Laboratorio N°3. Determinación de Grupos Sanguíneos. Tipaje Directo

LABORATORIO No.
3
“DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS. TIPAJE DIRECTO”
REACCIÓN DE HEMAGLUTINACIÓN DIRECTA
NOMBRE: Darel Barragan CÉDULA 8-983-1917
FUNDAMENTO:
La determinación del grupo sanguíneo es una técnica habitual en la transfusión de
hemoderivados. Es necesaria porque el sistema inmunitario de algunos individuos rechaza
los hematíes de otros. Esta reacción inmunológica esta mediada por las isohemaglutininas,
que son anticuerpos (Ac) fácilmente detectables y cuantificables ya que forman aglutinados
visibles cuando se enfrentan a hematíes específicos. La detección de isohemaglutininas en
el suero o plasma de un individuo tiene un interés triple. Por una parte, se requiere para
determinar correctamente el grupo sanguíneo y evitar reacciones transfusionales graves.
Por otra, sirve para evaluar la capacidad de producir Ac de una persona, algo muy útil para
el diagnóstico de inmunodeficiencias. Finalmente, sirve para obtener reactivos para tipaje
de grupos sanguíneos.
Se pueden determinar al menos 27 sistemas antigénicos hemáticos con sus correspondientes
variantes alélicas. Los más importantes en transfusión sanguínea, por su alta
inmunogenicidad, son los sistemas H - ABO y Rhesus (Rh).
Sistema H – ABO:
Los epítopos responsables son carbohidratos presentes en glicoesfingolípidos y
glicoproteínas de membrana, que están codificados por dos loci génicos. El locus H, en el
cromosoma 19 y el locus ABO, en el cromosoma 9, que tiene tres alelos: los alelos A y B
son codominantes y el alelo O que es un gen delecionado sin actividad enzimática, de
modo que en homocigosis deja la secuencia H intacta. Los genotipos y fenotipos
responsables de los cuatro grupos mayoritarios son: OO, grupo O, AA y AO, grupo A; BB
y BO, grupo B y el AB, grupo AB. En este último, los hematíes tendrán oligosacaridos con
una y otra modificación. Clasificación según la Landsteiner (clasificación hoy universal).
La importancia inmunológica de los antígenos H-ABO está en el hecho de que las personas
toleran sus propios oligosacáridos pero sintetizan en gran cantidad Ac frente a los otros
grupos.
Como se producen espontáneamente, es decir sin contacto previo con hematies de dichos
grupos, se consideran “Anticuerpos naturales”. En el recién nacido alcanzan un nivel
detectable en plasma a las pocas semanas de edad. Hay evidencias que indican que en
realidad se sintetizan en respuesta a bacterias de la flora intestinal, polenes y/o a sustancias
presentes en alimentos de origen animal, que contendrían oligosacaridos con reactividad
cruzada.
Sistema Rhesus:
El factor Rh es un aglutinógeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner, en los
glóbulos rojos de primates (Macacusrhesus) y que también existe normalmente en el 85%
de los humanos, que por esta causa se denomina Rh positivos. En el sistema Rh, existen
varios antígenos: D, C, c, E, e; sin embargo, de rutina, solo se determina la presencia del
antígeno D en los eritrocitos y de acuerdo a su presencia o ausencia se dice que un
individuo es Rh D positivo o Rh D negativo.
La proteína Rh es la más importante a efectos transfusionales. Las personas que expresan

RhD se caracterizan como “Rh positivas”, mientras que si carecen de Rh D por delación
parcial o completa del gen RHD, serán “Rh negativas”.
Los anticuerpos anti RhD, que son IgM e IgG, no aparecen espontáneamente en las
personas Rh negativas, sino que son consecuencia de la exposición a hematíes D, por
ejemplo tras una transfusión incorrecta o en el embarazo si la madre Rh negativa gesta un
feto que expresa Rh positivo
Determinación de antígenos eritrocitarios e isohemaglutininas por reacción de

hemaglutinación directa:
La determinación correcta del grupo sanguíneo requiere el análisis de los eritrocitos para
ABO y D mediante Anticuerpos específicos anti-A, anti-B y anti-D. Esto se denomina
grupo hemático y suele llevarse a cabo en sangre completa, sin que interfiera la presencia
de plasma, leucocitos o plaquetas.
MATERIALES:
 Portaobjetos
 Palillos aplicadores de madera
 Muestra sanguínea anticoagulada
 Gasas
 Reactivos Anti A, Anti B, Anti AB y Anti D.
 Micropipetas de 10ul a 100ul
 Goteros
PROCEDIMIENTO:
1. Homogenizar la muestra sanguínea.

2. Depositar 50 ul o una gota de sangre tres veces en dos porta objetos
3. Colocar una gota de los reactivos Anti A, Anti B, Anti AB y Anti D sobre cada gota
de sangre.
4. Homogenizar con un palillo formando un círculo.
5. Observar la reacción en cada círculo y anotar
INVESTIGACIÓN:
1. Cuáles son los carbohidratos presentes en los grupos A, B, AB y O.
Grupo A
 Glucosa
 Galactosa
 Fucosa
 N-Acetilglucosamina
 N-Acetilgalactosamina
Grupo B
 Glucosa
 Galactosa
 Fucosa
Grupo AB
 Glucosa
 Galactosa
 Fucosa
 N-Acetilgalactosamina
Grupo O
 Glucosa
 Galactosa
 Fucosa
2. Complete el siguiente cuadro:

Antígeno presente
Grupo Sanguíneo Genotipos en la superficie del Anticuerpo en el
presentes eritrocito plasma
A AA o AO Expresa el Anti-B
antígeno A en la
membrana del
eritrocito
B BB o BO. Expresa el Anti-A
antígeno B en la
membrana del
eritrocito
AB AB Expresa el El plasma no tiene
antígeno AyB en la ningún anticuerpo
membrana del
eritrocito
O OO No presenta Ninguno
ningún antígeno en
la superficie

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LABORATORIO No.

NOMBRE: Darel Barragan CÉDULA 8-983-1917

La proteína Rh es la más importante a efectos transfusionales. Las personas que expresan

Determinación de antígenos eritrocitarios e isohemaglutininas por reacción de

1. Homogenizar la muestra sanguínea.

1. Cuáles son los carbohidratos presentes en los grupos A, B, AB y O.

2. Complete el siguiente cuadro:

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