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    practicaTEMA 15

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    YULIANA AYMEE PEA RODRIGUEZ
    El documento proporciona información sobre la determinación del colesterol. Explica que el colesterol se encuentra normalmente en la sangre y puede provenir de fuentes exógenas o sintetizarse endógenamente en el hígado. Describe cómo las lipoproteínas de alta densidad transportan el colesterol desde los tejidos al hígado. El procedimiento incluye la precipitación selectiva de lipoproteínas de baja densidad y la cuantificación del colesterol ligado a las lipoproteínas de alta dens

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    TEMA 15

    DETERMINACION DE COLESTEROL

    DEFINICION:

    El colesterol es un lípido simple que deriva de los esteroles, se encuentra normalmente


    en la sangre en la proporción de 150 a 250 mg %.

    FUNDAMENTACION TEORICA:

    Su presencia en el organismo tiene un doble origen: exógeno y endógeno.

    El 1º se refiere al colesterol introducido mediante alimentación a base de grasas,


    huevos, jamones, mantequilla, etc.

    El 2º es el colesterol sintetizado en el organismo, siendo el hígado el principal


    sintetizador, luego la piel, el Bazo, los riñones y las arterias.

    La cantidad de colesterol sintetizada en el hígado oscila de 1,5 a 2 gr. Y en los tejidos


    extrahepaticos de 0,5 gr. En 24 horas ósea que normalmente se sintetiza mayor
    cantidad de colesterol del que introduce mediante la alimentación.

    El COLESTEROL tiene tendencia a depositarse en las paredes de las arterias. Esta


    propiedad y el hecho que estas paredes sinteticen colesterol es de gran importancia y
    ha sido objetivo de numerosos estudios ya que se ha demostrado que puede ser una
    de las causas para originar ARTERIOSCLEROSIS o (Ateroesclerosis), que se caracteriza
    por endurecimiento de las paredes arteriales que pierde flexibilidad natural por lo que
    la sangre es enviada con dificultad a todo el organismo principalmente al cerebro.
    El COLESTEROL es importante por ser el precursor de compuestos de interés fisiológico
    como ser: hormonas corticales y sexuales, ácidos y sales biliares y vitamina D, es
    eliminado del organismo por la materia fecal al estado de coprosterol y por medio de
    los ácidos y sales biliares.

    Las lipoproteínas plasmáticas son articulas esféricas que contienen cantidades


    variables de colesterol, triglicéridos, fosfolípidos y proteínas. Estas partículas se
    solubilizan y transportan el colesterol en el torrente sanguíneo.

    La proporción relativa de proteína y lípido determina la densidad de estas


    lipoproteínas.

    La principal función de estas lipoproteínas de alta densidad en el metabolismo lipídico,


    es la capacidad de transporte de colesterol desde los tejidos periféricos al hígado en un
    proceso conocido como transporte reverso de colesterol.

    El DHL, colesterol bajo, está asociado por un alto riesgo de enfermedades cardiacas.
    Por este motivo la determinación de HDL es una herramienta útil en la identificación
    de individuos de alto riesgo.

    FUNDAMENTO DEL METODO:

    Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) se separan precipitando selectivamente las


    lipoproteínas de baja y poca densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de Sulfato
    de dextran de PM 50.000 en presencia de iones Mg. ++

    En el sobre nadante separado por centrifugación, quedan las HDL y se realiza la


    determinación del colesterol ligado a las mismas, empleando el sistema enzimático
    colesterol oxidasa / peroxidasa con colimetria según Trinder (fenol / 4 –
    aminofenazona).

    PRÁCTICAS Y OBJETIVOS:

    Determinar el colesterol sanguíneo bioquímicamente.

    MATERIAL:

    1. Espectrofotómetro
    2. Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados
    3. Baño María
    4. Tubos de ensayo
    5. Vasos de precipitado
    6. Jeringas, guantes, torundas de algodón, alcohol

    REACTIVOS:

     Suero

    PROCEDIMIENTO:

    1. Colocar en un tubo de ensayo 0,5 ml. de muestra


    2. Agregar 50 ul de reactivo precipitante. Homogeneizar, agitando “Sin verter”
    por 20 seg. Y dejar 30 min. En refrigerador o 15 min en Baño María de agua a
    10 º C, no colocar en congelador.
    3. Centrifugar 15 min. a 3.000 r.p.m. Usar el sobre nadante liquido como
    muestra y repartir en 3 tubos de ensayo marcados de la siguiente manera:

    B S D

    Sobrenadante - - 100 ul.

    Standard - 20 ul -

    Reactivo de trabajo 2 ml 2 ml 2 ml

    4. Mezclar e incubar 15 min a 37º C, retirar del B.M. y enfriar.


    5. Leer A 505 nm en espectrofotómetro o en colorímetro con filtro verde (490 –
    530 nm), llevando a cero con el blanco.

    VALORES DE REFERENCIA

    Hombres: 0,30 - 0,70 gr/ Lt

    Mujeres: 0,30 - 0,85 gr/ Lt.

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