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1. Si el tiempo de retención de un componente A es mucho mayor que el de un componente

B, qué indica esto acerca de los analitos en:
 ¿Una cromatografía de permeación en gel?

En permeación en gel: A es de menor tamaño que B.

 b- Una cromatografía de fase reversa?

En fase reversa: A es menos polar que B.

2. Dibuje un diagrama de bloques e identifique los componentes fundamentales de un

cromatógrafo de gases.

Sistema de
Fase movil Detector registro de
datos

Puerto de Fase
inyección estacionaría

Horno de
Columnas
columna

 ¿En qué circunstancias es conveniente derivatizar un analito antes de realizar un

análisis por CG?
La derivatización generalmente aumenta la volatilidad y en ciertos casos puede
producir una respuesta selectiva del detector.
 ¿Qué es un “gradiente” en CG y en CL? En CG se refiere a un aumento de temperatura
durante la separación cromatográfica. En CL se refiere al aumento en el poder de
elución de la fase móvil durante la separación cromatográfica.
 ¿Qué ventajas tiene una fase estacionaria ligada en CG? Reduce la tendencia de la fase
estacionaria a sangrar de la columna a elevadas temperaturas.
 ¿Por qué el detector de conductividad térmica responde a todos los analitos excepto
al gas portador? El detector de conductividad térmica “compara” la conductividad
térmica del eluato con la del gas portador.
 Comparar las propiedades de una columna tubular abierta con las de una columna
empaquetada. Las columnas tubulares abiertas se caracterizan por: mayor resolución,
debido a que la longitud de la columna es mayor; menor tiempo de análisis, debido a
que al contener menos fase estacionaria retienen menos a los solutos; mayor
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sensibilidad, por las características que le son propias. Tienen menor capacidad de
muestra, es decir, se puede aplicar menos muestra que a una columna empacada.
3. - Los siguientes datos fueron obtenidos por medio de un cromatograma gas líquido, en
una columna de 1.50 m., cuya fase estacionaria es de escualeno.

Compuesto tr (min) W (min) Calcular: a- El tiempo de retención corregido

no retenido 3 ----- (tr') para cada compuesto.
benceno (PE 80 °C) 10 1.1
hexano (PE 68 °C) 11 1.4 11 1.4 t ´ r=t R −t 0
t ´ r benceno=10−3=7
t ´ rhexano=11−3=8

b- El número promedio de platos (N prom.).

2

( )
2
tR 10
N benceno =16( ) =16 =16 ( 82.6446 )=1322.31
wb 1.1

( wt ) =16( 1.411 ) =16 ( 61.73468)=987.75

2 2
R
N hexano =16
b

N prom=N hexano + N benceno /2=987.75 +1322.31/2= 2310.064/2=1155.32

c- La resolución (R) entre ambos picos y decir si se logra la separación.

t rb−t ra
Rs= =¿
1
( a +a )
2 A B
al ser la separacion de 0.8 se tienen que es inaceptable .
4. Los siguientes tiempos de retención y ancho de picos fueron observados en una columna
gas líquido de 1,50 m, rellena con FE muy polar, de composición química del tipo del etilen
glicol.

Compuesto tr (min) W(min)

no retenido 0.40 ------
hexano (PE 68 °C) 4.60 0.35
1-metiletil metanoato (PE 68 °C) 5.00 0.37
Calcular:
a- El factor de capacidad (k') para cada sustrato.
t r −t m 4.2
k ´ hexano= = =10.5
tm 0.4
t r−t m 4.6
k ´ metanoato = = =11.5
tm 0.4

b- El factor de selectividad (α).

t Ry−t m 5.00−0.4 4.6
¿ = = =1.095
t Rx −t m 4.60−0.4 4.2
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c- La altura equivalente del plato teórico (AEPT o H).

Nhexano = 16 (4.60 min. / 0.355 min.)2 = 2687
Nm-e-metanoato = 16 (5.00 min. / 0.372 min.)2 = 2890
Nprom = 2788 H = L /
Nprom H = 150 cm / 2788 = 0.054 cm

d- Qué modificaciones hubiese observado en los tr si la fase estacionaria hubiese sido no

polar, por ejemplo escualeno? ¿Y si la fase hubiese sido levemente polar, con una
estructura del tipo de ftalato de didonilo?
 Con una fase estacionaria no polar, que es el caso del escualeno, los dos
compuestos también se hubiesen separado, pero el orden de elución hubiese
estado invertido; primero habría eluído el éster y luego el hexano, el cual, más
afín con la fase no polar, queda más retenido. Con una fase semipolar,
probablemente no se hubiesen separado. Dado que sus puntos de ebullición y
sus solubilidades son similares, no tendrían porque migrar a diferentes
velocidades.
5. Se desea determinar la concentración de etanol en sangre por el método de patrón
interno. Para ello se procesan (de la misma manera) una serie de soluciones acuosas
patrón de etanol y una muestra de suero: una alícuota de 0.01 mL de cada solución se
diluyen con 0.1 mL de una solución patrón de 2-propanol 0.1mg/mL. Se inyectan 0.1 µl de
2 cada solución en un CG provisto de un detector FID (ionización de llama), un integrador y
una columna PEG-400 (polietilenglicol) a 80 °C. Los resultados obtenidos fueron los
siguientes:

a- Construir el gráfico de
calibración correspondiente y usarlo para determinar la concentración de etanol en la
muestra de sangre.
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R=0.91 mg/ml
b- ¿Qué ventajas tiene emplear las áreas integradas de los picos en vez de sus alturas para
realizar la cuantificación? Si varían ligeramente las condiciones de una columna, el tr de un
compuesto y la altura del pico pueden modificarse. Pero el ancho y la altura varían
simultáneamente y el área correspondiente se mantiene constante

6. Las siguientes aseveraciones se refieren a los distintos modos de HPLC. Indique si las
mismas son verdadera (V) o falsa (F).

a. En cromatografía de adsorción la fase móvil es no polar. (V)

b. Moléculas polares pueden ser fácilmente separadas por cromatografía de adsorción. (F)
c. El tiempo de retención de los solutos en cromatografía de exclusión puede ser alterado
cambiando la polaridad de la fase móvil. (F)
d. La exclusión molecular se usa sólo para separar moléculas grandes. (F)
e. En cromatografía reversa la fase móvil es más polar que la fase estacionaria. (V)

7. Una mezcla de fenil metil cetona, nitrobenceno, benceno y metil benceno se separa en
una columna C18 con una fase móvil metanol: agua 60:40. En estas condiciones la cetona
eluye primero.
a- ¿En qué orden eluyen los otros solutos? fenil metil cetona, nitrobenceno, benceno,
metilbenceno.
b- ¿Cómo se puede cambiar la composición de la fase móvil para cambiar el tiempo de
retención de los solutos? Se puede incrementar la polaridad de la fase móvil
c- ¿Cómo se afectaría el tiempo de retención de los solutos si se usa una columna ligada
con grupos fenilos en lugar de C18? Las columnas con fase ligada de tipo fenilo son
ligeramente más polares que las de C18 y esto podría causar que los solutos eluyan
más rápido; no afecta a todos los solutos de la misma manera, depende en todo caso
del tipo de compuesto.
8. Indique qué tipo de cromatografía líquida sería más adecuada para la separación de
mezclas de compuestos con las siguientes propiedades:
a- Masa molecular mayor de 2000, solubles en agua y con carácter no iónico: geles
b- Masa molecular menor de 2000, solubles en agua y con carácter iónico: intercambio
ionico
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c- Masa molecular igual a 340, soluble en agua y con carácter no iónico: Reparto fase
enlazada normal
d- Masa molecular igual a 1000, soluble en acetonitrilo: Reparto fase enlazada normal
9. Explique qué diferencia existe entre trabajar en modo de elución isocrática y en modo
gradiente:
 Elución Isocrática: composición constante de la fase móvil.
 Elución por gradiente: los distintos analitos son eluídos con incremento de la
composición de la fase móvil en la fase orgánica.

10. ¿En qué se diferencian la cromatografía gas-líquido y la de gas-sólido

 Cromatografía gas-líquido (CGL): la fase estacionaria es un líquido inmovilizado
sobre la superficie de un relleno sólido inerte o sobre las paredes de un tubo
capilar. Es una herramienta rutinaria y de gran aplicación en todos los campos de
la ciencia. Es a la que hacemos referencia habitualmente cuando hablamos de
cromatografía de gases.
 Cromatografía gas-sólido (CGS): la fase estacionaria es sólida y la retención de los
analitos se produce por adsorción. Como el proceso de adsorción no es lineal, los
picos cromatográficos presentan colas pronunciadas y no tiene mucha aplicación
11. ¿Qué tipo de mezclas se separan por cromatografía gas-sólido?
Se basa en la adsorción de sustancias gaseosas sobre superficies sólidas. Las constantes de
distribución son mayores por lo que, por lo que se emplea en la separación de especies
que no se retienen en columnas de gas-líquido, como los componentes del aire, dióxido o
disulfuro de carbono, óxidos de nitrógeno, gases nobles
12. Definir: (a) Volumen de retención, (b) Volumen de retención neto, (c) Volumen de
retención especifico
a) Volumen de retención: Al tratarse de gases, no podemos pasar por alto el efecto de la
presión o el volumen, por lo que es más conveniente emplear volúmenes de retención en
lugar de los tiempos de retención para los analitos, que se relacionan.
(b) Volumen de retención neto: Los volúmenes de retención dependen de la presión
promedio en el interior del sistema, que toma un valor comprendido entre la presión de
entrada y la de salida. Por ello, se incluye un factor de corrección de caída de presión o
factor de compresibilidad:
(c) Volumen de retención especifico: Es el volumen neto de retención por gramo de fase
estacionaria, corregido a la presión media de la columna y a una temperatura estándar (0
ºC, 273 K)

13. ¿Qué es la programación de temperatura en cromatografía de gases?

La temperatura de inyección debe ser lo suficientemente elevada como para volatilizar
completamente todos los componentes de la muestra, no debiéndose elevar más allá de
este nivel para evitar posibles descomposiciones térmicas de la muestra. La temperatura
de columna debe elegirse de forma que los componentes de interés de la mezcla
aparezcan con volúmenes de retención medios, aún costa de dejar retenidos en la
columna los componentes que presenten mayores tiempos de retención. En estos casos,
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basta con realizar dos o tres inyecciones de prueba para determinar una temperatura de
trabajo adecuada.

14. En qué se diferencian las siguientes columnas abiertas: PLOT, WCOT y SCOT
(a) Columnas PLOT: En estas columnas existe una capa porosa sobre la pared interna. Esta
porosidad se puede conseguir tanto por medios químicos (por ejemplo, por ataque), como
depositando partículas porosas sobre la pared a partir de una suspensión. La capa porosa
puede servir de soporte para la fase líquida estacionaria, o actuar ella misma como fase
estacionaria.
(b) Columnas WCOT: En estas columnas la fase estacionaria líquida recubre la pared
interna del tubo, la cual es lisa y en general poco modificada.
(c) Columnas SCOT: Es una versión de las columnas PLOT, con una capa de partículas
sólidas depositadas a partir de una suspensión

15. ¿Qué propiedades debe tener una fase estacionaria líquida en cromatografía de gases?
Selectividad. La polaridad de una fase estacionaria líquida se refiere a las interacciones
intermoleculares que involucra dipolos permanentes. Selectividad es definida como las
diferentes atracciones intermoleculares. Varias cualidades a de reunir un líquido para
servir como fase estacionaria: • Viscosidad • Tensión Superficial • Tensión de Vapor •
Selectividad respecto a los componentes de la fase móvil • Reversibilidad del Reparto •
Estabilidad Térmica
16. ¿Por qué las fases estacionarias en cromatografía de gases están con frecuencia enlazadas
o polimerizadas? ¿Qué significado tiene estos términos?
Fases estacionarias líquidas son generalmente unidos y / o reticulados con el fin de
proporcionar una estabilidad térmica y una fase estacionaria más permanente que no se
filtrará fuera de la columna. Vinculación implica la unión de una capa monomolecular de la
fase estacionaria a la superficie de embalaje por medio de enlaces químicos. La
reticulación implica el tratamiento de la fase estacionaria mientras se encuentra en la
columna con un reactivo químico que crea enlaces cruzados entre las moléculas que
componen la fase estacionaria.
17. ¿Qué son los índices de retención? Cómo se puede determinar
El índice de retención para un analito es una medida de la tasa a la cual se lleva a través de
una columna en comparación con la tasa de movimiento de los alcanos normales dos, uno
que se mueve más rápido que el analito y el otro más lentamente. Para obtener el índice
de retención de un analito en una columna dada, se determinan el registro de los tiempos
de retención ajustados para los dos alcanos y el analito. El índice de retención para butano
es siempre 400 y 500 pentano.
18. a- Realice una clasificación de tipos de resinas de intercambio iónico, indicando grupo
iónico fijo y contraión (ión intercambiado).

Tipo de resina Grupo iónico fijo Contraión

catiónica fuerte sulfonato (⎯SO3-) catión
catiónica débil carboxilato(⎯COO-) catión
aniónica fuerte amonio cuaternario anión
(⎯N(CH3)3+)
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aniónica débil amonio secundario ( Anión

⎯NH.CH3)

b- Indicar los efectos de aumentar el entrecruzamiento en las columnas de intercambio

iónico. Al aumentar el entrecruzamiento de las resina, aumenta su capacidad, selectividad
y favorece el equilibrio.