Replicación Del DNA
Replicación Del DNA
Replicación Del DNA
CONCEPTOS:
REBECA ALDUNATE
La replicación del DNA es semiconservativa
1958 Meselson y Stahl
REBECA ALDUNATE
Cada hebra de la doble hélice del DNA actúa
como templado para su replicación
Figure obtain from Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Horquilla de replicación:
Figure obtain from Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Modelo de Replicación del DNA CORRECTO
Figure obtain from Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
La DNA polimerasa solo puede
agregar nucleótidos
en el extremo 3´ de la nueva
hebra polimerizada
?
Posibilita la
eficiente
corrección
de errores
Figure obtain from Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Horquilla de replicación
PROCARIONTES
Hebra nueva
Hebra parental
Figure obtain from Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)
Una vez que comienza la replicación esta se mantiene en ambas direcciones en dos horquillas
de replicación hasta se generan las dos moléculas.
En E. coli la replicación de un cromosoma circular toma 42 min que contiene 4,639,221 base pairs y 1.4 mm de largo
(1000 base pairs per second per fork).
En humanos se ha estimado que la horquilla de replicación crece 100 pares de bases por seg
El genoma completo 3 × 109 pares de bases se replicará en 8 horas teóricamente se ha estimado que el genoma
humano contiene 10,000 100,000 replicons por lo que se podría demorar menos de 8 hr
Fragmentos de Okazaki (1968)
Sequencia corta de DNA con un primer de
RNA en el extremo 5´
Solo se crea en la hebra de retardo
La ADN ligasa cataliza la unión de una hebra de ADN con un grupo 3-hidroxilo libre a otra
con un grupo 5-fosfato libre.
En eucariotas y arqueas, el ATP se escinde en AMP y PPi para impulsar esta reacción.
1. Iniciación
2. Elongación
3. Término
DNA pequeños y circulares tienen un solo sitio de
origen de replicación
La enzima requiere un catión divalente (Mg ++) para su actividad y tiene tres
actividades enzimáticas asociadas:
Sin embargo, también hay enzimas que sintetizan DNA usando una plantilla de RNA
(transcriptasas inversas) e incluso enzimas que producen DNA sin usar una plantilla
(transferasas terminales).
La mayoría de los organismos tienen más de un tipo de DNA polimerasa pero todas operan
con las mismas características:
3'-5' exo,
E. coli DNA pol I DNA DNA/RNA monomeric
5'-3' exo
reverse
DNA/RNA DNA/RNA (ribonuclease H) used to make cDNA
transcriptase
•Pol I: implicated in DNA repair; has both 5'->3'(Nick translation) and 3'->5'
(Proofreading) exonuclease activity.
•Pol II: involved in replication of damaged DNA; has both 5'->3'chain extension ability
and 3'->5' exonuclease activity.
•Pol α: acts as a primase (synthesizing a RNA primer), and then as a DNA Pol
elongating that primer with DNA nucleotides. After around 20 nucleotides elongation
is taken over by Pol δ and ε.
•Pol β: is implicated in repairing DNA.
•Pol γ: replicates mitochondrial DNA.
•Pol δ: is the main polymerase in eukaryotes, it is highly processive and has 3'->5'
exonuclease activity.
•Pol ε: may substitute for Pol δ in lagging strand synthesis, however the exact role is
uncertain.
La estructura
tridimensional de las DNA
polimerasas se asemeja a
una mano derecha.
El nucleosido entrante
tiene color rojo y el
trifosfato es amarillo
Figure obtain from Molecular Biology of the Cell (©
Garland Science 2008)
Impedimento estérico para la incorporación
de ribonucleotidos por la DNA polimerasa
La adición de un nuevo nucleótido por la DNA polimerasa
requiere un correcto apareamiento de bases
Dos iones metálicos (verde en a y en b) unidos a la DNA polimerasa catalizan la adición de
un nuevo nucleótido. Uno de ellos interactúa con el 3’OH y el otro con el trifosfato
DOS funciones de la DNA POLIMERASA
DETERMINAAS POR SU ESTRUCTURA
En solución la helicasea
se une a un inhibidor
(dnaC protein),
Que se activa con el
loop de DNA
Replicación Eucariontes en diferentes regiones
del mismo cromosoma
• S- Cdc6 se fosforila y
degrada liberando a ORC
activando la formación de
la horquilla de replicación
Elongación
Elongación y Síntesis del DNA
•Progresividad de la DNA polimerasa depende de la existencia de un factor adicional una pinza
tipo anillo que permite que el DNA sintetizado permanezca unido y la DNA pol no se separe
SLING CLAMP
O PINZA
ABRAZADERA
SLIDING CLAMP
El canal interior del anillo está cargado positivamente y revestido con hélices alfa que
no hacen ningún contacto específico con el DNA, lo que permite que la abrazadera
deslizante se deslice libremente sobre el dúplex detrás de la polimerasa.
Una de las hebras de DNA rica en G en su extremo 3´es mas larga que la otra
hebra (G-rich sequence is AGGGTT).
La estructura adoptada por los telómeros es de un loop que seria estabilizada por
proteínas específicas que se unen al telomero lo que da una estructura al extremo
del cromosoma
Replicación en el telómero.
Síntesis de la secuencia repetitiva de G. El extremo 3´del DNA parental es extendido por la
ENZIMA Telomerasa a partir de un templado de RNA
DNA Supercoiling y las enzimas que
controlan el supercoiling las
Topoisomerasas
Avance del frente de replicación
El problema topológico
Alivio del sobreenrollamiento al frente del
avance de la replicación.
Topoisomerasa I
La enzima corta una de las dos
hélice
Luego la molécula de DNA gira en el
interior de la cavidad enzimática
A DNA topoisomerasa puede ser
vista como una endonucleasa
reversible que se une
covalentemente al DNA
DNA topoisomerasa II
A diferencia de la Topoisomerasa
tipo I utiliza ATP y se une
covalentemente en ambas hebras
de DNA
Topoisomerases Tipo II se
encuentran preferentemente en
células que proliferan por lo que
ha sido blanco de drogas
anticancer
REPLICACIÓN DEL DNA
CONCEPTOS:
REBECA ALDUNATE