DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA SALUD Y LA VIDA

CARRERA DE INGENIERÍA AMBIENTAL

CURSO BIOQUÍMICA AMBIENTAL - TALLER PRÁCTICO

“DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN
MICROORGANISMOS DE ORIGEN LAGUNAR”

Integrantes:
- Chirinos Medina, Heidy
- Dextre Linares, Claudia Andrea
- Diaz Campoverde, Angela
- Gutierrez Huincho, Jonel

Docente:
Vélez Azañero, Armando Jesús Edilberto

2021-2
INTRODUCCIÓN
Los lípidos son aquellas moléculas orgánicas cuya propiedad más resaltante es su
insolubilidad en el agua; asimismo, pueden cumplir diversas funciones como servir
de estructura, transporte y como reserva de energía de larga duración (Hernandez,
2019). Los ácidos grasos (AG) son moléculas que conforman a los lípidos y que le
proporcionan las características mencionadas previamente; estos pueden ser
saturados e insaturados, se les denomina saturados debido a que no presentan
enlaces dobles y se les puede encontrar fácilmente en tejidos animales, mientras
que por el contrario, los AG insaturados van a presentar enlaces dobles a lo largo su
cadena y se les puede hallar en tejidos vegetales (Vanbergen, et al, 2019).
Asimismo, en estas biomoléculas se encuentran también los fosfolípidos, que son
las moléculas que conforman las membranas biológicas aportándole una propiedad
anfipática que la hace ser permeable y selectiva con respecto al medio extracelular
(López, 2019).

Por otra parte, en ambas células, tanto vegetales como animales, los triglicéridos se
encargan del almacenamiento energético; estos son lípidos simples, cuya estructura
la conforma un glicerol y tres ácidos grasos unidos por enlace éster (Carvajal, 2017).
En el campo de la ingeniería ambiental, estos lípidos son muy empleados en
evaluaciones de impacto ambiental, puesto que son indicadores de contaminación
por carga orgánica en cuerpos de agua, dicha contaminación se determina hallando
la concentración de triglicéridos en los microorganismos acuáticos (Sanchez, 2020).
Un ejemplo de su aplicación se da en los estudios de eutrofización, que en la
actualidad es uno de los mayores problemas del recurso hídrico, que indica el
envejecimiento de los lagos, producido por un aumento excesivo de nutrientes, de
las cuales, los microorganismos toman provecho para su crecimiento, ocasionando
un aumento desproporcionado de protozoarios y algas y por ende, la disminución de
la entrada de luz, oxígeno disuelto en agua y la muerte de peces (Miranda, et al.,
2018).

El objetivo del trabajo de investigación fue determinar estadísticamente la relación

que existe entre los triglicéridos y el oxígeno disuelto en agua de sistemas lénticos.
La importancia de este trabajo se centra en dar a conocer la actividad de los
triglicéridos dentro de los cuerpos de agua, puesto que es un indicador de
contaminación por carga orgánica.
MATERIALES Y MÉTODOS

El método de Imhoff es utilizado como unidad de tratamiento de las aguas

residuales, específicamente, en la clasificación de tratamiento primario (Lizana,
2018). Su operación es muy simple y se basa en la constante remoción de las
espumas y en el drenaje periódico de los lodos digeridos. El tanque Imhoff puede
ser de forma rectangular o circular, y se divide de una cámara de sedimentación,
una cámara de digestión de lodos, y el área de ventilación y acumulación de natas
(CEPIS/OPS, 2005). Gracias a todas las características que posee, es que este
método es el más adecuado para la determinación de trigliceridos en
microorganismos de origen lagunar.

Debido a las circunstancias actuales por el COVID-19, los resultados no fueron

hallados en un laboratorio y los datos fueron otorgados por el docente; asimismo,
los resultados se obtuvieron siguiendo las indicaciones dadas durante clase.
Primero, con los datos de las absorbancias dadas, se calcularon las
concentraciones tanto para triglicéridos, como para oxígeno disuelto en agua. Luego
se procedió a calcular la existencia de una diferencia significativa entre entre las
muestras de las lagunas, para triglicéridos y oxígeno disuelto. Después, se
determinó cuánto y entre qué muestras eran las diferencias registradas. Finalmente,
se busca hallar una correlación entre las muestras estudiadas.

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Las muestras fueron extraídas a un metro de la orilla de tres lagunas con la

ayuda de un cucharón de muestreo con un volumen aproximado de 1.5L
cada uno que posteriormente se procede a utilizar el Método de Imhoff en el
cual 1L de cada muestra será vertido en un tubo de Imhoff, debido a que
tienen que permanecer 24 horas previas al inicio que serán puestos en los
soportes de tubo Imhoff, ya que se dará la precipitación en este transcurso de
tiempo, posterior al reposo con ayuda de una jeringa se retira el agua hasta
los 15 ml de cada tubo con cuidado de no resuspender el precipitado que
luego será vertido en los tubos de centrífuga de 15 ml, los cuales deben
poseer un peso constante, posterior a esto se centrifuga a 3000 RPM durante
10 min y se elimina el sobrenadante.
 CUANTIFICACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS EN CUERPOS LAGUNARES

Terminando el centrifugado, se adicionan 2 ml de agua destilada, y se

homogeniza, posteriormente se procede agregar 4 ml de metanol y se agita
durante dos minutos para después agregar 2 ml de cloroformo y agitar
durante dos minutos. Luego se vuelve añadir 2 ml más de cloroformo,
homogeneizar las muestras y dejar reposar un minuto, posteriormente se
agrega 2 ml de agua destilada, se homogeniza y se vuelve a dejar reposar
durante un minuto, finalmente se centrifugó el contenido a 3000 RPM durante
15 minutos.

Luego del centrifugado se extraerá 2 ml de la zona basal del tubo de las

muestras, que serán colocados en un tubo de microcentrífuga, el cual se
colocará en la estufa y se dejará reposar durante cinco minutos a 65°C.
Después para cuantificar los triglicéridos, se prepara un blanco de 1 ml de
reactivo enzimático, un estándar de 0.1 ml y 1ml de reactivo enzimático,
también se prepara las muestras problemas con 0.1 ml de cada muestra
extraída del lago y 1 ml de reactivo enzimático. La enzima artificial tiene como
función generar color para la cuantificación de triglicéridos mediante
espectrofotometría, posteriormente se llevará a una incubación de cinco
minutos a una temperatura de 37 °C. Finalmente, se procede a leer las
absorbancias a 520 nm (Tabla 1). De igual forma se proporcionaron los datos
de las absorbancias para el oxígeno disuelto en los tres cuerpos lagunares
(Tabla 2).

Tabla 1. Datos de absorbancia de triglicéridos en cuerpos lagunares con respecto a

las muestras problemas y muestra control

CONTROL M1 M2 M3
R1 0,458 0,684 0,932 1,283
R2 0,446 0,634 0,981 1,203
R3 0,463 0,651 0,999 1,254

Tabla 2. Datos de absorbancia del oxígeno disuelto en cuerpos lagunares con

respecto a las muestras problemas y muestra control
 CONTROL M1 M2 M3
R1 11,23 9,45 8,23 7,78
R2 10,98 9,23 8,04 7,56
R3 11,02 9,34 7,9 7,63

Tabla 3. Estándar de la concentración de triglicéridos

ABSORBANCIA ST 1,451
CONCENTRACIÓN ST 100 mg/ml

CÁLCULO DE LA CONCENTRACIONES

Con los datos de las absorbancias para los triglicéridos y los de oxígeno
disuelto, se procede a determinar las concentraciones de las demás muestras
problemas (lagunas) y para cada repetición, todo ello mediante la regla de
tres simple.

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Para realizar el análisis estadístico entre las pruebas, se utilizó el software

SPSS versión 2.5 en el cual se realizó un análisis de varianza ANOVA con un
nivel de significancia del 5%, con la finalidad de comprobar si la
concentración de triglicéridos y oxígeno disuelto en las lagunas control y
contaminadas mostraron diferencia significativa. En base a ese resultado, se
realizaron las comparaciones entre las mismas muestras y la muestra control,
mediante la Prueba Tukey, para identificar en qué muestras existía una
diferencia significativa, con respecto a la muestra control. Finalmente, con las
muestras, que marcan dicha diferencia significativa, ya halladas, se analiza la
correlación entre las variables concentración de triglicéridos y la
concentración de oxígeno disuelto.

RESULTADOS

TRIGLICÉRIDOS

CONCENTRACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
 Las concentraciones de triglicéridos, de todas las muestras de las lagunas,
en cada repetición, son mayores que en las de la prueba control, siendo los
valores más concentrados de triglicéridos, los provenientes de la Laguna 3
(Muestra 3) con valores entre 86.42 hasta 88.42 mg/ml. Siendo, las
concentraciones de la segunda laguna (Muestras 2) son también altas pero
menores a la de la Laguna 3, ya que sus valores van entre 64.23 hasta 68.85
mg/ml. Por otro lado, en las muestras de la Laguna 1, sus concentraciones no
fueron tan altas a comparación de las otras dos mencionadas, ya que estas
iban desde 43.69 hasta 47.14 mg/ml (Gráfico 1).

Gráfico 1. Concentraciones de Triglicéridos para cada repetición en cada muestra

de las lagunas estudiadas.

PRUEBA ANOVA

Para demostrar que existe una diferencia entre las concentraciones de

triglicéridos, se utilizó el análisis de varianza ANOVA, en el cual, se demostró
que existe una diferencia significativa (p<0.05; Tabla 4).

Tabla 4. Resultados del análisis de la Prueba ANOVA para las muestras de

Triglicéridos.

gl F Sig.
 ENTRE GRUPOS 3 408.016 .000

PRUEBA TUKEY

Al demostrar la existencia de una diferencia significativa entre las

concentraciones de triglicéridos de las lagunas, se realiza ahora una Prueba
Tuckey, para demostrar que existe una diferencia entre concentraciones de
las muestras y el control (p<0.05; Tabla 5).

Tabla 5. Resultados del análisis de la Prueba Tukey para las muestras de

Triglicéridos.

DIFERENCIA DE MEDIDAS SIG.

MUESTRA 1 -13.83 .000

CONTROL MUESTRA 2 -35.49333 .000

MUESTRA 3 -54.51433 .000

CONTROL 13.83 .000

MUESTRA
1 MUESTRA 2 -21.66333 .000

MUESTRA 3 -40.68433 .000

CONTROL 35.49333 .000

MUESTRA
2 MUESTRA 1 21.66333 .000

MUESTRA 3 -19.021 .000

CONTROL 54.51433 .000

MUESTRA
3 MUESTRA 1 40.68433 .000

MUESTRA 2 19.021 .000

OXÍGENO DISUELTO

CONCENTRACIÓN DE OXÍGENO DISUELTO

 Con respecto a las concentraciones de oxígeno disuelto en las repeticiones
de cada muestra, las mayores son de la laguna control; mientras que las
repeticiones de la Laguna 3 (Muestra 3), se obtuvieron los valores más bajo s
de oxígeno disuelto, con valores entre 7.56 hasta 7.78 mg/ml. Las
concentraciones de oxígeno disuelto de la muestra de la primera laguna son
relativamente altos, ya que tienen valores entre 9.23 a 9.45 mg/m. Por otro
lado, para las muestras de la segunda laguna (Muestra 2), las
concentraciones varían entre 7.9 a 8.23 mg/ml (Gráfico 2).

Gráfico 2. Concentraciones de Oxígeno Disuelto para cada repetición en cada

muestra de las lagunas estudiadas.

PRUEBA ANOVA

Para demostrar que existe una diferencia entre las concentraciones de

oxígeno disuelto,se utilizó el análisis de varianza ANOVA, en el cual, se
demostró que existe una diferencia significativa (p<0.05; Tabla 6).

Tabla 6. Resultados del análisis de la Prueba ANOVA para las muestras de

Oxígeno Disuelto.

gl F SIG.
 ENTRE GRUPOS 3 405.604 .000

PRUEBA TUKEY

Al demostrar la existencia de una diferencia significativa entre las

concentraciones de oxígeno disuelto de las lagunas, se procede a realizar
una Prueba Tuckey, para demostrar que existe una diferencia entre
concentraciones de las muestras y el control (p<0.05; Tabla 7).

Tabla 7. Resultados del análisis de la Prueba Tukey para las muestras de

Triglicéridos.

DIFERENCIA DE MEDIDAS p-valor

MUESTRA 1 1.73667 .000

CONTROL MUESTRA 2 3.02 .000

MUESTRA 3 3.42 .000

CONTROL -1.73667 .000

MUESTRA
1 MUESTRA 2 1.28333 .000

MUESTRA 3 1.68333 .000

CONTROL -3.02 .000

MUESTRA
2 MUESTRA 1 -1.28333 .000

MUESTRA 3 0.4 0.025

CONTROL -3.42 .000

MUESTRA
3 MUESTRA 1 -1.68333 .000

MUESTRA 2 -0.4 0.025

CORRELACIONES
Con la correlación de Pearson se determina que existe una relación lineal
perfecta, además las variables presentan una relación inversamente
proporcional, eso quiere decir que cuando aumenta la concentración de
triglicéridos en un 100% el oxígeno disuelto disminuye al 98,4% (Tabla 8).

Tabla 8. Datos de la correlacion de la laguna 1

CORRELACIÓN

Correlación de - 0.984
Pearson
Valor p 0.115

Con la correlación de Pearson se determina que existe una relación lineal

perfecta, además las variables presentan una relación inversamente
proporcional, eso quiere decir que cuando aumenta la concentración de
triglicéridos en un 100% el oxígeno disuelto disminuye al 98,5% (Tabla 9).

Tabla 9. Datos de la correlacion de la laguna 2

CORRELACIÓN

Correlación de - 0.985
Pearson
Valor p 0.111

Con la correlacion de Pearson se determina que existe una relación lineal

perfecta, además las variables presentan una relación inversamente
proporcional, eso quiere decir que cuando aumenta la concentración de
triglicéridos en un 100% el oxígeno disuelto disminuye al 93,5% (Tabla 10).

Tabla 10. Datos de la correlacion de la laguna 3

CORRELACIÓN

Correlación de - 0.935
Pearson
Valor p 0.232
DISCUSIONES

Con respecto a los datos obtenidos, se determinó que existe una mayor cantidad de
triglicéridos en el agua de la muestra de la laguna que las muestras control. Para el
estudio estadístico se utilizó el análisis de varianza ANOVA, en el cual, se demostró
que existe una diferencia sig= (p<0.05), con lo cual demostraría que hay
significancia entre los datos. Estos resultados podrían también deberse a la
presencia de FOGs que están formados por (Glicerol y ácidos grasos) que son
grasas y aceites que se encuentran en los sistemas de alcantarillado, los cuales
contaminan aguas superficiales, causando episodios de eutrofizaciòn, afectando los
ecosistemas acuáticos (Cabanillas, 2020). Por otro lado, estaría relacionado al
aumento de macrófitas por motivo de la agricultura que se desarrolla alrededor de
los cuerpos de agua, ya que los agricultores aplican químicos que pueden llegar
hasta ellos por escorrentía o infiltración, aportando grandes cantidades de fosfatos y
nitratos ( Bueno, 2017).

Los resultados de concentración de oxígeno disuelto fueron mayores en la laguna

control que en de las lagunas muestra; el análisis de varianza ANOVA arrojó que si
existen diferencias significativas (p<0.05), esto podrìa deberse a la presencia de
agua con turbidez alta,pues dificulta la fotosíntesis y concentración de oxígeno
(Escobar, 2020). Por otro lado, la disponibilidad del oxígeno disuelto se va a
relacionar con la presencia de microorganismos, debido a que el oxígeno disuelto se
ve influenciado por la densidad y diversidad. Esto se ve reflejado en que si lo niveles
de oxígeno disuelto son demasiado bajos el fitoplancton junto con otros organismos
no pueden sobrevivir, ya que consumen el oxígeno presente en el agua y la capa de
estructura lipídica que se forma en la superficie impidiendo el intercambio de gases
(Arce, 2019). Otra posible causa es un ambiente léntico donde hay una mayor
actividad de los microorganismos anaeróbicos y una disminución en el oxígeno
disuelto (Vázquez, 2017).

La prueba de correlación entre la cantidad de oxígeno disuelto y concentración de

triglicéridos resultó inversamente proporcional esto quiere decir que a medida que la
concentración de triglicéridos aumenta disminuye el oxígeno disuelto; esto podría
estar relacionado con lo que está sucediendo en la laguna de Ortices, Colombia
donde se viene presentando un crecimiento excesivo de fitoplancton causando un
afloramiento excesivo de plantas superficiales que inhiben a que los rayos del sol
penetren los cuerpos de agua disminuyendo el oxígeno disuelto y aumentando la
cantidad de materia orgánica e inorgánica en descomposición (Bueno, 2017). Por
otro lado la cantidad de oxígeno disuelto está relacionado con la actividad
metabólica de los organismos, como las bacterias que requieren del oxígeno para
descomponer desechos orgánicos disminuyendo el oxígeno del agua ya que si se
consume más de lo que se produce los niveles de oxígeno pueden alcanzar niveles
muy bajos causando la pérdida de vida de muchos organismos por “hipoxia”
aumentando la carga orgánica del medio (Quispe, 2016). La presencia de nitratos y
fosfatos que llegan a los lagos como desechos de procesos industriales o desechos
de fertilizantes son nutrientes esenciales para los organismos acuáticos autótrofos o
fotosintéticos, generando un crecimiento acelerado de algas, cianobacterias, las
cuales al morir aumentan la carga orgánica; estas serán descompuestas por
bacterias aeróbicas las cuales provocan el agotamiento del oxígeno disuelto
causando la muerte de distintos organismos acuáticos que dependen del oxígeno y
así aumentando la carga orgánica del medio acuático léntico (Cardenas, 2019).

CONCLUSIÓN

Luego de realizar el análisis estadístico de las muestras, se concluye que las

lagunas estudiadas se encuentran en proceso de eutrofización; esto debido a que
las concentraciones de triglicéridos son significativamente mayores a las de oxígeno
disuelto, que además muestran una clara correlación entre ellas, en comparación
con las muestras control. Al confirmarse el proceso de eutrofización de las lagunas,
a causa del crecimiento de concentraciones de proteínas, se afirma también que
estas aguas están siendo contaminadas con metales pesados o residuos mineros
en general, lo cual afecta la flora y fauna de este ecosistema, así como la tasa
reproductiva de los organismos; asimismo, la calidad de las aguas de las lagunas
tendrían una baja calidad, ya que la alteración de sus características organolépticas
producen derivados que son tóxicos tanto para el ecosistema como para las
personas que consumen el agua de estas lagunas.

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ANEXOS

TRIGLICÉRIDOS

Tabla 11. Concentración de triglicéridos

CONTROL M1 M2 M3

R1 31.56 47.14 64.23 88.42

R2 30.74 43.69 67.61 82.91

R3 31.91 44.87 68.85 86.42

Tabla 12. Resultados de prueba tukey de concentraciones de las muestras de

triglicéridos.

INTERVALO DE
CONFIANZA AL 95%
DIFERENCIA DESV. SIG.
DE MEDIDAS ERROR LÍMITE LÍMITE
INFERIOR SUPERIOR

MUESTRA 1 -13.83 1.68003 .000 -19.21 -8.45

CONTROL MUESTRA 2 -35.49333 1.68003 .000 -40.8734 -30.1133

MUESTRA 3 -54.51433 1.68003 .000 -59.8944 -49.1343

CONTROL 13.83 1.68003 .000 8.45 19.21

MUESTRA
1 MUESTRA 2 -21.66333 1.68003 .000 -27.0434 -16.2833

MUESTRA 3 -40.68433 1.68003 .000 -46.0644 -35.3043

CONTROL 35.49333 1.68003 .000 30.1133 40.8734

MUESTRA
2 MUESTRA 1 21.66333 1.68003 .000 16.2833 27.0434

MUESTRA 3 -19.021 1.68003 .000 -24.4010 -13.641

CONTROL 54.51433 1.68003 .000 49.1343 59.8944

MUESTRA
3 MUESTRA 1 40.68433 1.68003 .000 35.3043 46.0644

MUESTRA 2 19.021 1.68003 .000 13.641 24.401

 OXÍGENO DISUELTO

Tabla 13. Concentración de Oxígeno disuelto

CONTROL M1 M2 M3
R1 11.23 9,45 8,23 7,78
R2 10.98 9,23 8,04 7,56
R3 11,02 9,34 7,9 7,63

Tabla 14. Resultados de prueba tukey de concentraciones de las muestras de

oxígeno disuelto.

INTERVALO DE
DIFERENCIA DESV. CONFIANZA AL 95%
DE MEDIDAS ERROR SIG.
LÍMITE LÍMITE
INFERIOR SUPERIOR

MUESTRA 1 1.73667 0.10817 <0.05 1.3903 2.0831

CONTROL MUESTRA 2 3.02 0.10817 <0.05 2.6736 3.3664

MUESTRA 3 3.42 0.10817 <0.05 3.0736 3.7664

CONTROL -1.73667 0.10817 <0.05 -2.0831 -1.3903

MUESTRA
1 MUESTRA 2 1.28333 0.10817 <0.05 0.9369 1.6297

MUESTRA 3 1.68333 0.10817 <0.05 1.3369 2.0297

CONTROL -3.02 0.10817 <0.05 -3.3664 -2.6736

MUESTRA
2 MUESTRA 1 -1.28333 0.10817 <0.05 -1.6297 -0.9369

MUESTRA 3 0.4 0.10817 0.025 0.0536 0.7464

CONTROL -3.42 0.10817 <0.05 -3.7664 -3.0736

MUESTRA
3 MUESTRA 1 -1.68333 0.10817 <0.05 -2.0297 -1.3369

MUESTRA 2 -0.4 0.10817 0.025 -0.7464 -0.0536