Evaluacion de La Actividad Coagulante de Brownea Arizabentham (Caesalpiniaceae

Márquez et al. Actual Biol 27 (Supl.
1): 101-104, 2005
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD COAGULANTE DE BROWNEA ARIZA

BENTHAM (CAESALPINIACEAE)
EVALUATION OF THE CLOTTING ACTIVITY FROM BROWNEA ARIZA BENTHAM (CAESALPINIACEAE)
Rita Márquez-Vizcaíno1, Catalino de la Rosa2, Emilio J. Arrieta-García1, Juan Villalba-Uparela1
Resumen
Extractos de Brownea ariza Bentham (Caesalpiniaceae) fueron activos para promover la coagulación sanguí-
nea de una manera dependiente de la dosis; el mecanismo de acción podría involucrar los procesos mediados
por el ión calcio.
Palabras clave: Brownea ariza, extractos, coagulación, tromboplastina.
Abstract
Extracts of Brownea ariza Bentham (Caesalpiniaceae) were active to promove blood coagulation in a doses
dependent manner; the mechanism of action could involve processes mediated by calcium ion.
Key words: Brownea ariza, extracts, coagulation, tromboplastine.
INTRODUCCIÓN dinámico entre todos los procesos bioquímicos que

mantienen la fluidez de la sangre y la integridad
Brownea ariza Bentham, incluida en las leguminales vascular (Casas et al., 1994; Forero y Forero, 1998).
y en la familia Caesalpiniaceae, es un árbol de copa Cualquier alteración en dicho proceso es causa de
redondeada de alrededor de 9 m de alto, cuyas hojas coagulopatías; ejemplo de ello la coagulación
son alternas paripinnadas e inflorescencias en raci- intravascular diseminada (CID), e incluso, podrían
mos semiesféricos que pueden ser axilares o termi- desatarse eventos de señalización celular pro-
nales; la legumbre que presenta es comprimida de inflamatorios mediados por receptores en la super-
un largo de 14 a 18 cm, aproximadamente Este ár- ficie plaquetaria activados por proteasas (PAR) o
bol maderable, posee propiedades medicinales ta- por la liberación de citocinas (IL-6 e IL-8). De igual
les como laxantes y hemostáticas, siendo popular- forma, la coagulación sanguínea (que es solo un paso
mente utilizado en casos de hemorragias internas y del proceso hemostático) se inicia una vez es lesio-
heridas sangrantes (Gupta, 1995; García, 1992). nado cualquier tejido, impidiéndose la salida de san-
gre gracias al trombo formado por medio del
De otro lado la hemostasia es entendida como el fibrinógeno activado o fibrina. La generación de esta
conjunto de mecanismos que permiten un equilibrio última puede darse en tres etapas: la primera de ellas,
1
Grupo de Investigación Fitoquímica, Departamento de Biología. Facultad de Educación y Ciencias. Universidad de Sucre.
Sincelejo (Sucre), Colombia. Correo electrónico: <[email protected]>.
2
Grupo de Investigación Fitoquímica, Departamento de Química, Facultad de Ciencias Básicas. Universidad del Atlántico.
Barranquilla (Atlantico), Colombia. Correo electrónico: <[email protected]>.
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generando protrombinasa, la cual es el complejo gre extraída de 3 pacientes sanos, no fumadores y

activador de la protrombina gracias a activaciones sin dependencia de drogas. El anticoagulante usa-
sucesivas de varios factores de la coagulación, ya do fue citrato de sodio al 3,8%. La sangre citratada,
sea por la vía intrínseca o la vía extrínseca; la se- se centrifugó a 2.500 rpm durante 10 min, recupe-
gunda, generando trombina y finalmente, la forma- rándose el Plasma Pobre en Plaquetas.
ción de la fibrina (Riewald y Ruf, 2001).
Se preparó el extracto y las fracciones a una con-
Debido a la escasa información registrada acerca centración de 500 mg/ml usando como vehículo
de B. ariza Bentham, se realizó esta investigación solución salina, para determinar cual extracto y frac-
de una manera preliminar, analizando la posible acti- ción presentaba reacción de coagulación sobre plas-
vidad coagulante de los extractos en plasma pobre ma pobre en plaquetas.
en plaquetas (PPP) por medio de la técnica cono-
cida como tiempo de tromboplastina parcial acti- Conociendo los extractos con los que se presentó
vada (TTPA) (tiempo de referencia 33- 48 segun- enturbiamiento y/o solidificación en el plasma, se
dos), la cual evalúa el proceso de coagulación por prepararon concentración de 500.0, 250.0, 50.0,
medio de la vía intrínseca a partir del tiempo regis- 10.0 y 1.0 mg/ml.
trado en la formación del coágulo de fibrina in vitro.
Para la técnica tiempo de tromboplastina parcial
activada se emplearon como controles positivos el
MATERIALES Y MÉTODOS reactivo de tromboplastina parcial activada y el clo-
ruro de calcio (CaCl2) 0,025 M y como control
Material vegetal. Se trabajó con 835 g de corte- negativo solución salina.
zas en buen estado (secas y trituradas) de B. ariza
Bentham, las cuales fueron sometidas a extracción Análisis Estadístico. El análisis estadístico se basó
mediante maceración durante 4 días, obteniéndose en un análisis de correlación (incluyendo la estadís-
alrededor de 163,5 g (rendimiento del 19,58%) del tica de prueba t) y de regresión lineal y, un análisis
extracto total en etanol. de varianza (ANOVA) para tamaños de muestras
iguales, con el fin de establecer la correlación exis-
Del extracto total 150 g fueron fraccionados me- tente entre las dos variables sometidas a experimen-
diante columna flash utilizando como fase estacio- tación y la capacidad de darse la reacción de for-
naria sílica 60GF254 y como fase móvil (éter de pe- mación del coágulo de fibrina de manera similar en
tróleo, cloroformo, acetato de etilo, etanol y meta- muestras de plasma obtenida de sangre extraída de
nol) obteniéndose cinco fracciones codificadas co- tres pacientes.
mo F1, F2, F3, F4, y F5 las cuales se sometieron a
concentración a presión reducida en rota evaporador
y en una campana de vació para eliminar totalmente RESULTADOS Y DISCUSIÓN
el solvente orgánico.
Al reemplazar el reactivo de TPA, no se eviden-
Pruebas de coagulación. Se llevó a cabo la técni- ció cualquiera de las dos características a consi-
ca conocida como tiempo de tromboplastina par- derarse como positivas en la reacción de coagu-
cial activada (TTPA) usando el kit distribuido por lación in vitro (enturbiamiento y/o solidificación),
Wienner Lab. (Wiener Laboratorios S. A.). lo cual resulta lógico si se tiene en cuenta que
dicha reacción no tendrá lugar mientras no esté
Obtención de Plasma Pobre en Plaquetas. Las participando la tromboplastina parcial en presen-
pruebas se realizaron en plasma obtenido de san- cia de calcio iónico.
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Reemplazado el CaCl2 por la concentraciones de del coágulo de fibrina en las muestras de plasma.
500.0, 250.0, 50.0, 10.0 y .01 mg/ml del extracto Los resultados de estas pruebas se muestran en la
total, F4 y F5 se evidenció reacción de formación tabla 1.
Tabla 1. Resultado de la técnica TTPA reemplazando el CaCl2, indicándose los tiempos (promedios) en segundos de cada
paciente usando las concentraciones en mg/ml del extracto total, fracción cuatro y fracción cinco
Muestras Concentración Tiempo muestra Tiempo muestra Tiempo muestra

mg/ml de sangre 1 de sangre 2 de sangre 3
Extracto Etanol 500 16,04 16,07 15,78
250 30,93 30,81 32,24
50 31,78 29,75 29,24
10 31,49 29,56 29,83
1 32,12 30,02 29,48
Fracción 4 500 32,20 37,31 34,61
250 41,11 43,97 40,18
50 44,38 49,44 44,14
10 50,4 55,92 53,58
1 56,9 59,84 59,04
Fracción 5 500 82,5 61,5 50,16
250 64 46,8 50,5
50 40,69 36,42 38,86
10 36,47 31,83 33,23
1 33,85 32,40 30,59
La prueba se realizó por duplicado, cuya diferencia el extracto total a una concentración de 500mg/ml
no sobrepasaba el 5%, siendo los datos aceptados muestra solidificación en el plasma pobre en
por la mínima variación presentada entre ellos. El plaquetas a un tiempo de 16,04 segundos; en la frac-
análisis de correlación lineal entre las dos variables ción cuatro se dio la reacción a los 32,20 segundos
sometidas a experimentación, demostraron una co- estando dentro de los rangos registrados por TPA,
rrelación lineal cercana a 1 y -1, siendo significati- siendo el comportamiento de éstos en forma inver-
vas las correlaciones, empleando una prueba de hi- sa proporcional a la concentración, la fracción cin-
pótesis formal basada en la estadística de prueba t co mostraron un comportamiento diferente, ya que
con valores de a específicos para el extracto y frac- la reacción se presentó en forma directa propor-
ciones (0,20 para el extracto total, 0,10 para frac- cional a la concentración. Esto del punto de vista
ción cuatro y 0,05 para fracción cinco). farmacológico es interesante, ya que se presenta la
Rechazándose la hipótesis nula acerca de no haber formación del coágulo de fibrina utilizando la con-
correlación lineal significativa, ya que los resultados centración mínima 1 mg/ml en un tiempo de 33,85
corroboran la afirmación de una correlación entre segundos.
el tiempo y la concentración requeridos para la for-
mación del coágulo de fibrina in vitro. En el análisis de varianza (ANOVA) para tama-
ños de muestras iguales comparando los valores
Al comparar el tiempo de 33-48 segundos regis- medios de las tres muestras de sangre, el nivel de
trado por la TPA control positivo, se observó que a utilizado fue 0,05, demostrándose que las tres
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muestras provenían de poblaciones cuyas medias hemostático que necesariamente dependen de una
eran iguales, puesto que el valor estadístico de concentración adecuada de calcio.
prueba fue inferior en todos los casos al nivel de
a ensayado. Los resultados obtenidos de la técnica aplicada
muestran que las concentraciones ensayadas del
El calcio es fundamental para que ocurra la activa- extracto total y fracciones cuatro y cinco de corte-
ción de los factores implicados en la activación de za de B. ariza Bentham, potencian la activación de
la protrombina en el proceso de formación de la los factores implicados en el proceso de la coagu-
fibrina (Casas et al., 1994; Forero y Forero, 1998). lación sanguínea mediados por el calcio.
Al reemplazar el CaCl2 por las concentraciones
ensayadas, los resultados obtenidos muestran que
los metabolitos secundarios presentes en los extrac- AGRADECIMIENTOS
tos potencian el proceso de la coagulación median-
te la vía intrínseca cuyo efecto en el plasma pobre A Nelly Pacheco Mercado y Graciela Herrera por
en plaquetas es notorio; sin embargo, in vivo se lle- la valiosa asesorías durante la realización de la prue-
van a cabo diversas reacciones dentro del proceso ba biológica.
REFERENCIAS
Casas A. 1994. Laboratorio Clínico Hematología. Mc Gupta M. 1995. 270 plantas medicinales iberoameri-
Graw Hill-Interamericana. Madrid, España. canas. Editores Presencia Ltda. Bogotá, Colom-
Forero Y, Forero A. 1998. Manual de procedimientos en bia.
coagulación. Publicaciones INS. Bogotá, Colombia. Riewald M, Ruf W. 2001. Mechanistic coupling of
García H. 1992. Flora medicinal de Colombia. Segunda protease signalling and initiation of coagulation
edición. Tercer Mundo Editores. Bogotá, Colombia. by tissue factor. PNAS. 98:7742-7747.
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Palabras clave: Brownea ariza, extractos, coagulación, tromboplastina.

Key words: Brownea ariza, extracts, coagulation, tromboplastine.

INTRODUCCIÓN dinámico entre todos los procesos bioquímicos que

generando protrombinasa, la cual es el complejo gre extraída de 3 pacientes sanos, no fumadores y

Muestras Concentración Tiempo muestra Tiempo muestra Tiempo muestra

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