U.M.S.N.H.

FACULTAD DE QUÍMICO FARMACOBIOLOGÍA

PRÁCTICA # 12 METABOLISMO DE CARBONO
PROFR. TITULAR: Q.F.B. JORGE OCTAVIO ÁVILA
RAMÍREZ.
TÉC. ACADÉMICO: Q.F.B.ANDRÉS MARTÍNEZ
RAMÍREZ.
INSTRUCTORES:
Q.F. B.MARGARITA ALCARAZ ESPEJEL.
Q.F.B. RICARDO ÁVILA GARCÍA.
Q.F.B. ADRIÁN RAMÍREZ VIVIAN.
INTEGRANTES: EQUIPO # 7 SECCIÓN: 4ª.
*ANGÉLICA SOTO PÉREZ.
*MIGUEL ANGEL RIVAS CORTES.
*MAURICIO SECUNDINO CALVILLO.
*FRANCISCO JAVIER RAMÍREZ RODRIGUEZ.
*KEVIN ALAIN RODRIGUEZ FLORES.
*MARTIN ALEJANDRO RAMÍREZ HURTADO.
16 DE NOVIEMBRE DEL 2010. LAB. DE MICRO M – 1

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 PRÁCTICA # 12 METABOLISMO DE CARBONO.

OBJETIVO:
Que el alumno aprenda a realizar e identificar pruebas bioquímicas, en las cuales ciertos tipos
de microorganismos tienen la capacidad de metabolizar fuentes de carbono.

FUNDAMENTO:
METABOLISMO: conjunto de reacciones o transformaciones químicas que ocurren en una
célula o en un microorganismo. Está constituido por:
- ANABOLISMO: conjunto de reacciones químicas encaminadas a la síntesis de componentes
celulares. Son reacciones de biosíntesis, que consecuentemente requieren energía.
- CATABOLISMO: conjunto de reacciones de degradación de sustancias en las que se produce (o
libera) energía.
Como resultado de estos dos grupos de reacciones tiene lugar el crecimiento celular. Una
célula, para crecer, necesita sintetizar los nutrientes que tienen en el ambiente, y por
biosíntesis forma los componentes celulares. Los nutrientes son fuentes de C, N, O. La energía
que se necesita para estas biosíntesis, procede del exterior y puede ser de diversa naturaleza:
luz, compuestos orgánicos y compuestos inorgánicos. La mayoría de los microorganismos usan
compuestos químicos orgánicos que son captados del ambiente, introducidos en la célula y
degradados por catabolismo en sistemas más simples que la célula necesita (la célula los
expulsa, más tarde, como productos de desecho). Esta energía se usa para el anabolismo y para
otras funciones celulares, como puede ser el movimiento de los
flagelos, transporte de solutos por la membrana. Los microorganismos se puede clasificar
atendiendo al tipo de metabolismo que realice. En concreto, se agrupan atendiendo a la fuente
de energía que toman del medio o la fuente de C.
Dependiendo de la energía que toman del medio para crecer, tenemos:
- luz, fototrofos
- compuestos químicos, quimiotrofos. Estos a su vez se pueden dividir según sea el compuesto
químico que utilizan. Ambos obtienen energía de la oxidación del compuesto químico, por
tanto, obtienen energía química.
- inorgánico: quimiolitótrofos
- organico: quimioorganótrofos

Dependiendo de la fuente de carbono (C) (fuente de moléculas con C para usarlo como
constituyente celular), tenemos:
- anhidrido carbónico, sintetizan los constituyentes celulares a partir de dióxido de carbono.
Transforman compuestos inorgánicos en orgánicos, autotrofos.
- Utilizan compuestos orgánicos que ya han sido elaborados por otros organismos,
heterótrofos.

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La mayoría de los organismos autótrofos son los que obtienen su energía de la oxidación de
compuestos químicos inorgánicos o de la luz.

FOTOAUTÓTROFOS: Usan la luz como fuente de energía y el dióxido de carbono como fuente
de carbono. Este grupo incluye a: plantas, algas, cianobacterias y bacterias verdes y rojas.
LITOAUTÓTROFOS: Usan compuestos químicos inorgánicos como fuente de energía y dióxido
de carbono como fuente de carbono. Está formado exclusivamente por procariotas.
QUIMIOHETERÓTROFOS: Usan compuestos orgánicos como fuente de energía y fuente de
carbono. Son: animales, protozoos, hongos y la mayoría de las bacterias. Estos son los grupos
principales (y los microorganismos están presentes en todos) pero también puede haber
microorganismos de los siguientes tipos:
FOTOHETERÓTROFOS: Usan la luz como fuente de energía y los compuestos orgánicos como
fuente de carbono. Pertenecen a este grupo algunas bacterias rojas.

MECANISMO DE OBTENCIÓN DE ENERGÍA. Las moléculas poseen enlaces químicos cuya

energía puede ser utilizada por microorganismos. La manera de usar esta energía, es mediante
reacciones de oxidaciónreducción.
Los microorganismos que usan la luz, la transforman en energía química mediante fotosíntesis,
por lo que todos los organismos usan energía química.
- OXIDACIÓN, consiste en la eliminación de electrones de un átomo o de una sustancia, pero
también puede ser la eliminación de átomos de hidrógeno de una sustancia.
- REDUCCIÓN, ganancia de un electrón o de un átomo de H.
Así, las reacciones redox son la transferencia de electrones o de átomos de hidrógeno desde
una sustancia que se oxida a otra que se reduce. La sustancia que se oxida es el dador de
electrones y la que se reduce es el aceptor de electrones. El dador de electrones va a ceder
protones al aceptor de electrones en la célula, el dador, que está reducido al transferirse los
electrones, se oxida y viceversa. Al dador de electrones también se le denomina fuente de
energía o fuente de electrones.
Hay un concepto: POTENCIAL REDOX: nos indica la tendencia o facilidad de un compuesto para
ceder electrones y oxidarse, o para captar electrones y reducirse.

Muchas células procariotas necesitan algún tipo de compuesto orgánico como fuente de
carbono, se ha demostrado que las bacterias pueden asimilar varios compuestos orgánicos
carbonados y usarlo para hacer nueva materia celular.

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 DIAGRAMA DE BLOQUES.
BACTERIAS:
-Shigella Boydii
ESTERILIZAR EL ASA
-Salmonella Sp

TOMAR BACTERIA

CON LA MISMA
MUESTRA INOCULAR
TODOS LOS TUBOS

INCUBAR A 370C A
24 Hrs

OBSERVAR Y
REPORTAR

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OBSERVACIONES.
Se trabajo con 4 M.O. diferentes (Shiguella Boydii, Salmonella Sp, E. Coli y Klebsiella) se les
realizaron 4 pruebas bioquímicas referentes al metabolismo del carbono (TSI, Citrato, rojo de
Metilo, Malonato)

Cultivo de Shiguella Boydii y Medio TSI (agar, hierro y triple

Salmonela Sp azúcar) sin M.O

Medio Citrato sin M.O. Medio Rojo de Metilo sin M.O.

Medio Malonato sin M.O.

Se inocularon los 4 medios con cada una de las bacterias antes citadas.

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 Picadura y estriado en el medio Suspensión del M.O. en el medio
TSI Rojo de Metileno

Estriado en el pico de flauta del Suspensión del M.O. en el medio

medio Citrato Malonato

Después de incubar a 37°C por 24h se obtuvieron los siguientes resultados:

E.Col Klebsiell Shiguella Salmonella

í a Boydii Sp
Lac-Sac + + - -
Glucosa + + + +
Gas + + - -
H2S - - - +
Resultad A/A A/A K/A K/A H2S
o
Malonato - + - -
Citrato - + - +
R. Metilo + - + +

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Shiguella Boydii

TSI. Fermento la glucosa (1) Citrato. No desdoblo el citrato el

medio permaneció ácido
No fermento Lac-Sac (2)

R. Metilo. Hubo viraje a color rojo, Malonato. No se presento cambio

indica la producción de ácidos m. de color, no consumió malonato

Salmonella Sp.

TSI. Fermento la glucosa (1) Citrato. No desdoblo el citrato el

No fermento Lac-Sac (2) Se nota la medio permaneció ácido
producción de ác. Sulfhídrico (3)

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 R. Metilo. Hubo viraje a color rojo, Malonato. No se presento cambio
indica la producción de ácidos m. de color, no consumió malonato

E. Coli

TSI. Fermento la glucosa Fermento Citrato. No desdoblo el citrato el

Lac-Sac medio permaneció ácido

R. Metilo. Hubo viraje a color rojo, Malonato. No se presento cambio

indica la producción de ácidos de color, no consumió malonato
mixtos.

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Klebsiella

gas

TSI. Fermento la glucosa Fermento Citrato. Si desdoblo el citrato el

Lac-Sac Producción de gas medio se alcalinizo y cambio a
(gas). color azul.

R. Metilo. No hubo cambio de Malonato. Se presento un cambio

color, indica que la Klebsiella no a color azul, se consumió el
genero ácidos mixtos. malonatao y el medio se alcalinizo
NOTA IMPORTANTE.

Al medio R. de Metilo se le deben agregar

4 gotas del indicador rojo de metilo para
revelar el resultado de la prueba.

CONCLUSIÓN:
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Aprendimos a realizar distintas pruebas bioquímicas para las enterobacterias Shigella Boyllii,
Salmonella Sp., Escherichia Coli y Klebsiella. Estas pruebas fueron:

CALDO CON MALONATO: El caldo con malonato se emplea para diferenciar enterobacterias del
grupo de Enterobacter de bacterias del grupo de Escherichia; los primeros son capaces de
utilizar malonato como única fuente de carbono, produciendo una reacción alcalina y cambio
de color del medio al azul. Si no se aprecia viraje de color la reacción es negativa.

ROJO DE METILO VOGES-PROSKAUER (RM VP): Es un indicador de pH con un intervalo de

viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la producción de ácidos por
la vía de fermentación ácido mixto. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color
rojo-fucsia.

CITRATO: La utilización de citrato como única fuente de carbono se detecta en un medio de

cultivo con citrato como única fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del
medio. Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino
a pH 7,6.

TSI (TRIPLE SUGAR IRON): El agar triple azúcar hierro es un medio nutriente y diferencial que
permite estudiar la capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y
lactosa en un único medio. También permite la detección de la producción de H 2S. 

En cada caso, los resultados pudieron ser confirmados por la coloración, turbidez, entre otras
características observadas en cada uno de los tubos (aparecen en la tabla de observaciones).
Así, pudimos apreciar que cada bacteria responde distinto en cada uno los cultivos.

CUESTIONARIO.

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1.- Realiza un esquema de un tubo de TSI e indica en que parte del tubo podemos leer la
glucosa, la lactosa, y la sacarosa.

2.-Dibuja y escribe todos los posibles resultados de una prueba de TSI.

3.-Investiga ¿qué es lo que ocurre para que el precipitado de negro de ácido sulfhídrico sea
visible en el tubo TSI?

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R = Ocurre una reacción entre el H2S y el FeSO4 dando así un precipitado negro Fe2(SO4)3

4.- Investiga los componentes de los siguientes medios para pruebas bioquímicas:

*TSI (agar hierro y triple azúcar)

R=Peptona…………………. ..15g
Extracto de levadura…..3g
Extracto de carne…… …3g
Proteosa de peptona…. 5g
Glucosa………………………..1g
Lactosa…………………………10g
Sacarosa………………………10g
Sulfato de hierro…………0,20
Cloruro sódico……………. 5g
Tiosulfato de sodio…… .0,30g
Rojo fenol…………………..0,024g
Agar……………………………. 12g

*RM-VP (ROJO DE METILO/VOGES-PROSKAUER)

Mezcla de Peptonas 7.0g

Dextrosa 5.0g
Fosfato de Potasio 5.0g

*MALONATO DE EWING MODIFICADO

Ortofosfato potásico de hidrógeno 0.6g

Ortofosfato potásico de dihidrógeno 0.4g
Malonáto de sodio 4.0g
Extracto de levadura 1.0g
Azul de bromotimol 0.06g
Caolín 10.0g
Agar 25.0g

*AGAR CITRATO DE SIMMONS

Citrato de sodio 2.0g

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Cloruro de sodio 5.0g
Fosfato dipotásico 1.0g
Fosfato monoamónico 1.0g
Sulfato de magnesio 0.2g
Azul de bromotimol 0.08g
Agar 15.0g

5.- ¿Qué tienen en común la prueba del citrato y la del malonato?

R= Ver si la bacteria utiliza como fuente de carbonos al citrato y malonato, los cuales se encuentran en
el ciclo de krebs.

6.- ¿Por qué se debe incubar 48 horas la prueba del citrato?

R= Para ver si el microorganismo entre en la fase logarítmica de crecimiento.

7.- Investiga el pH ácido final que queda el rojo de metilo cuando utiliza la vía de
fermentación ácido mixta y da el nombre de los ácidos fuertes que se generan.

R= El viraje del indicador de rojo de metilo que permanece amarillo por encima de pH 5,1 y rojo por
debajo de 4,4. Se generan: ácido fórmico, acético, láctico y succínico

8.- Investiga ¿cómo se realiza el reactivo indicador rojo de metilo?

REACTIVO DE ROJO DE METILO.

Rojo de metilo............................. 0.1 g
Alcohol etílico (95%).................. 250 mL
Agua destilada........................... 250 mL
Preparación:
- Disolver el colorante en el alcohol.
- Agregar el agua destilada.
- Filtrar la preparación.

BIBLIOGRAFÍAS.
BACTERIOLOGÍA CLÍNICA .
Ciencias de la Salud - Microbi, Enferme. infecciosas y Epidemiologia
AUTOR/-ES: Struthers, J.K. / Westran, R.P.
AÑO: 2005 BAILEY SCOTT - DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO.
AUTOR/-ES: Betty A. Forbes AÑO 2004, EDICIÓN 11ª.

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