Este reporte describe un experimento de germinación de semillas in vitro de tomate (Solanum lycopersicum) durante 5 semanas. Se obtuvo una tasa de germinación del 83% sin contaminantes y un buen crecimiento de las plántulas. El objetivo era conocer los métodos de desinfección y siembra de semillas para cultivo in vitro.
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Este reporte describe un experimento de germinación de semillas in vitro de tomate (Solanum lycopersicum) durante 5 semanas. Se obtuvo una tasa de germinación del 83% sin contaminantes y un buen crecimiento de las plántulas. El objetivo era conocer los métodos de desinfección y siembra de semillas para cultivo in vitro.
Este reporte describe un experimento de germinación de semillas in vitro de tomate (Solanum lycopersicum) durante 5 semanas. Se obtuvo una tasa de germinación del 83% sin contaminantes y un buen crecimiento de las plántulas. El objetivo era conocer los métodos de desinfección y siembra de semillas para cultivo in vitro.
Este reporte describe un experimento de germinación de semillas in vitro de tomate (Solanum lycopersicum) durante 5 semanas. Se obtuvo una tasa de germinación del 83% sin contaminantes y un buen crecimiento de las plántulas. El objetivo era conocer los métodos de desinfección y siembra de semillas para cultivo in vitro.
Tabla 1 Semillas Germinadas de la especie Solanum Lycopersicum, 8
Índice de figuras
Ilustración 1. semillas germinadas despues de 1 semana de cultivo. ......................11
Ilustración 2. semillas germinadas despues de 2 semanas de cultivo. ......................12 Ilustración 3. semillas germinadas despues de 4 semanas de cultivo. .....................13 Ilustración 4. semillas germinadas despues de 5 semanas de cultivo. .....................14
2 Resumen Se realizó una siembra de semillas in vitro de la especie Solanum lycopersicum, jitomate saladette durante 5 semanas, con el objetivo de conocer los métodos de desinfección de un explante para la siembra in vitro. Se pudieron observar buenos resultados en las siembras, ya que se obtuvo una tasa de germinación del 83% sin ningún contaminante, así como una tasa de crecimiento de los germinados bastante bueno, lo cual quiere decir, que hubo un buen manejo de explantes en la desinfección y a la hora de sembrarlas.
Pre-reporte y diagramas 1. ¿Por qué ajustar el pH a 5.8 antes de agregar el agente gelificante? Por que el pH se mide con el potonsiometro, si se agrega el gelificante antes podria probocar que el potenciometro se descomponga por una capa de gel que se forma sobre el electrodo
2. Explica cómo una semilla pasa de lestado de latencia al inicio de la germinación
Basicamente el estado de latncia es la incapacidad de una semilla para germibar debido aquer las condiciones ambientales no son las adecuadas paea hacerlo , por lo tanto, la semilla pasa de latencia al estado de germinacion cuando esta reconoce que las condiciones ambientales son adecuadas para germinar
3. ¿Cómo se prepara el medio de cultivo MS a partir de sales?
Todas las soluciones se preparan un 70% de agua del volumen final deseado y sobre de ella se van añadiendo de uno por uno todos los componentes hasta completar la disulucion
4. ¿Por qué es necesario esterilizar el medio de cultivo?
Para evitar el crecieminto de hongos y bacterias que le quiten los nutrientes a las plnatas.
5. ¿Cuál es el objetivo de sembrar las semillas in vitro?
Para que las semillas crezcan en un metodo de asepcia donde sus posibilidades de germinar sean altas, ademas de tener un medio donde se puedan controlar los factores que afcetan el crecieminto de la semilla
6. ¿A qué profundidad deben ser sembradas las semillas en el medio de cultivo?
Alrededor de 0.5 cm de profundidad
3 7. A partir de las fichas de seguridad de los reactivos a utilizar ¿Cuál o cuáles presentan un riesgo a tu salud y al medio ambiente? Explica por qué. HCl: altamente corrosivo por lo que causa quemaduras graves en la piel, ademas es muy volatil y genera vapores toxicos. NaOH: puede causar quemaduras graves y por ser una sustancia higroscopica.
Diagramas
Preparacion del medio de cultivo
4 Desinfección y siembra de semillas
Introducción La germinación es el proceso fisiológico mediante el cual emergen y desarrollan, a partir del embrión, las estructuras esenciales para la formación de una planta normal. Inicia con una variedad de actividades anabolicas y catabolicas, como la respiracion, la sintesis de proteinas y la movilizacio de las reservas despues de la absorcion de agua (Delouche, 2002). Los factores externos, como la temperatura, agua, oxígeno y luz, influyen directamente en la germinación de las semillas. La emergencia de una plántula depende entonces de las características fisiológicas y bioquímicas de las semillas, de su reacción a las condiciones externas a ella, y de la eficiencia al usar sus reservas durante la germinación (Peña- Valdivia, 2013). El cultivo in vitro de células y tejidos agrupa diversas técnicas que tienen como finalidad la multiplicación de plantas (micropropagación), el saneamiento del material vegetal (cultivo de meristemos y microinjerto) o la mejora genética (por ejemplo, la transgénesis) (Maestu Moraleda, 2018). El tomate es un cultivo anual, perenne y tiene un porte arbustivo. La planta puede desarrollarse de forma rastrera, semierecta o erecta. Además, dependiendo de la variedad,
5 el crecimiento puede ser determinado por la aparición de una inflorescencia terminal o indeterminado (Maestu Moraleda, 2018). Su semilla es de color grisáceo, tiene forma oval, aplastada, y un diámetro de 3 a 5 milímetros. Está compuesta por el embrión, el endospermo y la testa. El embrión está formado por la radícula, el hipocótilo, dos cotiledones y la yema apical, tiene una raíz principal que surge de la semilla y multitud de raíces secundarias, el tallo crece erguido en las primeras fases de desarrollo, pero se tuerce en cuanto aumenta el peso de las ramas, las hojas son compuestas y están formadas por numerosos foliolos a lo largo del raquis, que suelen ser peciolados, de forma ovalada y con bordes dentados, el fruto es una baya con dos o más lóculos, compuesto por el pericarpo, el tejido placentario y las semillas. Su color más habitual y conocido es el rojo. (Maestu Moraleda, 2018) Respecto a cultivo de semillas de jitomate de cultivo in vitro en 1934, White pudo mantener indefinidamente en medios líquidos (que contenían sales minerales, extracto de levaduras y azúcar), el crecimiento de raíces de tomate a partir de ápices del tallo, es una de las primeras personas en desarrollar este tecnica con la especie Solanum lycopersicum (jitomate) (Maestu Moraleda, 2018).
Materiales • 1 Vaso de precipitado 1000 ml • 1 Probeta 500 ml • 6 botes de cultivo con tapa • 3 Charolas para pesar • Espátula • Barra magnética • 2 Pipetas Pasteur desechables • Papel aluminio • 2 Pinzasde disección • Papel secante estéril • Frasco Schott de 500 mL • 1 Sobre de semillas de la planta detu elección • 4Vasos de precipitado 100 ml • 3 Vasos de precipitado 100 ml estériles
6 • Agitador de vidrio • Cinta kleenpack
Reactivos • HCl 1M • NaOH 1M • Medio MS • Sacarosa • Agar • Cloro comercial (6%) • Detergente comercial • Alcohol etílico al 70% Equipos • Balanza digital • Potenciómetro • Autoclave • Agitador/plancha magnética • Cabina de bioseguridad • Mechero de alcohol
Resultados Para la siembra de cultivo in vitro de la especie Solanum lycopersicum se tuvo una tasa de germinación del 83%, después de 5 semanas de haber sido germinadas in vitro, donde no se observó ningún tipo de contaminantes. Se prepararon 400 ml de medio MS con agua destilada, el cual contiene acido nicotínico, piridoxina, tiamina, agua, clacio, potacio, fosforo, magnesio, tiaminafosfato, acido ascórbico, acido fólico, riboflavina, hierro, cobre, niquel, zinc, manganeso, boro, nitrógeno, azufre y diotina. En concentración 1/10 y agregando externamente 18 g de sacarosa, se disolvió todo perfectamente y se aforo a 600 ml con agua destilada, después se ajusto su pH a 5.8 y se vaciaron aproximadamente 5 ml en cada tubo y se agregó 0.6 g de agar a cada tubo, y se mezclo perfectamente.
7 12
10
8 Germinadas
6 germinados
4 Linear (germinados )
0 0 1 2 3 4 5 6 Semana
Tabla 1 Semillas Germinadas de la especie Solanum Lycopersicum
Tasa de germinación: 10/12 *100 = 83%
Discusión Es notable el hecho de que el porcentaje de germinación de las semillas de Solanum lycopersicum es bastante elevado, teniendo un 83% de porcentaje de geminación, dejando solo a 2 semillas que no fueron capaces de germinar, el hecho de que el porcentaje de germinación sea muy alto es debido a la eficiencia del medio de cultivo elaborado y a los factores controlados del cultivo en vitro, esto basado en el autor Carrillo Castañeda, Guillermo, quien realizo un proceso de cultivo in vitro de la especie Solanum lycopersicum y establece que junto con el proceso de tratado de las semillas pre-cultivo, un factor determinante para obtener un alto porcentaje de germinación es la correcta preparación del medio de cultivo, pues este quien dota a las semillas del ambiente correcto para que estas puedan germinar (Guillermo, 2015). A lo largo de las semanas se pudo observar como hubo un crecimiento acelerado de las semillas de Solanum lycopersicum, lo cual según el autor María Andrade-Rodríguez quien realizo un experimento con una variante de semillas de guisante, establece que uno de las cosas primordiales para un rápido crecimiento de semillas in vitro es la correcta preparación del medio de cultivo (Andrade-Rodríguez, 2015), por lo que en base a lo narrado por dicha autora, establecemos que el rápido crecimiento de las semillas de Solanum lycopersicum es por una adecuada preparación del medio de cultivo utilizado para el cultivo in vitro de estás.
8 Durante la germinación y crecimiento de las semillas de Solanum lycopersicum no se obtuvo ningún tipo de contaminación donde basándonos con la información de la Dra.C. María E. González quien realizó un estudio de los efectos de la contaminación microbiana y oxidación fenólica en el establecimiento in vitro de frutales perennes, donde dicta, que uno de los puntos más importantes para evitar la contaminación in vitro, es el correcto proceso de desinfección y eso incluyen cosas como las concentraciones de los desinfectantes, tiempos y transiciones entre los desinfectantes, también establece que para evitar la contaminación la desinfección del material es de suma importancia, así como la asepsia del manipulante, respecto a este mismo aspecto, la doctora dicta que es importante que las semillas a ser cultivadas pasen el menor tiempo posible en los puntos críticos los cuales son el traslado entre las sustancias desinfectantes, el traspaso de las semillas de su ultimo enjuague a su cultivo in vitro y por ultimo el tiempo previo al almacenamiento y almacenamiento de los recipientes que contiene las semillas (González, 2010), por lo que se cree que este proceso fue ejecutado de una manera sumamente efectiva por el hecho de no haber obtenido contaminación en ninguno de los tubos cultivados. Respecto a las semillas no germinadas, se piensa que esto fue debido a 2 factores importantes, uno debido a que la semilla no era apta para germinar desde antes de ser cultivada que es poco probable y otra cuya causa es la más probable es el hecho de que estas no sobrevivieron al proceso de desinfección, esta teoría basada en la investigación de C.E. Billard acerca de la Desinfección y siembra a simbiótica de semillas de dos especies y una variedad de orquídeas del género oncidium, donde se aprecia que el autor comenta que en muchas ocasiones las semillas más débiles no resisten el proceso de desinfección lo que genera que estas semillas sean incapaces de germinar y por lo tanto tarde o temprano estas mueran (Billard, 2012), en base ah esto es en lo cual se llegó a la teoría de que las semillas que no germinaron fue por el hecho de que no sobrevivieron al proceso de desinfección, por lo cual estas estaban destinadas a morir desde antes de ser cultivadas.
Conclusión Angélica Leonor Hernández Cerda: • La siembra de semillas in vitro puede tener la gran ventaja de dar una buena efectividad en su germinación, ya que está en un ambiente controlado y con
9 factores que le favorecen a la semilla, por ejemplo el medio de cultivo MS, el cual está compuesto por un gran número de nutrientes que aportan al desarrollo de la semilla, sin embargo, una de las desventajas es que este método puede ser muy delicado con respecto a la asepsia, podría haber una contaminación a la hora de manejar las semillas con cualquier mal manejo en el momento de hacer la siembra. • El manejo de explantes aun trabajando en la campana de flujo, se debe trabajar con cautela, y hacer una correcta desinfección en las semillas, teniendo cuidado en las concentraciones de las soluciones con las que se desinfectan, punto que también es importante tener en cuenta. • Muchas semillas sufren daños a la hora de pasar por los procesos de desinfección, por lo que hay que hacer una buena selección de estas para pasar a ser sembradas.
José Emmanuel Gaytán González:
La germinación en vitro permite una mayor tasa de efectividad en la germinación de una semilla debido a que se controlan los factores de crecimiento. Las 2 semillas de Solanum lycopersicum que no germinaron fue por que no sobrevivieron al proceso de desinfección de las semillas. No se presentaron contaminaciones en ninguno de los tubos por las buenas prácticas de asepsia y el buen proceso de desinfección que realizaron los integrantes del equipo. La alta tasa de germinación de las semillas del Solanum lycopersicum (83%) fue debido a la buena preparación del medio de cultivo y a la buena manipulación de las semillas. El medio de cultivo es uno de los factores más importantes del cultivo in vitro para determinar la germinación de las semillas y el crecimiento de las mismas.
Anexos
10 Ilustración 1. semillas germinadas despues de 1 semana de cultivo.
Ilustración 2. semillas germinadas despues de 2 semanas de cultivo.
11 Ilustración 3. semillas germinadas despues de 4 semanas de cultivo.
12 Ilustración 4. semillas germinadas despues de 5 semanas de cultivo.
13 Bibliografías Andrade-Rodríguez, M. (26 de junio de 2015). Interciencia. Obtenido de Germinación de semillas y crecimiento de plántulas in vitro: https://www.interciencia.net/wp- content/uploads/2017/10/549-C-ANDRADES5.pdf Billard, C. (19 de agosto de 2012). scielo. Obtenido de Desinfección y siembra asimbiótica de semillas de dos especies y una variedad de orquídeas del género oncidium: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1405- 27682014000200008 Delouche, J. C. (2002). Germinación, deterioro y vigor de semillas. Obtenido de seednews: http://www.seednews.inf.br/espanhol/seed66/artigocapa66_esp.shtml González, D. M. (diciembre de 2010). Scielo. Obtenido de Efectos de la contaminación en el establecimiento in vitro: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0258- 59362010000400015 Guillermo, C. C. (2015). Ecofan. Obtenido de Estabilización de semilla de Solanum lycopersicum durante almacenamiento y estimulación de la germinación: https://www.ecorfan.org/handbooks/Ciencias-BIO- T_I/Handbook_Biologia_y_Agronomia_T1_V1_69_81.pdf Maestu Moraleda, E. (Julio de 2018). SciELO Mèxico. Obtenido de Regeneraciòn de plantas en cultivo in vitro de tomate: https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/107255/MAESTU%20- %20Regeneración%20de%20plantas%20en%20cultivo%20in%20vitro%20de% 20tomate%20%28Solanum%20lycopersicum%20L.%29.pdf?sequence=1&isAll owed=y Peña-Valdivia, C. T.-V. (2013). Reacción del frijol silvestre (Phaseolus vulgaris L.) a la profundidad de siembra. Rev. Mex. Cienc. Agríc. , 89-102.
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