P3me1515 20191

Práctica 3.
Técnicas de cultivo de bacterias

Unidad 3. Cultivo de bacterias y técnicas de siembra
Objetivos
 Aplicar las diferentes técnicas de siembra que se emplean para el estudio y asilamiento de
bacterias.
 Relacionar la presentación del medio de cultivo con la técnica de siembra.
 Clasificar las condiciones de incubación para el cultivo de bacterias.
 Evaluar el efecto de las condiciones del medio de cultivo en el crecimiento.
 Describir las características morfológicas del crecimiento bacteriano en los distintos medios de
cultivo.
 Describir la morfología microscópica, agrupación y pureza de las bacterias cultivadas.
Introducción
El estudio de los microorganismos se basa en la observación de las características microscópicas y
de desarrollo que presentan en medios de cultivo. Así el cultivo de bacterias, es un método que
permite su reproducción en medios líquidos, semisólidos y sólidos. En los últimos la formación de
colonias visibles con características particulares permite diferenciar a los microorganismos, así
como detectar contaminantes en los cultivos puros.
Materiales
 Cultivos puros de bacterias
Escherichia coli
Serratia marcescens
Micrococcus luteus
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Bacillus subtilis
 Material por equipo

1 Microscopio
2 mecheros
2 gradillas
2 asas bacteriológicas
1 vaso de precipitados de 250mL
 Colorantes
1 juego de colorantes de Gram
ME1515 – 2019/1 - Práctica 3 - Página 1
Azul de metileno para tinción simple
 Medios de cultivo
8 cajas de Petri con Agar de uso general1
6 tubos con caldo BHI.
6 tubos con caldo BHI con diferentes condiciones de pH.
 Material que deben tener los alumnos:

8 tubos con caldo BHI*
2 tubos con medio semisólido*
4 tubos con agar BHI inclinado*
Pipetas Pasteur estériles*
Portaobjetos
1
Puede ser Agar Soya Tripticase (TSA), Agar Infusión de Cerebro y Corazón (BHI), Agar Nutritivo
(AN), Agar Casoy (AC), etc.
* Material preparado la práctica anterior
1ª Sesión
Cultivo de bacterias
Metodología
 Siembra de bacterias (cada equipo debe sembrar 2 bacterias diferentes)

1. Organizar el material de modo que cada alumno cuente con lo siguiente: 4 cajas con Agar de
uso general1, 3 tubos de caldo BHI* 2 tubos con agar inclinado* y un tubo con medio
semisólido*.
2. Identificar las cajas de Petri y tubos de ensayo con plumón indeleble o con etiquetas con los
siguientes datos: tener cuidado de que las anotaciones queden en la periferia de la base de la
caja o cerca de la boca del tubo.
1515-09-# de equipo
Nombre del microorganismo
dd/mm/aa
3. A partir de la muestra bacteriana inocular una asada en un tubo con 7mL de caldo BHI (tubo
0).
4. A partir del tubo 0 preparar un frote, teñir con Gram y observar en 100x y registrar sus
observaciones.
5. A partir del tubo 0 inocular el material que se muestra en el cuadro siguiendo el esquema de
trabajo.
6. Sellar con las cajas dos tiras de masking tape, y colocar los tubos en un bote de metal o
plástico. Los tubos de diversas temperaturas deberán incubarse por separado. Incubar los otros
tubos y las cajas invertidas a 37°C durante 24 horas en condiciones aeróbicas.
7. Transcurrido el tiempo de incubación, revisar y guardar en refrigeración a 4°C.
Técnicas de siembra
 Tubo con caldo mediante la transferencia  Tubo con agar semisólido mediante picadura
una gota con pipeta Pasteur. (emplear el asa recta o en aguja)
 Tubos con agar inclinado. Uno con estría  Caja de Petri con hisopo mediante la técnica
recta y el segundo con estría ondulada. de extendido o siembra masiva. Esta técnica
también puede hacerse con asa bacteriológica.

 Caja de Petri con el asa trazar una estría  Cajas de Petri con el asa trazar una serie de
simple en un cuarto de caja (cuadrante estrías con el fin de aplicar la técnica de
simple). Esta también puede aplicarse en el cuadrante radial o estriado por agotamiento.
área total de la caja.

Organigrama
Tinción de Gram
Siembra con asa
Tubo 0
Caldo BHI
Cepa bacteriana
BHI semisólido
Inocular con asa de aro
pequeño o aguja de siembra
Agar BHI
Inocular con asa
Estría continua
Agar BHI inclinado
Inocular con asa de aro
pequeño en estría recta y
estría ondulada
Agar BHI
Inocular con asa
Cuadrante simple
Caldo BHI
Inocular con asa o pipeta Pasteur
Agar BHI
Inocular con asa
Cuadrante radial
Agar BHI
Inocular con hisopo por
siembra masiva y transferir al
caldo BHI

2ª Sesión
Resultados del desarrollo de bacterias
1. Describir las características de desarrollo en los tubos (medio líquido, semisólido y sólido) y
en las cajas de acuerdo con las guías de observación. Registrar sus resultados en el cuadro 1.
2. A partir del cultivo líquido y de dos colonias aisladas preparar 3 frotes y teñir con Gram.
Registro de resultados
 Cuadro 1. Características microscópicas y de crecimiento en medios líquidos, semisólidos y

sólidos, inoculados mediante diferentes técnicas.
Nombre científico de la bacteria: _______________________________________________
Presentación del medio Características de desarrollo Resultados

de cultivo y técnica de
siembra
Características Forma
microscópicas Agrupación
Gram
Caldo inoculado con Superficial (pelicular o anillado)
asa o pipeta o hisopo Sedimento
Turbidez
Color
Picadura en medio Características de crecimiento
semisólido Movilidad (+ o -)
Color
Agar inclinado (estria Forma del crecimiento
recta) Color
Consistencia (seca, húmeda)
Agar inclinado (estria Color
ondulada) Textura
Consistencia
Caja de Petri, Desarrollo masivo o confluente
inoculación por Presencia de colonias aisladas
extendido o masivo Color
Caja de Petri, Desarrollo masivo o confluente
inoculación por estría Presencia de colonias aisladas
Color
continua
Caja de Petri, Desarrollo a lo largo del estriado
inoculación cuadrante Presencia de colonias aisladas
simple Características de las colonias:
Forma (puntiforme, circular,
ameboide, rizoide, fusiforme)
Color (blanquecino, blanco opaco,
amarillo etc)
Borde (entero, ondulado, lobulado,
crenado, filamentoso)
Elevación (plana, elevada, convexa,
rugosa, papilar, embonada)
Textura (acuosa, butirosa, cremosa,
membranosa, viscosa)
Caja de Petri, Presencia de colonias aisladas
inoculación cuadrante Características de las colonias:
radial (estría radial o Forma (puntiforme, circular,
agotamiento) ameboide, rizoide, fusiforme)
Color (blanquecino, blanco opaco,
amarillo etc)
Borde (entero, ondulado, lobulado,
crenado, filamentoso)
Elevación (plana, elevada, convexa,
rugosa, papilar, embonada)
Textura (acuosa, butirosa, cremosa,
membranosa, viscosa)
Características macroscópicas de crecimiento bacteriano

Disposición de desechos
1. Verter los desechos de colorantes en los contenedores dispuestos en los laboratorios
2. Después de observar las preparaciones, sumergir los portaobjetos en una solución sanitizante
durante 10 minutos, lavar con detergente, enjuagarlos y colocarlos en un frasco con alcohol al
95 %.
3. En el caso de ruptura de las preparaciones, envolver los fragmentos con papel, esterilizar el
paquete en autoclave y después desecharlos en el contenedor de vidrio roto.
4. Los cultivos muestra deben ser esterilizados en autoclave, antes de ser desechados.
5. Después de observar las características de desarrollo, esterilizar los cultivos en autoclave.
6. Vaciar el agar sobre un papel y envolverlo.
7. Colocar el paquete en una bolsa de plástico y depositarla en el contenedor correspondiente.
8. Sellar las cajas de plástico con cultivos y depositarlas en el contendor rojo del laboratorio A.
Bibliografía complementaria
 Cappuccino, J. & Sherman, N., Microbiology: A laboratory manual, California. Benjamin
Cummings, 2010.
 Leboffe Michael J. and Burton E. Pierce. 2006. Microbiology laboratory theory and application.
2nd edition, Morton Publishing Co. USA.
 Madigan M.T, Martinko J.M., Stahl D and Clark D.P., Brock Biology of microorganisms, 13th
edition, UK, Pearson Benjamin Cummings, 2010.
 Prescott L.M., Harley J.P. and Klein G.A., Microbiología, 3a edición, Madrid, México, Mc
GrawHill-Interamericana, 2009.
 Ramírez-Gama, R. M., Luna, M. B., Velásquez, M. O., Vierna, L., Mejía C. A., Tsuzuki, R. G.,
Hernández G. L., Müggenburg, I., Camacho Cruz, A. y Urzúa H. M. del C., Manual de Prácticas
de Microbiología General, México, UNAM, Facultad de Química, 2011.
 Tortora G.J., Funke B.R. and Case C.L., Microbiology: An Introduction with Mastering
Microbiology, 11th edition, UK, Pearson Benjamin Cummings, 2012.
Cuestionario
1. ¿Cuáles son las características generales de las bacterias?
2. ¿Qué es un cultivo microbiológico?
3. ¿Qué es una colonia bacteriana?
4. ¿A qué se le denomina cepa en Microbiología?
5. Define y compara cultivo axénico y cultivo mixto.
6. ¿Qué es una cepa pura? ¿Cómo compruebas su pureza?
7. ¿Cuál es la utilidad de sembrar las bacterias en los medios semisólidos y líquidos?

Glosario de microorganismos
Escherichia coli
Serratia marcescens
Micrococcus luteus
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Bacillus subtilis
Ejercicios
Elaborar dos planas en hojas de cuadro grande utilizando los siguientes estriados:

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Técnicas de cultivo de bacterias

 Material por equipo

 Material que deben tener los alumnos:

 Siembra de bacterias (cada equipo debe sembrar 2 bacterias diferentes)

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 Cuadro 1. Características microscópicas y de crecimiento en medios líquidos, semisólidos y

Nombre científico de la bacteria: _______________________________________________

Presentación del medio Características de desarrollo Resultados

Características macroscópicas de crecimiento bacteriano

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