Universidad Austral de Chile

Facultad de Ciencias
Instituto de Ciencias Químicas

Guía de Laboratorio “Síntesis Orgánica, QUIM 183”

Autores:

Joel Velásquez
Marcelo Muñoz
Javier Martínez
Gabriel Vallejos

Valdivia – Semestre 2 2022

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Laboratorio 1: Síntesis de una Feromona de la Cucaracha

Introducción

La cucaracha alemana, Blattellagermanica, es una importante plaga residencial a

nivel mundial, comúnmente asociada a la comida, y causante de muertes por alergia y asma
en niños de ciudades altamente pobladas.

Las infecciones de esta plaga se controlan en la actualidad mediante la sanitización

y el uso de insecticidas. Sin embargo, con el tiempo las poblaciones de estos insectos
tienden a desarrollar resistencia a ciertos insecticidas, haciéndose necesario el uso de
combinaciones de estos productos químicos. Entre estos se encuentran compuestos
orgánicos como los carbamatos, organofosfatos, hidrocarburos clorinados y piretroides. En
la gran mayoría de los casos estos productos son potencialmente dañinos tanto para los
seres humanos como para el medio ambiente, por lo que se recomienda su utilización en
trampas con carnada por sobre su aplicación masiva.

Esta estrategia implica el uso de carnadas especialmente elegidas para atraer a las
cucarachas, las que luego pueden ser eliminadas por insecticidas en la trampa o removidas
de esta. No obstante, estas carnadas pierden eventualmente su efectividad a medida que las
cucarachas aprenden a rechazarlas. Adicionalmente éstas, al no ser específicas para las
cucarachas, pueden atrapar o matar otras especies de insectos beneficiosos. De lo anterior
se puede concluir que una carnada perfecta sería una que atrajera específicamente a la
cucaracha, sin que esta pudiese aprender a rechazarla.

Las feromonas, como potenciales carnadas para insectos, han sido objeto de estudio
científico desde mediados del siglo pasado. Una feromona es un compuesto químico usado
por individuos de la misma especie para comunicarse entre sí. Este tipo de comunicación es
particularmente importante entre los insectos, utilizándose por ejemplo en el demarcado de
territorios, ubicación de comida y envío de alarmas, causando que estos se reúnan, se
dispersen o encuentren una pareja. Cuando estas feromonas específicas son utilizadas como
carnada, esta última tiene la ventaja de no atraer a otros insectos beneficiosos o que las
cucarachas comiencen a rechazarla.

En teoría el uso de feromonas en el control de insectos suena prometedor. Sin

embargo el aislamiento, identificación y luego síntesis química de la mayoría de las
feromonas ha mostrado ser un proyecto bastante difícil. Esto se debe esencialmente a que
cada insecto puede llegar a tener sólo un nanogramo (10-9 g) de la feromona, por lo que
miles o millones de insectos deben ser sacrificados para obtener una cantidad suficiente
para caracterizarla. En este largo y tedioso proceso es necesario extraer las glándulas
productoras de la feromona en cada individuo, para luego realizar fraccionamientos guiados
por ensayos biológicos.

La primera feromona de un insecto aislada fue la del gusano de la seda en 1959. Los
avances en instrumentación de las décadas siguientes, principalmente cromatografía de
gases (GC), cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS) y

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resonancia magnética nuclear (NMR), ayudó considerablemente a la aceleración de este

proceso, y en el día de hoy un importante número de feromonas son utilizadas en el control
de plagas.

Es importante mencionar a uno de los instrumentos más comúnmente utilizados en

el proceso de aislamiento de feromonas, específicamente en la detección de actividad
biológica: el electroantenograma (EAG). En este análisis se colocan electrodos en ambos
extremos del sistema de antenas del insecto en estudio, además de a un amplificador DC.
Cuando las células sensitivas de la antena se encuentran en presencia de compuesto
químico correcto (la feromona), el voltaje entre la punta y la base de la antena cambia y una
señal eléctrica es enviada a un detector. Cuando un EAG es acoplado a un sistema de
cromatografía de gases GC, este es llamado cromatografía de gases con detección
electroantenográfica o GC-EAG.

En 1993 se reportó que la hormona sexual de la cucaracha alemana se encuentra en

el pigidio de las hembras vírgenes, pero su identificación fue esquiva por varios años, hasta
que en 2005 pudo finalmente ser aislada y caracterizada. (S. Nojima, C. Schal, F. X.
Webster, R. G. Santangelo, W. L. Roelofs, Science 2005, 307, 1104-1106). Sin embargo,
en el estudio se utilizaron más de 15000 cucarachas hembras vírgenes para obtener
cantidades suficientes para los análisis de GC-EAD. Por otra parte los análisis de NMR y
MS indicaron que el compuesto en cuestión era el isovalerato de gentisilquinona, llamado
también como blattellaquinona. Siendo este un compuesto nuevo, fue necesario confirmar
esta estructura mediante síntesis química, utilizando el esquema que usaremos en este
experimento, resultando en un compuesto con propiedades espectroscópicas idénticas a las
compuesto aislado. Además, la sustancia sintética mostró una actividad biológica también
equivalente, tanto a nivel in-vitro como en poblaciones reales, probando así que la
estructura propuesta era la correcta.

La síntesis de la blattellaquinona requiere de dos pasos. En el primero es la reacción

del alcohol 2,5-dimetoxibencílico con cloruro de isovalerilo. Esta es una reacción de
sustitución nucleofílicaacílica y produce 2,5-dimetoxibencil 3-metilbutanoato. Esta
reacción es llevada a cabo en presencia de trietilamina. Cuando la reacción se ha
completado, es necesario un tratamiento posterior a la mezcla de reacción que incluye un
lavado con cloruro de amonio acuoso. La segunda etapa corresponde a la oxidación del 2,5-
dimetoxibencil 3-metilbutanoato utilizando nitrato de cerio y amonio (CAN) para formar el
compuesto final blattellaquinona.

El CAN es un agente oxidante que rara vez es incluido en textos de química

orgánica de pregrado, pero su habilidad para oxidar derivados del p-dimetoxibenceno en
sus correspondientes benzoquinonas se conoce desde los años 70. Además es barato, no-
higroscópico y de fácil manejo, y al no ser muy soluble en disolventes orgánicos, las
reacciones son llevadas a cabo usando mezclas de agua y acetonitrilo.

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Esquema 1: Síntesis de blattellaquinona.

Precauciones de seguridad

 El cloruro de isovalerilo es inflamable, corrosivo y puede causar quemaduras. Además,

es irritante de las vías respiratorias, lacrimógeno y tiene un olor terrible. Debe ser
manejado bajo la campana en todo momento.
 El alcohol 2,5-dimetoxibencílico es irritante: sus vapores no deben ser inhalados y es
necesario evitar el contacto con los ojos y la piel.
 La trietilamina es inflamable, corrosiva y peligrosa.
 El cloruro de amonio es irritante y dañino si se traga.
 El acetonitrilo es inflamable, irritante y dañino si es inhalado.
 El nitrato de cerio y amonio es un oxidante e irritante.
 El diclorometano se considera como un peligro moderado a la salud. Sin embargo se
recomienda el uso de guantes durante su manipulación.
 Los potenciales peligros asociados del intermediario y producto final de síntesis son
desconocidos, por lo que se recomienda que sean tratados como si fuesen peligrosos.

Procedimiento experimental

Preparación de 2,5-dimetoxibencil 3-metilbutanoato.

Disuelva 10 mmoles de alcohol 2,5-dimetoxibencílico en 40 mL de diclorometano y

coloque la muestra en un balón de fondo redondo con agitación magnética. Agregue 11
mmoles de trietilamina y agite hasta que la mezcla se encuentre en solución.

Agregue gota a gota utilizando un embudo de adición, durante 10-15 min, 13

mmoles de cloruro de isovalerilo a la solución en agitación constante. Después de que se
haya agregado todo el cloruro de ácido, continúe la agitación por 45 min. Realice
cromatografía en capa fina para observar si ha terminado la reacción.

Transfiera la mezcla resultante a un embudo de decantación y lave la fase orgánica

siguiendo la siguiente secuencia: una vez con 10 mL de bicarbonato de sodio saturado, dos
veces con 10 mL de cloruro de amonio al 10%, y una vez con 10 mL de cloruro de sodio
saturado. Seque la fase orgánica con sulfato de sodio anhidro y remueva el disolvente en un
evaporador rotatorio. Cuando el disolvente haya sido removido, se espera obtener alrededor

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de 2 mL de un líquido claro con algunos sedimentos. Este intermediario crudo, 3-

metilbutanoato de 2,5-dimetoxibencilo, se usará directamente en el próximo paso. Deje sólo
una pequeña muestra para un análisis de RMN e IR.

Preparación de isovalerato de gentisilquinona, Blattellaquinona.

Agregue al crudo de 3-metilbutanoato de 2,5-dimetoxibencilo obtenido en la etapa

anterior una mezcla de 40 mL of acetonitrilo/agua (50:50), y coloque la solución en un
balón de fondo redondo con agitación magnética.

Asegure un embudo de decantación (embudo de adición) sobre el balón y agregue

lentamente (10-15 min) una solución de 30 mmoles de nitrato de cerio y amonio (CAN) en
20 mL de agua bajo agitación vigorosa. Luego de que todo el CAN se haya agregado,
continúe con la agitación por 45 min. Realice cromatografía en capa fina para observar si
ha terminado la reacción.

Después de terminada la reacción, remueva los sólidos que se hayan formado

mediante filtración por gravedad. Luego agregue NaCl hasta que la solución se sature, y
traspase cuidadosamente el líquido a un embudo de decantación. Extraiga tres veces con 30
mL de CH2Cl2 cada vez.

Nota: Usualmente la fase orgánica se encuentra en la parte superior del embudo de

decantación durante la primera extracción, y otras veces no. Pruebe la identidad de ambas
fases con agua y guárdelas en caso de cometer algún error.

Combine los tres extractos orgánicos y lave secuencialmente como sigue: dos veces
con una disolución de 25 mL de bicarbonato de sodio saturado y una vez con 25 mL de una
disolución de cloruro de sodio. Seque la orgánica con sulfato de sodio anhidro. Elimine el
disolvente orgánico mediante un evaporador rotatorio y coloque el remanente líquido
viscoso en un vidrio de reloj hasta que se los restos de disolvente se evaporen y aparezca un
sólido. Este sólido es blattellaquinona.

Análisis del producto

Realice mediciones de punto de fusión, IR, y NMR del producto final,

blattellaquinona.

1.- Verificación teórica de la oxidación del anillo dimetoxi-fenílico al anillo quinona.

Con el objeto de verificar el proceso de oxidación del último paso de reacción, se

recurrirá al cálculo teórico de espectros IR y su posterior comparación con los obtenidos
experimentalmente para las substancias involucradas. En este caso particular, la presencia
de un esterisovalérico en la estructura aumenta considerablemente el número de
conformaciones de baja energía que deben ser consideradas en el cálculo teórico. Para
evitar este inconveniente, se realizará el cálculo para dos moléculas modelo y se verificará
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si estas muestran correctamente los cambios espectrales observados en las substancias

reales. Para el caso del precursor 2,5-dimetoxibencil 3-metilbutanoato se usará como
modelo el 2,5-dimetoxitolueno, y para el caso del producto final isovalerato de
gentisilquinona se usará la metil-parabenzoquinona.

Pasos a realizar:

1. Ingrese la estructura molecular de ambas moléculas modelo utilizando el software

Avogadro 1.1 y genere los archivos de entrada para el software Orca 3.0.3.

2. Ejecute los trabajos en el software Orca y una vez terminados, utilice el ejecutable
orca_mapspc para generar las curvas espectrales para cada molécula.

3. Compare los espectros experimentales y teóricos usando un software gráfico adecuado

y verifique si las bandas calculadas teóricamente coinciden con las obtenidas
experimentalmente.

Preguntas

1) En ambos pasos de la reacción uno de los reactivos es agregado lentamente. Sugiera

porque esto es necesario.

2) La reacción de haluros de acilo con alcoholes es una conveniente forma de sintetizar

esteres. Indique que cloruro de acilo y que alcohol serían necesarios para la preparación del
siguiente compuesto. ¿Qué otro compuesto sería necesario agregar a la mezcla de reacción
para facilitarla?

3) Compare y contraste los reactivos y condiciones de reacción que se usarían para

sintetizar el éster en la pregunta 2 a través de una esterificación de Fisher.

4) ¿Que bandas en el IR de la blattellaquinona y de su precursor directo esperaría que

fuesen útiles en la diferenciación de ambas substancias?

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Laboratorio 2: Síntesis de la D-glucopiranosilAzida: Una evidencia

espectroscópica para la inversión estereoquímica de una reacción SN2.4
Introducción

Las reacciones de substitución nucleofílicas de un carbono sp 3, SN1 y SN2, son dos

de las interconversiones de grupos funcionales más importantes discutidas en un nivel
introductorio de química orgánica. Estos procesos se usan para presentar las consecuencias
de cómo sutiles cambios estructurales pueden llegar a tener efectos significativos en las
rutas mecanísticas seguidas por los compuestos orgánicos para obtener el producto.
Aunque los resultados estereoquímicos de estas reacciones son discutidos en más detalle en
clases teóricas, la inversión de la configuración en SN2, y la típica formación del racemato
en SN1, hay muy pocos experimentos de laboratorio viables que muestren evidencia
accesible para estos cambios. En el presente documento se encuentra un útil experimento
del tipo SN2 proveniente de la química de los hidratos de carbono, que usa un nucleófilo
típico (azida) y un grupo saliente (bromuro) presentado en cursos de pregrado. La evidencia
de la inversión proviene de las constantes de acoplamiento vecinal en el espectro de 1H
RMN del material inicial y el producto.

El derivado de azúcar 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-glucopyranosyl bromuro

(acetobromoglucosa, 1,), que es fácilmente sintetizado y comercialmente accesible, es un
importante donador de glycosyl (que normalmente reacciona mediante el mecanismo SN1)
que ha encontrado amplias aplicaciones en el campo de la síntesis de glucósidos. El uso de
buenos nucleófilos como la azida provoca que el desplazamiento estereoespecífico SN2 en
bromuro 1 genere, como se enfatiza aquí, la glycosylazida invertida (2), la que está
estructuralmente bien definida y es un precursor útil para glycosyl amidas importantes
biológicamente (esquema 1).

En el experimento descrito aquí, los estudiantes fueron capaces de obtener pruebas

del cambio estereoquímico en el C1 cuando el bromuro 1 se convierte en azida 2 mediante
la comparación de las constantes de acoplamiento protón-protón para H1 de cada
substancia, y luego usando la ecuación de Karplus para vincular estos valores a los ángulos
de torsión alrededor del C1-C2 de los dos compuestos. Además de ser un ejemplo útil del
proceso de inversión de una reacción SN2, los compuestos derivados del azúcar usados en
este ejercicio tienen estructuras y espectros que sirven para iniciar la discusión de otros
temas como la conformación, configuración, y fenómeno de la diastereotopicidad.

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Esquema 1. Un desplazamiento estereoespecífico SN2 que incluye una inversión en un

carbono sp3

Procedimientos Experimentales

Preparación de 2,3,4,6-tetra-O-acetil-α-D-glucopiranosil bromuro (1).

El -D-Glucopyranosilpentaacetato (2.5 g, 6.4 mmol) se disuelve en una mezcla de

33% HBr/AcOH (20 mL) en un matraz de fondo redondo de 100 mL secado en estufa,
provisto de un tapón septum y una barra de agitación magnética. Se deja agitar la solución
de color café-anaranjado durante tres horas o hasta que la TLC (1:1, hexano : acetato de
etilo, y donde el producto tiene un Rf = 0.37) indique que hay consumo del reactivo inicial.
La mezcla de reacción se diluye posteriormente con acetato de etilo (25 mL), enfriado a 0
°C, y esta solución es neutralizada cuidadosamente con NaOH al 10% acuoso (50 mL) y
saturada con una solución de NaHCO3 (5mL).

La mezcla es extraída con acetato de etilo (3 x 25 mL) y luego estos extractos

combinados se secan con sulfato de magnesio anhidro; se filtra y evapora bajo presión
reducida hasta obtener un líquido viscoso claro que es esencialmente glycosyl bromuro 1
puro (2.62 g, 99% de rendimiento). Este material debe ser inmediatamente almacenado en
un congelador en condiciones anhidras si es que no se usa inmediatamente para sintetizar
glycosylazida 2. Los espectros de protones 1H, 13C y COSY NMR del compuesto bromuro
1 están incluidos en el material complementario.

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Preparación de 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-glucopiranosilazida (2) en base a una

reacción α-D-glucosil bromuro (1) via SN2.

El α-D-glucosyl bromuro (1, 2.60 g, 6.32 mmol) se pesa en un matraz de fondo

redondo de 100-mL provisto de un tapón septum y una barra de agitación magnética, y se
disuelve en una mezcla de acetona y agua de 5:1 (70 mL). Se añade la azida de sodio (1.95
g, 25.0 mmol) y se agita la solución durante 24 horas a temperatura ambiente, o hasta que la
TLC (1:1 hexano : acetato de etilo) indique que todo el material inicial ha reaccionado. La
acetona es removida en un rotavapor o mediante calentamiento a temperatura menor a 50
°C en un baño de agua bajo una campana extractora. Al material pastoso obtenido se le
agrega agua y acetato de etilo (50 mL cada uno). Se separa la fase orgánica y la fase líquida
acuosa se extrae con acetato de etilo (2 x 50 mL). Los extractos combinados (incluyendo la
primera fase orgánica separada) se secan sobre sulfato de magnesio anhidro; se filtra y se
evapora hasta obtener un sólido blanco que posteriormente se cristaliza usando metanol
caliente o isopropanol para obtener la azida 2 como un sólido cristalino sin color. Se
proporciona a los alumnos espectros de 1H, 13C and COSY NMR de una muestra pura 2
para su análisis.

Análisis en baja resolución MS: m/z calculado a 396.102 (+Na)

m/z encontró 396.1 (+Na).
Punto de Fusión: 124-126 °C
[α]D =29.6° (c. 1.0, CH2Cl2)

Parte Teórica Computacional:

Introducción:

La espectroscopía de resonancia magnética nuclear (RMN) es uno de los métodos

más populares en la determinación estructural y conformacional de pequeñas moléculas en
disolución, debido a la información detallada que se puede obtener de los espectros de
RMN, obtenidos en cantidades del orden de los miligramos, incluso menos, de material. El
corrimiento químico de 1H y 13C provee información acerca del entorno químico de los
átomos; las constantes de acoplamiento (J) protón-protón proveen información acerca de la
conectividad entre los átomos y las integrales de protones entregan el número relativo de
grupos de átomos. Esta información básica puede ser suplementada por el corrimiento
químico de 15N, determinación del efecto nuclear Overhauser (enO), efecto rotatorio
Overhauser (erO), entre otros experimentos disponibles. Las diferentes partes de
información pueden ser interpretadas por científicos expertos, o por determinación
estructural asistida por programas computacionales. Debido al amplio rango de información
que se puede obtener de los espectros de RMN no es de sorprender que muchas estructuras
erróneas se hayan publicado en literatura. Muchos errores son causados por la mala

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asignación de la configuración relativa de los compuestos orgánicos, debido a esto en los

últimos años se han implementado técnicas de química cuántica a través de la teoría del
funcional de la densidad (TFD) para calcular desplazamientos químicos; constantes de
acoplamiento 3JHH; constantes de acoplamiento 1JCH; interpretación espacial de los
resultados enO y erO, entre otras.6

Es así como se ha elucidado la conformación y la estabilidad relativa de flavan-3-

oles en agua, las estructuras optimizadas y sus energías fueron calculadas utilizando TFD,
utilizando los métodos M06-2X, ωB97X-D, B3LYP y CAMB3LYP. Los resultados fueron
evaluados por comparación de las constantes de acoplamiento espín-espín calculadas de
protones vecinales y valores observados en espectros de RMN 1H en D2O.7

Otro ejemplo lo constituye el estudio de las propiedades estructurales y

conformacionales de valsartan (3), un medicamento antihipertensivo con capacidad
selectiva de ser antagonista de los receptores de angiotensina II, que actúa sobre los
receptores AT1. Se escaneó la superficie de energía potencial de valsartan a través del
método TFD B3LYP/6-311++g** y B3LYP-D3/6-311++g** para cuatro confórmeros
encontrando los puntos de mínima energía. Los parámetros de RMN incluyendo
corrimientos químicos y constantes de acoplamiento espín-espín fueron obtenidos de un set
de datos espectroscópicos 2D (H-H COSY, HMQC y HMBC) experimentales. Por otro
lado, diversos métodos FTD como LDA, GGA e híbridos fueron usados para realizar los
cálculos de los mismos parámetros y luego comparar los valores.8

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Objetivos:

 Determinar la constante de acoplamiento (3JH1-H2) azida de 2,3,4,6-tetra-O-acetil-β-

D-glucopyranosido (2).
 Determinar la constante de acoplamiento (3JH1-H2) azida de 2,3,4,6-tetra-O-acetil--
D-glucopyranosido (4).

A desarrollar:

a) Dibuje la azida de 2,3,4,6-tetra-O-acetil-β-D-glucopiranosido (2) con el programa

Avogadro y genere la entrada para el programa NWChem para el cálculo de
optimización de geometría y constante de acoplamiento espín-espín entre los
hidrógenos 1 y 2. Realice lo mismo para el compuesto 3.
b) Ocupe el método UHF y la base 3-21G*. La entrada de debe ser con coordenadas de
matriz Z con las que se definen posiciones (no ocupar con coordenadas cartesianas
ya que no etiqueta los átomos). En la tabla 1 podrá encontrar un ejemplo de entrada
de NWChem para realizar este trabajo.
c) Compare las constantes de acoplamiento experimental (3JH1-H2) y teóricas.

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TABLA 1: Ejemplo de entrada del programa NWChem para el cálculo de una constante de
acoplamiento (3JH11-H13)

Input o entrada para NWChem, nombre del Observaciones de las Líneas del
Archivo nmr.nw (archivo de texto con extensión archivo nw
nw)

echo echo es un comando de entrada

start molecule Indica la molécula de inicio.

title "Title"
charge 0

geometry units angstroms print Acá se describen las coordenadas de

zmatrix la molécula, la que deben estar en
C Matriz Z, para que funcione el
C 1 r2 etiquetado de los átomos que se
H 1 r3 2 a3 utilizará para calcular la constante de
H 1 r4 2 a4 3 d4 acoplamiento.
H 1 r5 2 a5 3 d5
H 2 r6 1 a6 3 d6
H 2 r7 1 a7 3 d7
O 2 r8 1 a8 3 d8
H 8 r9 2 a9 1 d9
variables
r2 1.52331
r3 1.11035
a3 109.70756
r4 1.11057
a4 110.08062
d4 240.19393
r5 1.11063
a5 110.01346
d5 119.85178
r6 1.11373
a6 110.53337
d6 58.51746
r7 1.11043
a7 109.32096
d7 300.57785
r8 1.40142
a8 110.43631
d8 181.12571
r9 0.99288
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a9 106.65298
d9 281.49754
end
end

driver; maxiter 400; end

basis Indica la base de cálculo que se

* library 3-21G* utilizará para desarrollar las
end iteraciones y comando
selfconsistentfield (scf); hace
scf referencia al método de campo
uhf autoconsistente ocupado en química
end y que es una forma aproximada de las
ecuaciones de mecánica cuántica del
task scf optimize Método Hartree-Fock.

property
spinspin 1 11 13 Tarea para optimizar la geometría
end según scf

task scf property

Tarea y comando para calcular una
constante de acoplamiento 1 entre los
átomos 11 y 13. Usted deberá
modificar estas variables para
calcular lo solicitado.

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Laboratorio 3: Reducción de cetonas con borohidruro: Estereoquímica de

la reducción de estrona.6
Objetivo: En este experimento se llevará a cabo la reducción de una cetona a un alcohol
usando borohidruro de sodio. También se estudiará la estereoquímica de esta reacción
mediante la reducción de estrona y analizando los productos de la reacción.

Escenario

Usted es parte de un equipo de síntesis orgánica en una compañía líder en la investigación

de medicamentos. En una reciente reunión de directores de división, los equipos de
farmacología y toxicología propusieron llevar a cabo estudios metabólicos relacionados con
algunos esteroides anabólicos sintéticos para poder encontrar medicamentos que puedan
fortalecer las terapias contra el cáncer de mamas. Tras la reunión, su equipo ha sido
asignado para la tarea de sintetizar esteroides estereoquímicamente puros para este
proyecto. Su líder de proyecto le ha solicitado evaluar la pureza estereoquímica de los
esteroides que se obtengan a través de la utilización de distintos reactivos para la síntesis.

Los esteroides son una clase de moléculas bioactivas que juegan un rol esencial en el
cuerpo, como por ejemplo el control de la meiosis, el metabolismo de los hidratos de
carbono, el almacenamiento de grasa, el control de los músculos y funciones inmunes.
Numerosos esteroides sintéticos y naturales se usan terapéuticamente para tratar desórdenes
metabólicos, pérdida de peso y cáncer de mama.

La naturaleza del substituyente en esta

posición afecta el metabolismo del
esteroide.

Figura 3.1. Testosterona – un esteroide típico.

Estructuralmente, los esteroides contienen un esqueleto de cuatro anillos

fusionados, y a los cuales se conectan varios grupos funcionales. Una conversión sintética
importante de esteroides que afecta su metabolismo es la metilación en la posición 17 del
esqueleto. La metilación en esta posición retarda significativamente el metabolismo del

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esteroide en el hígado y su transformación en productos de desecho. Por esta razón, los

esteroides metilados en la posición 17 usualmente tienen una vida media más larga que sus
contrapartes no metiladas. La base de este metabolismo retardado es que el grupo metilo en
la posición 17 previene que el esteroide se posicione en el sitio activo de las numerosas
enzimas del hígado que procesan esteroides. Por esta razón, la mayoría de los esteroides
orales están metilados en dicha posición.

Figura 3.2. Ejemplos de esteroides sintéticos metilados en la posición 17 disponibles oralmente

Ethynylestradiol: Un estrógeno sintético utilizado en la mayoría de las formulaciones de

anticonceptivos orales

Methylestosterone: Un esteroide anabólico sintético utilizado para tratar la deficiencia de

testosterona en hombres y el cáncer de mamas en mujeres (prohibida por la NCAA para
atletas)

Oxymetholone: Un esteroide sintético anabólico utilizado para tratar la osteoporosis y la

anemia, y que ha probado ser efectivo en el tratamiento del síndrome de desgaste del VIH

Para poder diseñar un esquema apropiado de síntesis de esteroides

estereoquímicamente puros, su líder de equipo le ha solicitado que investigue la viabilidad
de usar esteroides con un grupo carbonilo en la posición 17 como material inicial. Una
forma sencilla de investigar el curso estereoquímico de la reducción es llevando a cabo la
reducción de estrona y luego determinar si la reacción resultó en un solo producto
estereoquímicamente puro o una mezcla de estereoisómeros.

Entendiendo el Experimento

Hidruros metálicos (fuentes del anión hidruro H: –), del grupo de elementos 3A,
como el hidruro de aluminio y litio (LiAlH4) y el borohidruro de sodio (NaBH4), son usados
ampliamente para reducir compuestos carbonilos y convertirlos en sus correspondientes
alcoholes. El hidruro de aluminio y litio reduce muchos compuestos que contienen grupos

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carbonilos – aldehídos, cetonas, ácidos carboxílicos, ésteres y amidas. En contraste, el

NaBH4 es un agente reductor más suave y reduce solo aldehídos y cetonas.

Aldehído o cetona. Seguido por una hidrólisis acida  alcohol (La estereoquímica del
alcohol está gobernada por la naturaleza y la posición de los grupos R)

La reactividad reducida del borohidruro de sodio y el hecho de que el ion sodio es

un ácido de Lewis más débil que el ion litio requiere que sea usado en solventes próticos
como el alcohol. Por el contrario, el hidruro de aluminio litio reacciona rápidamente con (y
es en consecuencia destruido por) solventes próticos y por lo tanto debe ser usado en
condiciones anhidras y en solventes apróticos libres de cualquier función del tipo carbonilo.
La facilidad con que se le puede manejar y su reactividad óptima (y su bajo costo) hacen
que el borohidruro de sodio sea el reactivo escogido para reducir aldehídos y cetonas, no
solo en el laboratorio sino también en procesos industriales de gran escala.

En este experimento se llevará a cabo la reducción de estrona a estradiol usando

borohidruro de sodio en metanol como solvente. Las estronas y el estradiol están
clasificados como estrógenos, compuestos esteroides que funcionan como hormonas
sexuales femeninas. Promueven el desarrollo de características sexuales secundarias
femeninas, como el crecimiento de los pechos, y están involucrados en el engrosamiento
del endometrio y otros aspectos que regulan el ciclo menstrual. Como todas las hormonas
esteroides, los estrógenos penetran rápidamente a través de la membrana celular. Una vez
dentro de la célula, interactúan con los receptores de estrógenos. Las estronas y el estradiol

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fueron encontrados inicialmente en la orina de mujeres embarazadas. Además de su

funcionalidad como hormonas sexuales, los estrógenos naturales y sintéticos tienen
aplicaciones terapéuticas en terapias de reemplazo de hormonas y el tratamiento del cáncer
de mamas.

Pregunta 1. Examine cuidadosamente las estructuras de un estradiol 17- y un estradiol

17-, y determine la relación estereoquímica entre los dos isómeros.

Cuando la estrona es tratada con borohidruro de sodio (NaBH 4), tiene lugar la
reducción del grupo carbonilo, y se produce un alcohol. Esto significa que la estrona se
puede convertir tanto en 17-estradiol como en 17--estradiol. Para poder predecir el
resultado estereoquímico de la reacción, se debe considerar algunas características
estructurales adicionales de la molécula de estrona. Un esteroide con todas las uniones trans
del anillo, como la estrona, permanece rígido y en una forma similar a un disco. El grupo
angular metil (ver estructura abajo) está en una posición axial, y convencionalmente se dice
que ocupa la cara  (beta) del esteroide. La otra cara, la inferior del esteroide, es llamada la
cara  (alfa). Cuando el borohidruro de sodio ataca el grupo carbonilo, debe atacar los
orbitales– del grupo carbonilo. En principio, esto debería ocurrir en cualquiera de las caras
del esteroide. Sin embargo, al examinar la estructura abajo, es posible ver que las dos
formas distintas de acercamiento del BH4− no son equivalentes.

Un ataque en Beta produce Alfa-alcohol, un ataque en Alfa produce Beta-alcohol

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Pregunta 2. Tomando como base las estructuras presentadas arriba, ¿qué cara del grupo
carbonilo en la estrona será atacado más rápidamente por el anión borohidruro? ¿Cómo
afecta esto la orientación del grupo hidroxi en el producto?

Pregunta 3. Prediga el mayor diasterómero que se formará de la reducción de estrona

usando borohidruro.

Procedimiento

Se añade 5 mL de etanol al 95% y 40 mg (148 mol) de estrona a un balón de fondo

redondo de 25 mL junto con una barra de agitación magnética. Se ajusta la temperatura de
la placa calefactora hasta el nivel 3 (la temperatura de la placa calefactora debe ser ~80
°C)y se coloca el balón de reacción en un baño de vaselina líquida sobre la placa
calefactora y se agita hasta que la estrona esté completamente disuelta.

Solubilidad de la estrona: Un gramo de estrona es soluble en 250 mL de etanol al 95% a

15°C. Sin embargo, la misma cantidad de estrona solo requiere de 50 mL de alcohol a
ebullición para disolverse. Tomaría alrededor de 5 minutos para que la estrona se
disolviese en el EtOH de 95%.

Confeccione una TLC de gel de sílice y cuidadosamente trace una línea con un lápiz
grafito blando a 1.0 cm desde el fondo de la placa para indicar el origen. Coloque cinco
pequeñas marcas perpendiculares al origen de la línea, que estén equidistantes, para
delinear cinco carriles separados, los cuales deben ser numerados. Usando un capilar fino,
coloque una pequeña muestra de su solución de estrona y aplíquela tres veces al CARRIL
1.

Luego agregue a la solución de estrona 1 mL de NaBH4 0.5 M y agite la mezcla de

reacción por 15 minutos. Tenga en consideración que la mezcla inicial será bastante clara y
puede que se enturbie después de unos cuantos minutos. Al final de este periodo, usando
otro capilar fino, coloque una muestra de la reacción en el CARRIL 2 de la placa (figura
3.3).

Ajuste el nivel de calor de la placa calefactora en 4 (temperatura ~90 °C) y ebulla la

mezcla de reacción mientras continua la agitación. Desconecte el plato calefactor una vez
que la reacción comience a ebullir y continúe la agitación por 5 minutos. Lentamente
agregue agua destilada a la mezcla de reacción con una pipeta pasteur. Son necesarios entre
10-12 mL de agua para causar que la solución se vuelva turbia.

La adición inicial de agua aplaca la reacción. Los ésteres de borato, que son menos
solubles en agua que en el etanol de 95%, precipitarán inicialmente fuera de la solución.
Sin embargo, los ésteres de borato reaccionan con el agua para producir alcoholes y
borato de sodio, que sí es soluble en agua. Si agrega agua lentamente, podrá ver que el

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precipitado inicial vuelve a disolverse. El agua añadida se mezclará con el producto que
se está cristalizando en la proporción correcta.

Retire el balón de reacción del agitador magnético y enfríelo en un baño de hielo

por 15 minutos para permitir que el producto se cristalice. Proceda a filtrar los cristales
mediante succión en un embudo Hirsh. Posteriormente, lave el producto con dos mL de
agua destilada y continúe la succión por al menos 15 minutos. Determine el peso del
producto seco y luego transfiera una pequeña cantidad de él con una espátula limpia a un
pequeño vial cónico. Añada 2 gotas de etanol al 95% y mezcle el producto aislado con una
espátula. Coloque una pequeña muestra con un capilar fino y siémbrela en el CARRIL 3 de
la placa. Siembre además de la misma manera una solución estándar de 17--estradiol en
el CARRIL 4 y de 17--estradiol en el CARRIL 5 respectivamente. Llene la cámara
cromatográfica de la TLC con 8 mL de solvente de elución (acetona: diclorometano:
hexano, 22 : 50 : 28 en volumen). Asegúrese que el nivel del solvente esté por debajo de la
línea de origen de la placa cromatográfica. Después de que la TLC se haya eluído, marque
el frente del solvente y sumerja brevemente la TLC en una solución reveladora de vanillina
para visualizar los resultados. Coloque la TLC en una estufa de secado por 3 minutos y si es
necesario, colóquela en una placa calefactora caliente, e identifique el isómero que se
obtenga como producto. ¿Estos resultados son consistentes con la predicción realizada?
Calcule el porcentaje de rendimiento del producto final. Determine el punto de fusión del
producto seco y verifique la asignación estereoquímica del producto (figura 3.3)

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Figura 3.3. Perfil de la TLC de una reducción de estrona con borohidruro de sodio. Carril
1: mezcla de reacción antes de añadir el borohidruro. Carril 2: mezcla de reacción 5
minutos después de añadir el borohidruro. Carril 3: producto aislado. Carril 4: 17-β -
Estradiol de referencia. Carril 5: 17- - Estradiol de referencia.

Para obtener un espectro IR, transfiera todo el producto después de tomar el punto
de fusión a un vial cónico de 3-mL. Añada 0.5 mL de éter dietílico y mezcle vigorosamente
el contenido con una espátula, y espere a que se asiente. Añada una gota de solución de éter
sobrenadante en el centro del plato de sal del IR y permita que se evapore. Repita este
proceso 4-5 veces para obtener una película homogénea del producto en el plato de sal.
Analice el espectro IR de los productos y compárelos con el espectro del material inicial.

Observación y Resultados

Reporte el rendimiento del isómero estradiol e identifique su estereoquímica

tomando como base el punto de fusión observado y la TLC. Reporte los valores de R f
correspondientes a los puntos observados en la TLC. Analice el espectro IR de su producto.
¿Cómo se diferencia del espectro del material inicial?

Compuesto MW Mp (°C)
estrona 270.38 260–2
17--estradiol 272.39 220–3
17--estradiol 272.39 176–80
Borohidruro de Sodio 37.83 400(d)
d=se descompone al derretirse

Discusión

La discusión debería incluir un detallado mecanismo de reducción de estrona mediante el

borohidruro de sodio. El mecanismo debe explicar claramente la ruta estereoquímica
seguida en la reacción. Comente sobre la estereoespecificidad de esta reacción y conteste
las siguientes preguntas.
1. ¿Por qué es necesario usar solventes apróticos mientras se llevan a cabo las reducciones
con hidruro de aluminio y litio? Al usar metanol como ejemplo de un solvente
prótico, escriba la ecuación balanceada que representa la reacción entre el hidruro de
aluminio y litio y el metanol.
2. Las reducciones de hidruros son esencialmente reacciones de adición nucleofílica.
Identifique el nucleófilo y la reducción electrofílica en la reducción de cetonas con
borohidruro de sodio.
3. Explique por qué la acetofenona reacciona tan fácilmente con el borohidruro de sodio
cuando la 2,6-dimetilacetofenona es más lenta. Construya un modelo de 2,6-
dimetilacetofenona y examine la orientación del grupo carbonilo con respecto al
anillo. ¿Qué características estructurales de la 2,6-dimetilacetofenona afectan la
velocidad de la reducción por borohidruro?

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4. Conteste las siguientes preguntas basándose en las cantidades relativas de alcoholes

producidas en una reducción de 10-metildecalona con diferentes agentes reductores,
como se indica más abajo.

1. Reducción por donadores de hidruro.

2. Acumulación acídica.

Agente reductor β-alcohol (%) α-alcohol (%)

NaBH4 (en isopropanol) 70 30
LiAlH4 (en éter dietílico) 60 40
LiAlH(OiPr)3 (en éter diisopropílico) 95 5

Donde LiAlH(O iPr)3 ≡

a) Explique por qué la velocidad de la reducción de la 10-metildecalona sería mayor

con hidruro de aluminio y litio que con borohidruro de sodio. Luego, compare las
velocidades de reducción con borohidruro de sodio y con borohidruro de litio como
agentes reductores.
b) Justifique la formación de una sustancialmente mayor cantidad de β-alcohol en la
reducción de 10-metildecalona con hidruro de triisopropoxialuminio de litio
comparado con el borohidruro de sodio.

Parte Teórica Computacional:

Introducción:

El borohidruro de sodio (NaBH4) ha sido ampliamente usado como agente reductor en

química orgánica desde hace ya medio siglo. El NaBH4 puede reducir grupos carbonilos de
cetonas y aldehídos, tal como grupos imina, de manera muy suave en comparación a
hidruro de aluminio y litio (LiAlH 4). A pesar de que borohidruro de sodio es ampliamente
usado, aún permanecen ciertos detalles sin estudiar en el mecanismo de la reacción de
reducción de compuestos carbonílicos; el año 2014 se estudió de manera teórica el

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mecanismo de reducción de resorufina por NaBH4 (esquema 1), para lo cual se utilizó el
programa Gaussian 09, el método TFD de Truhlar M06-2X y la base 6-31+G*.10

ResorufinaDihidroresorufina

Esquema 1: Reacción de reducción de resorufina.

Debido a que la búsqueda de estados de transición es ardua y computacionalmente

demanda mucho tiempo y recursos, en este práctico se determinará la energía del aducto
entre el grupo carbonilo de la estrona y el anión borohidruro, con coordenadas congeladas
en la distancia entre el hidruro y en carbono, así como entre el boro y el oxígeno, como se
muestra a continuación.

Con esto se espera determinar, de manera teórica, cuál de las dos caras de la estrona está
más impedida estéricamente.

Objetivos:

 Determinar la energía del aducto(1) utilizando coordenadas congeladas.

 Determinar la energía del aducto(2) utilizando coordenadas congeladas.

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1 2

A desarrollar:

a) Dibuje aducto 1 con el programa Avogadro y genere la entrada para el programa

NWChem para el cálculo de optimización de geometría, restringiendo las distancias
entre uno de los hidrógenos del anión BH4- y en carbono, así como la distancia entre
el oxígeno y el boro a 2,267 A aproximadamente. Realice lo mismo para el aducto2.
b) Ocupe el método HF y la base 3-21G*. La entrada de debe ser con coordenadas de
matriz Z con las que se definen posiciones (no ocupar con coordinas cartesianas ya
que no etiqueta los átomos). En la tabla 1 podrá encontrar un ejemplo de entrada de
NWChem para realizar este trabajo.

TABLA 1: Ejemplo de entrada del programa NWChem para el cálculo de optimización de

geometría con coordenadas congeladas.

Input o entrada para NWChem, nombre del Observaciones de las Líneas del
Archivo etrona.nw (archivo de texto con archivo nw
extensión nw)
echo
echo es un comando de entrada
start molecule
Indica la molécula de inicio.
title "Ejemplo"
charge -1

geometry units angstroms print

zmatrix Acá se describen las coordenadas de
C la molécula, la que deben estar en
O 1 r2 Matriz Z, para que funcione el
H 1 r3 2 a3 etiquetado de los átomos que se
H 1 r4 2 a4 3 d4 utilizará para calcular la constante de
B 3 r5 1 a5 2 d5 acoplamiento.
H 5 r6 3 a6 1 d6
H 5 r7 3 a7 1 d7
H 5 r8 3 a8 1 d8
H 5 r9 3 a9 1 d9
variables
r2 1.21944
r3 1.08442
a3 119.98905
r4 1.08432
a4 120.00770
d4 179.78896
r5 3.48770
a5 89.73817
d5 79.20347
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r6 1.19111
a6 64.71755
d6 115.70973
r7 1.19113
a7 86.92593
d7 2.54570
end
end

driver; print low; end

driver; maxiter 400; end
driver; xyz test; end Indica la base de cálculo que se
utilizará para desarrollar las
basis iteraciones y comando
* library 3-21g* selfconsistentfield (scf); hace
end referencia al método de campo
autoconsistente ocupado en química
scf y que es una forma aproximada de las
vectors output n2.movecs ecuaciones de mecánica cuántica del
end Método Hartree-Fock.

geometry adjust # move to guess geometry &

apply constraints
zcoord
bond 16 47 2.267 r constant
bond 19 43 2.267 r constant
end Tarea y comando para restringir la
end distancia entre los átomos 16 y 47 a
2,267 A y la distancia entre los
task scf optimize átomos 19 y 43 a 2,267 A. Usted
task scf energy deberá modificar estas variables para
calcular lo solicitado.

Tarea para optimizar la geometría y

calcular la energía según scf

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Referencias:

1. Feist, P. L. The Synthesis of a Cockroach Pheromone. J. Chem. Educ. 2008, 85,

1548-1549.
2. Smith, M.B.; March, J. March’s Advanced Organic Chemistry: Reactions,
Mechanisms, and Structure; John Wiley and Sons: New york, 2001.
3. Vogel, A.I.; Tatchell, A.R.;Furnis, B.S.; Hannaford, A.J.; Smith, P.W.G. Vogel's
Textbook of Practical Organic Chemistry, Prentice Hall, 1996.
4. Adesoye, O. G.; Mills, I. N.; Temelkoff, D. P.; Jackson, J. A.; Norris, P. Synthesis
of a D-GlucopyranosylAzide: Spectroscopic Evidence for Stereochemical Inversion
in the S(N)2 Reaction. J. Chem. Educ. 2012, 89, 943-945.
5. Carey, F. A.; Giuliano, R. M. Organic Chemistry, 8th ed.; McGraw Hill Higher
Education: New York, 2010; pp 137−183.
6. Venkata, C.; Forster, M. J.; Howe, P. W. A.; Steinbeck, C., The potential utility of
predicted one bond carbon-proton coupling constants in the structure elucidation of
small organic molecules by NMR spectroscopy. PLoS One 2014,9, e111576/1-
e111576/8, 8 pp.
7. Hayashi, N.; Ujihara, T., Conformations of Flavan-3-ols in Water: Analysis Using
Density Functional Theory. J. Nat. Prod. 2017,80, 319-327.
8. Chashmniam, S.; Tafazzoli, M., NMR investigation and theoretical calculations of
the solvent effect on the conformation of valsartan. J. Mol. Struct. 2017,1148, 73-
80.
9. Aditya, A.; Nichols, D. E.; Loudon, G. M. Borohydride Reduction of Estrone. J.
Chem. Educ. 2008, 85, 1535-1537.
10. Song, P.; Ruan, M.; Sun, X.; Zhang, Y.; Xu, W., Theoretical Study of Resorufin
Reduction Mechanism by NaBH4. J. Phys. Chem. B 2014,118 (34), 10224-10231.

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