P14 Mitosis

Biología General FACS-UNJBG-2022
MITOSIS
I. INTRODUCCION
La mitosis es un proceso biológico en el que una célula origina otras dos genéticamente
iguales. Es parte de un proceso continuo, característico de células somáticas diploides de los
eucariontes, al que se denomina ciclo celular, el cual consiste de dos fases: la interfase y la fase de
división. Durante la interfase los núcleos muestran una apariencia granular y difusa, los
cromosomas están completamente desespirilizados y pueden notarse uno o más cuerpos oscuros
denominados nucléolos. La interfase consta de tres subfases, en la interfase o fase S (de síntesis)
el ADN de cada cromosoma se replica produciendo dos copias exactas llamadas cromátidas
hermanas las que se encuentran unidas por el centrómero. La célula al termino de esta fase es 2n
4c, (dura 6 a 8 h). La fase S es precedida por una fase denominada G1 (gap: hueco o intervalo) y
seguida de otra fase llamada G2. La fase G1, en una célula prototipo es el periodo que sigue a una
división celular y suele durar (6 a 12 h), la célula dobla su tamaño y masa debido a la expresión de
los genes que codifican para las proteínas responsables de su fenotipo particular. El periodo
comprendido entre el termino de la replicación del ADN y el inicio de la división de la fase G2 (3 - 4
h). Durante ella las células se preparan para la división de dos células hijas, en este periodo
sintetizan todas las enzimas que intervienen en la división celular. En la fase G2, además, el
organizador de los microtúbulos o centrosoma se divide en dos, y los dos productos migran hacia
los polos del núcleo.
II. OBJETIVOS
Observar e identificar las diferentes fases del ciclo de reproducción celular de la mitosis.
Analizar los eventos morfológicos y moleculares ocurridos durante los procesos de división celular.
III. MATERIALES
- Muestras de tejido en constante división celular
- Lunas de reloj
- Láminas portaobjetos
- Láminas cubreobjetos
- Mechero
- Bisturí
- Pinzas
- Ácido acético al 50%
- Orceina ácetica
- Microscopios
IV. PROCEDIMIENTO
FUNDAMENTO: Con esta técnica de tinción se verán los núcleos y cromosomas de color rosáceo
morado. La orceina tiñe específicamente la cromatina, la asociación de ADN y proteínas, que
durante la interfase se encuentra relativamente descondensada ocupando todo el espacio del
núcleo, y durante la división se condensa formando los cromosomas.
Con el “squash” se rompen la estructura interna de la raíz, las células se dispersan y extienden por
toda la preparación, separándose unas de otras. Cuanto más extendidas y más planas por el
aplastado, mejor las observaremos.
En todas las células se podrán diferenciar: el citoplasma no teñido, el núcleo densamente teñido y
en cuyo interior se podrá observar ocasionalmente una o dos regiones poco o nada teñidas (los
nucléolos) que son muy ricos en RNA y no se tiñen de orceina. Como el núcleo tiene un volumen,
más o menos esférico, no se detectan cuando se encuentran en la cara opuesta. Allium cepa tiene
dos nucleolos, pero a veces se funden en uno, en estos casos tiene mayor tamaño.
La pared celular, característica de las células vegetales que se encuentra externa a la membrana,
no se tiñe pero deducimos su presencia por la forma rectangular o cuadrada que tienen las células,
a diferencia de las células animales que no la poseen y siempre tienen formas más esféricas y
menos angulosas.
Los cromosomas se verán en aquellas células que se encuentran en mitosis.
- obtener raicillas de cebolla (Allium cepa) de la siguiente manera: las raicillas de cebolla se
obtiene colocando una semana antes de la práctica, un bulbo de cebolla sin catáfilas externas y
quitándoles todas las raicillas secas. En la parte ecuatorial se introducen 3 ó 4 mondadientes
distribuidas equidistantemente para suspender el bulbo en la boca de un vaso con agua corriente,
para que el agua este en contacto con el disco germinativo, que emitirá nuevas raíces.
- Con un bisturí realizar un corte transversal de 2 ó 3 raicillas entre los 2 ó 3 mm del extremo
apical, obteniéndose así una muestra por cada raicilla.
- Colocar las muestras obtenidas en una placa Petri conteniendo el fijador (acido acético al 50
%) por un tiempo mínimo de 5 minutos (5 a 30 minutos).
- Trasladar las muestras a una luna de reloj y agregarle orceina acética, cubriendo la
muestra.
- Realizar el calentamiento utilizando mechero de alcohol hasta la emisión de vapores, luego
se deja enfriar durante 5 minutos.
- Repetir el calentamiento dos veces más. Nota: el tiempo de coloración está en función al
tamaño de los cortes y a la maduración del colorante.
- Colocar la muestra en el centro de la lámina portaobjetos, agregar una gota de colorante. La
orceina tiñe de manera permanente los tejidos y la piel por lo que hay que tener cuidado con su
manejo, y no deben respirarse los vapores que se desprenden durante la tinción y el
calentamiento, para lo cual debe mantenerse la cabeza alejada y el brazo extendido. Asimismo,
debe ponerse varias capas de papel filtro al aplastar para evitar mancharse el dedo, ya que
además de teñir puede irritar levemente la piel al tener acético y clorhídrico.
- Colocar una laminilla cubreobjetos.
- Con una lápiz carboncillo golpee el cubreobjetos en forma concéntrica de adentro hacia
afuera.
- Con un papel filtro eliminar el exceso de colorante.
- Cubrir la lamina preparada con papel filtro y presione fuerte, con el dedo pulgar, el
cubreobjeto (squash).
- Observar en el microscopio con objetivo de mediano y mayor aumento.
- Identificar las diferentes fases de la mitosis y graficarlos.
V. RESULTADOS
VI. DISCUSIÓN
VII. CONCLUSIONES
VIII. BIBLIOGRAFÍA
IX. CUESTIONARIO:
1. ¿Cuál es la acción de ácido acético sobre las células de las raíces?
2. ¿Cuál es la fase mitótica más frecuente?
3. ¿Qué sucede en la profase de la mitosis?
4. ¿Describa como se lleva a cabo la citocinesis en las células animales?

5. ¿Cómo están formados los cromosomas de las glándulas salivales?

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4. ¿Describa como se lleva a cabo la citocinesis en las células animales?

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