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Taller2 2022

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BCM 2021

Taller 2: Replicación

Lucia Brignoni
[email protected]
Primero que
nada

¿Dudas de la
clase pasada?
Analice el siguiente esquema de una burbuja de
replicación e indique las opciones correctas
Primero que nada

¿Burbuja y Horquilla son lo mismo?


Hay que seguir tres reglas:

Hay que copiarlo todo


El sentido de síntesis es 5’-3’
La ADNpol necesita un extremo OH libre
Analice el siguiente esquema de una burbuja de
replicación e indique las opciones correctas:
a) El origen de replicación está
representado por la letra a
Origen
b) La cadena retrasada está
representada por la letra b
Origen

Hebra líder Hebra retrasada

Hebra retrasada Hebra líder


c) La hebra molde superior genera la
hebra líder y la inferior la hebra
retrasada.
La replicación es
bidireccional, se
forman dos
horquillas
d) El extremo 5’ está representado
por la letra d
Origen

Hebra líder 3´ Hebra retrasada





5´ 3´


3´ 5´

Hebra retrasada Hebra líder


Primers
El
origen
está
hacia
acá
Apertura de las hebras
e) La ADN polimerasa es necesaria y
suficiente para que la burbuja de
replicación avance
Ahora relajá
el esqueleto
y dejate Muchas
desenrollar
enzimas
Muy
controlado
Mucha
energía
Las
enzimas
El corazón
dan para
todo
La alta mutabilidad del virus HIV es uno de los principales
problemas para su tratamiento
El HIV es un retrovirus,
y su ciclo depende de
una transcriptasa
reversa responsable de
la generación de
copias de ADN del
genoma viral que se
integrará al genoma
del huésped
La alta mutabilidad
del virus se relaciona
con una fidelidad de
un orden de magnitud
menor de la enzima
viral con respecto a
otras polimerasas del
huésped
¿A qué se puede deber esta
diferencia?

Corrección de prueba: Esta actividad es


exclusiva de las ADN polimerasas replicativas y
no está presente en la retrotranscriptasa viral
La ADN polimerasa incorpora un
nucleótido incorrecto a la hebra que
se esta sintetizando.

La Polimerasa es capaz de detectar el


apareamiento incorrecto.

La actividad exonucleasa 3´→ 5´


remueve el nucleótido erróneo.
La primera droga
DEOXITIMIDINA utilizada con éxito en
el control del Sida fue
el AZT. El AZT es un
análogo de la
deoxitimidina cuyo
AZT nombre formal es
3’-azido-2’3’-
dideoxitimidina
AZT-TP
Este nucleósido es
fosforilado in vitro
para formar
deoxinucleósido-
5’-trifosfato Sugiera un mecanismo
de acción del AZT-TP
Esto es lo que
pasa con
cualquier base AZT AZT

N3 N3

¿Y con AZT-TP? X
¿Será efectiva la administración del AZT sin
trifosforilación para tratar la enfermedad?
Justifique

Sin trifosfato no
hay energía para
formar el enlace
fosfodiéster
Se ha verificado que la
transcriptasa reversa tiene
mayor afinidad por el AZT que
por el TTP, a la inversa de lo
que ocurre con las ADN
polimerasas eucariotas.
¿Esto influye en algún
sentido en el éxito del
tratamiento?
ADN Timidina
polimerasa
Humana
+

-
-

+
Retro-
transcriptasa AZT
Viral
¿Qué otras aplicaciones
puede tener un fármaco
homólogo de una base
nitrogenada?
En base a la imagen
explique cómo avanza el
replisoma durante la
replicación
Molde de la Hebra recién
hebra líder sintetizada
Polimerasa de ADN
en la hebra líder
Hélice de ADN
Primasa de ADN parental

Proteína de unión al ADN cadena simple


Helicasa de ADN
Molde de la hebra retrasada

Primer Nuevo fragmento Cargador


Hebra recién
de ARN de Okazaki
sintetizada
ADN polimerasa en la
hebra retrasada
(terminando un
fragmento de Okazaki)
Supóngase
una bacteria
que ha sido
cultivada varias
generaciones
en un medio donde
la única fuente de
nitrógeno es N15
Tomamos una muestra y la
transferimos a un medio
que contenga sólo N14 y
después analizamos su
ADN por centrifugación en
gradiente de densidad.

¿Cuál es la densidad
esperada de este ADN?
Si permitimos que se produzca una
segunda generación de replicación en
N14, ¿qué resultado esperaríamos
haciendo la misma experiencia?

Estimar este problema en dos


escenarios:
1 suponiendo que la replicación es
semiconservativa
2 suponiendo que es conservativa.
Conservativa Semiconservativa

ADN
Parental

Primera
Replicación

Segunda
Replicación
Pesado
Liviano
PREDICCIONES
OBSERVACIONES
Conservativo Semiconservativo

Primera replicación

Segunda replicación
PREDICCIONES
OBSERVACIONES
Conservativo Semiconservativo

Primera replicación

Segunda replicación

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