Procedimientos en Microbiología Clínica

Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades

Infecciosas y Microbiología Clínica

Editores: Emilia Cercenado y Rafael Cantón

Coordinador: Carlos Sánchez Carrillo

Autores: Carmen Guerrero Gómez
Carlos Sánchez Carrillo

ISBN: 84-609-2287-1

I
INDICE
INDICE DEL DOCUMENTO CIENTIFICO
1. Introducción
2. Consideraciones clínicas
3. Recogida y transporte de las muestras
4. Toma de muestras
5. Recepción y procesamiento de las muestras en el laboratorio de microbiología

INDICE DEL DOCUMENTO TÉCNICO

1. PROPÓSITO Y ALCANCE
2. FUNDAMENTO
3. DOCUMENTOS DE CONSULTA
4. MUESTRAS
4.1.Criterios de aceptación y rechazo de las muestras/toma de decisiones
4.2.Mantenimiento de muestras tras el procesamiento
4.3.Transporte de muestras por superficie y por vía aérea
4.3.1. Transporte internacional aéreo
4.3.2. Transporte nacional y local por superficie
5. MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS Y PRODUCTOS
6. APARATOS Y MATERIAL
7. PROCESAMIENTO
7.1 Recepción de la muestra
7.2. Procesamiento de la muestra
7.2.1. Pretratamiento de la muestra
7.2.1.1.Centrifugación
7.2.1.2. Homogeneización
7.2.1.2.1 Mediante hoja de bisturí
7.2.1.2.2. Mediante mortero
7.2.1.2.3. Mediante Stomacher
7.2.2. Preparación de extensiones
7.2.2.1. Mediante impronta: piezas de tejido
7.2.2.2. Extensiones finas: material muy purulento
7.2.2.3. Líquidos
7.2.2.4. Muestras en torunda
7.2.3. Inoculación de la muestra en los medios de cultivo
7.2.3.1. Piezas no triturables
7.2.3.2. Muestras recibidas en jeringas o tubos estériles
7.2.3.3. Muestras recibidas en torundas
7.2.3.4. Técnica de Maki para cultivo de catéteres
intravasculares
7.2.3.5. Cultivos semicuantitativos
7.2.3.6. Cultivos cuantitativos
7.2.4. Incubación
7.2.4.1. Temperatura
7.2.4.2. Atmósferas de incubación
8. OBTENCIÓN Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS
9. RESPONSABILIDADES
10. ANOTACIONES AL PROCEDIMIENTO
11. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
12. BIBLIOGRAFÍA

II
 Procedimientos en Microbiología Clínica
Recomendaciones de la Sociedad Española de Enfermedades
Infecciosas y Microbiología Clínica
Editores: Emilia Cercenado y Rafael Cantón

1a. RECOGIDA, TRANSPORTE Y PROCESAMIENTO GENERAL DE LAS

MUESTRAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA 2003

Coordinador: Carlos Sánchez Carrillo

Autores: Carmen Guerrero Gómez

Carlos Sánchez Carrillo

1
 DOCUMENTO CIENTÍFICO

1. INTRODUCCIÓN 3. RECOGIDA Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS

La actividad que desarrolla el laboratorio de Toda la información diagnóstica que puede
microbiología está orientada esencialmente al generar el laboratorio de microbiología depende en
diagnóstico microbiológico de las enfermedades gran medida de la muestra enviada. Esta no sólo
infecciosas. Una parte importante de esa actividad tiene que ser la adecuada, sino que además debe
consiste en el aislamiento, la identificación y la cumplir unos requisitos que aseguren su idoneidad y
determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos de en consecuencia la calidad de nuestro trabajo. La
los microorganismos causales de estas enfermedades. idoneidad de las muestras enviadas depende del
Otra parte importante de la actividad de un laboratorio cumplimiento de una serie de medidas o reglas
de microbiología consiste en la detección de referentes a: procedimiento de obtención, cantidad
anticuerpos, antígenos y ácidos nucleicos en diversas enviada y transporte rápido y adecuado al
muestras (sangre, líquidos estériles, orina, etc.), técnicas laboratorio. Todas las normas y recomendaciones
que resultan muy útiles en el diagnóstico precoz de sobre estos aspectos se encuentran detalladas en el
determinadas enfermedades infecciosas. La gran documento técnico. Las consecuencias de una
diversidad de muestras clínicas y de métodos muestra mal tomada y/o mal enviada pueden
diagnósticos aplicables, son dos aspectos que suponer un fracaso en el aislamiento del agente
diferencian el laboratorio de microbiología de otros etiológico o el aislamiento de posibles
laboratorios clínicos. microorganismos contaminantes que pueden generar
Este documento pretende exponer de forma tratamientos innecesarios o inadecuados. Para
resumida los aspectos referentes a la recogida, asegurar la idoneidad de las muestras que recibe, el
transporte y procesamiento de las muestras que son laboratorio de microbiología debe elaborar un
relevantes para que la actividad del laboratorio de manual claro y conciso de las normas de recogida y
microbiología se desarrolle de manera eficaz y eficiente. transporte de las mismas. Dicho manual debe
Los aspectos relacionados con las pruebas rápidas de distribuirse en controles de enfermería, consultas y
detección de anticuerpos, antígenos y ácidos nucleicos demás dependencias hospitalarias y ambulatorias en
no se describen en el presente procedimiento y serán las que se asista a los pacientes.
desarrollados en otros posteriores.
4. TOMA DE MUESTRAS
2. CONSIDERACIONES CLÍNICAS La explicación detallada de la toma de cada
El primer paso del diagnóstico microbiológico muestra para el diagnóstico microbiológico se puede
comienza con la obtención de la muestra clínica encontrar en cada procedimiento concreto de la
adecuada. Para ello es preciso conocer los posibles SEIMC. En estos se detallará la preparación previa
agentes etiológicos de las enfermedades infecciosas del paciente, la muestra de elección, las alternativas
y los mecanismos patogénicos de los mismos. La aceptables, su cantidad, los recipientes adecuados y
muestra debe ser representativa del proceso la conservación de la muestra así como su
infeccioso que se pretende diagnosticar, teniendo estabilidad.
siempre en cuenta que en determinadas infecciones,
muestras no relacionadas directamente con la 5. RECEPCIÓN Y PROCESAMIENTO DE LAS
focalidad clínica pueden tener también un buen MUESTRAS EN EL LABORATORIO DE
rendimiento microbiológico. El síndrome clínico y los MICROBIOLOGÍA
posibles agentes etiológicos implicados condicionan Una vez que la muestra se recibe en el laboratorio
no sólo el tipo de muestra a enviar sino también su de microbiología, el manejo de la misma incluye:
procedimiento de obtención y el transporte al 1. Recepción de la muestra: consiste básicamente en
laboratorio. En la tabla 1 se resumen los distintos determinar si la muestra cumple o no los requisitos
tipos de muestras adecuadas en función de las de calidad necesarios para ser procesada. Estos
infecciones más comunes. Igualmente, la requisitos incluyen: la correcta identificación de la
información clínica es la que permite al laboratorio muestra, la valoración sobre si existe una cantidad
aplicar las técnicas diagnósticas disponibles de adecuada para el estudio solicitado y la
manera más eficiente. Por ello es fundamental que el comprobación de las condiciones adecuadas de
microbiólogo esté en estrecha comunicación con los transporte y conservación. Cada laboratorio debe
clínicos y que participe activamente en el proceso elaborar y distribuir los criterios de aceptación y
diagnóstico del paciente. A su vez, el laboratorio de rechazo de las muestras.
microbiología debe poner a disposición de los
clínicos toda la información necesaria sobre las
posibilidades diagnósticas que el laboratorio ofrece.
Para ello, debe elaborar y distribuir la cartera de
servicios disponible.

2
Tabla 1.- Muestras clínicas recomendadas para el diagnóstico microbiológico de las
infecciones más comunes
Tipo de infección Muestra Comentarios
Bacteriemia
Hemocultivos
Infecciones cardiovasculares y
asociadas a dispositivos
intravasculares (IV)
Endocarditis Hemocultivos/Válvula/Verrugas
Infección del catéter Catéter IV, piel pericatéter,
conexión del catéter
Pericarditis Líquido pericárdico
Sistema nervioso central
Meningitis LCR
Abscesos cerebrales Aspirados de abscesos
Tracto respiratorio
Faringoamigdalitis Exudado faríngeo
Sinusitis Aspirado sinusal No válidos los exudados nasales
Otitis media Timpanocentesis
Otitis externa Exudado oído externo
Neumonía Esputo, muestras obtenidas por
fibrobroncoscopia, punción
transtorácica aspirativa, punción
transtraqueal, broncoaspirado
Empiema y abscesos pulmonares Líquido pleural, aspirados de
abscesos
Nasofaríngeo Diagnóstico tosferina/Infecc. víricas
Nasal Detección de S. aureus
Infecciones oculares
Conjuntivitis Exudado conjuntival/raspado
Queratitis Raspado corneal
Endoftalmitis Líquido intraocular
Infecciones gastrointestinales
Diarrea Heces/biopsia intestinal/
Aspirado duodenal
Infecciones intraabdominales
Peritonitis Líquido peritoneal
Abscesos intraperitoneales y Aspirados de abscesos
abscesos viscerales
Colecistitis Líquido biliar
Tracto urinario
Infección urinaria Orina (micción media, sonda)
Orina obtenida mediante punción Diagnóstico de bacteriuria por
suprapúbica anaerobios y de ITU en niños

Tracto genital
Úlceras genitales Raspado de la úlcera
Nódulos genitales Aspirado del nódulo
Uretritis Exudado uretral
Vulvovaginitis Exudado vaginal Detección de S.agalactiae (también
Cervicitis Exudado endocervical exudado rectal)
Prostatitis Secreción prostática Acompañada de orina pre y post
masaje prostático
Piel y tejidos blandos
Impétigo, foliculitis, erisipela, celulitis, Preferiblemente aspirados
úlceras, infecciones gangrenosas, tomados con jeringa y biopsias de
abscesos cutáneos, heridas y tejido. Son menos recomendables
quemaduras las muestras tomadas con
torundas
Hueso y articulaciones
Artritis Líquido sinovial
Osteomielitis Biopsia ósea o exudado
LCR: Líquido cefalorraquídeo

3
2. Procesamiento: consiste en la preparación de las Aunque el aislamiento por cultivo, continúa siendo
muestras, la realización de tinciones y la una las técnicas más frecuentemente empleadas
inoculación en los medios de cultivo para su en el diagnóstico de las enfermedades infecciosas,
posterior incubación. En este proceso es preciso existen en la actualidad otras técnicas cuya
considerar: a) el tipo de muestra enviada, b) el principal ventaja sobre el cultivo es la rapidez
diagnóstico clínico del paciente y c) la petición diagnóstica. Estas técnicas de diagnóstico rápido
solicitada. se basan en la detección de antígenos y de ácidos
El tipo de muestra enviada determina si nucleicos o en la detección de la respuesta
requiere o no pretratamiento (centrifugación, inmunológica. Si bien la detección de ácidos
homogeneización) previo a la inoculación de los nucleicos no está al alcance de todos los
medios de cultivo. laboratorios, las técnicas de detección de
La información clínica del paciente es antígenos no requieren tecnología ni equipos
fundamental para la selección de los medios de especiales y son fáciles de realizar. Las técnicas
cultivo a inocular y su posterior incubación. más utilizadas son la inmunofluorescencia directa,
De modo general, en función del tipo de la aglutinación con partículas de látex, el
muestra, el laboratorio utiliza unos medios de enzimoinmunoensayo y la inmunocromatografía.
cultivo primarios que permiten el aislamiento de la Otras técnicas de diagnóstico rápido basadas en la
mayoría de los agentes etiológicos más frecuentes detección de la respuesta inmunológica
de los distintos procesos infecciosos. Sin embargo, (anticuerpos principalmente) han demostrado ser
en ocasiones el síndrome clínico puede estar muy útiles en el diagnóstico de determinadas
causado por microorganismos poco frecuentes enfermedades infecciosas. Las técnicas más
cuyo aislamiento requiere el uso de medios de utilizadas son el Rosa de Bengala (para el
cultivo específicos y/o selectivos no habituales. La diagnóstico de la brucelosis) y la detección de
sospecha de la participación de alguno de estos anticuerpos heterófilos (para el diagnóstico de la
microorganismos poco habituales, debe mononucleosis infecciosa), el RPR (para el
comunicarse al laboratorio. Igualmente, el diagnóstico de la sífilis), y la detección rápida
laboratorio debe dar a conocer a los clínicos de su presuntiva de infección por el VIH. En la actualidad
institución qué microorganismos investiga existen múltiples equipos comercializados para la
rutinariamente y cuáles debe especificar en la detección de numerosos microorganismos en
petición (cartera de servicios o catálogo de determinadas muestras clínicas (ver tabla 2) que
pruebas). han demostrado utilidad.

4
Tabla 2.- Microorganismos con técnica rápida disponible para su detección en muestras clínicas
Microorganismos Muestras Técnicas disponibles
Bacterias
a
Haemophilus influenzae tipo b LCR Aglutinación
b
Streptococcus pneumoniae LCR, orina, muestras Aglutinación (LCR), IC (orina)
respiratorias
Neisseria meningitidis LCR Aglutinación
c d
Legionella pneumophila Muestras respiratorias, orina IFD (respiratorias), IC, EIA (orina)
Streptococcus pyogenes Exudado faríngeo, lesiones IC
cutáneas, líquidos estériles
Brucella spp. Sangre Aglutinación
Clostridium difficile Heces Aglutinación, EIA
Hongos
Aspergillus spp. Suero Inmunodifusión, EIA
Cryptococcus neoformans Suero Inmunodifusión, EIA
Pneumocystis jiroveci Muestras respiratorias IFD
Virus
Rotavirus Heces IC, Aglutinación
Adenovirus Heces, muestras IC (heces, respiratorias), Aglutinación
respiratorias (heces), IFD (respiratorias)
Virus respiratorio sincitial Muestras respiratorias IC, IFD
Virus influenza Muestras respiratorias IC, IFD
Virus parainfluenza Muestras respiratorias IFD
Virus de la inmunodeficiencia Sangre IC, EIA
humana
Virus herpes simplex Lesiones cutáneas IFD
Virus varicella zoster Lesiones cutáneas/muestras IFD
respiratorias
Citomegalovirus Sangre/muestras IFD
respiratorias/orina
Virus Epstein Barr Sangre Aglutinación
Parásitos
Cryptosporidium Heces Tinción de ácido-alcohol resistencia
Plasmodium Sangre Giemsa, Gota gruesa, IC
Giardia + Cryptosporidium Heces IFD
Entamoeba histolytica Heces EIA
a b c d
Abreviaturas: LCR: Líquido cefalorraquídeo; IC: Inmunocromatografía; IFD: Inmunofluorescencia directa; EIA:
Enzimo inmunoensayo

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 DOCUMENTO TÉCNICO

PNT-RTP-01
RECOGIDA, TRANSPORTE Y PROCESAMIENTO GENERAL DE LAS
MUESTRAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

ELABORADO REVISADO Y APROBADO

Jefe de Servicio
Nombre/Firma Fecha Nombre/Firma Fecha

EDICIÓN FECHA ALCANCE MODIFICACIONES

01 Primera edición

COPIA REGISTRADA Nº.......... ASIGNADA A.......................................................................................

Este documento es propiedad del Servicio de Microbiología del Hospital .......………………. ..................
La información en él contenida no podrá reproducirse total ni parcialmente sin autorización escrita del
Responsable de su elaboración. Las copias no registradas no se mantienen actualizadas a sus
destinatarios.
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1. PROPÓSITO Y ALCANCE una escasa cantidad de muestra puede ser la

El propósito de este procedimiento es establecer las causa de falsos negativos.
directrices para asegurar la calidad de la fase 6. El material destinado a cultivo no debe estar en
preanalítica en lo que afecta tanto a la recogida contacto con sustancias desinfectantes o
como al transporte de las muestras hasta la llegada anestésicas, siempre que sea posible.
al laboratorio de microbiología previo al 7. La muestra se debe recoger, siempre que sea
procesamiento. Asimismo, este procedimiento posible, antes de iniciar cualquier terapia
establece las directrices del procesamiento inicial de antimicrobiana.
la muestra de una manera general, una vez recibida 8. Se debe evitar, siempre que sea posible, el
en el laboratorio. contacto de la muestra con microbiota normal del
paciente, con el objeto de asegurar que la muestra
Este procedimiento es aplicable a todos los laboratorios refleje lo mejor posible el lugar de la infección.
de hospitales, centros de salud o cualquier laboratorio 9. El envío al laboratorio de microbiología debe ser lo
que realice determinaciones de microbiología clínica. más rápido posible con objeto de asegurar la
supervivencia de microorganismos de difícil
2. FUNDAMENTO crecimiento y de evitar el sobrecrecimiento de la
Todo el trabajo de un laboratorio de microbiología se microbiota normal, acortar el tiempo de contacto
convierte en inútil si las muestras clínicas que se con anestésicos locales o con otras sustancias
reciben para el diagnóstico no son de calidad, es decir, con acción antimicrobiana utilizadas en la recogida
no están correctamente recogidas y transportadas al de la muestra.
laboratorio en las condiciones adecuadas para la
determinación que se solicita. El laboratorio de
microbiología debe proporcionar esta información a los
servicios solicitantes para que tanto la recogida como
el transporte y la conservación se hagan de manera
apropiada.

3. DOCUMENTOS DE CONSULTA
- Seguridad en el laboratorio de microbiología clínica
(Procedimiento 10). Procedimientos en microbiología
clínica. Recomendaciones de la SEIMC. Coordinadora
Elena Loza Fernández de Bobadilla. 2000.
- Procedimientos específicos para cada tipo de técnica.

4. MUESTRAS
En la tabla 3 se puede consultar con más detalle la
muestra de elección para cada determinación
microbiológica, recipientes, transporte y
conservación de cada muestra. Como reglas
generales cabe indicar las siguientes:
1. Antes de recoger la muestra, considerar el
riesgo/beneficio de la recogida de la muestra para
el paciente.
2. La muestra debe transportarse en envases
adecuados con cierres a prueba de fugas (ver
tablas 4 y 5). La recogida de la muestra deberá
realizarse en condiciones de máxima asepsia,
evitando contaminaciones ambientales del
personal y del propio enfermo a la muestra y
viceversa.
3. La muestra debe etiquetarse con el nombre del
paciente, el servicio solicitante, el tipo de muestra y
la fecha de recogida. En determinados casos será
importante precisar la hora de recogida.
4. Se recomienda que cada muestra se introduzca en
una bolsa de plástico que a su vez se introducirá
en otra donde se incluya el volante. Así se evita
que los posibles derrames de la muestra invaliden
el volante de petición.
5. Se debe recoger una cantidad de muestra
adecuada a la petición (ver tabla 6). En ocasiones
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Tabla 3.- Transporte y conservación de muestras para diagnóstico microbiológico

Muestra Determinación Envases TRANSPORTE CONSERVACIÓN
Tiempo y temperatura Tiempo y temperatura
Abscesos/heridas Bacterias Envase para anaerobios (pref.) o jeringa sin aguja (pref.) ≤2 h, TA ≤24 h, TA
quemaduras/mordeduras Una para Gram, otra para cultivo (Amies/Stuart)
Hongos Estéril (pref.)/Torunda ≤2 h, TA ≤24 h, TA
Una torunda para tinción, otra para cultivo (Amies/Stuart)
Virus Torunda seca1 Transferir a TV, +24 h, -60/-80ºC
≤24 h, 2-8°C
Biopsias Bacterias/Hongos Estéril ≤15 min, TA ≤24 h, TA
Virus Estéril Transferir a TV, +24 h, -60/-80ºC
≤24 h, 2-8°C
Catéter/material Bacterias/Hongos Estéril ≤15 min, TA ≤24 h, 2-8°C
protésico
Catéter urinario No es aceptable
Catéter drenaje No se recomienda Enviar líquido drenaje/abscesos/aspirados
Genital Bacterias/Hongos Estéril ≤2 h, TA ≤24 h, TA
(Secreción prostática)
Genital (cervical/ Chlamydia trachomatis Medio transporte clamidia (cultivo) Inoculación inmediata
uretral/rectal Torunda seca (fluorescencia)
Genital (cervical/rectal/ Bacterias (gonococo) Inoculación directa sobre medios de cultivo
uretral) Torunda con medio transporte ≤2 h, TA ≤24 h, TA
Genital (líq. amniótico) Bacterias/Hongos Transporte de anaerobios ≤15 min, TA ≤24 h, TA
Genital (úlcera) Virus Torunda seca1 Transferir a TV, +24 h, -60/-80ºC
(cualquier localización) ≤24 h, 2-8°C
Genital (semen) No se recomienda
Genital (úlcera) Treponema pallidum Campo oscuro Inmediata visualización
(cualquier localización)
Genital (Uretral) Mycoplasma hominis Torunda de dacrón Inocular a medio transporte ≤8 h, TA
Ureaplasma urealyticum de mycoplasmas ≤36 h, 2-8°C
Genital (vaginal) Bacterias/Hongos Torunda con medio transporte (cultivo) ≤2 h, TA ≤24 h, TA
Torunda seca para Gram
Heces Bacterias Estéril con Cary Blair ≤2 h, TA ≤24 h, 2-8°C
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Muestra Determinación Envases TRANSPORTE CONSERVACIÓN

Tiempo y temperatura Tiempo y temperatura
Clostridium difficile Estéril ≤1 h, TA 48 h, 2-8°C para cultivo
1-24 h, 2-8°C 72 h, 2-8°C (citotoxina)
>24 h, -20°C +72 h, -60/-80°C (citotoxina)
Parásitos Transporte con SAF, FOR + PVA, MIF + PVA Indefinido, TA Indefinido, TA
Rotavirus Estéril 2-8°C
Heces/Rectal Virus Torunda seca1 Transferir a TV, +24 h, ºC
≤24 h, 2-8°C
Jugo gástrico Bacterias/Hongos Estéril ≤2 h, 2-8°C ≤24 h, 2-8°C
Micobacterias Estéril ≤15 min, TA o neutralizar ≤24 h, 2-8°C
en la 1ª hora de la recogida
Lesiones fúngicas Hongos Inoculación directa sobre medios de cultivo ≤24 h, TA
(piel, pelo, uñas)
Líquidos Bacterias Estéril/botellas de hemocultivos ≤15 min, TA ≤24 h, TA
estériles transporte para anaerobios
Hongos Estéril ≤15 min, TA ≤24 h, 2-8°C
Virus Estéril ≤15 min, 2-8°C ≤72 h, 2-8°C
Serología Estéril ≤15 min, TA ≤24 h, 2-8°C
Parásitos Estéril ≤15 min, TA ≤24 h, TA
Médula ósea Bacterias/Hongos Estéril/botellas de hemocultivos ≤24 h, TA ≤24 h, TA
Parásitos (Leishmania) Estéril ≤2 h, TA ≤2 h, TA
Virus Estéril Transferir a TV, +24 h, -60/-80ºC
≤24 h, 2-8°C
Ocular (Conjuntival) Bacterias/Hongos Torunda con medio de transporte ≤2 h, TA ≤24 h, TA
Ocular (Raspado corneal) Bacterias/Hongos Inoculación directa en medios de cultivo ≤15 min, TA ≤24 h, TA
Ocular Virus Torunda seca1 Transferir a TV, +24 h, -60/-80ºC
≤24 h, 2-8°C
Oído externo Bacterias/Hongos Torunda con medio de transporte ≤2 h, TA ≤24 h, 2-8°C
Oído interno Bacterias/Hongos Torunda con medio de transporte ≤2 h, TA ≤24 h, TA
Transporte para anaerobios
Tubo estéril
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Tabla 3.- Continuación

Muestra Determinación Envases TRANSPORTE CONSERVACIÓN
Tiempo y temperatura Tiempo y temperatura
Orina Bacterias/Hongos Estéril ≤2 h, TA (sin conservante) ≤24 h, 2-8°C
Tubos con conservante (ác. bórico-formiato sódico) ≤24 h, 2-8°C (con conservante)
Virus Estéril ≤24 h, 2-8°C
M. hominis/ Estéril Inocular en medio transporte ≤8 h, TA
U. urealyticum de micoplasma ≤36 h, 2-8°C
Leptospira Estéril ≤1 h, TA
Parásitos Estéril ≤2 h, TA ≤24 h, 2-8°C
Antígeno Legionella Estéril ≤2 h, TA ≤24 h, TA
≤24, 2-8°C
+14 d, -20°C
Antígeno de neumococo Estéril ≤2 h, TA ≤24 h, TA
≤24, 2-8°C
+14 d, -20°C
Orina suprapúbica Bacterias Transporte para anaerobios ≤2 h, TA ≤24 h, 2-8°C
Rectal Bacterias Torunda con medio de transporte ≤2 h, TA ≤24 h, TA
Sangre Hemocultivo Botellas de hemocultivos ≤2 h, TA ≤24 h, TA
Serología Suero ≤24 h, 2-8°C +24h, -20°C
Plasma (no válido si hay que inactivar) +24h, -60/-80°C
(evitar
descongelación)
Virus Plasma ≤2 h, TA
(con EDTA para técnicas moleculares)
Carga vírica VIH Plasma (nunca heparina) ≤2 h, TA ≤72 h, -20-°C
+72h, -60/-80°C
Cultivo Leishmania Sangre no coagulada (con heparina pref.) ≤15 min, TA
Parásitos Sangre no coagulada (con EDTA) ≤15 min, TA
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Tabla 3.- Continuación

Muestra Determinación Envases TRANSPORTE CONSERVACIÓN
Tiempo y temperatura Tiempo y temperatura
Tracto respiratorio Bacterias Transporte para anaerobios/Estéril ≤15 min, TA ≤24 h, TA
superior (sinusal) Hongos Estéril
Tracto respiratorio Bacterias/Hongos Torunda con medio de transporte ≤2 h, TA ≤24 h, TA
superior (faríngeo)
Tracto respiratorio Antígeno S. pyogenes Torunda seca (Dacrón/algodón) ≤2 h, TA ≤72 h, 2-8°C
superior (faríngeo)
Virus Torunda seca1 Transferir a TV, +24 h, -60/-80ºC
≤24 h, 2-8°C
Tracto respiratorio Bacterias/Hongos Torunda con medio de transporte ≤2 h, TA ≤24 h, TA
superior (nasal)
Bacterias/Hongos Torunda con medio de transporte ≤2 h, TA ≤24 h, TA
Virus Torunda seca1 Transferir a TV, +24 h, -60/-80ºC
≤24 h, 2-8°C
Tracto respiratorio Bordetella pertussis Torunda seca de alginato Inmediato/2-8°C
superior (nasofaríngeo)
Tracto respiratorio Bacterias/Hongos Estéril ≤2 h, TA ≤24 h, 2-8°C
Inferior2/esputo
Virus Estéril Transferir a TV, +24 h, -60/-80ºC
≤24 h, 2-8°C
1
Para virus: Se aceptan torundas de algodón, dacrón o rayón con bastón de aluminio o plástico. No aceptar torundas de alginato o con bastón de madera. 2Muestras del tracto respiratorio inferior: aspirado bronquial,
lavado broncoalveolar, cepillado por telescopado, aspirado traqueal, punción transtorácica aspirativa con aguja ultrafina.
Abreviaturas: TA: temperatura ambiente, TV: medio de transporte de virus; SAF: acetato sódico-formalina, FOR: 10% formalina, MIF: mertiolato-ioduro-formalina; pref.: preferentemente.
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Tabla 4.- Sistemas de transporte para la investigación de microorganismos aerobios

Sistema de transporte Comentarios

Torundas con medio de transporte Torundas en tubos de plástico con medio de transporte
que mantiene un pH favorable y previene la desecación de
la muestra.

Torundas de alginato cálcico Útiles para la investigación de Chlamydia spp. y

Bortedetella spp. Pueden ser tóxicas para N.gonorrhoeae,
U. urealyticum y virus útiles para la toma de muestra de
conexiones de catéteres intravasculares.
Torundas de dacrón Útiles para la investigación de virus
Torundas de algodón Pueden inhibir a Chlamydia spp. Cuando la torunda es de
madera, puede inactivar a virus del grupo Herpes e
interferir con las pruebas de identificación de Ureaplasma.

Torundas para exudados nasofaríngeos Torundas flexibles que emplean alambre en lugar de
varilla de madera
Tubos estériles de boca ancha Útiles para el transporte de orinas, esputos,
broncoaspirados, lavados broncoalveolares, heces,
biopsias.

Tubos estériles Líquidos estériles, catéter telescopado, aspirados de

abscesos y heridas
Tubos estériles con medio de transporte o Tubo estéril con medio de transporte (Cary Blair) para
conservante enteropatógenos en heces.
Tubo con fijador (alcohol polivinílico) para parásitos en
heces.
Tubo con conservante (ácido bórico–formiato de sodio)
para orinas. Mantiene la población bacteriana durante 48h
a temperatura ambiente sin necesidad de refrigeración.
Placas de Petri estériles Útiles para pelos, escamas cutáneas y uñas

Tabla 5.- Sistemas de transporte para la investigación de microorganismos anaerobios

Sistema de transporte Comentarios

Torundas con sistemas de transporte
específicos para anaerobios
Viales y tubos con atmósfera anaerobia Contienen un medio de transporte semisólido con un
agente reductor y un indicador. Cualquier coloración azul
de dicho medio indica exposición al aire.

Bolsas de anaerobiosis La muestra se introduce en el interior de una bolsa

impermeable en cuyo interior se introduce un catalizador y
un generador de hidrógeno y CO2.

Jeringa para la obtención de aspirados Cuando no se dispone de ninguno de los sistemas

anteriores o bien la cantidad de muestra es mínima, puede
utilizarse la misma jeringa con la que se ha obtenido. Para
ello hay que eliminar el aire y taponar la aguja con un
tapón de goma.
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Tabla 6.- Consideraciones sobre la toma de las muestras

1. Consideraciones sobre la toma de las muestras del sistema nervioso central

Volumen mínimo
Cultivo Comentarios
recomendado (ml)
Bacterias 1 Enviar el tubo mas turbio
Hongos 2 Descartar Cryptococcus spp.
Micobacterias 2
Anaerobios 2 Abscesos y biopsias
Parásitos 2 Abscesos o biopsias. Naegleria spp. y
Acantamoeba spp. también en LCR.
Virus 1-2

2.- Consideraciones sobre los líquidos estériles

Cultivo Volumen (ml) Comentarios

Bacterias 1-5 Especificar sospecha de artritis gonocócica
Hongos > 10
Micobacterias > 10
Anaerobios 1-5 Usar un medio de transporte con anaerobiosis

3.- Consideraciones sobre las muestras del tracto respiratorio

Cultivo Volumen (ml) Comentarios

Bacterias No aplicable Especificar sospecha de Legionella
Hongos 3-5 Esputos, broncoscopias, aspirados y biopsias
pulmonares
Pneumocystis jiroveci 2 Esputo inducido, lavado broncoalveolar o biopsia
pulmonar
Micobacterias 5-10 Esputo, broncoscopia, aspirados y biopsias pulmonares
Anaerobios 1 Aspirado sinusal, timpanocentesis, aspirados y biopsias
pulmonares
Parásitos 3-5 Amebas, huevos de helmintos, larvas de Echinococcus,
Ascaris y Strongyloides spp.

4. Consideraciones sobre las muestras oculares

Cultivo Comentarios
Bacterias Inocular los medios directamente
Hongos Inocular los medios directamente
Micobacterias No usar torundas
Anaerobios Líquido intraocular
Parásitos Descartar Acantamoeba spp.
Chlamydia No usar torundas de algodón
Virus No usar torundas de alginato cálcico
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Tabla 6.- Continuación

5. Consideraciones sobre las muestras gastrointestinales

Cultivo Comentarios
Bacterias Heces
Biopsia gástrica: Helicobacter pylori
Torunda rectal: Patógenos entéricos (especialmente Shigella spp.) y
Neisseria gonorrhoeae.
Hongos Jugo gástrico, biopsia gástrica, biopsia esofágica
Micobacterias Jugo gástrico, biopsia gástrica, heces
Parásitos Jugo duodenal (Giardia spp y Strongyloides stercoralis)
Biopsia rectal: Entamoeba histolytica
Biopsias intestino delgado: Giardia spp. Cryptosporidium y
Microsporidium spp.
Virus Biopsia esofágica (CMV y Herpes) y biopsia rectal (Herpes).

6.- Consideraciones sobre las muestras de orina

Cultivo Volumen (ml) Comentarios

Bacterias 0,5-1 No válidas orinas de 24 horas
Hongos > 20 No válidas orinas de 24 horas
Micobacterias > 20 No válidas orinas de 24 horas
Anaerobios 1 Sólo en orinas suprapúbicas
Parásitos Orina de 24 Schistosoma haematobium, Trichomonas
horas vaginalis, Onchocerca volvulus
Virus 10-50 No válidas orinas de 24 horas. Adenovirus y CMV

7.- Consideraciones sobre las muestras del tracto genital y enfermedades de transmisión sexual.

Cultivo Muestra recomendada

Neisseria gonorrhoeae Cervical, uretral, anal
Bacterias Cervical, vaginal, secreción prostática
Trichomonas vaginalis Vaginal, secreción prostática
Hongos Anal, vaginal, cervical
Anaerobios Abscesos
Virus Herpes Úlceras genitales
Chlamydia trachomatis Uretral, vulva, cervical
Treponema pallidum Úlceras genitales
Ureaplasma urealyticum Uretra, secreción prostática
Linfogranuloma venéreo Rectal, cervical, uretral, úlceras genitales
Haemophilus ducreyi Úlceras y nódulos genitales

8.- Consideraciones sobre las muestras de piel y tejidos blandos

Cultivo Comentarios
Bacterias Usar aspirados con jeringas o biopsias de tejido preferiblemente
Hongos Dermatofitos, levaduras, filamentosos y hongos dimórficos
Micobacterias Mycobacterium marinum, Mycobacterium fortuitum y Mycobacterium chelonae
Anaerobios Poco comunes en infecciones superficiales, investigar sobre todo en mordeduras y
traumas
Virus Virus herpes simplex y varicella zoster
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4.1. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Y RECHAZO DE muestras en formol), no se aceptarán estas muestras

LAS MUESTRAS/TOMA DE DECISIONES y se informará al servicio solicitante de la inadecuación
El laboratorio de microbiología debe determinar, una vez de la muestra.
recibida la muestra en el laboratorio, si ésta cumple con
los requisitos para ser procesada. Estos requisitos 4.2. MANTENIMIENTO DE MUESTRAS TRAS EL
incluyen entre otros, una correcta identificación, tipo de PROCESAMIENTO
muestra adecuada para la petición, y condiciones Es recomendable mantener las muestras conservadas
adecuadas de transporte y conservación. Es necesario (dependiendo de la muestra/petición: a temperatura
que cada laboratorio establezca y difunda a los servicios ambiente, en estufa de 35-37°C, en nevera de 2-8°C, o
peticionarios sus propios requisitos de la aceptación de congeladas a -20°C ó a –70°C) un tiempo tras su
una muestra para estudio microbiológico. procesamiento. El tiempo de conservación debe ser
aquel que garantice que un problema en el
El laboratorio de microbiología debe disponer también procesamiento o en la interpretación de los cultivos
de un sistema de registro de estas incidencias en el que pueda ser solucionado recuperando la muestra para un
figure la muestra implicada, la persona que realiza la nuevo procesamiento. El tiempo mínimo oscila entre 1-3
recepción de la muestra, el tipo de incidencia, la persona días. Se recomienda guardar tanto las muestras
con la que se contacta del servicio solicitante y la procesadas como las rechazadas (no procesadas).
resolución de la incidencia (si la muestra no se procesa,
si finalmente se decide su procesamiento y en qué 4.3. TRANSPORTE DE MUESTRAS POR
condiciones, etc.). Como sugerencia se podía utilizar el SUPERFICIE Y POR VÍA AÉREA
formato del Anexo 1, Registro de incidencias en la Cada vez es más frecuente la realización de
recepción de las muestras. procedimientos microbiológicos en lugares distantes
al de la toma de muestra. Aunque es obvio que las
Las incidencias más frecuentes en la llegada de una muestras biológicas, sean infecciosas o no, deben
muestra al laboratorio de microbiología y las acciones a estar correctamente empaquetadas y etiquetadas
realizar (toma de decisiones) ante cada caso son las para su transporte y envío, se ha hecho necesario el
siguientes: desarrollo de legislaciones o guías específicas, tanto
- Muestra deficientemente identificada: no se a nivel nacional como internacional, debido al
aceptará una muestra sin identificar, mal aumento del transporte de muestras fuera de los
identificada o en la que no coincidan la recintos hospitalarios y entre los distintos centros
identificación del volante de petición con la de la sanitarios. El objetivo de este desarrollo es el reducir
muestra. En cualquier caso se contactará con el al mínimo posible el riesgo de accidentes.
servicio peticionario haciéndole conocer la 4.3.1.- Transporte internacional aéreo. Las
necesidad de que procedan a la correcta regulaciones internacionales para el transporte de
identificación de la muestra. Si se puede recoger material infeccioso están basadas en las
otra muestra, se solicitará nuevamente. Recomendaciones del Comité de Expertos de las
Dependiendo de la importancia de la muestra, se Naciones Unidas para el Transporte de Artículos
puede optar a su procesamiento antes de la Peligrosos. Estas recomendaciones están incluidas
correcta identificación con el objeto de que no se en las regulaciones de la Unión Postal Universal
deteriore la misma. (UPU), La Organización Internacional de Aviación
- Muestras derramadas: no se aceptarán muestras (OIAC) y la Asociación Internacional de Transporte
claramente derramadas y se solicitará una nueva Aéreo (IATA), todas ellas asesoradas por la OMS.
muestra. Se procederá como en el caso anterior
solicitando una nueva muestra. En el caso de no ser Actualmente, las muestras se clasifican en
posible la recogida de una nueva muestra, desinfectar sustancias infecciosas (clasificadas dentro de uno
externamente el envase o trasvasar la muestra a un de los cuatro grupos de riesgo definidos por la OMS)
contenedor estéril. En este caso, se indicará en el y en muestras para diagnóstico.
informe que la muestra estaba derramada y que los
resultados deben ser interpretados con la debida La modificación en enero de 2003 de la clasificación
precaución. de una muestra como muestra para diagnóstico
- Transporte/conservación inadecuados: si no se permite que las que cumplan este criterio puedan ser
cumplen los requisitos de la tabla 3, se solicitará clasificadas como ONU 3373 y embaladas según las
nueva muestra. En el caso de muestras que no se instrucciones de embalaje 650 del manual de la
puedan volver a recoger (por ejemplo: muestras IATA, con las siguientes excepciones:
quirúrgicas) se puede optar por procesarlas - patógenos del grupo 4 de riesgo.
informando por escrito al servicio solicitante de la - Agentes identificados y patógenos nuevos o
incidencia en la recogida/transporte de la muestra y emergentes.
alertando de que los resultados obtenidos deben ser - Cultivos o “stocks” en grandes concentraciones.
interpretados con la precaución correspondiente. En el En los tres casos anteriores los envíos deberán
caso de que el transporte deficiente invalide seguir siendo clasificados bajo ONU 2814 ó 2900 y
totalmente el estudio microbiológico (por ejemplo,
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embalados de acuerdo con la instrucción del 6. Normas para envío con refrigerantes (dióxido de
embalaje 602 de IATA. carbono y nitrógeno líquido).
7. Ejemplos de formato de los documentos de envío
Sistema básico de embalaje (ver figura 1). Se (los originales pueden obtenerse de la compañía
compone de: transportadora).
4.3.2.- Transporte nacional y local por superficie.
Recipiente primario estanco, a prueba de Otras posibilidades de transporte de material
filtraciones, etiquetado, que contiene la muestra. El biológico incluyen el traslado de muestras dentro de
recipiente debe envolverse en material absorbente. un hospital o centro, de un centro de salud a un
hospital, de un laboratorio a otro, de un hospital a
Recipiente secundario estanco, a prueba de otro dentro de la misma ciudad o a otra ciudad. Estos
filtraciones, que encierra y protege el recipiente servicios de entrega deben ser gestionados por el
primario. Se pueden colocar varios recipientes propio hospital, por el servicio de salud o por
primarios envueltos en un recipiente secundario. Se cualquier organización de transportes o agencia que
debe usar suficiente material absorbente para haya sido autorizada.
proteger a todos los recipientes primarios y evitar
choques entre ellos. Los principios en los que se basa un transporte
seguro son los mismos que se aplican para el
Recipiente externo de envío. El recipiente transporte internacional y la finalidad es que la
secundario se coloca en un paquete de envío que muestra no tenga ninguna posibilidad de salir del
protege al recipiente secundario y su contenido de embalaje en las circunstancias normales de
los elementos externos, tales como daño físico y transporte.
agua, mientras se encuentra en tránsito.
Para el embalaje y transporte de material biológico
Los formularios con datos, cartas y otras en estas situaciones (transporte local por superficie)
informaciones de identificación de la muestra deben se recomienda un embalaje tipo, como el envase
colocarse pegados con cinta adhesiva en el exterior homologado de la figura 1 y se deben tener en
del recipiente secundario. cuenta las siguientes indicaciones:

Para el transporte de sustancias infecciosas se debe 1. Los recipientes de las muestras deben ser
utilizar el sistema de embalaje básico con herméticos y a prueba de fugas de líquidos.
requerimientos específicos de etiquetado y 2. Si el recipiente es un tubo, debe estar cerrado
documentación. herméticamente, con tapa de rosca y colocado en
una gradilla, de tal forma que mantenga su
En los vuelos internacionales está estrictamente posición vertical.
prohibido que los pasajeros transporten sustancias 3. Los recipientes con muestras y gradillas deben
infecciosas con ellos o en su equipaje de mano. colocarse en una caja resistente de metal o
Igualmente está prohibida la utilización del correo plástico y a prueba de fugas de líquido, que
diplomático para el transporte de este tipo de contenga una cubierta segura y que cierre
material. perfectamente.
4. La caja donde se transportan los materiales deberá
La Guía para el transporte de sustancias infecciosas ser asegurada firmemente en el vehículo de
y especímenes diagnósticos, publicada por la OMS transporte.
en 1997, permite un conocimiento detallado de los 5. Cada caja de transporte deberá estar etiquetada
requerimientos específicos para las diferentes de forma adecuada y de acuerdo a su contenido.
situaciones que se pueden plantear ante el envío de 6. Los formularios con los datos de identificación de
material biológico, algunos de los cuales se plantean los especímenes deben acompañar a cada caja de
a continuación: transporte.
7. El vehículo de transporte deberá ir provisto de
1. Cantidad de sustancias infecciosas que pueden material absorbente, desinfectantes, un contenedor
enviarse en un paquete. para desechos a prueba de fugas líquidas y
2. Tipos de etiquetas de riesgo para sustancias guantes resistentes de uso múltiple.
infecciosas y para microorganismos genéticamente El transporte de material biológico requiere una
modificados. buena colaboración entre el remitente, la compañía
3. Tipos de etiquetas de riesgo para microorganismos de transporte y el destinatario, y cada uno debe
no infecciosos. asumir sus responsabilidades para garantizar que el
4. Etiquetas para envío con dióxido de carbono (hielo producto llega a su destino oportunamente y en
seco). buenas condiciones.
5. Información que debe figurar en la etiqueta.
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Figura 1.- Sistema básico de embalaje

5. MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS Y rango de aceptación, anotar la incidencia y realizar las

PRODUCTOS acciones frente a esa variación. Estas acciones, por un
Los medios de cultivo y reactivos recomendados para lado, deben asegurar los resultados derivados de los
el procesamiento de muestras se detallan en la tabla cultivos y por otro corregir esa desviación.
7. Las condiciones de almacenamiento (temperatura,
humedad, etc.) de los reactivos y medios de cultivo De una manera genérica se sugieren los siguientes
utilizados deben ser establecidas, controladas y intervalos de aceptación:
revisadas (ver más detalles en el apartado 6). • estufas de 35-37°C se acepta una mínima superior o
igual a 34°C y máxima inferior o igual a 37,5°C
Se deben realizar, con periodicidad (semanal, mensual, • estufas de 42°C se aceptan variaciones entre 40-43°C
trimestral, etc.) establecida por el propio laboratorio, una • estufas de 30°C se aceptan variaciones entre 28-32ºC
revisión de los materiales almacenados (cantidad, Para las neveras el intervalo de tolerancia que se acepta
caducidades, estado general) con el fin de comprobar el es generalmente de 2º-8°C, aunque puede variar en
estado de los mismos, verificando su correcta ubicación función de los reactivos que contengan.
en los espacios identificados y definidos para ellos en el
almacén y su aptitud para el uso (ver como ejemplo de Todos los termómetros utilizados en la medida de
formato el del Anexo 2, Revisión de almacén). temperaturas de los aparatos se han de verificar
mediante un termómetro de referencia calibrado. Se
6. APARATOS Y MATERIAL introducirá el termómetro utilizado para la medición de la
Los equipos habituales necesarios en el procesamiento temperatura y el termómetro calibrado en el equipo
de una muestra para estudio microbiológico son: correspondiente (nevera, congelador o estufa) durante
- Estufas - Congeladores un mínimo de 15 minutos. Se aceptarán aquellos
- Neveras - Centrífugas termómetros cuyos desvíos no sobrepasen los límites
establecidos para cada uso concreto. La periodicidad de
De manera periódica (preferiblemente a diario) debe la verificación de los termómetros con el termómetro
controlarse la temperatura (y humedad/presión de CO2 calibrado debe ser establecida por el propio laboratorio.
si fuera necesario) de cada estufa/nevera/congelador al
inicio de la jornada de trabajo con un termómetro Existen sistemas automáticos para el control de la
situado permanentemente en el centro de cada equipo. temperatura, humedad, presión de CO2, etc., que
El termómetro debe permitir la medida de la temperatura controlan de una manera permanente (en intervalos de
máxima y mínima alcanzadas. Se anotará en la hoja de 15-20 minutos) los anteriores parámetros con gran
registro de temperatura de cada aparato (como ejemplo fiabilidad y que utilizan sondas de referencia verificadas
se propone la del Anexo 3, Registro de temperatura) y por organismos certificados. Estos sistemas alertan de
en el caso de temperaturas mínima o máxima fuera del los desvíos que se producen de una manera más rápida
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Tabla 7.- Recomendaciones de medios de cultivo y tinción de Gram para muestras

microbiológicas seleccionadas

Muestras/Microorganismo Gram AS ACH MCK Tio/BHI Otros

1
Biopsias X X X X X Medios anaerobios
Biopsias (intestinal, colon, rectal) C.difficile
Enteropatógenos
Biopsias gástricas X Helicobacter pylori
Catéter vascular X
Conexiones/Piel pericatéter X
Genitales
Rectal X S. agalactiae
Uretral X X Thayer Martin
Cervical X X Thayer Martin
Secreción prostática X X X X
Vaginal X S. agalactiae
Heces Caldo Selenito, SS o similar
Campylobacter selectivo
Sangre ampicilina
1
Heridas profundas, mordeduras, X X X X X Medios anaerobios
quemaduras, úlceras, abscesos
Heridas superficiales X X X X X
1
Jugo gástrico X X X X Medios anaerobios
Líquidos estériles
1
L. ascítico, peritoneal, X X X X X Medios anaerobios
pericárdico, sinovial
L. pleural X X X X X BCYE
1
Medios anaerobios
Líquido cefalorraquídeo X X X X
Ocular
Exudado conjuntival X X
1
L. intraocular X X X X X Medios anaerobios
Oído externo X X X
Timpanocentesis X X X X X
Orina (micción, sondaje) X X Agar Cled
1
Orina suprapúbica X X X X Medios anaerobios
Tracto respiratorio inferior
Broncoaspirado X X X X BCYE
Cepillado bronquial con X X X X BCYE
1
telescopado Medios anaerobios
Lavado broncoalveolar X X X X BCYE
Esputo X X X X
Tracto respiratorio superior
1
Aspirado sinusal X X X X X Medios anaerobios
Faríngeo X Alternativa CNA
Nasal X Agar Manitol sal
Clostridium difficile CCFA
E.coli O157H7 Sorbitol-MCK
Bordetella pertussis Bordet Gengou
IFD si no cultivo
Helicobacter pylori X Agar Helicobacter
Thayer Martin
Agar Brucella
Legionella BYCE
Neisseria gonorrhoeae X Thayer Martin
Streptococcus agalactiae X Todd-Hewitt
Agar Granada
Vibrio TCBS
Yersinia CIN
1:
medios anaerobios: agar sangre para anaerobios (Brucella agar), agar feniletanol para anaerobios.
agar sangre lacada-vancomicina-kanamicina (ASKVL), agar Bacteroides bilis esculina (BBE)
Abreviaturas: AS: Agar sangre; ACH: Agar chocolate; MCK: Agar MacConkey; Tio/BHI: Caldo tioglicolato ó infusión
cerebro-corazón de buey; BCYE: agar enriquecido para cultivo de Legionella; CNA: agar sangre colistina-ácido nalidíxico;
CCFA: agar cicloserina-cefoxitina-fructosa-yema de huevo; TCBS: agar tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa; CIN:
agar cefsulodina-irgasán-novobiocina
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que el control manual, controlan todos los equipos del - Traspasar la muestra al interior de un mortero
laboratorio y generan los informes de estos estéril y añadir 1-2 ml de caldo de cultivo
parámetros. - Con ayuda de la mano del mortero triturar la
7. PROCESAMIENTO muestra mediante movimientos rotatorios
7.1. RECEPCIÓN DE LA MUESTRA - Traspasar la muestra utilizando una pipeta
Cada laboratorio de microbiología debe disponer Pasteur estéril a un contendor estéril
de unas normas de recepción y aceptación de 7.2.1.2.3. Mediante Stomacher
muestras para diagnóstico microbiológico. En el acto - Colocar la muestra en el interior de una bolsa
de la aceptación de muestras por el laboratorio se de Stomacher y añadir 1-2 ml de caldo de
deben comprobar los siguientes aspectos: cultivo
- La trazabilidad, es decir, la correspondencia de la - Colocar la bolsa en el interior del Stomacher,
muestra con el volante de petición (con el dejando unos centímetros de la bolsa
paciente). En la petición se debe incluir: sobresalir sobre la tapa del Stomacher.
- Nombre completo del paciente, número de - Cerrar la tapa y conectar el Stomacher durante
historia o de la seguridad social o DNI 1 a 5 minutos.
- Servicio solicitante, nombre del médico - Desconectar el Stomacher, extraer la bolsa y
solicitante traspasar su contenido a un contenedor estéril.
- Tipo de muestra (descripción completa y Las muestras que se procesen para hongos no se
método de obtención) homogenizan sino que se deben cortar en pequeños
- Hora y/o fecha de recogida trozos con la ayuda del bisturí y se inoculan
- Enfermedad de base y motivo de la petición directamente sobre los medios de hongos con objeto
- El correcto transporte de la muestra para la de evitar que determinados hongos no septados
petición solicitada sean inviables.
- La petición correcta de determinaciones 7.2.2.- Preparación de extensiones
microbiológicas 7.2.2.1. Mediante impronta: Piezas de tejido
- Colocar el tejido en una placa de Petri y cortar
7.2. PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA una porción con la ayuda de una hoja de bisturí
El laboratorio someterá a la muestra a un - Con unas pinzas, tomar la pieza cortada y
procesamiento en función de sus protocolos de realizar impresiones por la superficie del corte
trabajo y de la información que aporta el servicio sobre un portaobjetos
solicitante sobre la muestra y el paciente. Así el 7.2.2.2. Extensiones finas: material muy
procesamiento dependerá de varios factores: purulento
• Petición del servicio solicitante - Tomar una porción de la muestra y colocarla
• Tipo de muestra/técnica de obtención sobre un portaobjetos
• Diagnóstico del paciente/enfermedad de base - Colocar otro portaobjetos sobre la muestra y
• Motivo de petición presionar los dos portaobjetos
• Cualquier otra información aportada en el volante - Desplazar el portaobjetos superior sobre el
de la petición que contiene la muestra hasta separarlos
De una manera general podemos considerar estos - Repetir este último paso hasta conseguir una
tipos de procesamiento de las muestras para extensión fina
microbiología de la siguiente forma: 7.2.2.3. Líquidos
7.2.1.- Pretratamiento de la muestra - Depositar una gota de líquido sobre un
7.2.1.1. Centrifugación portaobjetos y dejar secar
- Centrifugar todos los líquidos en volumen - Citocentrifugar unas gotas de líquido 5-10
superior a 1ml a 2.500 rpm durante 15 minutos min. a velocidad media
- Centrifugar sangre a 3.500 rpm durante 3-5
minutos para detección de antígenos y/o 7.2.2.4. Muestras en torunda
anticuerpos - Colocar la torunda sobre un portaobjetos
- Otras técnicas de concentración específicas: - Añadir sobre la torunda una pequeña
precipitación en etanol, ultracentrifugación cantidad de caldo de cultivo
selectiva, etc. - Realizar movimientos rotatorios, exprimiendo
7.2.1.2. Homogeneización la torunda sobre el portaobjetos
7.2.1.2.1 Mediante hoja de bisturí 7.2.3. Inoculación de la muestra en los medios de
- Traspasar la muestra a una placa de Petri cultivo: selección de los medios: (ver tabla 7)
estéril. Con ayuda de una hoja de bisturí 7.2.3.1. Piezas no triturables
desmenuzar el tejido hasta obtener una Si la pieza es pequeña, introducirla en un caldo
consistencia homogénea. de cultivo e incubar 24 horas tras lo cual se
- Traspasar la muestra homogenizada a un harán subcultivos a los medios necesarios.
contenedor estéril con ayuda de una pipeta - Si la muestra es grande, añadir al contenedor
Pasteur. en el que se recibe 10-20 ml de caldo de
7.2.1.2.2. Mediante mortero enriquecimiento e incubar inmediatamente.
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Tras 24 horas realizar subcultivos a los medios - El aislamiento de Campylobacter spp. de

necesarios. heces requiere una temperatura de incubación
7.2.3.2. Muestras recibidas en jeringas o tubos de 42ºC
estériles - La mayoría de los cultivos para hongos se
- Inocular 2 ó 3 gotas de la muestra en uno de incuban a 30°C
los cuadrantes de la placa de Petri 7.2.4.2. Atmósferas de incubación
- Realizar estriamientos de la muestra mediante - Aerobiosis
un asa estéril por todos los cuadrantes de la - Atmósfera enriquecida con 5-7% de CO2
placa - Atmósfera microaerofílica para el aislamiento
- Inocular unas gotas de la muestra en un caldo de Campylobacter: 5% de O2, 10% CO2 y 85%
de cultivo de N2.
7.2.3.3. Muestras recibidas en torundas - Atmósfera de anaerobiosis
- Hacer rotar la torunda varias veces en uno de
los cuadrantes de la placa Cada laboratorio debe realizar una vigilancia de la
- Con un asa estéril realizar estrías desde la calidad de los medios de cultivo que utiliza, tanto de
zona de la descarga por el resto de los los preparados en el propio laboratorio (apariencia,
cuadrantes de las placas. crecimiento/inhibición, esterilidad) como de los que
- Introducir la torunda en un caldo de cultivo y se adquieran comercialmente.
exprimirla bien mediante movimientos
rotatorios sobre las pares del tubo. Cortar la El laboratorio debe solicitar al proveedor de medios
parte superior y mantener en incubación una de cultivo los certificados de los controles de calidad
porción de la misma en el interior del tubo con donde deben estar incluídas las características
caldo de cultivo. físicas y químicas que definen al medio de cultivo.
7.2.3.4. Técnica de Maki para cultivo de Esos certificados deben conservarse en el
catéteres intravasculares laboratorio. Asimismo, se deberán realizar controles
- Con la ayuda de una asa o de unas pinzas de calidad a los medios adquiridos comercialmente.
estériles extraer el catéter de su envase. El propio laboratorio debe elegir tanto la periodicidad
- Si mide más de 2-4 cm, cortarlo con un bisturí como la selección de los medios a los que realizar el
hasta esa longitud. control de calidad en función del tipo de medios que
- Depositarlo en una placa de agar sangre y utilice, la variedad y los datos históricos de la
rodar desde un extremo al otro de la placa 3-4 conformidad de los controles realizados por el
veces laboratorio con las características que el proveedor
7.2.3.5. Cultivos semicuantitativos (conexión facilite: un medio estable y que no haya ocasionado
catéteres/piel pericatéter) problemas de crecimiento según registros previos se
- Extender la muestra con la torunda seca por debe controlar menos que uno que sea menos
toda la placa de agar sangre como si de un estable y haya ocasionado problemas en su uso. El
cultivo cuantitativo de orina se tratara laboratorio debe generar registros de este control de
7.2.3.6. Cultivos cuantitativos (orina, medios adquiridos de proveedores y conservar estos
broncoaspirados, secreciones traqueales, registros para poder evaluar los medios y
lavados broncoalveolares) reconsiderar permanentemente el control de calidad
- En el caso de muestras respiratorias fluídas, de los mismos. Como ejemplo de formato para el
agitar en vórtex durante unos segundos. Si no registro de control de medios adquiridos
se consigue una buena homogeneización, comercialmente se propone el formato del Anexo 4,
añadir suero salino y agitar en vórtex de Control de medios preparados. Con este control no
nuevo. Indicar en los medios de cultivo la sólo se evalúa la conformidad del laboratorio con los
dilución aproximada realizada con el suero medios que adquiere ya preparados sino que
salino. En el caso de la orina pasar también se evalúan las condiciones de
directamente al siguiente paso. procesamiento, estufas y atmósferas utilizadas.
- Esterilizar un asa calibrada de volumen Para el control de los medios se deben utilizar
adecuado (por ejemplo de 0,0025 mL) con el preferentemente cepas de colección (ATCC, CECT u
incinerador o mediante llama. otras colecciones) pero en el caso de no tener
- Enfriar el asa e inocular la muestra con la acceso a estas cepas se podrán utilizar cepas
ayuda del asa en los medios adecuados, aisladas en el propio laboratorio con características
realizando un cultivo cuantitativo por toda la perfectamente definidas.
superficie de la placa.
7.2.4. Incubación 8. OBTENCIÓN Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS
7.2.4.1. Temperatura Las incidencias surgidas en la recogida de la muestra
- La mayoría de los cultivos bacterianos se para estudio microbiológico se deben informar lo antes
incuban a 35-37ºC posible al servicio solicitante con el objeto de que la
resolución sea inmediata. Cuando la información sea
telefónica, los interlocutores deben quedar identificados,
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y esta información debe seguirse siempre de un informe 8. Miller, J.L. 1996. A guide to specimen management in
escrito a la mayor brevedad posible. clinical microbiology. American Society for
Microbiology. Washington, D.C.
9. RESPONSABILIDADES 9. Murray, P.R. 1998. Pocket guide to clinical
nd
microbiology. 2 ed. American Society for
El proceso de recogida de la muestra es Microbiology. Washington, D.C.
responsabilidad del servicio solicitante o del laboratorio 10. Murray, P.R., E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover,
de microbiología si se realiza en él la toma de la and R.H. Yolken. 1999. Manual of Clinical
muestra. Microbiology, 7
th
ed. American Society for
La información sobre las normas de recogida, Microbiology. Washington, D.C.
transporte y conservación y su distribución a los 11. Orden de 4 de diciembre de 2001 por la que se
servicios solicitantes es responsabilidad del laboratorio actualizan las instrucciones técnicas para el
de microbiología. transporte sin riesgos de mercancías peligrosas por
El procesamiento de la muestra es responsabilidad vía aérea. Suplemento del BOE nº 299. de 14 de
del laboratorio de microbiología. diciembre de 2001. Fascículo primero. pp. 68-71.

10. ANOTACIONES AL PROCEDIMIENTO

Todo el personal del laboratorio de microbiología
deberá conocer las normas generales de seguridad.
El laboratorio de microbiología debe establecer las
normas de seguridad en un Manual de Seguridad y
distribuirlo a todo el personal que trabaje en el
laboratorio. Para más información, se puede consultar
el procedimiento número 10 de la SEIMC sobre
Seguridad en el Laboratorio de Microbiología en el
que de detallan los niveles de contención necesarios
para cada microorganismo.

11. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Todas las limitaciones del proceso de recogida,
transporte, conservación y procesamiento de
muestras han sido expuestas a lo largo del
documento. Estas limitaciones deben quedar
registradas con el objeto de que puedan ser
medidas periódicamente y de poder disponer de
datos de su evolución correspondientes. Cada
laboratorio de microbiología debe establecer
indicadores de los procesos de recogida, transporte,
conservación y procesamiento de muestras con el
objeto de llevar a cabo las correspondientes
acciones cuando estos indicadores estén fuera del
rango de los límites establecidos.

12. BIBLIOGRAFÍA
1. Enmiendas propuestas por Portugal y España a los
anexos A y B del Acuerdo Europeo sobre Transporte
Internacional de Mercancías Peligrosas por carretera
(ADR), hecho en Ginebra el 30 de septiembre de
1957. Suplemento del BOE nº 70 de 22 de marzo de
2002. Fascículo primero, pp. 178-184.
2. Fleming, D.O. D.L. Hunt. 2000. Biological safety:
rd
principles and practices. 3 ed. American Society for
Microbiology. Washington, D.C.
3. Isenberg, H. 1992. Clinical Microbiology Procedures
Handbook. American Society for Microbiology.
Washington, D.C.
4. ISO 9001:2000. Sistema de gestión de la calidad.
Requisitos.
5. ISO 9001:2000. Sistema de gestión de la calidad.
Fundamentos y vocabulario.
6. ISO 9004:2000. Sistema de gestión de la calidad.
Directrices para la mejora del desempeño.
7. Mandell, G., J. Bennett, and R. Dolin. 2000. Principles
th
and practice of infectious diseases, 5 ed. Churchill
Livingston, New York.
 Servicio de Microbiología Recogida, transporte y Fecha:
procesamiento general de muestras PNT-RPT-01
Hospital........................... en el laboratorio de microbiología Edición Nº 01 Página 17 de 20

Anexo 1.- Registro de incidencias en la recepción de las muestras

Fecha: / /
INTERPRETAR
Persona que CONTACTO
Tipo Servicio NO PROCESAR CON
Nº detecta INCIDENCIA
1
SERVICIO RESOLUCIÓN 1
Muestra Muestra Peticionario POR : PRECAUCIÓN
incidencia PETICIONARIO 1
POR :

OBSERVACIONES: Firma Facultativo:

1
Describir la incidencia: derramada; transporte inadecuado; mal identificada; no especificada petición; no procede petición; falta muestra,
etc.
Registro de incidencias en la recepción de las muestras.
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Anexo 2.- Revisión de almacén

REVISIÓN REALIZADA

DESCRIPCIÓN DE LAS INCIDENCIAS DETECTADAS

Fecha: Firma (Responsable de Almacén)

RESOLUCIÓN (ACCIONES EMPRENDIDAS)

RESPONSABLES:

Fecha: Firma:

Registro de revisión de almacén.

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procesamiento general de muestras PNT-RPT-01
Hospital........................... en el laboratorio de microbiología Edición Nº 01 Página 19 de 20

Anexo 3.- Registro de temperatura

APARATO Nº: LOCALIZACIÓN:
DESCRIPCIÓN:
MARCA: MODELO
Nº SERIE:
CASA COMERCIAL: PROPIETARIO:
FECHA DE COMPRA:

REGISTRO DE TEMPERATURA
Anótese diariamente la temperatura y la fecha del control, así como el nombre legible de la
persona que lo realizó.
No olviden controlar las temperaturas máxima y mínima alcanzadas y anotar cualquier
incidencia observada.

Límite aceptado de temperaturas:

FECHA TEMP INCIDENCIA FIRMA LEGIBLE

Registro de temperatura.
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Anexo 4.- Control de medios preparados

Control de (medio controlado)
Cepa utilizada:
Resultado esperado:
Mes Año

Fecha Crecimiento Aspecto colonia/ Valoración: Nombre/

(Sí/No) Observaciones Correcta=1 Firma
Incorrecta=2 legible

Formato de Control de medios preparados.