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    Práctica 5 Pigmentos Fotosinteticos

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    tess gonzalez
    Este documento presenta la práctica 5 sobre la extracción de pigmentos fotosintéticos. Los objetivos son extraer los pigmentos como la clorofila y carotenoides de las hojas de plantas usando solventes orgánicos y identificarlos mediante cromatografía de papel y espectrofotometría. El método incluye moler las hojas en un solvente, separar los pigmentos usando cromatografía de papel, y analizar los picos de absorción de cada pigmento usando un espectrofotómetro para ident

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    Práctica 5 Pigmentos Fotosinteticos

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    Este documento presenta la práctica 5 sobre la extracción de pigmentos fotosintéticos. Los objetivos son extraer los pigmentos como la clorofila y carotenoides de las hojas de plantas usando solventes orgánicos y identificarlos mediante cromatografía de papel y espectrofotometría. El método incluye moler las hojas en un solvente, separar los pigmentos usando cromatografía de papel, y analizar los picos de absorción de cada pigmento usando un espectrofotómetro para ident

    Descripción original:

    Teresa González Abundis

    Título original

    práctica 5 Pigmentos fotosinteticos

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    Este documento presenta la práctica 5 sobre la extracción de pigmentos fotosintéticos. Los objetivos son extraer los pigmentos como la clorofila y carotenoides de las hojas de plantas usando solventes orgánicos y identificarlos mediante cromatografía de papel y espectrofotometría. El método incluye moler las hojas en un solvente, separar los pigmentos usando cromatografía de papel, y analizar los picos de absorción de cada pigmento usando un espectrofotómetro para ident

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    Este documento presenta la práctica 5 sobre la extracción de pigmentos fotosintéticos. Los objetivos son extraer los pigmentos como la clorofila y carotenoides de las hojas de plantas usando solventes orgánicos y identificarlos mediante cromatografía de papel y espectrofotometría. El método incluye moler las hojas en un solvente, separar los pigmentos usando cromatografía de papel, y analizar los picos de absorción de cada pigmento usando un espectrofotómetro para ident

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    de 13

    UNIVERSIDAD AUTÓNOMA CHAPINGO

    DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGÍA AGRÍCOLA

    FISIOLOGÍA VEGETAL
    PRÁCTICA 5:
    EXTRACCIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS
    M. C. OFELIA HERNÁNDEZ ORDOÑEZ
    EQUIPO:
    GRUPO; 5° “”

    Fecha:
    Mensaje:
    INTRODUCCIÓN
    OBJETIVOS
    ✓ Extraer pigmentos fotosintéticos por medio de solventes orgánicos para
    su identificación por medio de cromatografía de papel y del espectro de
    absorción de luz de la solución de pigmentos extraídos y las longitudes de
    onda de cada uno de ellos.

    MATERIALES Y MÉTODOS
    ✓ 3 g de materia vegetal (hojas de trueno)
    ✓ 20 ml de cetona con bencina de petróleo
    ✓ Mortero y pistilo
    ✓ Papel filtro Whatman No. 1
    ✓ Micropipeta Pasteur
    ✓ Vaso de precipitado de 100 ml.
    ✓ Tubos de ensaye grande
    ✓ Tapones de hule
    ✓ Gradilla
    ✓ Grapas
    ✓ 8 ml de solvente
    ✓ Espectrofotómetro
    ✓ Celdas par espectrofotómetro
    METODOLOGÍA
    a) Cromatografía de pigmento
    1. Obtención del extracto: a las hojas de trueno eliminarles la nervadura central, picarlas finamente, agregarlas al
    mortero junto con 5 mL de la mezcla del solvente, moler hasta obtener una pasta muy fina. Adicionar otros 5 mL
    para filtrar el extracto y recibirlo en el vaso de precipitado la solución con pigmentos.
    2. Obtención de cromatograma: En el papel que se coloca en el tapó de hule, marque con lápiz una línea; con la
    ayuda de la micropipeta, aplique sobre la línea tres gotas de extracto. Sumerja el papel en el solvente, póngalo en la
    oscuridad y deje que corra unos 20 a 30 minutos, antes de que llegue el solvente al extremo superior (Figura 5.1).
    Marcar con un lápiz las distancias corridas por el solvente y pigmentos. Obtener los valores Rf para cada pigmento
    𝑑
    con la siguiente ecuación: 𝑅𝑓 = 𝑠 ≤ 1; donde ds = distancia alcanzada por el solvente y dm= distancia media de
    𝑑𝑚
    cada mancha (Figura 5.2). Compare los valores obtenidos con los de la tabla de referencia.

    m1

    dm
    m2 ds

    m3
    m4

    Figura 5.2. Montaje de la cromatografía.


    Figura 5.2. Montaje de la cromatografía.
    CUADRO 5.1 Valores referenciales del Rf para cromatografía de papel.

    PIGMENTO COLOR Rf SOLVENTE a Rf SOLVENTE b

    Caroteno Amarillo 0.96 0.90

    Feofitina Gris 0.44 0.28

    Xantofilas Amarillo 0.35 – 0.10 0.22

    Clorofila a Verde – azul 0.28 0.11

    Clorofila b Verde - amarillo 0.17 0.10

    Solvente a _______________ Solvente b ______________________


    b) Espectro de absorción.
    1. De las tiras de cromatografía en papel obtenidas anteriormente recorte las
    partes que contienen cada uno de los pigmentos y se colocan por separado
    en un vaso de precipitado que contenga 10 ml de solvente adecuado para
    cada pigmento.
    Mezclar perfectamente hasta disolver los pigmentos, retire el papel y
    coloque el extracto en el tubo del espectrofotómetro para determinar el
    espectro de absorción.
    2. Determinación del espectro de absorción. Siguiendo las instrucciones
    de manejo del espectrofotómetro realizar lecturas de absorbancia de 340 a
    700nm en intervalos de nm.
    Grafique la longitud de onda vs. absorbancia.
    Identifique los picos de absorción de cada pigmeto.
    Fotografía 5.1 Muestras para analizarse en el espectrofotómetro.
    RESULTADOS
    Cuadro 5.2 Pigmentos identificados en la cromatografía de papel.
    Equipo Rf calculado Color del pigmento Pigmento(s) identificado
    1
    2
    3
    4
    5
    6
    7
    8

    Promedio
    RESULTADOS

    Figura 5.1. Identificación de pigmentos en plantas mediante espectofotograma.


    ANÁLISIS DE RESULTADOS
    CONCLUSIONES
    BIBLIOGRAFÍA

    ✓ Acosta Zamudio, C., Alfaro Maya, Cl., Ortiz Estrella, E., Colinas León, Ma. T.,
    Hernández Miranda, Cl. 2003. Manual de Prácticas de Laboratorio de Fisiología
    Vegetal. Academia de Fisiología Vegetal del Departamento de Fitotecnia de la
    Universidad Autónoma Chapingo. Chapingo, Estado de México. 76 p.

    ✓ Azcón-Bieto, J.; M. Talon. (1993). Fisiología y Bioquímica Vegetal.

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