ELECTROFORESIS
Hidalgo A.*; Mosquera S.*; Salvador M.*; Solano A.*
BIOQUÍMICA
Grupo 3
*Escuela Politécnica Nacional, Facultad de Ingeniería Química y Agroindustria
Quito, Ecuador
e-mail:
[email protected],
[email protected] [email protected] [email protected] 1. ¿QUÉ ES LA ELECTROFORESIS? 6. Usando su gráfico, determinar el peso molecular de
las tres proteínas desconocidas. Esto se puede hacer
La electroforesis se define como el movimiento o dispersión mediante la búsqueda de la movilidad electroforética
de una partícula después de haber sido expuesta a un campo relativa (Rf).
eléctrico. Por lo general, se realiza en una matriz o gel y se usa
comúnmente para separar fragmentos de ADN, ARN, 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑏𝑎𝑛𝑑𝑎 𝑒𝑛 𝑐𝑢𝑒𝑠𝑡𝑖ó𝑛
moléculas o proteínas según el tamaño y la carga (Kapital 𝑅𝑓 = (1)
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑟𝑎𝑛𝑡𝑒
Inteligente, sf). En otras palabras, es la separación de las
moléculas de ADN y ARN por tamaño, mediante corriente 7. Se realiza entonces una línea recta que interseccione
eléctrica. La electroforesis se realiza mediante un dispositivo con el eje y para que, de esta forma, se pueda
que consta de una carga negativa en un extremo y una carga determinar el peso molecular aproximado (Bioted,
positiva en el otro extremo. Cuando se inserta una molécula sf).
cargada en este entorno, si es negativa se mueve hacia un
extremo, mientras que si es positiva se mueve hacia el otro A modo de ejemplo, visualizar la figura 1, en donde se expone
extremo correspondiente (Cromtek, 2021). un gráfico en el cual se determina el peso molecular de
diferentes proteínas.
2. ¿CÓMO SE DETERMINAN PESOS MOLECULARES A
TRAVÉS DE ESTA TÉCNICA?
Por medio de la electroforesis, el peso molecular de una
proteína puede estimarse comparando su movilidad
electroforética con la movilidad electroforética de proteínas de
PM conocidas. Vale la pena recalcar que, existe un margen de
error del 10% por medio de esta técnica (Lomonte, sf, p.92).
Para determinar el PM por medio de esta técnica se realiza los
siguientes pasos:
1. Tomar una hoja transparente, por ejemplo, de acetato
de celulosa y colocarla sobre el gel.
2. Trazar cuidadosamente los contornos de los pocillos
de muestras. A continuación, marcar todas las bandas
de proteínas sobre el gel.
Figura 1. Curva para la determinación de pesos moleculares de proteínas
3. Medir la distancia de migración, en centímetros (al
milímetro más cercano) de cada banda principal en el
gel. Ignorar las bandas débiles, todas las mediciones 3. ¿CUÁL ES LA INFLUENCIA DEL pH Y LA FUERZA
deben ser desde la parte inferior del pocillo a la parte IÓNICA DE LA SOLUCIÓN REGULADORA EN LA
inferior de la banda de proteína. SEPARACIÓN?
4. Utilizando papel semilogarítmico, trazar la distancia El pH y la fuerza iónica de la solución reguladora tienen una
de migración, o Rf, de cada proteína estándar en el importancia fundamental en la separación, debido a que, en el
eje x no logarítmico frente a su peso molecular en el caso del pH, se debe tener en cuenta de que los aminoácidos
eje y logarítmico. adquirirán cierta carga de acuerdo a sus grupos funcionales y
la naturaleza ionizable de los mismos, la cual dependerá del
5. Dibuje la mejor línea recta promedio a través de todos pH del medio tamponado donde se los situé. Es decir, la carga
los puntos. Esta línea debe tener más o menos el
neta de las proteínas va a depender del pH, teniendo en cuenta
mismo número de puntos dispersos en cada lado de la
que, a pH bajo los grupos ionizables estarán protonados y la
línea.
carga neta de las proteínas será positiva, y a pH altos los grupos
ionizables estarán desprotonados y la carga neta será negativa, Cables de alimentación: transfieren la corriente eléctrica
para lo cual, se debe encontrar un pH intermedio, conocido desde la fuente hacia la cámara.
como punto isoeléctrico, donde la proteína va a tener una carga
neta nula. Por otro lado, la fuerza iónica de la solución Peine: utilizado para generar espacios vacíos en el gel y
reguladora va a influir en la migración de los solutos, siendo depositar la muestra (Fierro, 2019).
la velocidad y el desprendimiento de calor los dos factores en
los que influencia esta fuerza, por ejemplo, cuando la fuerza Partes de un equipo de electroforesis capilar:
iónica es baja, la velocidad de migración es mayor y el
desprendimiento de calor menor.
4. VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA
ELECTROFORESIS EN GELES DE POLIACRILAMIDA
Algunas desventajas que presentan este tipo de geles son la
limitación con respecto al tamaño de los fragmentos que se
pueden separar (5-600 pb), también, presentan la desventaja de
que su manipulación y elaboración son muy complejas
comparada con otro tipo de geles como los de agarosa. Entre
algunas ventajas que presentan este tipo de geles es que son Figura 3. Esquema de un equipo de electroforesis capilar
los más utilizados en los procesos de electroforesis de
proteínas en los laboratorios, además, el poder de resolución Reservorio de entrada y salida (cátodo y ánodo): envases
es mucho mayor a otro gel, lo que permite la separación de que contienen la muestra.
moléculas que difieren en un sólo par de bases y estos geles de
poliacrilamida se corren de forma vertical (Fierro,2019). Capilar: tubo delgado por donde pasa la muestra para su
separación.
5. DESCRIPCIÓN DE LOS PRINCIPALES Fuente de alimentación: equipo que genera la corriente
COMPONENTES DE UN EQUIPO DE SEPARACIÓN. eléctrica.
Detector: recibe los analitos presentes y los muestra en el
Partes de un equipo de electroforesis en gel: ordenador (Chopin, 2012).
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] Chopin, M. (2012). Principios básicos de electroforesis
capilar: técnica analítica de separación de analitos.
Recuperado de: https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
2012/ir122g.pdf
[2] Fierro, F. (2019). Equipo de electroforesis en gel para el
ADN. Recuperado de:
https://www.labxchange.org/library/pathway/lx-
pathway:82b570c3-9bb5-453f-8903-c84cb477c7fc/items/lx-
Figura 2. Equipo para electroforesis en gel pb:82b570c3-9bb5-453f-8903-c84cb477c7fc:html:0229f0ab
Cubeta: envase que contiene el gel de electroforesis. [3] Kapital Inteligente, sf. “Qué es la electroforesis y tipos de
electroforesis”. Recuperado de:
Cámara amortiguadora: es un recipiente que contiene dos https://www.kapitalinteligente.es/que-es-la-electroforesis/
electrodos que conducen la corriente eléctrica hacia la (Junio, 2022)
cámara amortiguadora.
[4] Cromtek. (2021). “Electroforesis: ¿Qué es y para qué
Fuente de alimentación: proporciona una corriente sirve?”. Recuperado de:
eléctrica que permite que el movimiento de las https://www.cromtek.cl/2020/09/21/electroforesis-que-es-y-
biomoléculas a través de la matriz. para-que-sirve/ (Junio, 2022)
[5] Lomonte, B, sf. “Electroforesis en Gel de Poliacrilamida”.
Recuperado de:
https://www.academia.edu/19108410/Electroforesis_de_prote
%C3%ADna_de_la_leche (Junio, 2022)
[6] Bioted, sf. “Determinación del peso molecular de
proteínas”. Recuperado de:
https://www.bioted.es/protocolos/DETERMINACION-
PESO-MOLECULAR-PROTEINAS.pdf (Junio,2022)
