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CienciaDirecta

Ingeniería enzimática en el contexto de nuevas vías y

productos
Konrad B Otte y Bernhard Hauer

En los últimos años, la ingeniería enzimática se utilizó para ajustar un Después de que Arnold y Stemmer informaron los primeros
conjunto diverso de proteínas para realizar nuevas vías biosintéticas y ejemplos de evolución dirigida, se desarrollaron varios ingenios
obtener acceso a productos novedosos. Sin embargo, las enzimas en la nuevos que iban desde enfoques aleatorios hasta enfoques
naturaleza no siempre cumplen con las demandas requeridas en términos racionales.1]. En esta revisión, resumimos cómo los
de actividad, selectividad y estabilidad. En estos casos, la ingeniería investigadores han abordado recientemente los desafíos
enzimática se ha utilizado para mejorar las propiedades de las enzimas, lo mencionados anteriormente. Ilustramos las tendencias con una
que facilitó el desarrollo de biocatalizadores funcionales hechos a medida, elección personal de ejemplos en el contexto de nuevos
incluso más allá de sus capacidades naturales. Se pueden encontrar caminos y productos. En este documento, el enfoque de esta
ejemplos en las tres áreas principales de la biotecnología química: revisión se encuentra exclusivamente en la ingeniería del
biocatálisis de un solo paso, ingeniería metabólica y cascadas enzimáticas. biocatalizador. El término vía en esta revisión no solo se refiere
En esta revisión destacamos el trabajo publicado recientemente en estos tres a las vías metabólicas sino también a las vías sintéticas, razón
campos y enfatizamos las principales tendencias y diferencias. por la cual también se incluyen las reacciones enzimáticas
clásicas de un solo paso. Dentro de esta revisión, mostraremos
los tres campos: biocatálisis de un solo paso, enfoques de
direcciones
Instituto de Bioquímica Técnica, Universitaet Stuttgart, Allmandring 31, ingeniería metabólica y cascadas enzimáticas con un enfoque
70569 Stuttgart, Alemania en la ingeniería enzimática (Figura 1), distinguiéndose entre
cascadas quimioenzimáticas y multienzimáticas.
Autor para correspondencia: Hauer, Bernhard (
[email protected])
Biocatálisis de un solo paso
La ingeniería enzimática es una metodología clave bien establecida
Opinión actual en biotecnología2015,35:16–22 en el campo de la catálisis enzimática de un solo paso, que es
Esta revisión proviene de una edición temática sobrebiotecnología química importante en la síntesis de varios compuestos en varios pasos.
Aunque hay numerosos ejemplos y revisiones de la ingeniería de
Editado porUwe T BornscheueryAlex Toftgaard Nielsen
enzimas en la literatura, los investigadores con frecuencia logran
Para obtener una descripción completa, consulte elTemay elEditorial
llamar la atención sobre el campo mediante el desarrollo de nuevas
Disponible en línea el 10 de enero de 2015
estrategias de evolución o métodos de detección, mediante la
http://dx.doi.org/10.1016/j.copbio.2014.12.011 realización de reacciones no naturales desafiantes o mediante la
0958-1669/# 2014 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados. habilitación de rutas sintéticas novedosas, que son favorables sobre
los enfoques únicamente químicos [2,3]. En contraste con la
literatura de ingeniería metabólica y cascadas enzimáticas, la
evolución de enzimas en el campo de la biocatálisis de un solo paso
es la más ubicua.

Introducción Un ejemplo es el desarrollo y la ingeniería de unv- transaminasa de

Los productos más limpios y 'verdes', los rendimientos más altos y Savileet al.para la síntesis de sitagliptina, un fármaco antidiabético.
los procesos que consumen poca energía son promesas tentadoras, El trabajo ilustra muy bien las áreas de enfoque y los desafíos de la
que a menudo aparecen en coherencia con la biotecnología. Aunque ingeniería de enzimas, que también se encuentran en ejemplos
los métodos biotecnológicos ya están bien establecidos en la similares [4–6]. La reacción no difiere de la propia reacción
industria química y se utilizan para producir varios productos, enzimática natural en cuanto a su mecanismo. Sin embargo, difiere
incluidos combustibles, productos farmacéuticos y productos en términos de topología de sustrato y en las condiciones de
químicos finos, estas promesas no siempre se pueden cumplir sin reacción del proceso final. Los criterios principales en los que basar
más preámbulos. Algunos biocatalizadores demuestran actividades la selección son la actividad, el disolvente, así como la estabilidad y
bajas, así como selectividades y estabilidades deficientes en las selectividad a la temperatura, también representativos de otros
condiciones del proceso. Tales restricciones hacen que los procesos trabajos en esta área. Durante un curso de 11 rondas de evolución
biotecnológicos sean antieconómicos o se queden en el camino en dirigida, en total se introdujeron 27 mutaciones aleatorias para
comparación con sus contrapartes químicas clásicas. La ingeniería llegar a la final.v-variante de transaminasa que cumple todos los
enzimática se puede utilizar para superar los obstáculos naturales requisitos de reacción [7].
de las enzimas de tipo salvaje a fin de desarrollar un catalizador de
diseño con las propiedades deseadas que coincidan con los Hay muchos otros ejemplos, pero todavía hay problemas
requisitos del proceso. por resolver. Cómo realizar una reacción, por

Opinión actual en biotecnología2015,35:16–22 www.cienciadirecta.com

 Vías y productos novedososOtte y Hauer 17

Figura 1

Un solo paso Metabólico enzimático

Biocatálisis Ingeniería cascadas

A B
COOEt
C X Y
Fe mi1 mi
2
R R
COOEt
C mi3
X

sustrato X fuente de carbono C sustrato A

producto Y producto X producto c

§ sitagliptina § 1,4-butanodiol § Ácidos dicarboxílicos

§ Atorvastatina § isobutanol § Amino alcoholes
§ boceprevir § 1,3-propanodiol § β-hidroxinitrilos
§ Montelukast § 3-hidroxipropionato § ω-aminoácidos
§ Vernakalant § ácido glucárico § norefedrina

Opinión actual en biotecnología

Tres campos principales de esta revisión: biocatálisis de un solo paso (izquierda), ingeniería metabólica (centro) y cascadas enzimáticas (derecha). La ingeniería enzimática
juega un papel cada vez mayor en los tres enfoques diferentes. Sin embargo, la aparición en la literatura en comparación con la literatura general publicada en este campo no
está distribuida por igual. Esto no refleja necesariamente la importancia de la ingeniería enzimática en los campos individuales sino el esfuerzo de mutagénesis, que fue
necesario para desarrollar un catalizador adecuado y la cantidad de información accesible al público.

que no existe una contrapartida natural aunque la reacción en Enfoques de ingeniería metabólica
sí es química y termodinámicamente factible? Este problema se A primera vista, la evolución dirigida de enzimas
puede abordar explotando la promiscuidad de la enzima, donde parece jugar solo un papel subordinado en el
la maquinaria catalítica de una enzima se utiliza para catalizar contexto de la ingeniería metabólica. En la literatura
reacciones apenas relacionadas.8]. Un ejemplo interesante es la que se refiere a los productos biotecnológicos
ciclopropanación de derivados de estireno por Arnold y establecidos como 1,2-propanodiol, 1,3-propanodiol,
colaboradores. Comparable a la transferencia de oxeno para la ácido succínico, treonina, valina, ácido glucárico,
formación de epóxidos, utilizaron el hemo del sitio activo de una artemesinina y 3-hidroxipropionato, no se mencionan
monooxigenasa P450 (CYP102A1) deBacilo megateriumen actividades de ingeniería enzimática. Esto se debe
presencia de un reductor para una transferencia de carbeno, lo principalmente a la falta de acceso público a la
que conduce a la formación de un derivado de ciclopropano ( información sobre cómo se diseñó la cepa de
Figura 2) [9]. En un trabajo adicional, pudieron aumentar la producción final. Parte de la información se clasifica
actividad de ciclopropanación al cambiar el agente reductor de como secreto de empresa o solo aparece vagamente
Na2S2O4a NAD (P) H, habilitado por el reemplazo del ligando de descrita en la literatura de patentes. Otra razón
hierro hemo axial (C400S) [10--]. La expansión de las podría ser el poco impacto científico de la ingeniería
capacidades catalíticas de las enzimas para permitir una nueva de enzimas en ejemplos en los que solo se realizaron
química es una tendencia destacada en este campo. alteraciones menores en las propiedades de las
Recientemente, se diseñó una escualeno esperanzano ciclasa enzimas. Sin embargo, esto no significa que la
(SHC) para actuar como un catalizador ácido general de ingeniería enzimática no sea importante para los
Brønsted en agua. La enzima evolucionada fue capaz de activar enfoques de ingeniería metabólica;12–14]. En un
diferentes grupos funcionales (alquenos, epóxidos y carbonilos) ejemplo, Liao y sus compañeros diseñaron un
para producir varios productos de ciclación no naturales.11--]. Escherichia colicepa para la producción deL
-homoalanina, que es un

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18biotecnología química

Figura 2

O
R R
R R
COOEt
·+ EtOOC
O
norte norte norte norte norte norte norte norte

Fe Fe Fe Fe
A B
norte norte norte norte norte norte norte norte

S S S S

Cis Cis Cis Cis

HO COOEt
2 + O2 + H++
NAD(P)+ NAD(P)H 2
norte

N / A2S2O4 norte2

Opinión actual en biotecnología

Comparación de la reactividad natural de la monooxigenasa P450 (a)y la promiscuidad observada de enzimas catalíticas (b). (a) En el compuesto de reacción natural I, el resto
activo, confiere transferencia de oxígeno al reactivo insaturado para producir un epóxido. El compuesto I se regenera por reducción de las especies nacientes de Fe(III),
transferencia de oxígeno y posterior transferencia de electrones. (b) El compuesto de Fe(IV) catalíticamente activo está dado por una especie carbenoide en caso de
reactividad promiscua. La transferencia de carbeno en lugar de oxígeno conduce a la formación de una especie de ciclopropilo. La especie carbenoide activa se regeneró
utilizando diazoacetato de etilo (EDA) con liberación de nitrógeno en presencia de ditionito de sodio [9].

precursor quiral para productos farmacéuticos. Como enzima clave, Como tendencia general, se puede afirmar que los enfoques de
la glutamato deshidrogenasa se desarrolló en esta vía no natural ingeniería metabólica se han utilizado casi exclusivamente para la
mediante mutagénesis de saturación del sitio.15]. La selectividad es producción de productos químicos a granel. La ingeniería
el segundo punto importante que se aborda con frecuencia [16-19]. enzimática es un método establecido en este campo, pero también
Dependiendo de la ambición, este parámetro puede modificarse en deben optimizarse otros parámetros, incluidos los niveles de
ambas direcciones. evanset al.desarrolló una policétido sintasa no expresión, el pH óptimo y las temperaturas de funcionamiento.
ribosómica a partir dePantoea aglomeranspara una menor Debido a los altos costos de investigación y desarrollo, se requiere
selectividad, lo que permitió laen vivosíntesis de varios nuevos que las cepas huésped sean altamente selectivas y productivas para
derivados de andrimid, un antibiótico de amplio espectro [20]. Nair y un producto específico.
Zhao, por el contrario, desarrollaron una xilosa reductasa a partir de
Neurospora crasapor PCR propensa a errores (epPCR) para Cascadas enzimáticas
aumentar la selectividad de la xilosa sobre la arabinosa [21,22]. Las reacciones enzimáticas en cascada se distinguen de los
enfoques de ingeniería metabólica principalmente en la fuente
de la molécula de sustrato. Mientras que para los enfoques de
Para las fermentaciones, el equilibrio redox juega un papel ingeniería metabólica se utiliza una fuente externa de carbono
importante, especialmente en condiciones anaeróbicas. Como como la glucosa, para las cascadas enzimáticas se añade una
consecuencia, la dependencia del cofactor de las enzimas molécula precursora definida. Las cascadas biocatalíticas se
también es un objetivo importante para la ingeniería de pueden realizaren vivooen vitro,siendo también factible el uso
enzimas.23–26]. Por las mismas razones, se utilizó la ingeniería de células en reposo o células liofilizadas. Dependiendo de otros
enzimática para superar los problemas de resistencia inhibitoria catalizadores utilizados en los enfoques, se puede diferenciar
y de retroalimentación.27-]. En el caso de la fermentación entre cascadas mixtas bio/químicas que involucran también
microbiana de 1,4-butanodiol Yim et al.reemplazó la subunidad quimiocatalizadores o cascadas bio/bio, que son catalizadas por
nativa delE. colipiruvato deshidrogenasa endógena con un dos o más enzimas.29–31]. Sin embargo, en comparación con
homólogo deKlebsiella neumonía,conocido por trabajar los ejemplos generales informados de cascadas enzimáticas,
también anaeróbicamente. Para reducir la sensibilidad al NADH hay más informes en la literatura sobre cascadas que usan
en condiciones limitadas de oxígeno, introdujeron además una enzimas evolucionadas que en enfoques de ingeniería
mutación de punto único D354K en la nueva subunidad E3 de la metabólica. Esto se debe principalmente al hecho de que los
piruvato deshidrogenasa y también una mutación R163L en el sistemas que involucran un sistema de regeneración de
gen de la citrato sintasa (gltA)para mejorar el flujo del ciclo de cofactores enzimáticos ya se clasifican como cascadas
krebs (figura 3) [28]. enzimáticas.32,33].

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 Vías y productos novedososOtte y Hauer 19

figura 3

O
–
– O
O
glucólisis succinato
O

CH2OH
O O
O
OH O krebs
SCoA
OH
OH
OH
O
– ciclo
glucosa piruvato acetil-CoA
O O
– –
O O – SCoA
O
O O O
α-ceto-
glutarato succinil-CoA
O
R163L – H
E. colipiruvato O

deshidrogenasa citrato succiniloO

complejo sintasa semialdehído
mi3 exhaustivo
mi1 mi3
subunidad
subunidad
subunidad
reducción
D354K
mi2
OH
subunidad HO
1,4-butanodiol

Opinión actual en biotecnología

Producción microbiana de 1,4-butanodiol. Además del ensamblaje de la vía real a partir de succinil-CoA ya-cetoglutarato, se utilizó ingeniería
enzimática para reducir la sensibilidad al NADH, que es crucial en condiciones microaeróbicas en dos pasos clave del metabolismo de la cepa. losE. coli
La subunidad E3 nativa de la piruvato deshidrogenasa se reemplazó con un homólogo deKlebsiella neumonía,que se sabe que funciona
anaeróbicamente. Para reducir la sensibilidad al NADH, se introdujo una mutación D354K en la subunidad heteróloga E3, así como una mutación
puntual R163L en la citrato sintasa.28].

La obra de Simónet al.es un ejemplo representativo de un nicotina, la síntesis deL-ácido pipecólico y una oxidación
enfoque bioquímico (Figura 4a). Partiendo de una 1,5-dicetona regioselectiva [36--].
asimétrica, pudieron acceder a los cuatro estereoisómeros de
una 2,6-piperidina disustituida. El primer paso de la reacción Los dos temas maduros para la ingeniería enzimática con
involucró la formación de una imina cíclica catalizada por unv- respecto a las cascadas bio/bio son la selectividad y la actividad.
transaminasa Mientras que el 37–40,41-]. Sehl informó un ejemplo de una cascada bio/bio. et
(S)-el enantiómero era accesiblea través deuna enzima al.Utilizando una cascada de dos enzimas, los autores pudieron
natural (Chromobacterium violaceum),la (R)-El enantiómero acceder a la norefedrina y la norpseudoefedrina (Figura 4b). En
se obtuvo mediante el uso de la transaminasa de sitagliptina un primer paso, se utilizaron dos carboligasas
diseñada previamente introducida (ArRmut11) [7]. En un enantiocomplementarias para sintetizar todos los
segundo paso, utilizaron dos métodos de reducción química diastereómeros de fenilacetilcarbinol a partir de benzaldehído y
diferentes (LiAlH4y Pd/CH2) para obtener los cuatro piruvato. Mientras que el (R)-carboligasa selectiva deE. coli
estereoisómeros a partir de los dos enantiómeros con altos mostró unee >99% bajo las condiciones de reacción
rendimientos y estereoselectividades. En el caso de la investigadas, el (S)-variante carboligasa selectiva (E469G) de
reducción con LiAlH4, la mezcla tuvo que ser extraída antes Acetobacter pasteurianusmostró uneede sólo -70%.
de la reducción [34]. Recientemente, la ingeniería enzimática se utilizó para mejorar
aún más la (S)- selectividad de esta carboligasa (ApPDC E496G) [
Köhler siguió un enfoque bioquímico diferente et al. 42]. En un segundo paso, dos enantiocomplementariasv-
Establecieron varias cascadas multienzimáticas mediante la transaminasas [(S)-selectivo:C. violaceum, (R)-selectivo:
incorporación de un organocatalizador de Ir biotinilado en un Aspergillus terreus]se utilizaron para la síntesis de los cuatro
andamio de proteína de estreptavidina. Esta hidrogenasa de diastereoisómeros (ambosv-TA que muestran un excelente
transferencia artificial (ATHase) era compatible con varias otras rendimiento y estereoselectividades) [35].
enzimas dependientes de cofactores de manera simultánea en
lugar de sucesiva. El alcance de las reacciones en cascada La selectividad de las enzimas diseñadas fue además el foco
realizadas incluye reducciones de iminas proquirales con principal en el desarrollo de las cascadas enzimáticas
desracemización posterior, la estereoinversión de presentadas en el trabajo de Spadiut.et al.ellos diseñaron

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20biotecnología química

Figura 4

LiAlH4,et3Alabama L iAlH4,et3Alabama
norte
norte
química H2
H2 química
(2S,6S)-epi-dihidro- (2R,6R)-epi-dihidro-
pinidina (S)-ω-TA O O (R)-ω-TA pinidina
norte biografía biografía norte

(2S)-yo mismo- 2,6-dicetona (2R)-yo mismo-

química
norte química A norte

H2 H2
H2,PD/C H2,-PD/C
(2S,6R)-dihidropinidina (2R,6S)-dihidropinidina

OH OH
CV-(S)EJÉRCITO DE RESERVA B A-(R)EJÉRCITO DE RESERVA

biografía
2
NUEVA HAMPSHIRE biografía NUEVA HAMPSHIRE2

(1R,2S)-norefedrina O O OH (1S,2R)-norefedrina
OH ApPDC
AHAS-I OH
E469G
+
biografía O O
O biografía

OH benzaldehído+- (S)-fenilacetilcarbinol OH
(R)-fenilacetilcarbinol
piruvato
biografía
biografía
NUEVA HAMPSHIRE2 CV-(S)EJÉRCITO DE RESERVA NUEVA HAMPSHIRE2

A-(R)EJÉRCITO DE RESERVA

(1R,2R)-norpseudo- (1S,2S)-norpseudo-
efedrina efedrina
Opinión actual en biotecnología

Las cascadas enzimáticas abren el acceso a diferentes estereoisómeros. (a)Cascada química/bio: Síntesis de alcaloides quimioenzimáticos de los cuatro
estereoisómeros de dihidropinidina yepi-dihidropinidina. En un primer paso catalizado por enzimas, se forma una 2-ceto-6-amina, que luego forma
espontáneamente la especie de imina de seis miembros. Un (S)-selectivov-AT decromobacterium violaceumy un ingeniero (R)-selectivov-AT de Arthrobactersp.
mostró excelentes conversiones y regioselectividades. Las reducciones se realizaron en un solo recipiente con Pd/C y H2para producir las dihidropinidinas
correspondientes o después de la extracción con LiAlH4y Et3Al en THF/hexano el correspondienteepi-dihidropinidinas [34]. (b)Cascada bio/bio: Síntesis enzimática
de los cuatro estereoisómeros de norefedrina y norpseudoefedrina. (R)-Se accedió al fenilacetilcarbinol con un Escherichia colicarboligasa AHAS-I, con la (S)-
enantiómero que se obtiene utilizando una carboligasa diseñada a partir deAcetobacter pasteurianus ApPDC (E469G). Para evitar la formación de subproductos,
la cascada se realizó de manera sucesiva en un recipiente con dos diferentes altamente selectivos. v-TA [(S)-selectivo:Chromobacterium violaceum, (R)-selectivo:
Aspergillus terreus] [35].

una endo-xiloglucanasa para la producción de Especialmente en el sector de los polímeros, algunos estudios
fucogalactoxiloglucanos de diseño [43]. en cascada de prueba de concepto informados recientemente
brindan acceso alternativo a compuestos interesantes, aunque
El trabajo adicional en el campo evolucionó en torno al tema de la la ingeniería enzimática no siempre está involucrada en este
inhibición y la combinación de la catálisis enzimática con la química punto. Estos incluyen por ejemplov-aminoácidos grasos,v-ácidos
convencional [40,44–47]. A diferencia de los enfoques de ingeniería grasos hidroxi y ácidos dicarboxílicos, todos monómeros de
metabólica, las cascadas enzimáticas demuestran una gama mucho base biológica de gran interés industrial [48–52]. Para la mejora
más amplia de sustratos y productos. La quiralidad se vuelve más y el ajuste de estas estrategias para que sean competitivas, la
importante y los métodos de diseño se vuelven más racionales. En ingeniería enzimática jugará un papel importante.
contraste con los catalizadores altamente evolucionados, las
selectividades más bajas dan como resultado el hecho de que se Conclusiones
pueden abordar clases de sustancias completas y que los costos de La ingeniería enzimática tiene un papel fundamental en las tres áreas
desarrollo son mucho más bajos que para los enfoques de principales de la biotecnología química: biocatálisis de un solo paso,
ingeniería metabólica. ingeniería metabólica y cascadas enzimáticas. Representa no solo una
herramienta para la optimización, sino que también es clave para
La mayoría de las cascadas reportadas son solo estudios desarrollar estrategias exitosas. Sin embargo, la ingeniería enzimática no
conceptuales y, por lo tanto, la aplicación industrial es escasa. está tan presente en la literatura como en la actualidad.

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 Vías y productos novedososOtte y Hauer 21

intermedio bicíclico [3.1.0] prolina basado en la desimetrización

utilizado. Esto es especialmente cierto en el caso de la ingeniería
catalizada por amina oxidasa.J Am Chem Soc2012, 134:6467-6472.
metabólica, ya que no se publican todos los pasos de optimización.

7. Savile CK, Janey JM, Mundorff EC, Moore JC, Tam S, Jarvis WR,
El mayor impacto de la ingeniería enzimática se puede Colbeck JC, Krebber A, Fleitz FJ, Brands Jet al.:Síntesis asimétrica
encontrar en ejemplos en los que sirve como tecnología biocatalítica de aminas quirales a partir de cetonas aplicadas a la
fabricación de sitagliptina.Ciencias (80–)2010,329:305-309.
habilitadora. En algunas de las publicaciones revisadas, las
actividades iniciales eran muy bajas o indetectables con las 8. Khersonsky O, Tawfik DS:Promiscuidad enzimática: una
perspectiva mecanicista y evolutiva.Annu Rev Bioquímica2010, 79:
enzimas naturales de tipo salvaje. La ingeniería enzimática 471-505.
ayudó a desarrollar vías novedosas y a abrir el acceso a una
9. Coelho PS, Brustad EM, Kannan A, Arnold FH:Ciclopropanación de
variedad de productos diferentes. olefinas mediante transferencia de carbeno catalizada por enzimas
de citocromo P450 diseñadas por ingeniería.Ciencias2013, 339:
307-310.
La ingeniería enzimática tiene un gran impacto en la biocatálisis
y seguirá haciéndolo en el futuro previsible, ya que facilita la 10Coelho PS, Wang ZJ, Ener ME, Baril SA, Kannan A, Arnold FH,
-- Brustad EM:Un P450 sustituido con serina cataliza la transferencia de carbeno
catálisis de nuevas reacciones no fisiológicas, el diseño de altamente eficiente a olefinas in vivo.Nat Chem Biol2013, 9:485-487.
nuevas vías, la síntesis de nuevos productos y la optimización de
Nuevo ejemplo de la promiscuidad catalítica de las monooxigenasas P450. Una
los procesos necesarios. Además, métodos adicionales como el variante de enzima diseñada catalizó una ciclopropanación altamente selectiva de
de novoEl diseño de enzimas y el aprovechamiento de la estireno a través de una supuesta transferencia de carbeno.

promiscuidad catalítica ayudarán a encontrar una de las 11. Hammer SC, Marjanovic A, Dominicus JM, Nestl BM, Hauer B:
mayores debilidades de los enfoques de evolución dirigida: la -- Las escualeno esperanzano ciclasas son protonasas para la catálisis
estereoselectiva del ácido de Brønsted.Nat Chem Biol2014http://dx.doi.org/
falta de actividad inicial. Aunque anteriormente se informóde 10.1038/NCHEMBIO.1719. (en prensa).
novoLas enzimas solo exhibieron propiedades catalíticas La ingeniería del sitio activo de una escualeno esperanzano ciclasa (SHC) condujo al
desarrollo de una plataforma para la catálisis enzimática general del ácido de
débiles, Hilvert y sus colaboradores demostraron que sus Brønsted. SHC se desacoplaba de la química de policiclación y se utilizó para la
actividades podrían aumentar considerablemente a través de la activación de diferentes grupos funcionales.
ingeniería enzimática.53-]. En nuestra opinión, el impacto dede 12Leonard E, Ajikumar PK, Thayer K, Xiao WH, Mo JD, Tidor B,
novoel diseño y la ingeniería enzimática, especialmente en Stephanopoulos G, Prather KLJ:Combinación de ingeniería
metabólica y proteica de una ruta biosintética de terpenoides para
combinación, contribuirán al desarrollo de reacciones el control de sobreproducción y selectividad.Proc Natl Acad Sci EE.
novedosas y, con ello, abrirán nuevas estrategias UU. 2010,107:13654-13659.
quimioenzimáticas y biosintéticas. 13Yoshikuni Y, Dietrich JA, Nowroozi FF, Babbitt PC, Keasling JD:
Rediseño de enzimas basado en la evolución adaptativa para una
función óptima en rutas metabólicas sintéticas.bioquímica2008,
Agradecimientos 15:607-618.
Este proyecto ha recibido financiación del Séptimo Programa Marco de
investigación, desarrollo tecnológico y demostración de la Unión Europea, 14Machado HB, Dekishima Y, Luo H, Lan EI, Liao JC:Una plataforma de selección
en virtud del acuerdo de subvención núm. 289646, 266025 y 613849. Un para la elongación de la cadena de carbono utilizando la ruta dependiente de
agradecimiento especial a Bettina M. Nestl, Stephan C. Hammer y Martin J. CoA para producir alcoholes superiores lineales.metab ing2012,14:504-511.
Weissenborn por la revisión crítica y los debates útiles.
15.Zhang K, Li H, Cho KM, Liao JC:Expansión del metabolismo para la
biosíntesis total del aminoácido no naturalL-homoalanina. Proc
Referencias y lecturas recomendadas Natl Acad Sci EE. UU.2010,107:6234-6239.
Los artículos de particular interés, publicados dentro del período de revisión, se
han destacado como: dieciséis.Jung YK, Kim TY, Park SJ, Lee SY:ingeniería metabólica de
Escherichia colipara la producción de ácido poliláctico y sus
- de especial interés copolímeros.Biotecnología Bioeng2010,105:161-171.
- - de interés pendiente
17Yang TH, Kim TW, Kang HO, Lee S, Lee EJ, Lim S, Oh SO, Song A, Park
1. Nestl BM, Hammer SC, Nebel BA, Hauer B:Nueva generación de SJ, Lee SY:Biosíntesis de ácido poliláctico y sus copolímeros
biocatalizadores para síntesis orgánica.Angew Chem Int. Ed.2014, 53: utilizando propionato CoA transferasa evolucionada y PHA sintasa.
3070-3095. Biotecnología Bioeng2010,105:150-160.

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mediada por DIP-Cl de un intermedio clave de Montelukast.
Org Process Res Dev2010,14:193-198. 22Nair NU, Zhao H:Reducción selectiva de xilosa a xilitol a partir de una
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Se importó una vía compuesta sintética de tres pasos a la levadura Saccharomyces Una enzima quimérica dependiente de difosfato de tiamina hecha
cerevisiae.Este es el primer ejemplo de producción de ácido mucónico enS. cerevisiae a medida para la síntesis asimétrica directa de (S)-benzoínas.
y muestra además el título más alto para una molécula basada en compuestos Angew Chem Int. Ed.2014,53:9376-9379.
aromáticos en condiciones de matraz agitado.
43.Spadiut O, Ibatullin FM, Peart J, Gullfot F, Martinez-Fleites C, Ruda M,
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multidisciplinario hacia la síntesis biocatalítica rápida y preparativa 418-421.
de amino alcoholes quirales: una transcetolasa concisa-/v-Síntesis Se desarrolló una eliminasa de Kemp diseñada computacionalmente para alcanzar la
mediada por transaminasas de (2S,3S)-2-aminopentano-1,3-diol. eficiencia excepcional de las enzimas naturales. El trabajo muestra que se pueden
Org Process Res Dev2010, 14:99-107. utilizar estrategias como la complementariedad de formas y la colocación precisa de
grupos catalíticos para diseñar un catalizador excelente.

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