UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE NICARAGUA,

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

CARRERA DE MEDICINA
ACTIVIDAD No. 4
LABORATORIO: MÉTODOS DIAGNÓSTICOS DE LAS INFECCIONES DETRANSMISIÓN
SEXUAL DE ORIGEN BACTERIANA
I. TEMARIO:
- Agentes etiológicos de las Infecciones de Transmisión Sexual (ITS) de mayor prevalencia
en nuestro medio (autoestudio)
- Características morfológicas y fisiológicas de los agentes etiológicos de las ITS en
estudio.
- Métodos de laboratorio utilizados para el diagnóstico de las ITS.

II. OBJETIVOS:
1. Observar las principales características morfológicas y fisiológicas de los agentes
etiológicos bacterianos de las ITS a través de las técnicas de laboratorio indicadas.
2. Explicar el fundamento teórico de la metodología diagnóstica para las diferentes ITS en
estudio.
III. INTRODUCCIÓN

Las Infecciones de transmisión sexual (ITS) son infecciones transmitidas predominantemente por contacto
sexual (vaginal, anal u oral), causadas por más de 30 virus, bacterias y parásitos; de los cuales8 son los vinculados
a la máxima incidencia de las ITS. De estos 8 agentes, 4 son infecciones curables en la actualidad (sífilis,
gonorrea, clamidiasis y tricomoniasis); los otros 4 (hepatitis B, herpes, virus papiloma humano y el VIH) son
infecciones virales incurables, aunque existen tratamientos capaces de atenuar o modificar los síntomas o la
enfermedad. (OMS, 2016)

Cada día más de 1 millón de personas contraen una infección de transmisión sexual. Se estima que, anualmente,
unos 357 millones de personas contraen alguna de las cuatro ITS siguientes: clamidiasis (131 millones), gonorrea
(78 millones), sífilis (5,6 millones) o tricomoniasis (143 millones). (OMS,
2016)

Las estadísticas a nivel mundial reportan: (OMS, 2016)

• Más de 500 millones de personas portadoras del virus que provoca el herpes genital tipo 2
(HSV2).
• Más de 290 millones de mujeres están infectadas con el virus del papiloma humano (VPH).
• Más de 900 000 mujeres embarazadas contrajeron sífilis en 2012, lo que causó complicaciones
en alrededor de 350 000 casos, incluidos casos de muerte prenatal.

En la mayoría de los casos, las ITS son asintomáticas o solas van acompañadas de síntomas leves que no
necesariamente permiten un diagnóstico certero.

Más allá del efecto inmediato de la infección en sí misma, las ITS pueden tener consecuencias graves,entre ellas:
(OMS, 2016)
 • La transmisión de la madre al niño puede dar lugar a muerte prenatal, muerte neonatal,
insuficiencia ponderal al nacer y prematuridad, septicemia, neumonía, conjuntivitis neonatal
y deformidades congénitas. Más de 900 000 mujeres embarazadas contrajeron sífilis en 2012,
lo que causó complicaciones en alrededor de 350 000 casos, incluidos casos de muerte
prenatal.
• Anualmente, la infección del VPH provoca 528 000 casos de cáncer cervicouterino y 266 000
defunciones.
• ITS tales como la gonorrea y la clamidiasis son causas principales de enfermedad inflamatoria
de la pelvis, desenlace adverso del embarazo e infertilidad.
• Algunas de estas ITS, como el herpes genital (HSV de tipo 2) y la sífilis, pueden incrementar
el riesgo de contraer el VIH.

En los países en desarrollo, el comportamiento de las ITS es producto de múltiples factores como:
• Falta de educación y conocimientos en ITS
• Pobreza.
• Rasgos culturales
• Comportamiento sexual
• Crecimiento demográfico
• Desigualdad de distribución de recursos de salud.

En Nicaragua según la Encuesta demográfica (ENDESA) 2011/2012, el 90% de las mujeres conocen o han oído
hablar de una ITS. Sin embargo la calidad de este conocimiento es mala, ya que desconocenque tienen cura, como
se transmiten de la madre al hijo, entre otros. (INIDE-MINSA, 2013)

En cuanto a los datos estadísticos en Nicaragua hay un grave problema ya que existe un Subregistro estadístico
elevado de las diferentes ITS. No todas se registran de forma obligatoria y el Ministerio de Salud no cuenta con
datos nacionales, la información disponible se basa en encuestas y estudios en grupos focales.

La Encuesta Centroamérica de Vigilancia de Comportamiento Sexual y Prevalencia de VIH e ITS en Poblaciones

Vulnerables (ECVC), que fue realizada en el Prevención y control de las Infecciones de Trasnmisición Sexual
año 2009–2010 en tres sitios del país: Managua, Chinandega y Masaya, evidencian los siguientes resultados:
(OPS, 2016)
• En trabajadoras sexuales, las ITS más prevalentes fueron: herpes simple tipo 2 con 75.7%,
vaginosis bacteriana 36.7%, tricomoniasis 30.1% y la prevalencia para cualquier ITS
estudiada fue de 53.4%.
• Para transgénero femeninas las prevalencias de ITS reportadas en la ECVC muestran Herpes
simple tipo 2 con 82.0%, sífilis 23.3%, sífilis activa 11.7% y la prevalencia para alguna ITS
38.9%.(5).
• En personas con VIH se reportan prevalencias de ITS mayores que para las otras poblaciones,
Herpes simple tipo 2, 81.5%, sífilis 11.6%

Los registros del primer nivel de atención del Ministerio de Salud (MINSA) señalan que del total de consultas
por ITS en el país, los principales motivos son: 46% por Candidiasis, 16.7% por Tricomoniasis urogenital, 9.1%
por Tricomoniasis no especificada, 8.3 por candidiasis en otros sitios, 3.1% por sífilis congénita, 2.9% por
infección gonocócica y 2.48 por infecciones herpéticas. (OPS, 2016)

Nicaragua reporta una de las tasas más bajas de incidencia de VIH a nivel centroamericano. Entre 1987-2016
se registran 12,160 personas VIH positivas, de los cuales han fallecido 1,193 personas.
Con una tasa de incidencia nacional en 2016 de 34,6 por 100,000 habitantes, no se reportó la tasa de prevalencia.
(MINSA, 2017)

Las ITS y sus secuelas son costosas para los individuos y para el sistema de atención en salud por lo que la
atención oportuna y eficaz de las ITS puede reducir los estragos causados por éstas al prevenir su transmisión y
secuelas. El manejo adecuado de las ITS incluye un diagnóstico precoz de las mismaspor lo que los métodos
diagnósticos de laboratorio se hacen necesarios para el fortalecimiento de la vigilancia epidemiológica de estas
enfermedades.

Desde el punto de vista clínico y según el tipo de manifestación que las ITS desarrollan, éstas se pueden dividir
de la siguiente manera:

1. ITS que cursan habitualmente con exudado genital

2. ITS que cursan habitualmente con úlceras o tumoraciones

ITS
Cursa con exudado genital Cursa con úlceras o tumoraciones
Neisseria gonorrhoeae (Gonorrea) Treponema pallidum (Sífilis)
Chlamydia trachomatis (cervicitis) Haemophilus ducreyi (Chancro blando)
Ureaplasma urealyticum (Cervicitis) Calymmatobacterium granulomatis
Candida sp (Candidiasis) (Granuloma inguinal o Donovanosis) Chlamydia
Trichomonas vaginalis (Tricomoniasis) trachomatis (serotipos L1, L2, L3)
Gardnerella vaginalis (Vaginosis bacteriana) (Linfogranuloma venéreo)
Otros (Staphylococcus aureus) Molluscum contagiosum (Molusco contagioso)
Virus del herpes genital
Virus de la Hepatitis B
Virus de la Mononucleosis infecciosa
Virus de Herpes Zoster

Estos agentes y las enfermedades que producen poseen un diagnóstico clínico primario, que en ocasiones necesita
de unas confirmaciones de laboratorio mediante técnicas, bacterianas o serológicas la mayoría de las veces.

IV. DESARROLLO
A) Metodología diagnóstica de algunas ITS bacterianas que cursan con exudado vaginal o
uretral

1. Examen al Fresco
En los estudios de exudados vaginales y uretrales es necesario realizar como primer paso unexamen al fresco (entre
porta y cubre objeto) del material tomado (exudado vaginal o uretral).
Investigue la presencia de los siguientes elementos:
Leucocitos Células Clave Trichomonas Levaduras e Hifas
vaginalis

Indican la existencia de Proceden de la Se observan parásitos Están presentes en

una reacción descamación del con movimiento flujos con aspecto de
inflamatoria epitelio vaginal o activo entre las células yogur o requesón,
posiblemente de uretral. Se presentan y los adheridos a las paredes
etiología bacteriana tapizadas de pequeños leucocitos. Se laterales de la vulva y de
bacilos pleomórficos, encuentran en unflujo la vagina.
indicando infección por abundante,
Gardnerella amarillento, espumoso
vaginalis. Estas y fétido.
células forman parte de
un flujo grisáceo y
fétido que recubre las
paredes vaginales.
Autoestudio:
- Diferencias clínicas de los flujos por gonorrea, tricomoniasis, vaginosis, candidiasis.
- Criterios de amsel vaginosis.
2. Prueba del KOH
Esta prueba se basa en la descarboxilación de los aminoácidos por las bacterias anaeróbicas y aeróbicas que se han
incrementadas, ocasionando en la secreción vaginal un olor característico que puede ser intensificado al
alcalinizarse la secreción con Hidróxido de Potasio (KOH) al 10%. Esta prueba se realiza para confirmar la
presencia de Gardnerella vaginalis.

Procedimiento
- Tomar otra gota de la muestra del tubo con solución salina que contiene la muestra del
exudado y colocarla en un portaobjeto.
- Agregar una gota de KOH al 10%.

Interpretación
Se considera positivo si desprende un olor desagradable parecido al pescado en mal estado, lo cualindica la
presencia de aminas, confirmando así el diagnóstico de Gardnerella vaginalis.

La utilización del Hidróxido de Potasio se utiliza también para mejorar la visualización de laslevaduras, ya que
aclara las mucosidades.
 3. Tinción de Gram
Como complemento al examen al fresco, se efectúan coloraciones generales como la tinción diferencial de Gram.
Según lo observado en las preparaciones teñidas con Gram se continúa la investigación efectuando cultivos sobre
medios más apropiados.

En general en una muestra obtenida de flujos vaginal, uretral, rectal, etc. teñido con Gram sedetermina la
presencia de:

Elementos Interpretación
Células clave Constituidas por células
epiteliales vaginales,
cubiertas de cocobacilos Gram
negativos o Gram positivos
(Gram variables) pequeños.
Sugiere la presencia de
Gardnerella vaginalis.

Bacilos Gram Lactobacillus spp.

positivos Difteroides
Generalmente saprofíticos.

Bacilos Gram Tinción de Gram de exudado

negativos. vaginal donde se destaca una
importante cantidad de bacilos
o cocobacilos gram- negativos
y ausencia de reacción
inflamatoria.
Compatible con Gardnerella
vaginalis.
 Cocos Gram Estafilococos
positivos Generalmente saprofíticos

Cocos Gram Agrupados en parejas con

negativos de forma tendencia a disponerse
arriñonada intracelularmente. Sugiere la
presencia de Neisseria
gonorrhoeae.
Diplococos intracelulares Gram negativo
(T. de Gram)
Levaduras, hifas o Sugiere la presencia de
pseudihifas Candida.

Bacilos Gram Mobiluncus

negativos, curvos o
en forma de coma

Polimorfonucleares Inflamación
(PMN).

Interpretación
- Flora Bacteriana Normal (FBN)
Presencia de Lactobacilos puros
Presencia de Lactobacilos y/o Difteroides con escasos Estafilococos.
- Flora Bacteriana Mixta (FBM)
Ausencia de Lactobacilos con presencia de cocos Gram positivos, Gram negativos; bacilos Gram
negativos; cocobacilos Gram variables; Levaduras y células pistas.

Cuantificación
- Abd (abundante): Más de 30 elementos por campo de inmersión
- R/C (regular cantidad): De 5 – 30 elementos por campo de inmersión.
- Esc (escasos): 1 – 4 elementos por campo de inmersión
- Aus (Ausencia) No hay elementos por campo de inmersión.
 4. Cultivos
Los cultivos de secreciones vaginales y uretrales se realizan principalmente para el aislamiento de
Neisseria gonorrhoeae, utilizándose para ello el Agar Chocolate y el Agar Thayer Martin.

Procedimiento
- Tomar el hisopo con la muestra endocervical, rotar con firmeza sobre el medio de
cultivo en forma de “Z”
- Pasar con un asa sobre las líneas de siembra (estriándola). Esto permite la fácil
detección de colonias de Neisseria gonorrhoeae en la periferia de la superficie del
medio.
- Los medios de cultivo se incubarán a 35ºC en una atmósfera con 10% de CO2.

Colonias de N. gonorrhoeae, obtenidas en medios de cultivo Agar Chocolate

y Agar Thayer Martin.

Interpretación: Se debe evaluar el crecimiento de las colonias (características de las colonias de N.

gonorrhoeae en los medios de cultivo) y decidir si es necesario realizar pruebas adicionales, como las
siguientes:

• Prueba de la Oxidasa
Se realiza en las colonias jóvenes usando el derivado Tetrametil del reactivo de oxidasa (dihidrocloruro
de NNN – P – fenilendiamina al 1%)

Procedimiento: Se coloca el reactivo en un papel filtro y una porción de la colonia, se frota sobre él con
un asa de platino.

Interpretación: A los 10 segundos aparece un color púrpura azulado profundo que nos indicará una
oxidasa positiva, de no variar de color se reportará como negativa.

• Prueba de la Catalasa

Procedimiento: Se colocan unas pocas gotas de Peróxido de Hidrógeno (H2O2) al 3% sobreuna lámina
portaobjeto y se le agrega una porción de las colonias.

Interpretación: Una efervescencia rápida nos indica la producción de oxígeno molecular yuna prueba
positiva.

• Prueba de la Fermentación de Azucares.

De ser positiva la prueba de la oxidasa y la prueba de la catalasa, se realiza la prueba de fermentación de
azucares como Glucosa, Maltosa, Lactosa y Sacarosa. Si la prueba es positiva a la glucosa, se somete
a las colonias sospechosas a la prueba de la β– Lactamasa con fines de establecer la resistencia de
Neisseria gonorrhoeae a la Penicilina.
Las pruebas de fermentación de hidratos de carbonos son utilizadas para diferenciar las especies de
Neisseria.

B) Metodología diagnóstica de la sífilis

Para el diagnóstico de Treponema pallidum, agente etiológico de la Sífilis se pueden usar las siguientes
pruebas de laboratorio, utilizando como muestras líquidos tisulares de las lesiones (chancro) superficiales
tempranas para la demostración de las espiroquetas o suero sanguíneo para reacciones serológicas.
1. Observación en campo oscuro
2. Inmunofluorescencia
3. Pruebas serológicas
- VDRL (Veneral Disease Reasearch Laboratories)
- RPR (Rapid Plasma Reagin)
- Pruebas de Fijación del complemento
- FTA - ABS (Prueba con anticuerpo treponémicos fluorescente)
- TPI (Prueba de Inmovilización de T. pallidum)
- TPHA (Prueba de Hemaglutinación con T. pallidum)

Las pruebas serológicas para la sífilis suelen dividirse en dos grupos: las no treponémicas y las
treponémicas. Cada grupo tiene características distintivas que los hacen útiles con diferentes
propósitos. Son complementarios y no se excluyen entre si. Las pruebas no treponémicas son más útiles
para muestreos. Las treponémicas deben reservarse como confirmadoras cuando una no treponémica es
positiva o cuando hay un grado elevado de sospecha clínica de sífilis a pesar de una prueba no treponémica
no reactiva.
CARACTERÍSTICAS DE LAS PRUEBAS SEROLÓGICAS PARA LA SÍFILIS

Prueba Tipo % Positivo durante los estadíos infeciosos

Primario Secundario Tardío

VDRL No treponémica 70 99 1
RPR No treponémica 80 99 0
FTA – ABS Treponémica 85 100 98
TPHA Treponémica 65 100 95
TPI Treponémica 50 97 95

INMUNOTREP – RPR es una prueba rápida de floculación, no treponémica, para detectar anticuerpos
reagínicos en suero o plasma. Incluye partículas de Carbón para mejorar la lectura visual de los resultados,
haciendo innecesaria la observación microscópica.
.

Autoestudio:
• Fundamento pruebas treponemicas y no treponemicas.
• Diferencias RPR y VDRL
• Etapas de la sifilis y sus características.
• Cuadro de diagnóstico difrencial entre otras ITS que cursan con ulcera genital como
herpes, chancroide, LGV, etc.

FLUJOGRAMA DIAGNÓSTICO SÍNDROME DE FLUJO VAGINAL

FLUJO VAGINAL

VAGINITIS VAGINOSIS CERVICITIS

Tricomoniasis: Flujo
color amarillo,
espumoso. Mal olor Flujo grisaceo, Gonorrea
homogeneo. Olor a
Candidiasis: Flujo pescado Clamidiasis
blanco, leche cortada. +
Prurito vulvar

1. Exudado
2. Examen al fresco
3. Tinción gram
Leucocitos, Protozoo 4. Prueba KOH
móvil piriforme:

Trichomonas. Diplococos gram –

Leucocitos, Levaduras, Flora mixta, Células intracelular en PMN:
pseudohifas: clave, escasos PMN y Gonorrea
lactobacillus. 1. Cultivo
Candida.
2. Prueba oxidasa
Prueba KOH: +pH Vaginosis
y catalasa.
vaginal 4.5 3. Fermentación
de azucares.
8
2
 VI. EVALUACIÓN
La evaluación de este laboratorio se realizará de la siguiente manera:
Prueba corta de
entrada: 50 puntos
Desarrollo del
laboratorio: 50 puntos
Total: 100 puntos

VII. BIBLIOGRAFIA

• Brooks, G.C, Butel, J, Morse, S, Mietzner, T. (2010).

Microbiología médica de Jawetz, Melnick y Adelberg.
25ª Edición. Mc Graw Hill LANGE.

• Instituto Nacional de Información de Desarrollo (INIDE)-

Ministerio de Salud (MINSA). (2013).Encuesta Nicaragüense
de Demografía y Salud 2011/12. Disponible en:
http://www.inide.gob.ni/endesa/Endesa11_12/HTML/endesa
11/assets/common/downloads/ Informepreliminar.pdf

• Koneman, E y col. (2008). Diagnóstico Microbiológico:

texto y atlas en color. 6a edición.Editorial Panamericana.
México.

• Ministerio de Salud
Nicaragua (MINSA). (2013).
Normativa N°113: Guía para la atención de las infecciones de
transmisión sexual manejo Sindrómico.

• Organización Mundial de la Salud (OMS). (2016). Nota

Descriptiva N° 110. Disponible en:
http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs110/es/

• Organización Panamericana de la Salud (OPS). (2016).

Prevención y control de las
Infecciones de Transmisión Sexual. Disp
onible en:
http://www.paho.org/nic/index.php?option=com_docman&vi
ew=download&category_slug
=vigilancia-de-la-salud-publica-1&alias=725-boletin-informativo-de-
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• Organización Panamericana de la Salud (OPS). (2014).

Diagnóstico de laboratorio de las infecciones de transmisión
sexual, incluida la infección por el virus de la
inmunodeficiencia humana. Disponible
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http://www.paho.org/hq/index.php?option=com_docman&tas
k=doc_view&Itemid=270&gi d=28913&lang=es