Este documento describe el desarrollo de un modelo de co-cultivo organotípico 3D (OTC) para estudiar las células epiteliales medulares tímicas (mTECs). El modelo OTC permite una mejor maduración y expresión de marcadores de las mTECs en comparación con cultivos 2D y 3D simples. El modelo se utiliza para estudiar la expresión promiscua de genes y marcadores como Aire, RANKL e Ins2 en las mTECs cultivadas.
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Este documento describe el desarrollo de un modelo de co-cultivo organotípico 3D (OTC) para estudiar las células epiteliales medulares tímicas (mTECs). El modelo OTC permite una mejor maduración y expresión de marcadores de las mTECs en comparación con cultivos 2D y 3D simples. El modelo se utiliza para estudiar la expresión promiscua de genes y marcadores como Aire, RANKL e Ins2 en las mTECs cultivadas.
Este documento describe el desarrollo de un modelo de co-cultivo organotípico 3D (OTC) para estudiar las células epiteliales medulares tímicas (mTECs). El modelo OTC permite una mejor maduración y expresión de marcadores de las mTECs en comparación con cultivos 2D y 3D simples. El modelo se utiliza para estudiar la expresión promiscua de genes y marcadores como Aire, RANKL e Ins2 en las mTECs cultivadas.
Este documento describe el desarrollo de un modelo de co-cultivo organotípico 3D (OTC) para estudiar las células epiteliales medulares tímicas (mTECs). El modelo OTC permite una mejor maduración y expresión de marcadores de las mTECs en comparación con cultivos 2D y 3D simples. El modelo se utiliza para estudiar la expresión promiscua de genes y marcadores como Aire, RANKL e Ins2 en las mTECs cultivadas.
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CO-CULTIVO ORGANOTÍPICO PARA LA PROLIFERACIÓN Y
DIFERENCIACIÓN DE MTECS Y EXPRESIÓN PROMISCUA DE GENES
GRUPO 3 Eva Serrano Elena Trapero Sandra Valenciano Nuria Ventureira Índice 1. Objetivos 2. Estructura fisiológica del timo 3. Cómo se hace el cultivo. Morfología de mTEC’s 4. Expresión de marcadores 5. Importancia del modelo 3D OTC 6. Conclusión 1. Objetivos Debido a la falta de un modelo 3D para el estudio de las células tímicas epiteliales medulares (mTECs), se plantea el desarrollo de un co-cultivo organotípico 3D (OTC) con este fin.
Por otra parte, también permitirá el estudio de la expresión promiscua de genes
(pGE) y otros marcadores, la mayoría perdidos en el cultivo 2D y 3D simple. 2. Estructura fisiológica del timo
Órgano linfoide
o Producción de linfocitos T o Maduración de linfocitos T o Producción de hormonas tímicas (timulina, timosina…) 1- Cápsula 2- Lóbulos tímicos • Corteza • Médula 3. Cómo se hace el cultivo. Morfología de mTECs Modelo 3D de cultivo in vitro de células mTECs → características similares a las epiteliales dérmicas preexistente células epiteliales dérmicas ❑ Su diferenciación depende de FoxN1 ❑ Sus ES expresan los mismos marcadores Adaptación moleculares ❑ Reprogramación de TECs en dérmicas embrionarias (no al contrario) ❑ Modelo 3D OTC de mTECs Composición: o Fibroblastos dérmicos humanos o Scaffold o mTECs murinas (CD80lo/hi) o Medio de cultivo mTECs* monocapa
IFAPB RANKL Receptor Activator of Nuclear Factor κ B Ligand. Es una proteína de RANKL membrane que tiene implicaciones tanto en el Sistema immune como en la formación de osteoclastos
Aire Autoimmune Regulator. Codifica para un factor de transcripción implicado en la regulación de la formación de autoantígenos y selección negativa en los linfocitos T en el timo. Aire Csnb Casein-β. Es una proteína presente en la leche humana.
TRAs
Ins2 IFAPB Insulin 2. Intestinal Fatty Acid Binding Protein. Proteína que une ácidos grasos de cadena larga con alta afinidad. Principalmente regula el transporte de ácidos frasos celular y extracelularmente. Su función específica dependerá del tejido donde se esté expresando. La cantidad de FoxN1 y CD80 no depende de RANKL
FoxN1: factor de transcripción que CD80: glucoproteína que media la
determina la funcionalidad de mTEC y unión entre células presentadoras de cTEC antígenos y linfocitos T CD80lo mTECs CD80hi mTECs CD80lo mTECs CD80hi mTECs
Aire: regulador transcripcional de TRAs (Ins2, I-fabp, Csnb) son el producto
la pGE. Este depende de RANKL de pEG. En CD80lo no se aprecia aumento tanto en CD80lo como CD80hi de expresión en presencia de RANKL. En CD80hi sí hay diferencias significativas. 5. Importancia del modelo 3D OTC
• Resultados más similares a la condición fisiológica que los co-cultivos 2D y 3D
simple. • Mejor maduración celular • Cultivos más longevos • Permite el estudio de los marcadores moleculares tímicos y pEG • Nuevas vías de investigación • Aplicaciones: investigación clínica 6. Bibliografía • Pinto, S., Schmidt, K., Egle, S., Stark, H. J., Boukamp, P., & Kyewski, B. (2013). An organotypic coculture model supporting proliferation and differentiation of medullary thymic epithelial cells and promiscuous gene expression. The Journal of Immunology, 190(3), 1085-1093. • https://ddd.uab.cat/pub/tesis/2007/tdx-0523108-162338/tdx.html consultada el 20/1/16 • http://leucocitos.org/timo/ consultada el 21/1/16 • http://www.genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=AIRE consultada el 25/1/16 • http://www.nature.com/gene/journal/v4/n1/full/6363929a.html consultada el 25/1/16 • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2674722/ consultada el 25/1/16
