Taller de Microbiologia

Laboratorio de microbiología
Planteamiento de Métodos Bioquímicos para identificar las bacterias

Escherichia coli y Staphylococcus aureus.
Presentado A: José Fernando Torres Ávila
Presentado por: Geiner Pineda Arcón
Facultad de química y farmacia

Programa de farmacia
Semestre | III
Universidad del Atlántico
Diciembre de 2020
Escherichia coli.
Escherichia coli pertenece a la familia de las enterobacterias, forma parte del microbiota del tracto
gastrointestinal de animales homeotermos. Es un bacilo gramnegativo, no exigente, oxidasa
negativa, catalasa positiva, anaerobio facultativo, cuya temperatura de crecimiento preferente es
a 37 °C (mesófilo), fimbriado y comúnmente es móvil por flagelos perítricos.
en su hábitat natural, vive en los intestinos de la mayor parte de los mamíferos sanos. Es el
principal organismo anaerobio facultativo del sistema digestivo. En individuos sanos la bacteria no
adquiere elementos genéticos que codifican factores virulentos, la bacteria actúa como un
comensal formando parte del microbiota intestinal y ayudando así a la absorción de nutrientes. En
humanos, Escherichia coli coloniza el tracto gastrointestinal de un neonato adhiriéndose a las
mucosidades del intestino grueso. No obstante, estas cepas comensales pueden producir
infecciones en el paciente inmunodeprimido. Esta bacteria también tiene características
oportunistas por lo que las cepas patógenas de E. coli pueden producir infecciones de diversa
severidad en el intestino, las vías urinarias, meningitis, sepsis, entre otras infecciones en caso de
otras infecciones o debilitamiento de las defensas.
Medios de cultivo del E. coli.

E. coli se puede aislar e identificar a partir de una muestra si se siembra en medios selectivos bajo
condiciones de esterilidad aeróbicas. Los medios selectivos de elección son:
 agar MacConkey
 agar eosina azul de metileno (EMB)
 agar Hierro de Kligler (KIA):
Identificación del E. coli.

Para la identificación del E. coli utilizaremos la prueba bioquímica de prueba de Kligler (TSI). Esta
prueba nos permite diferenciar bacterias de la familia Enterobacteriácea. Esta familia es numerosa
y se pueden distintos géneros, para distinguir los géneros se debe tener en cuenta lo siguiente:
Como se ve en la imagen el género Escherichia fermenta lactosa usándola como fuente de

carbono mayoritaria y no utiliza ácido cítrico como fuente única. Por lo que no cabe duda que esta
prueba nos servirá para identificarla.
Pasos para la Identificación del E. coli.
Paso 1:
Se debe incubar una muestra de bacterias en un agar en medio de Kligler, este agar tiene la
siguiente composición:
 Peptona de carne 13,0 g/L

 Cloruro de sodio 5,0 g /L
 Lactosa 10,0 g/L
 Tripteina 10,0 g/L
 Glucosa 10,0 g/L
 Cidrato de Fe y NH4 0,5 g/L
 Tiosulfato de sodio 0,3 g/L
 Rojo de fenol 0,025 g/L
 Agar 15,0 g/L
Paso 2:
Luego de incubada la muestra, esterilizamos una aza de bacteriología a fuego de un mechero hasta
el rojo vivo, para matar microorganismos presentes en ella.
Paso 3:
Tomamos el cultivo y enfriamos la aza en un lugar sin crecimiento microbiano y tomamos una
muestra del microorganismo en la punta del aza.
Paso 4:
En el tubo de ensayo en medio preparado previamente esterilizado, insertamos en forma de
picadura la muestra de bacterias, esterilizamos nuevamente la boca del tubo de ensayo y la aza,
procedemos a sellar.
Paso 4:
Repetimos el paso anterior a diferencia que no utilizaremos una inserción tipo picadura, sino una
inserción tipo estría.
Paso 5:
Incubamos el tubo de ensayo a 37°C por 24 Horas (No menos) y notamos los resultados.
Análisis de resultado:
Si la muestra es de color amarillo quiere decir que el microorganismo fermenta tanto glucosa
como lactosa, esta propiedad es común en el género Escherichia. Por lo tanto, el resultado es
positivo.
Staphylococcus aureus.
estafilococo áureo o estafilococo dorado, es una bacteria anaerobia facultativa, grampositiva,
productora de coagulasa, catalasa, inmóvil y no esporulada que se encuentra ampliamente
distribuida por todo el mundo, estimándose que una de cada tres personas se halla colonizadas,
aunque no infectadas por ella.
Puede producir numerosas enfermedades, que van desde infecciones benignas, tales como
foliculitis, forunculosis o conjuntivitis, hasta enfermedades de riesgo vital, como celulitis, abscesos
profundos, osteomielitis, meningitis, etc. también puede afectar al aparato gastrointestinal, ya sea
por presencia física de Staphylococcus aureus o por la ingesta de la enterotoxina estafilocócica
secretada por la bacteria
Las cepas habituales de Staphylococcus aureus son resistentes a la penicilina, dejando como los
antibióticos más eficaces para combatirlos a los aminoglucósidos, la oxacilina o la nafcilina.
Medios de cultivo del Staphylococcus aureus.

El S. aureus es una bacteria inmóvil que es no es exigente y puede ser cultivado en agar de sangre
o posiblemente en medio sal manitol al ser una bacteria anaerobia no es necesario dejar
destapado la caja de Petri en el momento de su incubación.
Identificación del Staphylococcus aureus.

Este género de bacterias se caracteriza por poseer la enzima catalasa, pero, en específico la
Staphylococcus aureus también posee la enzima coagulasa, para ello se utilizarán dos pruebas de
cada enzima para identificar esta bacteria presente en la piel de las personas, animales y algunas
aves, las pruebas que se realizaran será catalasa y coagulasa respectivamente.
Prueba de enzima catalasa.

Esta prueba es de muy fácil realización ya que consiste en agregar agua oxigenada en un medio de
cultivo y el resultado será positivo si ocurre un burbujeo. En esta prueba ocurre la siguiente
reacción
Esta prueva descompone el peróxido de hidrogeno en oxigeno (O 2) e Hidrogeno (H2) por la accion
de la enzima catalasa. La prueva resultaria negativa en caso que no existiera ninguna reacion o si el
preoxido se mantiene intacto.
Prueba de enzima coagulasa.
Esta prueba solo deber ser realizada en caso que la anterior resultase positivo de lo contrario
descartar inmediatamente. Esta prueba puede resultar un falso positivo en caso de que se utilice
un agar de sangre. Lo recomendable es incubar los microorganismos en un agar de medio sal
manitol.
Este procedimiento costa de utilizar plasma de conejo (o de cualquier animal) para notar la acción
de la enzima coagulasa.
Paso 1:
En una hoja de papel hacemos 2 círculos de color negro de un diámetro de 1cm aprox. A distancia
que quepan en un en un área de un portaobjetos
Luego ponemos el papel sobre el portaobjetos de esta manera:
Paso 2:
En cada muestra del portaobjetos agregamos una gota de suero de conejo en la posición de los
círculos.
Paso 3:
Realizamos el procedimiento de esterilización del aza y tomamos muestras del microorganismo y
las ponemos en el portaobjetos en la posición de los círculos donde se agrego la gota de plasma de
conejo y agitamos suavemente.
Análisis de resultado.
Al agitar, inmediatamente se notó una formación de grumos en el plasma de conejo.
Esto confirma la que el microorganismo produce la enzima coagulasa en la muestra al cuajar el

plasma, si esta prueba es negativa no ocurrirá nada.
Tenemos que el microrganismo produce encima catalasa y coagulasa las cuales identifican al
Staphylococcus aureus por lo que de esta manera se puede determinar bioquímicamente este
microrganismo.

Taller de Microbiologia

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Taller de Microbiologia

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Taller de Microbiologia

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Laboratorio de microbiología

Planteamiento de Métodos Bioquímicos para identificar las bacterias

Presentado A: José Fernando Torres Ávila

Presentado por: Geiner Pineda Arcón

Facultad de química y farmacia

Universidad del Atlántico

Medios de cultivo del E. coli.

Identificación del E. coli.

Como se ve en la imagen el género Escherichia fermenta lactosa usándola como fuente de

 Peptona de carne 13,0 g/L

Medios de cultivo del Staphylococcus aureus.

Identificación del Staphylococcus aureus.

Prueba de enzima catalasa.

Luego ponemos el papel sobre el portaobjetos de esta manera:

Al agitar, inmediatamente se notó una formación de grumos en el plasma de conejo.

Esto confirma la que el microorganismo produce la enzima coagulasa en la muestra al cuajar el

También podría gustarte