Laboratorio de Análisis Instrumental I 2022A

Informe

CUANTIFICACIÓN DE CALCIO PRESENTE EN LECHE POR ESPECTROSCOPIA

DE ABSORCIÓN ATÓMICA

Anyeli López1, Kevin Bucheli1, Maria Mercedes Montes de Oca1, Santiago

Ramirez1
1
Universidad Santiago de cali, Cali, Colombia

[email protected], [email protected],
[email protected], [email protected]

Resumen.

En la práctica de laboratorio se cuantificó el calcio presente en 3 marcas de

leche pasteurizada por medio de espectroscopia de absorción atómica. Las
concentraciones obtenidas fueron las siguientes:marca A:1,2 ppm , marca
B:1,7 ppm y marca C: 1,9 ppm.Al compararlos con los parámetros establecidos
en el Instituto Nacional de Bienestar Familiar en Colombia se encuentran por
debajo de lo establecido (1200 ppm). Los porcentajes de recuperación del
Calcio en las marcas A, B y C fueron 0,1%,0,1% y 0,2%, respectivamente.
Estos resultados se encuentran por fuera del rango determinado 90%-110% lo
cual refleja poca exactitud.

Introducción

La espectroscopia de absorción atómica (AAS) es una técnica analítica eficiente y precisa para
el análisis de elementos trazas, es un método confiable para la determinación de metales
pesados, ya que cuenta con una energía de transmisión electrónica única para cada metal, este
hecho no solo facilita la investigación de nuevos productos sino el control de calidad para
verificar metales pesados en los mismos.1

Los espectrómetros de absorción atómica cuentan con lámparas de cátodo hueco que
contienen el elemento a analizar. El material de la lámpara es excitado energéticamente para
que emita radiación; esta radiación emitida por los átomos de la lámpara será absorbida por
los átomos de la muestra a analizar. Si no hay absorción por parte de la muestra significa que
no hay átomos del mismo elemento presente en la lámpara 2.De acuerdo con la medición de la

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cantidad de luz absorbida, se puede hacer una determinación cuantitativa de la cantidad de

analito. El uso de fuentes de luz especiales y una cuidadosa selección de las longitudes de
onda permiten determinar elementos específicos 2. Actualmente, se han realizado estudios de
determinación de calcio. En cuanto a la técnica analítica empleada para las determinaciones la
espectroscopía de absorción atómica ha sido la más empleada para metales como el Ca, Cu y
Na en múltiples matrices, ya sea mediante espectroscopia de absorción atómica de llama
(FAAS) o de emisión (fotometría).

El calcio es un macromineral indispensable para la formación de huesos y dientes, la

contracción muscular y el funcionamiento del sistema nervioso; también interviene en la
coagulación de la sangre y en la actividad de algunas enzimas. Sin embargo, la mayoría del
calcio en el organismo se encuentra en los huesos y en los dientes. Una manera de prevenir la
deficiencia de calcio en el organismo es por medio de una dieta rica en alimentos que
contengan, por ejemplo, productos lácteos 3.

Los objetivos de la presente práctica son cuantificar el calcio presente en la leche pasteurizada
mediante la técnica de espectroscopia de absorción atómica y comparar el valor de
concentración de Calcio obtenido experimentalmente con el estipulado en la literatura.

Sección Experimental

Inicialmente, se preparó una solución de Óxido de lantano al 1%, para lo cual se pesaron
aproximadamente 1,1727 g de Óxido de lantano, se disolvieron con 5 mL de HCl
concentrado y se llevó a volumen final de 100 mL con agua destilada. A continuación, se
preparó la solución estándar de calcio 1000 ppm, para lo cual se pesó 0,2500 g de Carbonato
de calcio y se llevó a un balón aforado de 100 mL, se adicionó HCl concentrado hasta
completa disolución y se completó a volumen con agua destilada.Enseguida, se preparó la
solución estándar de Calcio de 100 ppm, para lo cual se midieron 10 mL de la solución
previamente preparada, se transfirieron a un balón aforado de 100 mL y se completó a
volumen con solución de HCl 0,01 M.

Enseguida, se realizó la preparación de la curva de calibración de calcio para esto, se partió

de la solución estándar de carbonato de calcio 100 ppm, se emplearon balones aforados de 50
mL y se completó a volumen con agua destilada. y se tomaron los volúmenes de estándar de
carbonato de calcio 100 ppm y óxido de lantano 1 % según indica la tabla 1:

Tabla 1. Preparación de la curva de calibración de calcio.

Estándar Volumen (mL) de Volumen (mL) de Concentración
solución de 100 solución de La al (ppm) de Ca en la
ppm 1% solución

Blanco 0,0 5,0 0,00

1 0,5 5,0 1,00

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2 1,0 5,0 2,00

3 2,0 5,0 4,00

4 3,0 5,0 6,00

5 4,0 5,0 8,00

Posteriormente, se realizó la preparación de la muestra, para lo cual se tomó una alícuota de

10 mL de leche pasteurizada, se adicionó 1 mL de HCl concentrado y se centrifugó durante
10 minutos.Luego, se tomó una alícuota de 2 mL del sobrenadante previamente obtenido, se
transfirieron a un balón aforado de 100 mL, se adicionaron 10 mL de la solución de Lantano y
se completó a volumen con agua destilada.

Posteriormente, se realizó la cuantificación del Ca presente en la muestra. El equipo empleado

en el laboratorio fué el espectrofotómetro de absorción atómica marca Shimadzu AA-6300
(Figura 1 ).

Las condiciones instrumentales para la medición de calcio fué una longitud de onda de 422,7
nm. Cabe señalar que la mezcla de gas oxidante empleado para la atomización fué
aire-acetileno dado que este alcanza una temperatura característica para originar la niebla en
la atomización del metal en análisis.

Figura 1. Equipo de absorción atómica.

1. Resultados y Discusión

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Todos los resultados que se presentarán a continuación, se obtuvieron del espectrofotómetro

de absorción atómica de llama modelo: AA-6300, versión de ROM: 1.09 y número de serie:
A30524501959 dispuesto para laboratorio de análisis instrumental de la Universidad Santiago
de Cali sede Pampalinda, en Cali - Colombia.

En la tabla 2, se presentan las lecturas de absorbancia obtenidas del blanco para calcular el
límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ), definidas como la cantidad
mínima a detectar y cuantificar confiablemente, mediante la ecuación 1 y 2 donde: “𝑆𝑚” es
señal mínima distinguible, “𝑆𝑏𝑙” Es el promedio de las lecturas del blanco “k” constante (3
para LOD y 10 para LOQ, según la literatura), “𝑆𝑏𝑙” es la desviación estándar de las lecturas
del blanco y “m” la pendiente de la recta. se hicieron tres lecturas en intervalos de 15
segundos cada una.

𝑆𝑚 = 𝑆𝑏𝑙 + (𝑘 × 𝑆𝑏𝑙) [Ecuación 1]

𝑆𝑚− 𝑆𝑏𝑙
𝐿𝑂𝐷 𝑜 𝐿𝑂𝑄 = 𝑚
[Ecuación 2]

Tabla 2. Límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ).

En la tabla 3, se presentan las lecturas de absorbancia obtenidas de cada patrón para la

elaboración de la curva de calibración de calcio, se hicieron tres lecturas por cada
concentración en intervalos de 15 segundos cada una.

Tabla 3. Lectura de la curva de calibración para la cuantificación de Ca en la leche.

En la gráfica 1, se evidencia la linealidad con un valor de coeficiente de determinación (R^2)

de 0,9996, lo que nos permite calcular un coeficiente de correlación (r) de 0,9998. Según
(Miller 2002), un valor superior a 0,99 de coeficiente de correlación indica una buena
correlación sobre los datos numéricos obtenidos, esto garantiza calcular confiablemente la
concentración real de Ca en las muestras analizadas.

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Gráfica 1. Curva de calibración para la determinación de Ca en leche.

En la tabla 4, se presentan las lecturas de absorbancia obtenidas de cada marca de leche (A, B
y C) como dato primario para la cuantificación de calcio. De igual forma, se hicieron tres
lecturas por cada marca de leche en intervalos de 15 segundos cada una.

Tabla 4. Lecturas de las muestras de leche analizadas.

Mediante el uso de la ecuación de la recta (ecuación 3) arrojada por la curva de calibración de

la gráfica 1, siendo: “y” absorbancia, “m” pendiente, “x” concentración y “b” intercepto; se
despeja “x” para encontrar la concentración de Ca en la leche de tres diferentes marcas, los
resultados se encuentran compilados en la tabla 5, en donde también se evaluó la precisión de
los datos obtenidos mediante la desviación estándar, considerando el método instrumental
adecuado para este tipo de determinación por ser inferior al 2% 4 y por ende, indica también la
reproducibilidad en las determinaciones analíticas efectuadas en muestras de leche diluída.

𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏 [Ecuación 3]

0,1353 − 0,02925
[𝐶𝑎] (𝑝𝑝𝑚) 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐴 𝐿𝑒𝑐𝑡𝑢𝑟𝑎 1 = 0,08605

[𝐶𝑎] (𝑝𝑝𝑚) 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐴 𝐿𝑒𝑐𝑡𝑢𝑟𝑎 1 = 1, 2 𝑝𝑝𝑚

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Tabla 5. Concentración de Ca en las muestras de leche analizadas.

En el envase de las tres referencias de marcas de leche, la tabla de información nutricional

resalta que cada porción aporta un 25 % de Ca, dicho porcentaje de valor diario está basado
en una dieta recomendada para adultos de 2000 calorías. Lo anterior es importante para
seleccionar entre alimentos, que aporten más de este mineral para el consumo diario.

En la tabla 6, se encuentra la información recopilada de la tabla de composición de los

alimentos colombianos (TCAC) (Tabla 6) la cual estipula que la leche de vaca, entera, líquida
y pasteurizada con código G012 contiene 120 mg de Ca por cada 100 g del alimento en
cuestión, equivalente a 1200 ppm según la ecuación 4.5

Tabla 6. Tabla de información nutricional de leche y derivados.

Fuente: https://www.icbf.gov.co/system/files/tcac_web.pdf Pág. 79 - 80.

120 𝑚𝑔 𝐶𝑎 1000 𝑔 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒

100 𝑔 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒
× 1 𝑘𝑔 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒
= 1200 𝑚𝑔 𝐶𝑎 / 𝑘𝑔 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 = 1200 𝑝𝑝𝑚 [Ecuación 4]

Los resultados encontrados como valor real de contenido de Ca en las muestras de leche
estuvieron muy por debajo de lo esperado en comparación con la literatura, no se encontró

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una razón atribuible a este hecho de manera experimental. Según Pavón (2014) una de las
causas más frecuentes de error en el método instrumental empleado son las interferencias
químicas, pero en la práctica se empleó un agente liberador que reaccione preferiblemente con
las especies que interfieren evitando así su reacción con el analito como lo es el Óxido de
Lantano. A partir de estos resultados, la investigación en cuestión indicaría que para cumplir
con la dieta recomendada para adultos de 2000 calorías se debe ingerir más alimentos que
aporten dicho mineral. Por otra parte, se deja abierta la investigación para concluir el por qué
de dichos resultados, como recomendación se sugiere revisar los cálculos como posible factor
que acerque el contenido calculado a un valor exacto al de la literatura, ya que si son precisos
y reproducibles según se evidencia por los valores ≤ 2 % en el coeficiente de variación o
desviación estándar relativa (RSD).

2. Conclusiones

De acuerdo al desarrollo experimental ejecutado se concluye que:

● Se determinó la concentración de calcio presente en marcas comerciales de leche

pasteurizada mediante espectroscopía de absorción atómica.
● Se compararon los valores de concentración de Calcio obtenidos en las muestras de
leche pasteurizada los cuales presentan niveles bajos del orden de 1,0 ppm de acuerdo
a los valores estipulados en la Tabla nutricional de alimentos en Colombia (1200 ppm).
● Los resultados de concentración obtenidas presentan alto grado de confiabilidad dado
que se observa baja dispersión entre ellos y por ende mayor reproducibilidad reflejada
en las bajas desviaciones estándar obtenidas (menores al 2%).

3. Preguntas
1. ¿Cuál es la longitud de onda de resonancia de calcio?

La longitud de onda de resonancia de calcio es de 422,7 nm.

2. Calcule la absortividad del calcio utilizando la línea de calibración (se utiliza un

quemador de 10 cm).

Ecuación para absortividad, donde: “A” es absorbancia, “ε” es la absortividad, “l” es la

longitud del quemador y “c” es la concentración molar:

𝐴 = ε ×𝑙 × 𝑐

Despejamos, reemplazamos y calculamos:

𝐴
ε = 𝑙×𝑐

0,1367
ε 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐴 = −5
10 × (3,12 × 10 )

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−1 −1
ε 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐴 = 439 𝐿 × 𝑚𝑜𝑙 × 𝑐𝑚
−1 −1
ε 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐵 = 415 𝐿 × 𝑚𝑜𝑙 × 𝑐𝑚
−1 −1
ε 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐶 = 408 𝐿 × 𝑚𝑜𝑙 × 𝑐𝑚

3. De acuerdo con sus resultados ¿cuál es el porcentaje de Ca en la leche analizada?

[𝐶𝑎𝑙𝑐𝑖𝑜] 𝑒𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙
% 𝑅𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = [𝐶𝑎𝑙𝑐𝑖𝑜] 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑎
× 100

1,2
% 𝑅𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐴 = 1200 𝑝𝑝𝑚
× 100

% 𝑅𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐴 = 0, 1 %

% 𝑅𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐵 = 0, 1 %

% 𝑅𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝐿𝑒𝑐ℎ𝑒 𝐶 = 0, 2 %

4. ¿Por qué es necesario adicionar solución de Óxido de lantano a las muestras?

Las interferencias químicas son causadas por aniones que forman compuestos de baja
volatilidad como como por ejemplo óxidos refractarios (B, Al, Fe o V), fosfatos y
sulfatos (Mg, Ca).En alguno casos tales interferencias pueden eliminarse al agregar un
agente liberador que reaccione preferiblemente con las especies que interfieren
evitando así su reacción con el analito. El Óxido de lantano se agrega como agente
liberador en la determinación de calcio para reducir la interferencia del sulfato o
fosfato. 6

El calcio con el fosfato forman el fosfato de calcio, el cual se transforma en

pirofosfato de calcio, que es relativamente estable en una llama aire/acetileno. Así la
cantidad de átomos libres de calcio generados en la llama será menor que la obtenida
con una solución de calcio de igual concentración, pero sin presencia de fosfato,
provocando una disminución de la señal. Este efecto es corregido con la adición de
Óxido de lantano, debido a que la adición del mismo logra suprimir el efecto de
fosfato, porque este atrae al lantano por mayor afinidad que al calcio, de forma tal que
lo deja libre en solución para ser medido totalmente.6

5. ¿El cloruro de potasio tiene el mismo efecto que el lantano? Explique.

Las interferencias químicas son causadas a menudo por aniones que forman
compuestos de baja volatilidad como por ejemplo óxidos refractarios (B, Al, Fe o V),
fosfatos y sulfatos (Mg, Ca). En algunos casos, tales interferencias pueden eliminarse
al agregar un agente liberador que reacciona de preferencia con las especies que
interfieren y evita su reacción con el analito. Por ejemplo, se puede agregar óxido de

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lantano o cloruro de potasio como agente liberador en la determinación de calcio para

reducir la interferencia del sulfato o fosfato.

6. Según sus resultados experimentales y comparando con el contenido de calcio

reportado en la literatura para leche de vaca, la muestra analizada cumple con la
especificación?

El valor encontrado en las muestras de leche analizada no sobrepasa el límite de Ca

por porción, sin embargo, sus porcentajes de recuperación son muy bajos lo que quiere
decir que se necesitan consumir más alimentos que aporten este mineral en mayor
concentración.

Bibliografía

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Tacares de Grecia: Universidad de Costa Rica
(2) Gaitán, M. (2004). Determinación de Metales Pesados totales con digestión ácida y
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(4) Betancourt, H. L. (2017). Determinación de la concentración de calcio, magnesio y
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(6) Pavón E. (2014). Determinación de calcio, hierro, sodio y potasio en cinco variedades
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0de%20calcio%2C%20hierro%2C%20sodio%20y%20potasio%20en%20cinco%20va.
pdf?sequence=1&isAllowed=y

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