relaciones que los constituyen.

• Tinción con hematoxilina-eosina (HyE)

Es la tinción “standard” en histopatología, esto es
debido a la extraordinaria riqueza de matices rosados
y rojos que provoca la tinción con eosina a lo que
suma la excelente definición nuclear originada por la
hematoxina.

Imagen. Hígado de diferentes tonalidades de color.

-Resultados:

 Núcleos: pardo negruzco a azul negro.

 Eritrocitos, musculo, gránulos eosinofílicos: rojo brillante.
 Citoplasma, proteínas del líquido de edema: rosa pálido.

7) MONTAJE.
Impregnación del corte de tejido con un medio transparente de índice de refracción
cercano al vidrio y al índice de refracción medio del tejido.

Protección del frotis contra agentes físicos, químicos, blanqueamiento, oxidación, etc.

Pregunta de examen: Medios de montaje más utilizados:

• Merckoglass
• Bálsamo de Canadá.

Otras tinciones histoquímicas.

• Giemsa: Bacterias, cromatina.

• Ácido Peryodico de Schiff (PAS): Mucopolisacárido, membranas Basales, etc.
• Mucicarmín: Moco
• Van Gieson: Colágena.
• Reticulina: Fibras reticulares.
• Tricrómica de Masson: Colágena.
• Rojo Congo: Amiloide
• Perls: Hierro.
• Sudán: Lípidos.
• Ziehl-Neelsen: Bacilos alcohol ácido resistentes.
• Gram: Bacterias.
• Gomiri Groccott: Hongos.

Es una tinción de Ziehl-Neelsen, donde los

bacilos alcohol ácido resistentes se tiñen de
rojo y son bastante evidentes en el fondo
azul

Giemsa se pueden identificar fácilmente

Helicobacter pylori.