Evaluación del efecto antiproliferativo de hojas de Hyptis

suaveolens (L.) Poit sobre la línea celulares de cáncer de

prostata

1
Contenido
1. INTRODUCCIÓN........................................................................................................................1
2. MARCO TEÓRICO....................................................................................................................1
2.1.1 Hyptis suaveolens (L.) Poit...................................................................................................1
2.1.2 Propiedades de Hyptis suaveolens (L.) Poit.........................................................................3
2.1.3 Aplicación farmacológica de Hyptis suaveolens (L.) Poit...................................................4
2.1.4 Cáncer...................................................................................................................................5
2.1.5 Epidemiologia del cáncer.....................................................................................................7
2.1.6 Características del cáncer....................................................................................................8
2.1.7 Cáncer de próstata................................................................................................................9
3.JUSTIFICACIÓN.........................................................................................................................11
La composición fitoquímica de Hyptis suaveolens (L.) Poit., tiene capacidad citoprotectora frente a
líneas celulares de cáncer de próstata...............................................................................................11
5.OBJETIVOS.................................................................................................................................11
5.1 OBJETIVO GENERAL.............................................................................................................11
5.2 OBJETIVO ESPECIFÍCO.........................................................................................................12
6.METODOLOGÍA.........................................................................................................................12
6.1 Material vegetal....................................................................................................................12
7. FACTIBILIDAD DEL PROYECTO...........................................................................................15
8. CRONOGRAMA DE TRABAJO................................................................................................17
9. BIBLIOGRAFÍA CONSULTA....................................................................................................18
Bibliografía.......................................................................................................................................18
10. BIBLIOGRAFIA ELECTRONICA...........................................................................................19

2
1. INTRODUCCIÓN
Las plantas medicinales han sido utilizadas durante mucho tiempo por los seres humanos
como un valioso recurso natural. El uso de la fitoterapia en el tratamiento de enfermedades
ha despertado el interés de la comunidad científica por realizar estudios que tienen como
objetivo particular aumentar el rendimiento de las plantas medicinales, sin comprometer sus
principios activos. Sin embargo, hay un preocupación por promover el uso racional de las
plantas medicinales, teniendo en cuenta las prácticas médicas tradicionales y el rigor
científico en la atención de la salud (Maria Valdiglezia M,A; otros, 2018).

Estudios centrados en la conservación y manejo agronómico de muchas especies se hacen

necesarias debido a la escasa información sobre el cultivo de plantas medicinales en la
literatura. Sin embargo, tiene conocido que la producción de biomasa y la síntesis de
principios activos en las plantas medicinales dependen de varios factores, tales como
genéticos y ambientales, incluidos los estreses bióticos y abióticos (Maria Valdiglezia M,A;
otros, 2018).

Aunque la agricultura es la clave para la supervivencia humana, la destrucción y los daños a

los cultivos agrícolas causados por plagas y enfermedades se han convertido en una
preocupación mundial para satisfacer la demanda de la creciente población (Pokherl &
Choden, 2022).

El agua y los nutrientes tienen influencia directa en la calidad y cantidad de constituyentes

bioactivos producidos por las plantas medicinales, de modo que las condiciones hídricas
adecuadas aseguren un desarrollo vegetativo normal. Garantizando la producción en niveles
satisfactorios de los principales principios activos contenidos en la planta estructuras
(Maria Valdiglezia M,A; otros, 2018).

2. MARCO TEÓRICO
2.1.1 Hyptis suaveolens (L.) Poit.
Hyptis suaveolens (L.) Poit., perteneciente a la familia Lamiaceae, es una hierba perenne de
rápido crecimiento que alcanza alturas de 180 a 210 cm. El género Hyptis sp está
compuesto de 400 especies aproximadamente, entre ellas la Hyptis suaveolens (figura 1).

1
La Chan o Chía Cimarrona (H. suaveolens), es una planta silvestre aromática, de la familia
de las lamiáceas, que alcanza a crecer hasta metro y medio de altura, propia de climas
cálidos y templados; sus flores son pequeñas, de color rosa o violáceo, semejantes a las de
la albahaca. Sus tallos están cubiertos de pelillos rígidos y tupidos [22].

Figura 1. Flores de Hyptis suaveolens [41]

Se caracteriza por su olor fuerte, tener las flores más bien grandes para el género, que están
arreglados en verticilos laxos. El cáliz es pubescente, con los lóbulos subulados, y en fruto
de 4-7 mm de ancho y más de 6 mm de largo. Las flores tienen el tubo de la corola mayor
de 5 mm; las nuececillas generalmente son solo dos y de 3-4 mm de largo [42].

El peciolo mide 1 cm de largo, las hojas con olor a menta al estrujarse. Las inflorescencias
son varias flores agregadas y en las puntas de las ramas. Las flores son de color púrpuras.
Frutos en nueces, comprimidos, truncados y emarginados en el ápice, los frutos inmaduros
son verdes, al madurar cambian a café claro; de 0.5 – 0.6 cm de largo. Las semillas son de
color negro y hay 1 – 2 semillas por fruto [43].

Es bien sabido que la composición química y la actividad biológica de H. suaveolens

cambian en función del origen y período de recolección de las plantas. Esto es un
característica común entre los metabolitos secundarios y de los aceites esencial es de las

2
plantas Lamiaceae en particular.Para H. suaveolens, se vuelve importante estudiar la
fertilización como función de las condiciones del agua, ya que esta especie es altamente
susceptible a las influencias del medio ambiente circundante, y la química componentes de
su aceite esencial pueden aumentar, disminuir o incluso cambiar la composición según las
condiciones ambientales (Maria Valdiglezia M,A; otros, 2018).

2.1.2 Propiedades de Hyptis suaveolens (L.) Poit.

A mediados del siglo XVI, el Códice Florentino señala: para las "carencias de cámaras"
(diarrea) se usa la semilla cruda, molida y comida, tanto la pasta como el zumo. Para las
mujeres que no pueden parir, se usa la semilla molida en agua, en cambio para los que
escupen sangre y tienen tos, se usa la raíz molida. A inicios del siglo XVIII Juan de
Esteyneffer la refiere como refrescante en las calenturas [44].

Estudios en H. suaveolens han revelado sus propiedades farmacológicas y antimicrobianas,

atribuidas principalmente a su contenido de alcaloides, flavonoides y taninos (Edeoga et
al., 2006).

Se han reportado diversas actividades del aceite esencial obtenido de las hojas de esta
especie: actividad antifúngica frente Candida albicans, Aspergillus niger, Rhizopus sp y
Botrytis sp; también actividad antibacteriana con inhibición del desarrollo de
microorganismos Gram negativos y positivos, (Mandal et al., 2007).

H. suaveolens representa una fuente importante de aceites esenciales, alcaloides,

flavonoides, fenoles, saponinas, terpenos y esteroles. Fue ampliamente cultivada en la
época prehispánica de México debido a sus semillas comestibles, y actualmente catalogada
como un “pseudocereal”, con probable origen en Mesoamérica y Norte América (Harlan,
1992).

Es una planta bastante utilizada en el occidente tropical de México, en los estados de

Colima y Nayarit, principalmente por comunidades Coras, mientras que en la zona sur del
país por diversas comunidades de origen maya. En muchos lugares se le considera una
maleza invasiva y dañina, pero lejos de ello, es en realidad no solamente una planta
medicinal, sino que sus semillas tienen notable valor nutritivo, además de poseer cualidades
insecticidas y antifúngicas [45].

3
La infusión de sus hojas y tallos tiene varios usos medicinales: se emplea como estimulante
de la digestión, carminativo, antiséptico (insecticidas y antiparasitaria),
antiinflamatorio, analgésico, lactogogo (estimula la lactancia), sudorífico, eficaz en el
tratamiento de infecciones gastrointestinales, febrífugo, para la diabetes, infecciones
respiratorias y de la piel, enfermedades de la matriz y cáncer, repelente de moscos
(aplicado sobre la piel), sedante (contra el insomnio y nerviosismo). La hoja seca
pulverizada se puede mezclar con semillas de diversos granos para evitar que se infesten de
hongos e insectos [46]..

De las ramas de H. suaveolens se obtiene un aceite esencial en el que se han identificado
los monoterpenos borneol, camfeno, alcanfor, 1-8-cineol, ciclohexenol, alfa-cimeno, alfa
felandreno, limoneno, linalol, mirceno, cis y trans-beta-ocimeno, alfa-pineno, terpinén-4-ol,
alfa y gama-terpineno, alfa-terpineol, alfa-terpinoleno y tujano; los sesquiterpenos
aromandreno, octahidro-dimetil-azuleno, beta-bourboneno, alfa-cadinoll, alfa cariofileno,
su alcohol, decahidro-trimetil-ciclopropil (E), azuleno, elemeno, germacreno C, alfa-
guaieno, alfa-humuleno. En la raíz se han detectado los triterpenoa alfa y beta-amirina,
ácido betulínico, friedelín, ácido 3-beta-hidroxi-lup-12-en-28-oico, lupeol, su acetato,
ácidos oleanólico, alfa-pelto-boykinólico, 3-beta-hidroxi-upenóico y ursólico; y los
esteroles campesterol, daucosterol y beta-sitosterol. Y en las hojas se han encontrado los
monoterpenos 1-8-cineol, felandreno, y alfa y beta-pineno; y los esteroles campesterol y
fucosterol [45].

La repelencia de H. suaveolens probablemente se deba a la concentración de aceites

mentolados volátiles presentes en las hojas de chan (Perry 1980). La actividad antibiótica
de esta planta se ha demostrado frente a diversas especies de bacterias, levaduras y hongos,
especialmente el aceite esencial obtenido de las partes aéreas de la misma [46].

2.1.3 Aplicación farmacológica de Hyptis suaveolens (L.) Poit.

La importancia farmacológica de este género en el tratamiento de trastornos respiratorios,

congestión nasal, fiebre, enfermedades del hígado, disfunciones gastrointestinales,
infecciones de la piel e incluso el virus de la inmunodeficiencia humana. Hyptis

4
Suaveolens es la primera especie de la familia, reportada en 1952, describiendo su
composición de aceite esencial (Roy John, 2022).

El análisis fitoquímico de este género reveló la presencia de muchos compuestos

bioactivos. Los estudios realizados hasta ahora muestran que los terpenos, los terpenoides,
los lignanos y los flavonoides están comúnmente presentes en este género y que las
composiciones químicas varían mucho entre especies, dependiendo de las ubicaciones
geográficas, genéticas y climáticas (Roy John, 2022).

El ácido ursólico es un compuesto anticancerígeno predominante en esta planta. El informe

describe el borneol como el componente principal de su aceite esencial. Sin embargo, una
mayor caracterización de este aceite esencial no se ha realizado hasta ahora (Roy John,
2022),

Esta especie ha sido ampliamente estudiada debido a su aceite esencial, que tiene una alta
actividad antifúngica, antibacteriana, anticancerígena y antiséptica. En medicina popular, se
ha utilizado como antitusivo, diaforético, antiespasmódico y es útil en el tratamiento de la
gota (Maria Valdiglezia M,A; otros, 2018).

2.1.4 Cáncer
Fue Hipócrates – el padre de la medicina– quien en el año 400 a.C. (antes de Cristo) le dio
su nombre, cancrum. Lo eligió por analogía con un cangrejo por la imagen que adquirían
los vasos sanguíneos de los tumores, similar a pinzas o garras que se adhieren con
tenacidad a los tejidos normales (Dosque pasqualini, 2007).

En la actualidad, el cáncer es un problema creciente y la cantidad de tumores está

aumentando en la mayor parte de las regiones del mundo. En 2003, alrededor de seis
millones de personas murieron de esta enfermedad. Para 2020, el número de muertes por
año será de 10 millones o más (Cortinas,C., 2011).

Se han descrito más de 100 formas distintas de cáncer de acuerdo con el órgano o tejido en
el que se originan. Los más frecuentes son los llamados carcinomas, que constituyen cerca
de 90% de los cánceres, y se generan de los epitelios o capas celulares que recubren la
superficie de nuestro cuerpo, tal vez porque este tipo de tejidos son los que más proliferan

5
y/o porque suelen ser los más expuestos a varias formas de daño físico o químico
relacionadas con el desarrollo de cáncer (Cortinas,C., 2011).

Las leucemias y los linfomas se producen a partir de las células formadoras de la sangre
(hematopoyéticas) que residen en la médula ósea y en los tejidos linfáticos y, aunque son
menos frecuentes que los carcinomas, causan mayor impacto moral, social y económico
pues afectan a niños y jóvenes lo cual puede reducir su esperanza de vida y productividad.
Los sarcomas son los más raros y se originan en el tejido conjuntivo y en las estructuras de
soporte, músculo, nervios, así como en los vasos sanguíneos y linfáticos (Cortinas,C.,
2011).

El cáncer se encuentra en la actualidad entre las dos y cinco primeras causas de muerte en
los países desarrollados y en algunos grupos poblacionales de diversos países en desarrollo;
los más comunes son los de pulmón, estómago, mama, colon/recto y del cuello del útero
(Cortinas,C., 2011),

Una célula madre tiene capacidad de autorrenovarse mediante divisiones mitóticas o bien
de continuar la vía de diferenciación para la que está programada y, por lo tanto, producir
células de uno o más tejidos maduros, funcionales y plenamente diferenciados en función
de su grado de multipotencialidad Algunas células madre adultas son capaces de
diferenciarse en más de un tipo celular como las células madre mesenquimales y las células
madre hematopoyéticas, mientras que otras son precursoras directas de las células del tejido
en el que se encuentran, como por ejemplo las células madre de la piel o las células madre
gonadales (células madre germinales (Cortinas, C., 2011).

Existen cuatro tipos de células madre: Una llamada célula madre totipotente puede crecer
y formar un organismo completo, tanto los componentes embrionarios (como por ejemplo,
las tres capas embrionarias, el linaje germinal y los tejidos que darán lugar al saco vitelino),
como los extraembrionarios (como la placenta). Es decir, pueden formar todos los tipos
celulares (Cortinas, C., 2011).

Célula madre pluripotente no puede formar un organismo completo, pero puede formar
cualquier otro tipo de célula proveniente de los tres linajes embrionarios (endodermo,

6
ectodermo y mesodermo), así como el germinal y el saco vitelino. Pueden, por tanto,
formar linajes celulares (Cortinas, C., 2011).

Las células madre multipotentes son aquellas que sólo pueden generar células de su
propia capa o linaje embrionario de origen (por ejemplo: una célula madre mesenquimal de
médula ósea, al tener naturaleza mesodérmica, dará origen a células de esa capa como
miocitos, adipocitos u osteocitos, entre otras) (Cortinas, C., 2011).

Las células madre unipotentes pueden formar únicamente un tipo de célula particular
(Cortinas, C., 2011).

2.1.5 Epidemiologia del cáncer

El Cáncer de próstata supera el 10% de todos los nuevos casos de cáncer diagnosticados en
el mundo, aunque esta cifra asciende al 20% de todos los cánceres diagnosticados en países
desarrollados. De manera global, junto con las de pulmón y de mama, es una de las
neoplasias más frecuentes de la humanidad. Según el entorno geográfico, se trata del primer
o segundo cáncer más frecuente en los varones (Javier Angulo Cuesta, 2014).

El estudio de la incidencia de la enfermedad revela que se diagnostican aproximadamente

en torno a 680.000 nuevos casos cada año en el mundo y que se registran unas 220.000
muertes anuales por su causa. En Europa, con una tasa de incidencia de 214 casos por cada
1.000 varones, es la neoplasia sólida más común e incluso supera al cáncer de pulmón y al
colorrectal. Más del 70% de los casos son diagnosticados en edades superiores a los 65
años (Javier Angulo Cuesta, 2014).

Figura 1.1.1

Distribución mundial en las tasas de

incidencia del cáncer de próstata por países
estandarizadas por edad (fuente de los datos:
GLOBOCAN 2008)

7
2.1.6 Características del cáncer
Tomando como base estos seis aspectos que distinguen a las células cancerosas de las
normales, se abordarán en ese orden los procesos biológicos involucrados, partiendo de la
forma en que se llevan a cabo en las células normales. La prevalencia de la enfermedad,
calculada sobre un período de 5 años, se estima en 2.368.000. Más del 80% de estos casos
corresponden a países desarrollados (Cortinas,C., 2011).

Crecimiento aun en ausencia de señales e “luz verde”: la mayoría de las células normales
esperan la llegada de una señal o mensaje externo antes de dividirse, las células cancerosas,
frecuentemente “falsifican ” sus propios mensajes de la inducción del crecimiento
(D.Hanahan y R.A Weinberg, 2000).

Crecimiento a pesar de señales de “alto” transmitidas por las células vecinas: a medida que
un tumor se expande, aprieta los tejidos adyacentes, que envían menajes químicos que
normalmente detendrían la división celular, pero las células malignas ignoran tales ordenes
(D.Hanahan y R.A Weinberg, 2000).

Evasión de mecanismos de autodestrucción existentes: en células saludables, a producción

de daño genético sobre un cierto nivel desencadena un programa de “suicidio molecular “.
Las células tumorales evaden mecanismos, aun cuando agentes del sistema inmune pueden
a veces exitosamente ordenar a las células cancerosas que se autodestruyan (D.Hanahan y
R.A Weinberg, 2000).

Habilidad de estimular la construcción de vasos sanguíneos: Los tumores necesitan oxigeno

y nutrientes para sobrevivir y los obtienen captando casos sanguíneos para que formen
nuevas ramificaciones que atraviesan la masa tumoral (D.Hanahan y R.A Weinberg, 2000).

Inmortalidad efectiva: las células normales no se dividen mas de 70 veces. Las células
malignas necesitan mas que eso para formas un tumor por lo que le dan a vuelta a sistemas,
como los telómeros al final de los cromosomas, que hacen respetar el limite de
reproducción celular (D.Hanahan y R.A Weinberg, 2000).

Capacidad de invadir otros tejidos y diseminarse en otros órganos: los canceres usualmente
se vuelven amenazadores para la vida solo cuando de alguna manera han invalidado el
circuito celular que los confina a una parte especifica de un órgano especifico en el cual

8
surgen. Nuevos crecimientos aparecen y eventualmente interfieren con circuitos vitales
(D.Hanahan y R.A Weinberg, 2000).

2.1.7 Cáncer de próstata

La próstata es la principal glándula accesoria sexual del varón y su función es secretar
sustancias fundamentales para la capacitación espermática durante la vida de los varones.
La próstata es el órgano masculino que con mayor frecuencia desarrolla cáncer
(adenocarcinoma). Habitualmente esta enfermedad coexiste con otras patologías
prostáticas: hipertrofia prostática benigna (HPB) y prostatitis, principalmente (Javier
Angulo Cuesta, 2014).

La próstata presenta 3 zonas glandulares diferentes: la zona periférica (ZP) corresponde al

70% del volumen de la próstata adulta del joven, la zona central (ZC) abarca el 25% de la
glándula y rodea los conductos eyaculadores y la zona de transición (ZT) corresponde al
5% y es la porción situada más próxima a la uretra (Javier Angulo Cuesta, 2014).

Figura 1.1.2 Anatomía topográfica zonal prostática: A. Zona de transición (ZT); B. Zona
central (ZC); C. Zona periférica (ZP); D. Estroma fibromuscular anterior (EFA).

En condiciones fisiológicas, y en el CP sensible a hormonas, la proliferación y secreción

celular prostática responde principalmente a estímulos androgénicos mediados por
dihidrotestosterona (DHT) (Javier Angulo Cuesta, 2014).

En la enfermedad resistente a castración, el receptor androgénico (RA) se vuelve promiscuo

y responde a hormonas esteroideas y a otros efectores diversos. En este momento la
secreción autocrina de neuropéptidos y la presencia de factores de crecimiento modula
también la agresividad de la enfermedad (Javier Angulo Cuesta, 2014).

9
La próstata es el órgano del cuerpo humano más propenso a la enfermedad a medida que
aumenta la edad. El CP no tiene un pico de incidencia definido, porque sucede de manera
proporcional directa con el aumento de la edad. Además, el factor edad se asocia a otros 2
factores de riesgo bien definidos: la etnia y la herencia. Curiosamente, aunque la incidencia
del CP aumenta, los valores de testosterona sérica disminuyen con la edad. Los varones con
diagnóstico de CP tienen una concentración más baja de testosterona que los varones de edad
similar sin CP. Este hecho implica que existen además otros factores patogénicos (Javier Angulo
Cuesta, 2014).

Aproximadamente el 10% de todos los casos de CP tienen una base genética y pueden
considerarse CP hereditario auténtico, definido por la presencia de 3 o más familiares de
primer grado afectados o de al menos 2 familiares afectados que hayan desarrollado
precozmente la enfermedad (Javier Angulo Cuesta, 2014).

Figura 1.1.3   La testosterona a través de su metabolito dihidrotestosterona (DHT) permite

que la célula glandular prostática lleve a cabo su función secretora y estimula la división
celular. RA, receptor androgénico.

El consumo de grasas está muy relacionado con la incidencia de la enfermedad, en concreto

el consumo de grasas saturadas. Asimismo, en su aparición también parece influir el
consumo de carne roja. Posiblemente esta observación se deba al incremento de ácido
alfalinoleico en este tipo de dietas, que puede generar estrés oxidativo y daño en el ADN.
Por el contrario, el consumo de ácidos grasos omega-3 de fuentes marinas parece implicar
una disminución en el riesgo de desarrollar CP (Javier Angulo Cuesta, 2014).

10
Hay consenso en que se produce mayor mortalidad en obesos y, aunque se desconoce el
mecanismo, se ha interpretado como relacionado con una activación de las rutas
procarcinógenas como el eje de factor de crecimiento similar a la insulina El selenio podría
proteger el ADN de los daños provocados por los mecanismos oxidativos e inhibir la
génesis tumoral por bloqueo de la proliferación celular e inducción de apoptosis (Javier
Angulo Cuesta, 2014).

3.JUSTIFICACIÓN
Las plantas medicinales son un remedio utilizado hace muchos años por nuestros ancestros,
estas mismas contienen muchas propiedades positivas para la salud, Estudios realizados
sobre Hyptis Suaveolens revelan las propiedades farmacológicas y antimicrobianas
atribuidas principalmente a su contenido de alcaloides, flavonoides y tatinos es decir
metabolitos secundarios es decir compuestos fenólicos que tienen su origen en el mundo
vegetal. Actúan como fitoalexinas es decir las plantas heridas secretan fenoles para
defenderse de posibles ataques fúngicos o bacterianos. De esta forma se puede inhibir la
reproducción celular en especial en células cancerosas como lo en este caso con el cáncer
de próstata.

4. HIPÓTESIS

La composición fitoquímica de Hyptis suaveolens (L.) Poit., tiene capacidad citoprotectora

frente a líneas celulares de cáncer de próstata

11
5.OBJETIVOS

5.1 OBJETIVO GENERAL

Evaluar la actividad antiproliferativa del extracto etanol-agua 70:30 sobre líneas celulares de cáncer
de próstata de extracto etanol-agua 70:30 de las hojas de de Hyptis suaveolens (L.)

5.2 OBJETIVO ESPECIFÍCO

 Determinar el contenido de compuestos fenólicos del extracto etanol-agua 70:30 de las
hojas de H. suaveolens (L.) mediante el método de Folin-Ciocalteu.
 Evaluar la actividad antioxidante del extracto etanol-gua 70:30 de las hojas de H.
suaveolens (L.) por el método de DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo)
 Evaluar la actividad antiproliferativa del extracto etanol-agua 70:30 de las hojas de H.
suaveolens (L.) in vitro sobre la línea celular de cáncer de próstata

6.METODOLOGÍA

6.1 Material vegetal

H. suaveolens es una planta silvestre que se encuentra durante todo el año y para este
trabajo se utilizó las hojas y tallos. Fue recolectada en agosto 2022 en La Tinaja,
Municipio de Cotaxtla, Veracruz, México; coordenadas; 18°45′38″N 96°27′38″O.

Se utilizaron ….. g de planta seca y molida, sometiéndola a un proceso de extracción

continúa empleado etanol-agua (70:30 v/v) por un periodo de 3 días, posteriormente se
redujo el volumen utilizando un rotavapor hasta obtener 25 mL del extracto el cual se
caracterizó determinando densidad óptica y °Bx

12
6.2 Determinación de la actividad antioxidante
a) Determinación del contenido total de polifenoles
Fue determinado mediante el método de Folin-Ciocalteu de acuerdo con Cai et al. (2004)
con modificaciones. A 50 µL de muestra (1mg/mL), se añadieron 2.5 mL de una solución
1:10 del
reactivo de Folin-Ciocalteu y 2 mL de Na 2CO3 al 7.5%, las muestras se incubaron a 45°C
durante 15 min. Transcurrido el tiempo se tomaron las lecturas de absorbancia a 765 nm
utilizando un espectrofotómetro de UV-VIS La cuantificación del contenido total de
polifenoles se realizará a partir de una curva de calibración utilizando como patrón primario
ácido gálico.

b) Evaluación de propiedades antioxidantes empleando DPPH

Para la determinación de las propiedades antioxidantes del extracto Etanol-Agua 70:30 de
las hojas de H. suaveolens se preparó una solución DPPH al 9 x 10 -5 M en metanol
preparada el día del ensayo, se tomaron 2.9 mL de esta solución y se añadieron 100 μL de
las soluciones de los extractos a una concentración de 1 mg/mL. Las muestras fueron
incubadas por 30 min a 37°C en un baño María protegidas de la luz, posteriormente se
midirá la absorbancia a 517 nm en un espectrofotómetro de UV-VIS. Se utilizó como
blanco una solución con 100 μL de metanol en 2.9 ml de la solución de DPPH, la
absorbancia se midió en cada ensayo. El experimento se realizará por triplicado. Como
control positivo se usó una solución de ácido ascórbico en concentración de 5 mM (Brand-
Williams et al., 1995; Domínguez-Ortiz et al., 2009).
6.3 Evaluación de la actividad biológica
a). Preparación del extracto para su adición al cultivo celular
Se pesaron 24 mg del extracto liofilizado etanol-agua 70:30 de las hojas H. suaveolens y se
disolvieron en 6 mL de medio DMEM/F-12 suplementado al 1% SFB y 1% P/S para tener
una solución a una concentración de 4000 µg/mL, esta solución fue filtrada en una unidad
de filtración estéril con tamaño de poro de 0.22 µm. Una vez esterilizada la solución se
realizó una serie de diluciones dobles para obtener las concentraciones: 7, 15, 31, 62, 125,
250, 500, 1000, 2000 y 4000 µg/mL.

13
b) Ensayo de proliferación celular
La línea celular se sembró en multiplatos de 96 pozos (0.32 cm 2, CORNING) a una
densidad de 2,500 células por pozo en 100 μL de medio de cultivo DMEM/F-12
suplementado al 8% con SFB y 1% de P/S incubándose por un periodo de 48 h a 37°C y
5% de CO2 para permitir la adhesión celular.

Después de este periodo se realizó el cambio a las condiciones experimentales, retirando el

medio de cultivo haciendo un lavado con DMEM/F-12 base sin suplementar para eliminar
restos del medio anterior y productos de desecho provenientes del metabolismo celular.
Finalmente, los cultivos fueron incubados con las diferentes concentraciones del extracto
liofilizado etanol-agua 70:30 de hojas de H. suaveolens disuelto en DMEM/F-12 al 1% de
SFB y 1% de P/S

Transcurridas las primeras 24 h se retiró el medio de cultivo con las diferentes condiciones
experimentales y se colocaron 50 μL de la solución de MTT (5 mg/mL). Se dejó incubar
durante 4 h a 37 °C y 5% de CO 2 una vez transcurrido este tiempo se retiró el MTT y se
colocaron 200 μL de DMSO para solubilizar los cristales generados, se homogenizó
perfectamente cada pozo, una vez disueltos todos los cristales se pasaron a una nueva placa
con ayuda de una micropipeta
para realizar su lectura en el espectrofotómetro a 570 nm. Este procedimiento se repitió con
los cultivos correspondientes para la determinación de la proliferación a las 48 h.
Se realizaron un total de tres experimentos independientes con tres replicas cada uno. Los
resultados fueron expresados como el promedio de los tres experimentos ± el error estándar
de la media.

c) Recuento de células mediante el ensayo de exclusión con azul de tripano

En un multiplato de 48 pozos (0.96 cm2, CORNING) se sembrará la línea celular 7 500
células por pozo en 250 µL de medio DMEM/F12 suplementado al 8% de SFB y 1% de P/S
incubándose a 37 °C y 5% de CO 2 por 48 h para permitir su adhesión y proliferación
celular.
Posterior a este periodo se realizó el cambio de condiciones con las diferentes
concentraciones del extracto de H. suaveolens. Después del periodo de incubación con el
extracto, se realizó el conteo celular en los cultivos. Para despegar las células del sustrato se

14
retiró el medio de cultivo y se realizó un lavado de la monocapa con PBS 1X y se añadió 50
µL de tripsina-EDTA 0.05%, el cultivo se incubó por 10 minutos a 37°C en una atmosfera
de 5% de CO2. Posteriormente, la tripsina fue neutralizada con un volumen igual de medio
de cultivo suplementado, las células se despegaron del pozo mediante resuspensión. El
conteo celular se llevó a cabo homogenizando la suspensión celular anterior y tomando una
alícuota de ésta que fue diluida con el azul de tripano 0.4% en una relación 1:1 v/v. Cuando
las células están dañadas o muertas, la integridad de la membrana está comprometida, el
azul de tripano puede entrar a la célula y teñirla, permitiendo la identificación y
cuantificación de la célula muerta (no viable). Una vez teñidas las células estas fueron
contadas en la cámara de Neubauer en un tiempo no mayor a 15 minutos, estas fueron
clasificadas en: viables (excluyeron el colorante) y no viables (teñidas). Por otro lado, la
viabilidad celular de los cultivos se evaluó mediante tinción directa con azul de tripano.
Para ello, se retiró el medio de cultivo, se añadió 50 µL de azul de tripano al 0.4 % a cada
pozo, posteriormente se incubó por 15 min a 37 °C y 5% de CO2, luego las células fueron
lavadas con PBS 1X para eliminar el exceso de colorante y así permitir su observación en el
microscopio.

7. FACTIBILIDAD DEL PROYECTO

El proyecto se llevará a cabo en la Facultad de Ciencias Químicas en el Laboratorio 101 de
Biotecnología y criobiología vegetal y en el Centro de Investigaciones Tropicales de la
Universidad Veracruzana, en Xalapa, Ver.

Factibilidad Características
Técnica Se identificado con precisión la zona de colecta
del material biológico. Se cuenta con la
dirección de la Dra. Marina Guevara Valencia
en la Facultad de Ciencias, de la Dra. Leticia
Cano Asseleih, investigadora del CITRO_UV,
como directora externa y la colaboración del
Dr. José Antonio Guerrero Analco enriquecerá
el desarrollo del trabajo.
Financiera Evaluación de la actividad antioxidante:

15
 Reactivos de Folin-Ciocalteu, Na2CO3 al 7.5
%, ácido gálico, DPPH (1,1-difenil-2-
picrilhidrazilo) a 9 x 10-5M, ácido ascórbico
5mM, FeSO4.7H2O, tampón de acetato 300
Mm, pH 3.6, TPTZ (complejo férrico-2,5,6-
tripiridil-5-triazina) 10 mM, FeCl3 20 mM y
HCl 40 mM. estudio de actividad
antiproliferativa y citotóxica se emplearon
medios de cultivo DMEM F/12 suplementado
con 8% de suero fetal de bovino SFB, 1% de
penicilina y estreptomicina (P/S) y DMEM
F/12 suplementado con 1% de SFB y 1 % de
P/S. Adicionalmente, se utilizaron las
siguientes soluciones: Tampón de fosfatos 1X
(PBS 1X) y solución de tripsina-EDTA al
0.05%. Para los ensayos de citotoxicidad y
proliferación celular se utilizó el reactivo de
MTT (Bromuro de 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-
2,5-Difeniltetrazolio) (M2128, Sigma-Aldrich).
Dimetilsulfóxido (DMSO) (D5879, Sigma
Aldrich) y azul de tripano 0.4%
Infraestructura Parte del equipamiento al que se tiene acceso
incluye: parrilla con agitación, balanza
analítica, rotavapor, espectrofotómetro de UV-
VIS, incubadora con inyección de bióxido de
carbono (NUAIRE US AUTOFLOW CO2), un
gabinete de seguridad biológica,
espectrofotómetro lector de placas a 570 nm

16
 8. CRONOGRAMA DE TRABAJO
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
Valor
Actividades Meses Avance
estimado
2023 2022
Año
Jun Jul Ago Sep Oct Nov Dic Ene Feb Mar Abr May % %

Recopilación de
información
X X X 5 5

Revisión de bibliografías X X 5 5

Redacción del marco

teórico
X 10 10

Recolección de
muestras
X 10 10

Implementación de
metodologías
X X X 10 10

Obtención de
resultados
X 10 10

Análisis de resultados y
estadístico
X 10 10

Discusión de resultados X 10 10

Organización y
redacción del X X 10 10
documento final
Preparación de examen
oral
X 10 10

Examen Oral X 10 10
Total 100 100

Dra. Marina Guevara Valencia 30 septiembre de 2022 Daniel Salazar Vela

9. BIBLIOGRAFÍA CONSULTA

Bibliografía

17
Cortinas, C. (2011). ¿Qué es una celula madre? En C. Cortina, Cáncer:herencia y ambiente
(pág. 53). FCE. Obtenido de https://elibro.net/es/ereader/bibliotecauv/109770?
page=53

Cortinas,C. (2011). ¿ES EL CÁNCER UNO O MÚLTIPLES PADECIMIENTOS? En C.

Cortinas, Cáncer: herencia y ambiente (pág. 26). CFE. Obtenido de
https://elibro.net/es/ereader/bibliotecauv/109770?page=26.

Cortinas,C. (2011). ¿OCURRE MÁS FRECUENTEMENTE EL CÁNCER EN LA

ACTUALIDAD? En C. Cortinas, Cáncer:herencia y ambiente (pág. 28). FCE.
Obtenido de https://elibro.net/es/ereader/bibliotecauv/109770?page=28.

Cortinas,C. (2011). ¿QUÉ CARACTERIZA AL CANCER ? En C. Cortinas, Cáncer:

herencia y ambiente (pág. 35). FCE. Obtenido de
https://elibro.net/es/ereader/bibliotecauv/109770?page=35.

Cortinas,C. (2011). NOTICIAS SOBRE EL CÁNCER: QUÉ ES CIERTO Y QUÉ NO. En

C. Cortinas, Cáncer: herencia y ambiente (pág. 21). FCE. Obtenido de
https://elibro.net/es/ereader/bibliotecauv/109770?page=21

D.Hanahan y R.A Weinberg. (2000). ¿Qué caracteriza al cancer ? En C. Cortina, "The

hallmarks of Cancer " (págs. 57-70). Cell. Obtenido de
https://elibro.net/es/ereader/bibliotecauv/109770?page=25

Dosque pasqualini, C. (2007). Cinco Teorías . En C. Dosque pasqualini, Invetigacion de

Cáncer y Citogenética (pág. 22). Eudeba. Obtenido de ellibro.net:
https://elibro.net/es/ereader/bibliotecauv/101416?page=22.

Javier Angulo Cuesta. (2014). ScienceDirect. (J. A. Cuesta, Ed.) Obtenido de

ScienceDirect: https://pdf.sciencedirectassets.com/311276/3-s2.0-C20130151628/3-
s2.0-B9788490225400000015/main.pdf?X-Amz-Security-
Token=IQoJb3JpZ2luX2VjEEoaCXVzLWVhc3QtMSJHMEUCICDWkFOpINS1U
LN%2FUzTJLQv9Hl
%2Bcfrh8N64lsYIQ2XWIAiEAzXW5YXA6nHYFdF1CiWMyLN6NHbOz1dC3H
V7ta%2F1b

18
Maria Valdiglezia M,A; otros. (2018). Influence of nutrition and water stress in Hyptis
suaveolens. Elsevier, 125, 511-519.
doi:https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2018.09.040

Pokherl, B., & Choden, D. (2022). Antifungal efficacy of Hyptis suaveolens and Rumex
nepalensis extracts against Alternaria solani: An approach for bio-pesticides.
Elsevier, 43, 1-3. doi:https://doi.org/10.1016/j.bcab.2022.102439

Roy John. (2022). Chemical Composition, Antioxidant, and mosquito Larvicidal Activity
of Essential Oils from Hyptis capitata Jacq. Journal of Experimental Pharmacology,
195-204. doi:https://doi.org/10.2147/JEP.S355280

10. BIBLIOGRAFIA ELECTRONICA

https://acortar.link/PIXoxr (26/sep/2022)

https://elibro.net/es/lc/bibliotecauv/titulos/109770 (26/sep/2022)

https://elibro.net/es/lc/bibliotecauv/titulos/101416 (27/sep/2022)

https://elibro.net/es/ereader/bibliotecauv/101416?page=22 (27sep/2022)

https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2018.09.040 (27/sep/2022)

https://www.elsevier.es/es-revista-offarm-4-articulo-compuestos-fenolicos-un-analisis-sus-
13063508(28/sep/2022)

19