1.16302.

0002 Preparación de las muestras

La toma de muestra debe ser realizada por personal especializado.
Se necesitan frotis de sangre o médula ósea finos, secados al aire y guardados
Microscopía como máximo durante 3 días.
Los frotis han de ser secados al aire durante 30 minutos como mínimo, debién-
dose fijar éstos antes de la reacción citoquímica propiamente dicha según las
LEUCOGNOST® PAS correspondientes prescripciones.

Fijación de los frotis sanguíneos o de médula ósea 1 - 3 minutos

detección de la reacción ácido peryódico Schiff secados al aire en la mezcla fijadora LEUCOGNOST®
en leucocitos Enjuagar con agua corriente del grifo 10 segundos
Secar al aire

Después de la fijación. los frotis podrán ser almacenados hasta 3 días en el

Producto sanitario para diagnóstico in vitro
frigorífico.

Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnología.

Kit de reactivos citoquímicos para diagnóstico de la leucemia Todas las muestras deben estar rotuladas inequívocamente.
Deben usarse instrumentos adecuados para la toma de muestras y en la prepara-
El presente kit de “LEUCOGNOST® PAS - detección de la reacción ácido peryó-
ción, y deben seguirse las instrucciones del fabricante para la aplicación / el empleo.
dico Schiff en leucocitos” es utilizado para el diagnóstico celular en la medicina
humana, se emplea en el examen hematológico y citológico de muestras de
origen humano. Se trata de un kit de tinción que, junto con otros materiales de Preparación de reactivos
diagnóstico in vitro pertenecientes a nuestra cartera, hace evaluables determina- Solución A
das para el diagnóstico estructuras de destino (mediante fijación, tinción, dado
Para preparar aprox. 60 ml de solución se añaden juntos:
el caso contratinción, montaje) en material de examen hematológico y clínico-
citológico, como p. ej. frotis de sangre total y de médula ósea. Agua destilada 60 ml
El presente kit de tinción está previsto para la reacción en la cubeta de 60 ml
de Hellendahl y contiene todos los reactivos necesarios para detección de la Reactivo 1 (ácido peryódico) contenido completo del
reacción de ácido peryódico Schiff en leucocitos. Los tiempos de reacción del frasco
presente kit han podido ser reducidos claramente, por lo que el proceso estará Disolver el reactivo completamente y añadirlo a una cubeta de 60 ml de
acabado en unos 45 minutos como máximo. Hellendahl = solución A

Principio
Em hematología la reacción PAS es un importante método para la identificación
Solución B
de elementos celulares linfáticos. Junto a la reacción de peroxidasas y esterasas
es una de las tres tinciones citoquímicas básicas, importantes para el diagnós- Para preparar aprox. 60 ml de solución se añaden juntos:
tico diferencial, que se realizan regularmente en el caso de leucemias agudas.
Los frotis ya teñidos según Pappenheim pueden además ser teñidos posterior- Agua destilada 60 ml
mente con PAS y pueden decolorarse de nuevo con ácido peryódico al 1 %. Reactivo 2 (potasio disulfito) contenido completo del
EI ácido peryódico rompe los enlaces carbono carbono vecinos de polisacáridos frasco
(glucógeno) si los dos átomos de carbono llevan grupos hidroxilo. Los grupos
alcohólicos se oxidan entonces a aldehídos, que seguidamente pueden ser Disolver el reactivo completamente y añadirlo a una cubeta de 60 ml de
visualizados en rojo intenso con el reactivo de Schiff (fucsina ácido sulfuroso). Hellendahl
En combinación con el kit se podrá utilizar o el Reactivo de Schiff (art. 109033), Reactivo 3 (ácido clorhídrico) 2 ml
para obtener una fuerte tinción roja, o el Reactivo de Schiff Intense (art. 102572),
para conseguir una tinción roja aún más intensa. En esto, la diferencia se Añadir y mezclar = solución B
encuentra sobre todo en los tiempos de reacción más cortos al trabajar con el
Reactivo de Schiff Intense. Todas las soluciones de reactivos preparadas son incoloras y utilizables durante
3 horas.
Material de las muestras
Como material de partida para todas las tinciones deberían utilizarse preparados Técnica
procedentes de la citocentrífuga y frotis frescos y nativos de sangre o médula Tinción en la cubeta de 60 ml de Hellendahl
ósea. Por ejemplo, el uso de EDTA como anticoagulante debilita la reacción de con Reactivo de Schiff, art. 109033
enzima de forma importante, por esto no es recomendable la adición de sustan- Los portaobjetos han de ser inmersos y movidos brevemente en las soluciones, la
cias inhibidoras de la coagulación. simple introducción proporcionará resultados de tinción insuficientes.
Los portaobjetos deberían ser escurridos bien por goteo después de los diferentes
Reactivos pasos de tinción, de esta manera se podrá evitar el innecesario arrastre de solu-
Art. 1.16302.0002 ciones.
LEUCOGNOST® PAS Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos
detección de la reacción ácido peryódico Schiff en leucocitos indicados.
Componentes del envase:
Portaobjeto con frotis fijado
El kit de tinción contiene
Reactivo 1: LEUCOGNOST® PAS Ácido peryódico Introducir en solución A 15 minutos
Reactivo 2: LEUCOGNOST® PAS Potasio disulfito
Enjuagar con agua destilada 10 segundos
Reactivo 3: LEUCOGNOST® PAS Ácido clorhídrico
Introducir en solución B 1 minuto
Necesario además:
Enjuagar con agua destilada 10 segundos
Art. 109033 Reactivo de Schiff 500 ml, 2,5 l
para microscopía Teñir en Reactivo de Schiff, art. 109033 15 minutos
o a 20 - 25 °C
Art. 102572 Reactivo de Schiff Intense 1l
para la detección de aldehído y Enjuagar con agua destilada 10 segundos
mucosustancias en la microscopía
Introducir de nuevo en solución B 2 minutos
Art. 109249 Hemalumbre en solución según Mayer 500 ml, 1 l, Introducir en agua destilada 3 minutos
para microscopía 2,5 l
Art. 112327 LEUCOGNOST® mezcla fijadora 500 ml Contratinción con hemalumbre en solución según Mayer 3 minutos
fijador para citoquímica de enzimas Enjuagar con agua corriente del grifo 3 minutos
Art. 108562 Aquatex® frasco gotero
(medio de montaje acuoso) de 50 ml Secar al aire (p. ej. durante la noche o a 50 °C en el armario de secado)
para microscopía Si es necesario, montar con Aquatex® y cubreobjetos.

Para el almacenamiento de preparados hematológicos durante varios meses se

recomienda el montaje con un medio de montaje acuoso (p. ej. Aquatex®) y un
cubreobjetos. Sin montaje, la tinción tendrá una estabilidad de unos 30 días; si
se cubre con aceite de inmersión, la estabilidad será de sólo 3 días.
Tinción en la cubeta de 60 ml de Hellendahl Capacidad
con Reactivo de Schiff Intense, art. 102572 El kit de tinción es suficiente para 12 tinciones con hasta 16 preparados.
Los portaobjetos han de ser inmersos y movidos brevemente en las soluciones, la En las cubetas de 60 ml de Hellendahl con ampliación (corresponde a una pre-
simple introducción proporcionará resultados de tinción insuficientes. paración de tinción) pueden teñirse simultáneamente hasta 8 portaobjetos, y,
colocados reverso frente a reverso, hasta 16 portaobjetos.
Los portaobjetos deberían ser escurridos bien por goteo después de los diferentes
pasos de tinción, de esta manera se podrá evitar el innecesario arrastre de solu-
ciones. Notas sobre el empleo
Para conseguir un óptimo resultado de tinción, deberían respetarse los períodos Solamente para uso profesional.
indicados. Para evitar errores, la aplicación debería ser realizada por personal especializado.
Los preparados teñidos con el Reactivo de Schiff Intense presentan una tinción Deben cumplirse las directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y ase-
más intensa. guramiento de la calidad.
Deben emplearse microscopios equipados de acuerdo con el estándar.
Portaobjeto con frotis fijado Si es necesario, deberá utilizarse una centrifugadora que corresponda al están-
dar de laboratorios y a las exigencias.
Introducir en solución A 5 minutos
Enjuagar con agua destilada 10 segundos Protección contra infecciones
Debe observarse a toda costa una protección eficaz contra infecciones de acuer-
Introducir en solución B 1 minuto
do con las directivas de laboratorio.
Enjuagar con agua destilada 10 segundos
Teñir en Reactivo de Schiff Intense, art. 102572 5 minutos Indicaciones para la eliminación de residuos
a 20 - 25 °C El envase debe ser eliminado de acuerdo con las directivas válidas de elimina-
ción de residuos.
Enjuagar con agua destilada 10 segundos Las soluciones usadas y las soluciones caducadas deben eliminarse como
desecho peligroso, debiéndose cumplir las directivas locales de eliminación de
Introducir de nuevo en solución B 2 minutos residuos. Podrá pedirse información sobre los procedimientos de eliminación
Introducir en agua destilada 3 minutos bajo el Quick Link “Hints for Disposal of Microscopy Products” en
www.microscopy-products.com. Dentro de la UE tiene validez el REGLAMENTO
Contratinción con hemalumbre en solución según Mayer 3 minutos (CE) Nº 1272/2008 sobre la clasificación, el etiquetado y el envasado de sustan-
cias y mezclas, por el que se modifican y derogan las Directivas 67/548/CEE y
Enjuagar con agua corriente del grifo 3 minutos
1999/45/CE y se modifica el Reglamento (CE) Nº 1907/2006.
Secar al aire (p. ej. durante la noche o a 50 °C en el armario de secado)
Si es necesario, montar con Aquatex® y cubreobjetos. Reactivos auxiliares
Art. 102572 Reactivo de Schiff Intense 1l
Para el almacenamiento de preparados hematológicos durante varios meses se para la detección de aldehído y
recomienda el montaje con un medio de montaje acuoso (p. ej. Aquatex®) y un mucosustancias en la microscopía
cubreobjetos. Sin montaje, la tinción tendrá una estabilidad de unos 30 días; si Art. 104699 Aceite de inmersión frasco gotero de
se cubre con aceite de inmersión, la estabilidad será de sólo 3 días. para microscopía 100 ml, 100 ml,
500 ml
Para el análisis de preparados teñidos con un aumento microscópico >40x se Art. 108562 Aquatex® frasco gotero de
recomienda el uso de aceite de inmersión. (medio de montaje acuoso) 50 ml
para microscopía
Resultado Art. 109033 Reactivo de Schiff 500 ml, 2,5 l
Los preparados teñidos con el Reactivo de Schiff Intense presentan una tinción para microscopía
más intensa. Art. 109249 Hemalumbre en solución según Mayer 500 ml, 1 l,
Todas las estructuras que contienen polisacáridos, especialmente giucógeno, se para microscopía 2,5 l
tiñen de rojo intenso. Art. 112327 LEUCOGNOST® mezcla fijadora 500 ml
Las poblaciones de blastos, que como mínimo parcialmente permiten reconocer fijador para citoquímica de enzimas
una granulación característica, de granulación gruesa, PAS positiva, se clasifican
generalmente en la serie linfática.
Los blastos leucémicos de la serie mieloica son desde difusos hasta de granula- Clasificación de substancias peligrosas
ción fina, en algunos casos adicionalmente muestran aglomerados groseros PAS Art. 1.16302.0002
positivos. Tener en cuenta la clasificación de substancias peligrosas en la etiqueta y las
Los mieloblastos normales, eosinófilos y células de la serie de glóbulos sanguí- indicaciones en la ficha de datos de seguridad.
neos rojos no interferidos son por el contrario PAS negativos. La ficha de seguridad está disponible en el sitio web y a solicitud.
Los promielocitos, monocitos, basófilos y toda la serie de desarrollo neutrófilo
muestran una coloración roja difusa, qua aparece de rojo intenso a medida que Componentes principales de los productos
aumenta la madurez.
Art. 1.16302.0002
Los eritrobiastos en al caso de eritroleucemias y algunas anemias extremada-
mente hiperregenerativas pueden mostrar una notable reacción PAS. Reactivo 1
Ácido peryódico 1,3 mmol
Notas técnicas
Reactivo 2
El microscopio usado debería corresponder a los requisitos de un laboratorio de
Potasio disulfito 1,48 mmol
diagnóstico médico.
En los frotis sanguíneos puede presentarse un pequeño precipitado de gránulo
Reactivo 3
fino, que no influye en la evaluación diagnóstica.
Eliminar el aceite de inmersión en exceso antes de archivar. Ácido clorhídrico 60 mmol

Diagnóstico
Los diagnósticos deberán ser establecidos solamente por personas autorizadas
y cualificadas.
Deberán emplearse terminologías vigentes.
Deberán elegirse y realizarse ensayos ulteriores según métodos reconocidos.
Cada aplicación debería implicar controles adecuados para descartar resultados Consult instructions Manufacturer Catalog number Batch code
erróneos. for use

Almacenamiento
Guardar el kit de LEUCOGNOST® PAS - detección de la reacción ácido peryódi-
co Schiff en leucocitos de +15 °C a +25 °C. Caution, consult Use by Temperature
accompanying documents YYYY-MM-DD limitation
Estabilidad
El kit de LEUCOGNOST® PAS - detección de la reacción ácido peryódico Schiff Status: 2016-11-15
en leucocitos puede usarse hasta la fecha de caducidad indicada.
Después de abrir el frasco por primera vez, el contenido almacenado entre +15 °C Merck KGaA, 64271 Darmstadt, Germany
y +25 °C es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada. Tel. +49(0)6151 72-2440
Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados. www.microscopy-products.com
Las soluciones preparadas A y B son incoloras y utilizables durante 3 horas.
EMD Millipore Corporation, 290 Concord Road, Billerica,
MA 01821, USA, Tel. +1-978-715-4321