Lab 04 - Biología - Microbiología

UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN, TACNA
Facultad de Ingeniería
Escuela Profesional de Ingeniería Química
PRACTICA DE LABORATORIO
Título: Reconocimiento de biomoléculas orgánicas: proteínas y ácidos

nucleicos
Asignatura: Biología - Microbiología
Integrantes: Claudia Emily Barcés Fernández
Anais Lucero Zambrano Portilla
Nº de Matrícula: 2019 – 120002
2019 – 120016
Tacna – Perú
2021
LABORATORIO DE BIOLOGÍA - MICROBIOLOGÍA
“Nº 04 – RECONOCIMIENTO DE BIOMOLÉCULAS ORGÁNICAS: PROTEÍNAS Y

ÁCIDOS NUCLEICOS
I. INTRODUCCIÓN
En esta práctica se llevarán a cabo una serie de pruebas, cada uno con sus
instrumentos correspondientes, a través de ellas haremos reconocimiento de las
proteínas y ácidos nucleicos. También se observará el efecto de la temperatura, pH y
alcohol etílico Por otro lado con la reacción Xantoproteica se verificará el color de
algunos aminoácidos por su núcleo aromático.
Así mismo la reacción de Biuret y la extracción de ADN, nos ayudarán en esta

práctica, las reacciones finales de cada uno hará más sencillo el reconocimiento.
II. OBJETIVOS
● Identificar a las proteínas a través de sus propiedades físico-químicas.

● Mediante pruebas cualitativas reconocer la presencia de proteínas en
diferentes muestras biológicas.
● Aislar ADN de una muestra vegetal.
III. FUNDAMENTO TEÓRICO
Burriel V.(2011), indicó que los Ácidos Nucleicos son las biomoléculas portadoras
de la información genética. Son biopolímeros, de elevado peso molecular, formados por
otras subunidades estructurales o monómeros, denominados nucleótidos. Desde el
punto de vista químico, los ácidos nucleicos son macromoléculas formadas por
polímeros lineales de nucleótidos, unidos por enlaces éster de fosfato, sin periodicidad
aparente. De acuerdo a la composición química, los ácidos nucleicos se clasifican en
Ácidos Desoxirribonucleicos (ADN) que se encuentran residiendo en el núcleo celular y
algunos organelos, y en Ácidos Ribonucleicos (ARN) que actúan en el citoplasma. Los
ácidos nucleicos están formados por largas cadenas de nucleótidos, enlazados entre sí
por el grupo fosfato. El grado de polimerización puede llegar a ser altísimo, siendo las
moléculas más grandes que se conocen, con moléculas constituidas por centenares de
millones de nucleótidos en una sola estructura covalente.
H. Robert Horton(2006), señaló que en las proteínas pueden reconocerse
varios niveles de organización estructural. El primero de ellos es la estructura primaria,
que consiste en arreglo aminoacídico en la molécula. Pauling y Corey basados en
estudios de rayos X, sugieren que la cadena peptídica puede existir en la forma de un
resorte o hélice. Dichos investigadores consideraron un buen número de formas
helicoidales, pero encontraron que sólo la forma alfa-hélice llena los requisitos de
máxima estabilidad. La otra forma secundaria se conoce como hoja plegada Beta, en
la cual los puentes de hidrógeno se encuentran entre dos cadenas peptídicas
paralelas cuyos átomos de N están orientados en la misma dirección o antiparalelos,
donde solo las cadenas alternas están orientadas en la misma posición. La estructura
terciaria es la disposición en el espacio de las hélices. O en otras palabras la forma
tridimensional de la molécula de la proteína. Muchas de las moléculas de las proteínas
se comportan como si fueran bastante compactas, y por lo tanto se conocen como
proteínas globulares. Otras proteínas son más rígidas y forman hilos largos y se
conocen como proteínas fibrosas. La estructura terciaria se mantiene por los enlaces
que se muestran en la siguiente figura 1:
Figura 1, Estructura terciaria

Reacción de ninhidrina.
La ninhidrina, un agente oxidante poderoso, reacciona con todos los alfa-

aminoácidos un pH entre 4 y 8 para dar un compuesto de color purpura.
Reacción xantoproteica. Los aminoácidos que contienen un núcleo aromático
forman derivados forman derivados de color amarillo cuando se calientan con HNO3
concentrado. Las sales de estos derivados son de color naranja.
Reacción de Millón. Los compuestos que contienen el radical hidroxibenceno
reaccionan con el reactivo de Millón formado compuestos rojos. Los únicos
aminoácidos fenólicos son la tirosina y sus derivados y solamente ellos dan una
reacción positiva.
Prueba del nitroprusiato: Los grupos tioles reaccionan con nitroprusiato de
sodio en presencia de amoniaco para dar un color rojo.
Prueba de Biuret para enlaces peptídicos: El sulfato alcalino de cobre
reacciona con compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos produciendo un
complejo de coloración violeta. La intensidad del color obtenido es una medida de la
cantidad de enlaces pépticos presentes en la proteína. La reacción no es
absolutamente específica para enlaces peptídicos, ya que cualquier compuesto que
contenga dos grupos carbonilos unidos por un átomo de N o de C da un resultado
positivo.
IV. MATERIALES
4.1 MATERIALES
Materiales biológicos: Ovoalbúmina.
Muestras de vidrio: Tubos de ensayo, Pipetas, vaso precipitado, matraz,

probeta.
Reactivos: Ácido Clorhídrico, Hidróxido de sodio 20%, Hidróxido de sodio

40%, Sulfato de cobre 2%, Ácido nítrico, Alcohol etílico, Alcohol 96%,
solución tampón de lisis (250 mL de agua, 2 cucharadas de sal, 6
cucharadas de bicarbonato de sodio y jabón líquido).
Equipos y otros: Gradilla, Guantes quirúrgicos, Baño María.
V. PROCEDIMIENTO
5.1 Efecto de la temperatura, pH y alcohol etílico.
- En diferentes tubos de ensayo colocar una determinada cantidad

de ovoalbúmina y mezclarlos con diferentes agentes
desnaturalizantes.
- El primer tubo de ensayo se lleva a baño María a temperatura 70º
C durante 5 minutos.
- Al segundo tubo, adicionar 1 mL de ácido clorhídrico HCl. Agitar
y esperar un minuto.
- Al tercer tubo colocar 1 mL de alcohol etílico. Mezclar y observar
un precipitado.
5.2 Reacción Xantoproteica
- Separa la yema de la clara de huevo para obtener la

ovoalbúmina.
- Seguidamente en un tubo de ensayo, colocar 1 mL de la
ovoalbúmina, luego adicionar 0,5 mL de ácido nítrico
concentrado.
- Luego llevar a baño María a 70ºC por 2 minutos.
- Observar y anotar el resultado (se deberá observar un cambio de
coloración: amarillo).
- Después, se procederá a enfriar el tubo de ensayo.
- Posteriormente, cuando esté frío el tubo de ensayo, se procederá
a agregar gota a gota Hidróxido de Sodio al 40%.
- Observar la formación de un anillo naranja.
5.3 Reacción de Biuret
- Tomamos un tubo de ensayo en el agregamos 2 mL de una

muestra biológica (albúmina), 5 gotas de sulfato de cobre 2%
(Biuret) y 1 mL de Hidróxido de sodio 20%
- Observamos la reacción y anotamos.
5.4 Extracción de ADN
- Cortamos un tomate en pedazos, agregamos agua y lo licuamos,

luego lo filtramos.
- Una vez obtenido nuestro filtrado de tomate, agregamos 10 mL
del mismo filtrado a un matraz, seguidamente adicionamos 20 mL
del tampón de lisis y batimos aproximadamente unos 2 minutos.
- La solución obtenida la colocamos en un tubo de ensayo y
paulatinamente agregamos 10 mL de alcohol por las paredes del
tubo.
- Esperamos hasta que las fibras del ADN se separen.
Vl. RESULTADOS
- Efecto de la temperatura, pH y alcohol etílico.

REACTIVOS EVIDENCIA
Baño María a
70 °C (5 min.)
Ácido
Agente Clorhídrico
Ovoalbúmina Desnaturalizante (1 mL)
Alcohol Etílico
(1 mL)
Teóricamente, la desnaturalización de una proteína se refiere a la ruptura de los

enlaces que mantenían sus estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria,
conservando solamente la primaria.
Por otro lado, cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las
moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas, y se
desnaturalizan.
El resultado final:
En el tubo 1: Al elevar la temperatura en el Baño María, se observó un cambio evidente

en las propiedades de las proteínas.
En el tubo 2: Se presentó un cambio de color y la formación de un precipitado por lo

tanto un efecto positivo por parte del pH sobre las estructuras de las proteínas.
En el tubo 3: Se aprecia un cambio de color y de la coonsistencia de la mezcla.
- Reacción Xantoproteica
REACTIVOS EVIDENCIA
Hidróxido
Ovoalbúmina Ácido Baño María de Sodio
(1 mL) Nítrico a 70 °C (2 al 40%
(0,5 mL) min.) (gota a
gota)
Teóricamente, la reacción xantoproteica: Los aminoácidos que contienen un núcleo

aromático forman derivados forman derivados de color amarillo cuando se calientan
con HNO3 concentrado. Las sales de estos derivados son de color naranja.
El resultado final, se observó un anillo color naranja, que indica que la prueba es
positiva en la reacción xantoproteica.
- Reacción de Biuret
REACTIVOS EVIDENCIA
Hidróxido
Albúmina Biuret de sodio
(2 mL) (5 gotas) (1 mL)
Teóricamente, la prueba de Biuret para enlaces peptídicos: El sulfato alcalino de

cobre reacciona con compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos
produciendo un complejo de coloración violeta. La intensidad del color obtenido es
una medida de la cantidad de enlaces pépticos presentes en la proteína. La reacción
no es absolutamente específica para enlaces peptídicos, ya que cualquier compuesto
que contenga dos grupos carbonilos unidos por un átomo de N o de C da un resultado
positivo.
El resultado final fue una solución violeta, indicando así la presencia de

proteínas.
- Extracción de ADN
REACTIVOS EVIDENCIA
Filtrado Tampón
de de Lisis Alcohol
Tomate (20 mL) (10 mL)
(10 mL
Teóricamente, la extracción consiste en el aislamiento y purificación de

moléculas de ADN y se basa en las características fisicoquímicas de la
molécula. El ADN está constituido por dos cadenas de nucleótidos unidas entre
sí formando una doble hélice.
El resultado final, se observó el ADN en la parte superior de la mezcla obtenida,

por lo tanto el agua fue un solvente, la sal neutraliza la acidez del grupo fosfato,
la cual está presente en la molécula de ADN, el tampón de lisis (parte inferior
del tubo) rompe los lípidos o grasas y por último el alcohol (entre el ADN y el
tampón de lisis en el tubo) hizo que la fibra del ADN salga.
VII. CONCLUSIONES
● Aislar ADN de una muestra vegetal.

● Se logró identificar con facilidad a las proteínas por sus propiedades
físico-químicas, ya que estas dependen casi por completo de los grupos
funcionales contenidos en las cadenas laterales de los aminoácidos
expuestos en su superficie.
● Se reconoció a las proteínas mediante la reacción de Biuret, el color
violeta indicó su presencia en la muestra biológica (albúmina).
● La separación o aislamiento del ADN de una muestra vegetal, en este
caso el filtrado de tomate, el agua fue un solvente, la sal neutraliza la
acidez del grupo fosfato, la cual está presente en la molécula de ADN,
el tampón de lisis rompe los lípidos o grasas y por último el alcohol hizo
que la fibra del ADN salga.
VIII. CUESTIONARIO
1. Explicar las características de los aminoácidos.
Los aminoácidos son incoloros, cristalizables, su punto de fusión pasa los

200 °C, solubles en agua esto debido a que sus grupos R contienen grupos
funcionales polares, neutros que pueden establecer enlaces de hidrógeno con el
agua. , con actividad óptica y con un comportamiento anfótero.
La actividad óptica se debe a la capacidad para desviar de la luz polarizada

que atraviesa una disolución de aminoácidos.
El comportamiento anfótero en una disolución acuosa, los aminoácidos tienen

la capacidad de ionizarse esto dependiendo de su pH.
2. ¿Qué se entiende por desnaturalización y qué agentes desnaturalizantes se

pueden utilizar?
Desnaturalización de proteínas es la pérdida de las estructuras de orden

superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), sólo queda la cadena
polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura
tridimensional fija.
Los agentes desnaturalizantes que se pueden usar son:
A. Físicos: Calor, radiaciones.
A. Químicos: Detergentes, disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica.

3. ¿Cuál es la localización del ADN y ARN?
El ADN mayormente se ubica en el núcleo celular o ADN nuclear, también se

pueden encontrar pequeñas cantidades de ADN en las mitocondrias (ADN
mitocondrial).
El ARN se localiza en el núcleo de la célula eucariota, en el citoplasma y en

orgánulos como mitocondrias, cloroplastos y ribosomas.
4. Explicar las funciones de los ácidos nucleicos en los seres vivos, mediante un
cuadro sinóptico.
VIII. BIBLIOGRAFÍA
● Burriel V.(2011), “Estructura y propiedades de los ácidos nucleicos”

● H. Robert Horton, J. David Rawn, K. Gray Scrimgeour, Laurence A. Morán,
Marc D. Perry.”Principles of Biochemistry”. 4 ed. Pearson Prentice Hall,
2006.p.107-110

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Título: Reconocimiento de biomoléculas orgánicas: proteínas y ácidos

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Nº de Matrícula: 2019 – 120002

“Nº 04 – RECONOCIMIENTO DE BIOMOLÉCULAS ORGÁNICAS: PROTEÍNAS Y

Así mismo la reacción de Biuret y la extracción de ADN, nos ayudarán en esta

● Identificar a las proteínas a través de sus propiedades físico-químicas.

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

Figura 1, Estructura terciaria

La ninhidrina, un agente oxidante poderoso, reacciona con todos los alfa-

Materiales biológicos: Ovoalbúmina.

Muestras de vidrio: Tubos de ensayo, Pipetas, vaso precipitado, matraz,

Reactivos: Ácido Clorhídrico, Hidróxido de sodio 20%, Hidróxido de sodio

Equipos y otros: Gradilla, Guantes quirúrgicos, Baño María.

5.1 Efecto de la temperatura, pH y alcohol etílico.

- En diferentes tubos de ensayo colocar una determinada cantidad

5.2 Reacción Xantoproteica

- Separa la yema de la clara de huevo para obtener la

5.3 Reacción de Biuret

- Tomamos un tubo de ensayo en el agregamos 2 mL de una

5.4 Extracción de ADN

- Cortamos un tomate en pedazos, agregamos agua y lo licuamos,

- Efecto de la temperatura, pH y alcohol etílico.

Teóricamente, la desnaturalización de una proteína se refiere a la ruptura de los

En el tubo 1: Al elevar la temperatura en el Baño María, se observó un cambio evidente

En el tubo 2: Se presentó un cambio de color y la formación de un precipitado por lo

En el tubo 3: Se aprecia un cambio de color y de la coonsistencia de la mezcla.

Teóricamente, la reacción xantoproteica: Los aminoácidos que contienen un núcleo

Teóricamente, la prueba de Biuret para enlaces peptídicos: El sulfato alcalino de

El resultado final fue una solución violeta, indicando así la presencia de

Teóricamente, la extracción consiste en el aislamiento y purificación de

El resultado final, se observó el ADN en la parte superior de la mezcla obtenida,

● Aislar ADN de una muestra vegetal.

1. Explicar las características de los aminoácidos.

Los aminoácidos son incoloros, cristalizables, su punto de fusión pasa los

La actividad óptica se debe a la capacidad para desviar de la luz polarizada

El comportamiento anfótero en una disolución acuosa, los aminoácidos tienen

2. ¿Qué se entiende por desnaturalización y qué agentes desnaturalizantes se

Desnaturalización de proteínas es la pérdida de las estructuras de orden

Los agentes desnaturalizantes que se pueden usar son:

A. Físicos: Calor, radiaciones.

A. Químicos: Detergentes, disolventes orgánicos, pH, fuerza iónica.

El ADN mayormente se ubica en el núcleo celular o ADN nuclear, también se

El ARN se localiza en el núcleo de la célula eucariota, en el citoplasma y en

● Burriel V.(2011), “Estructura y propiedades de los ácidos nucleicos”

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