Este documento describe cómo realizar un perfil lipídico, el cual mide los niveles de triglicéridos, colesterol total, colesterol HDL y colesterol LDL en la sangre. Explica que estos análisis son importantes para diagnosticar y monitorear enfermedades metabólicas. Además, define qué son cada uno de estos lípidos, cómo se determinan mediante reacciones enzimáticas y cuáles son sus valores de referencia normales.
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Este documento describe cómo realizar un perfil lipídico, el cual mide los niveles de triglicéridos, colesterol total, colesterol HDL y colesterol LDL en la sangre. Explica que estos análisis son importantes para diagnosticar y monitorear enfermedades metabólicas. Además, define qué son cada uno de estos lípidos, cómo se determinan mediante reacciones enzimáticas y cuáles son sus valores de referencia normales.
Este documento describe cómo realizar un perfil lipídico, el cual mide los niveles de triglicéridos, colesterol total, colesterol HDL y colesterol LDL en la sangre. Explica que estos análisis son importantes para diagnosticar y monitorear enfermedades metabólicas. Además, define qué son cada uno de estos lípidos, cómo se determinan mediante reacciones enzimáticas y cuáles son sus valores de referencia normales.
Este documento describe cómo realizar un perfil lipídico, el cual mide los niveles de triglicéridos, colesterol total, colesterol HDL y colesterol LDL en la sangre. Explica que estos análisis son importantes para diagnosticar y monitorear enfermedades metabólicas. Además, define qué son cada uno de estos lípidos, cómo se determinan mediante reacciones enzimáticas y cuáles son sus valores de referencia normales.
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PERFIL LIPIDICO.
I. OBJETIVO: - Implementar técnicas de diagnóstico clínica rápido - Reconocer algunas propiedades de los lípidos mediante pruebas químicas. - Conocer el funcionamiento y utilidad de los equipos para diagnóstico clínico. - Aplicar adecuadamente las normas de trabajo en el laboratorio y el desarrollo de trabajo en equipo. - Realizar mediciones indirectas de compuestos biológicos.
II. INTRODUCCIÓN: La cuantificación analítica de una serie de lípidos que
son transportados en la sangre por los diferentes tipos de lipoproteínas plasmáticas. La determinación de estos parámetros es un procedimiento analítico básico para el diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias o secundarias. Entre estos parámetros analíticos que se pueden determinar están: el colesterol total, el colesterol transportado por las LDL, el colesterol transportado por las HDL, los triglicéridos totales, ciertas apoproteínas particulares etc.
Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades
cardiovasculares, en especial aquel unido a las LDL (colesterol malo). El colesterol de las HDL (colesterol bueno), puesto que representa aquella fracción de colesterol que se transporta al hígado para su metabilización y excreción por vía biliar, no se asocia con riesgo de enfermedad.
III. CONDUCTA DE ENTRADA:
III.1. ¿Qué es un perfil lípidico? III.2. ¿Qué se mide en un perfil lípidico? III.3. ¿A qué se le conoce como el famoso “colesterol bueno y malo”? III.4. ¿Qué indica valores altos de HDL?
IV. MARCO TEORICO:
Los triglicéridos son la principal forma de almacenamiento de energía en las células. Son lípidos formados por una molécula de glicerol esterificado con tres ácidos grasos
Los triglicéridos son un tipo de lípidos formados por una molécula de glicerol esterificado con tres ácidos grasos, que suelen ser distintos. Son el lípido más común y se almacenan principalmente en forma de una gran gota ocupando todo el citoplasma del adipocito. Su almacén secundario es el hígado. Los triglicéridos proceden de la dieta o de su síntesis en el hígado.
Los triglicéridos son hidrolizados por una lipasa específica liberando ácidos grasos y glicerol. El glicerol es fosforilado por la enzima glicerol kinasa y posteriormente, el glicerol-1-fosfato es oxidado a dixidroxiacetona fosfato por la enzima glicerol fosfato oxidasa, generándose peróxido de hidrogeno. En donde por reacciones sucesivas el peróxido reacciona con la 4- aminoantipirina y el ácido 3,5-dicloro-2-hidroxibencensulfónico para producir por medio de la enzima peroxidasa un compuesto coloreado en cantidad proporcional a la concentración de triglicéridos presentes en la muestra.
LIPASA TRIGLICERIDOS GLICEROL + ÁCIDO GRASO GK GLICEROL + ATP GLICEROL-3-FOSFATO + ADP GPO GLICEROL-3-FOSFATO DIHIDRIXIACETONAFOSFATO + H2O2 PAP 2H2O2 +4-AAP + DCBS COLOR + 4H2O COLESTEROL: El colesterol es un esterol (lípido) que se encuentra en los tejidos corporales y en el plasma sanguíneo de los vertebrados. Se presenta en altas concentraciones en el hígado, médula espinal, páncreas y cerebro. Pese a tener consecuencias perjudiciales en altas concentraciones, es esencial para crear la membrana plasmática que regula la entrada y salida de sustancias que atraviesan la célula.
El colesterol se determina por acción de las enzimas colesterol ester
hidrolasa y colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los ésteres de colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre produciendo peróxido de hidrógeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa reacciona dando origen al compuesto coloreado que absorbe 505 nm.
CEH COLESTEROL ESTER COLESTEROL + ÁCIDO GRASO CHOD COLESTEROL + O2 COLESTEROL-3 ONA + H2O2 PAP 2H2O2 +4-AAP + FENOL COLOR + 4H2O
COLESTEROL HDL: as lipoproteínas de alta son aquellas lipoproteínas
que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado. Debido a que las HDL pueden retirar el colesterol de las arterias y transportarlo de vuelta al hígado para su excreción, se les conoce como el colesterol o lipoproteína buena. Cuando se miden los niveles de colesterol, el contenido en las partículas, no es una amenaza para la salud cardiovascular del cuerpo (en contraposición con el LDL o colesterol malo). HDL son las lipoproteínas más pequeñas y más densas, están compuestas de una alta proporción de proteínas. El hígado sintetiza estas lipoproteínas como proteínas vacías y, tras recoger el colesterol, incrementan su tamaño al circular a través del torrente sanguíneo.
La adición de ácido fosfotúngstico y iones de magnesio a la muestra
provoca la precipitación de los quilomicrones VLDL, y LDL. El sobrenadante de la centrifugación contiene los HDL; cuya concentración de colesterol es determinada enzimáticamente.
El colesterol se determina por acción de las enzimas colesterol éster
hidrolasa y colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los ésteres de colesterol, y la segunda oxida el colesterol libre produciéndose peróxido de hidrógeno, el cual en presencia de la enzima peroxidasa reacciona con el sistema cromogénico dando origen a un compuesto coloreado que absorbe a 505 nm.
CEH COLESTEROL ESTER COLESTEROL + ÁCIDO GRASO CHOD COLESTEROL + O2 COLESTEROL-3 ONA + H2O2 PAP 2H2O2 +4-AAP + FENOL COLOR + 4H2O
V. PROCEDIMIENTO: V.1. TRIGLICERIDOS: La muestra a utilizar puede ser suero libre de hemolisis o plasma. Los triglicéridos son estables en suero o plasma 7 días en refrigeración (2-8 Grados Celsius). Para periodos más prolongados congelar a -20 grados Celsius.
Llevar el reactivo a la temperatura que se realizará el ensayo. Las puntas a
utilizar deben estar limpias y libres de residuos para no contaminar el reactivo.
Mezclar e incubar 5 min a 37 0C o 10 min a temperatura ambiente. Leer las
absorbancia a 500 nm. Llevando a cero el espectrofotómetro empleando el blanco. El color resultando es estable por lo menos 30 min. Medir a 500 nm. V.1.1. Calculo de los resultados:
200 Factor = Absorbanciadel patrón
( ) TRIGLICERIDOS mg = Absorbancia Muestra X Factor dl
VALORES DE REFERENCIA: 44-150 mg/dl.
V.2. COLESTEROL: La muestra a utilizar puede ser suero libre de
hemolisis o plasma. Los triglicéridos son estables en suero o plasma 7 días en refrigeración (2-8 Grados Celsius). Para periodos más prolongados congelar a -20 grados Celsius.
Llevar el reactivo a la temperatura que se realizará el ensayo. Las puntas a
utilizar deben estar limpias y libres de residuos para no contaminar el reactivo. BLANCO PATRON MUESTRA MUESTRA µL ---------- ---------- 10 PATRON µL ---------- 10 -------- REACTIVO 1000 1000 1000 ENZIMATICOµL
Mezclar e incubar 5 min a 37 0C o 10 min a temperatura ambiente. Leer las
absorbancia a 505 nm. Llevando a cero el espectrofotómetro empleando el blanco. El color resultando es estable por lo menos 30 min. V.2.1. Calculo de los resultados:
200 Factor = Absorbanciadel patrón
( ) TRIGLICERIDOS mg = Absorbancia Muestra X Factor dl
VALORES DE REFERENCIA: VALOR NORMAL < 200 mg/dl. SOSPECHOSO 200-239 mg/dl. ELEVADO > 240 mg/dl
V.3. COLESTEROL HDL: La muestra a utilizar puede ser suero libre de
hemolisis o plasma. Los triglicéridos son estables en suero o plasma 7 días en refrigeración (2-8 Grados Celsius). Para periodos más prolongados congelar a -20 grados Celsius.
V.3.1. PRECIPITACIÓN: Pipetear en los tubos de centrifuga.
Muestra 200 µl Reactivo precipitante 500 µl Mezclar, dejar 10 min a temperatura ambiente y centrifugar 10 min a 4000 r.p.m. ó 2 min a 12000 r.p.m. El sobrenadante debe ser claro.
V.3.2. DETERMINACIÓN DE COLESTEROL: Llevar el reactivo a temperatura
que se realizara el ensayo.
BLANC PATRÓN MUESTRA
O MUESTRA -------- ----------- 10 (SOBRENADANTE µl) PATRON (µl) --------- 10 -------- REACTIVO 1000 1000 1000 ENZIMATICO (µl) Mezclar e incubar 5 min a 37 0C o 10 min a temperatura ambiente. Leer las absorbancia a 505 nm. Llevando a cero el espectrofotómetro empleando el blanco. El color resultando es estable por lo menos 30 min.
V.4. ESPECTROFOTÓMETRO: Tome dos celdas y disponga para el blanco y el patrón. Encienda el espectrofotómetro Seleccione la longitud de onda con las teclas ▲ ▼ (un amplio rango operativo de 325 nm a 1100 nm) Seleccione el modo usando las teclas A/T/C (elija absorbancia) Inserte el blanco y oprima la tecla 0 ABS/100 %T Inserte la muestra y observe la lectura (espere que la lectura se estabilice). Realice los cálculos y reporte.
VI. CUESTIONARIO: 1. ¿Cuáles son las fuentes de lípidos en la alimentación? y ¿cuáles son los ácidos grasos esenciales? 2. ¿Cómo se clasifican los lípidos según su función? Explique. 3. ¿Qué indica niveles altos de LDL en sangre? 4. ¿Qué efectos tiene los quilomicrones en el transporte de las grasas? Explique.
Soluciones para la Diabetes y la Hipoglucemia (Traducido): Cómo prevenirla y deshacerse de ella de forma natural, sin medicamentos pero adoptando un estilo de vida saludable
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