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Aplicación Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119–3128 DOI

10.1007/s00253-012-4526-x

FISIOLOGÍA MICROBIANA Y CELULAR APLICADA

Efectividad de hongos micorrízicos arbusculares

(HMA) para inducir la acumulación de carotenoides
mayores, clorofilas y tocoferoles en lechugas de hoja verde y roja
Marouane Baslam & Raquel Esteban & José I.
García-Plazaola & Nieves Goicoechea

Recibido: 21 de mayo de 2012 / Revisado: 16 de octubre de 2012 / Aceptado: 18 de octubre de 2012 / Publicado en línea: 30 de octubre de 2012
# Springer-Verlag Berlín Heidelberg 2012

Resumen Estudios previos demostraron que los hongos micorrízicos Introducción

arbusculares (HMA) pueden inducir la acumulación de carotenoides,
fenoles, antocianinas y algunos nutrientes minerales en hojas de A pesar de los esfuerzos de las organizaciones de salud pública, a
lechuga (Lactuca sativa L.) mejorando así su calidad nutricional. menudo es difícil lograr aumentar el consumo de vegetales en la
Nuestros objetivos fueron saber qué carotenoides se acumulaban más sociedad. Por lo tanto, sería interesante mejorar los niveles nutricionales
en las hojas de de las verduras para mejorar la ingesta de nutrientes sin requerir un
lechugas micorrizadas y para evaluar el efecto de los AMF en los aumento en el consumo. La lechuga es una de las hortalizas más
niveles de tocoferoles en hojas de plantas de lechuga. Los AMF aceptadas en la dieta humana y, junto con la escarola, la verdura más
siempre mejoraron el crecimiento y, en la mayoría de los casos, utilizada para la denominada 'Cuarta Gama' de hortalizas (Borghi
aumentaron los niveles de todos los principales carotenoides, clorofilas 2003). Según FAOSTAT (División de Estadística de la FAO) 2011, la
y tocoferoles en las lechugas de hoja verde y roja. Dado que estas cantidad de producción de lechuga y achicoria en España, Francia,
moléculas también son nutracéuticos importantes, la micorrización Alemania y Grecia fueron, respectivamente, 1.000.000, 430.000,
320.000
surge como una técnica confiable para mejorar el valor nutricional de los vegetales y 80.000 t en 2009. En 2010, la cantidad total de producción
comestibles.
Estos resultados se comparan con otros métodos desarrollados para de lechuga y la achicoria en la Unión Europea alcanzó las 3.023.174 t,
mejorar la calidad nutricional. siendo Italia (843.344 t) y España (809.200 t) los principales países
productores.
Palabras clave Hongos micorrízicos arbusculares. ÿ-caroteno.
Lactuca sativa L. . Tocoferoles. Xantofilas
El Fitomejoramiento Convencional y la Biotecnología son dos
formas de mejorar la calidad nutricional de la lechuga.
Sin embargo, como lo expone Mou (2009), los esfuerzos de
mejoramiento para la nutrición a menudo se ven obstaculizados por la

M. Baslam : N. Goicoechea (*)

falta de capacidades analíticas en la mayoría de los programas de
Dpto. Biología Vegetal, Sección Biología Vegetal (Unidad mejoramiento de cultivos. Este autor también afirma que la
Asociada al CSIC, EEAD, Zaragoza e ICVV, Logroño). comercialización de la lechuga transgénica dependería del progreso en
Facultades de Ciencias y Farmacia, Universidad de Navarra, Irunlarrea 1,
la expresión transgénica, la aceptación pública, los desafíos económicos
31008 Pamplona, Spain e-mail: [email protected]
y de mercadeo, los problemas de propiedad intelectual y la evaluación
de riesgos. Todas estas dificultades inducen a buscar otras alternativas
para mejorar la calidad nutricional de la lechuga. De hecho, algunos
R. Esteban : J. I. García-Plazaola Dpto.
estudios se han centrado en mejorar el crecimiento y el valor nutricional
Biología Vegetal y Ecología, Universidad
del País Vasco (UPV/EHU), c/Sarriena s/n, Apdo.
de diferentes variedades de lechuga mediante la aplicación de luz
644, ES-48080 Bilbao, Spain suplementaria de longitudes de onda seleccionadas en invernaderos.
Por ejemplo, Li y Kubota (2009) encontraron que el azul, ultravioleta-A suplementario
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3120 Appl Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119–3128

(UV-A) o luces rojas pueden inducir, respectivamente, la acumulación nitrógeno, 80-180 mgL-1 P2O5 y 140-220 mgL-1 K2O y se esterilizó
de antocianinas, carotenoides y fenoles en lechugas baby cultivadas previamente a 100 °C durante 1 h en tres días consecutivos. En el
bajo luz blanca. Asimismo, Caldwell y Britz (2006) estudiaron los momento del trasplante, se inocularon 10 macetas de cada cultivar
efectos de la radiación UV suplementaria sobre los niveles de de lechuga con el hongo micorrícico Glomus fasciculatum (Taxter
carotenoides y clorofilas en varias lechugas de hoja verde y roja sensu Gerd.) Gerd. y Trappe, otras 10 macetas fueron inoculadas
cultivadas en invernadero. Otros autores (Lizarazo et al. 2010) con el inóculo comercial AEGIS Endo Gránulo y otras 10 macetas no
observaron que la cantidad de ÿ-tocoferol (vitamina E) en hojas de fueron inoculadas y se mantuvieron como controles no micorrízicos
lechuga aumentaba notablemente durante la ontogenia y, en (NM). G. fasciculatum provino de un cultivo en maceta con alfalfa
consecuencia, sugirieron que el contenido de vitamina E podría (Medicago sativa L.) como planta huésped y el inóculo (Gf) consistió
mejorarse fácilmente en este cultivo mediante seleccionando el en 20,0 g de suelo con fragmentos de raíz de alfalfa, esporas e hifas
momento adecuado de cosecha, lo que permitiría evitar el uso de por 2,0 L de sustrato total. El inóculo comercial fue una mezcla de
plantas modificadas genéticamente. Glomus intraradices (Schenck y Smith) (actualmente Rhizophagus
En este contexto, la aplicación de hongos micorrízicos intraradices (Schenck y Smith) Walker y Schüÿler comb. nov.) y
arbusculares (HMA) podría ser otra alternativa tanto al Glomus mosseae (Nicol. y Gerd.) Gerd. y Trappe (en realidad
fitomejoramiento convencional como a la lechuga transgénica para Funneliformis mosseae (Nicol. and Gerd.) Walker and Schüÿler comb.
potenciar la cantidad de algunos compuestos de interés nutricional nov.) que contenía alrededor de 100 esporas y otros propágulos
sin riesgo para la salud humana y respetuosa con el medio ambiente. infecciosos por gramo de producto y proporcionado y comercializado
Los hongos micorrízicos colonizan las raíces de más del 90 % de las por Atens (Tarragona, España). Se añadió un total de 9,5 g de la
especies de plantas principalmente para el beneficio mutuo tanto de formulación comercial de micorrizas a cada maceta (alrededor de
la planta huésped como del hongo (Smith y Read 2008), siendo las 950 esporas). El inóculo de micorrizas se mezcló en los 10 cm
micorrizas arbusculares el tipo de simbiosis micorrícica formada por superiores del sustrato en cada maceta justo antes del trasplante de
la mayoría de las plantas de cultivo y hortícolas, incluyendo lechuga. las plántulas para facilitar el contacto temprano entre los AMF y las
Investigaciones recientes realizadas por nuestro grupo han raíces en crecimiento de las plantas de lechuga jóvenes.
demostrado que la asociación de lechugas cultivadas en invernadero
con HMA puede beneficiar el crecimiento de las plantas e inducir la
acumulación de algunos nutrientes minerales (por ejemplo, Cu y Fe), Las plantas de lechuga se cultivaron en un invernadero a 25/15
carotenoides totales, antocianinas y, en menor medida, solubles. °C de temperatura día/noche y 40/80 % de humedad relativa día/
fenoles en hojas (Baslam y Goicoechea 2012; Baslam et al. 2011a, noche, y recibieron luz natural complementada con la irradiación de
b). lámparas fluorescentes (Sylvania DECOR 183, Professional-58 W,
Los principales objetivos de este estudio fueron (1) caracterizar Erlangen , Alemania) que proporcionó un flujo de fotones fotosintéticos
cómo la composición de carotenoides de las plantas de lechuga de (PPF) mínimo de alrededor de 300–400 ÿmolmÿ2 s durante un
ÿ1
hoja verde y roja responde a los AMF; y (2) evaluar el efecto de AMF fotoperíodo de 14 h. Todasdescribe
las plantas
por fueron
Baslamfertilizadas como
et al. (2011a) y se
en los niveles de tocoferol en hojas de plantas de lechuga. Estos también recibieron 300 ml de agua destilada dos veces por semana.
resultados se comparan con otros métodos desarrollados para Las plantas se cosecharon 7 semanas después del trasplante.
mejorar la calidad nutricional.
Las muestras para las determinaciones analíticas se recolectaron
tanto de hojas internas (zona interna) como externas (zona externa)
Materiales y métodos de lechugas. Ambas zonas fueron delimitadas visualmente y cada
una tenía una media de aproximadamente 15 hojas. La zona interna
Material biológico y diseño experimental estaba bastante cerca de la punta meristemática del brote e incluía
hojas de color verde claro. Las hojas interiores cosechadas se
Three types of lettuces (Lactuca sativa L.), Cogollos de Tudela (CT) colocaron a medio camino entre el centro de la cabeza y la parte
(var. Longifolia), Batavia Rubia Munguía (BRM) (var. Capitata) and exterior. Las hojas exteriores exhibieron un color más oscuro y un
Maravilla de Verano (MV) (var. tamaño más grande que las hojas interiores y no eran compactas en
capitata), fueron elegidos para este estudio. Las semillas de BRM, la cabeza de la lechuga.
MV y CT se esterilizaron superficialmente con lejía al 10 % durante
10 min y se sembraron (el 22 de junio) en una mezcla de turba y Parámetros de crecimiento y análisis de micorrizas
arena (1:1, v:v). Cuando las plántulas tenían de dos a tres hojas
completamente desarrolladas, se transfirieron (el 13 de julio) a Al momento de la cosecha, se seleccionaron aleatoriamente tres
macetas de 1,5 l (una planta por maceta y 30 macetas por cada tipo plantas de cada cultivar de lechuga y tratamiento para determinar la
de lechuga) llenas de una mezcla de vermiculita-arena silícea-turba producción de biomasa tanto de brotes como de raíces. El peso seco
ligera (2,5 :2.5:1, v:v:v). La turba (Floragard, Vilassar de Mar, (PD) de hojas y raíces se determinó después de secar el material
Barcelona, España) tenía un pH de 5,2–6,0, 70–150 mgLÿ1 de vegetal a 80 °C por lo menos durante 2 días (hasta que se obtuvo el peso).
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constante). Se limpiaron y tiñeron muestras de raíces de plantas de se calcularon al 5 %. Cuando la interacción entre los factores fue
lechuga como describen Phillips y Hayman (1970) y se determinó significativa según el análisis ANOVA, las diferencias menos
la colonización de micorrizas examinando segmentos de raíces de significativas se evaluaron mediante la prueba post hoc de diferencia
1 cm (n045 por cada tipo de lechuga y tipo de inóculo de micorrizas) mínima significativa (pÿ0.05).
bajo el microscopio. Los resultados se expresaron como porcentaje
de colonización (Hayman et al. 1976).
Resultados

métodos analíticos Parámetros de crecimiento y análisis de micorrizas

Se recolectaron muestras de hojas (ÿ40 mg FW), se congelaron en Las plantas de lechuga no inoculadas con cualquiera de los inóculos
nitrógeno líquido y se almacenaron a -80 °C hasta los análisis de de micorriza nunca mostraron estructuras fúngicas en las raíces
carotenoides, clorofilas y tocoferoles. La extracción se realizó (datos no mostrados). Por tanto, nos referiremos indistintamente a
mediante molienda en mortero enfriado con 1 ml de acetona (100 estas plantas como 'no inoculadas' o 'no micorrizas'. Cuando se
%) con 0.5 gLÿ1 de CaCO3, con el fin de evitar trazas ácidas que inoculó con G. fasciculatum, los porcentajes de colonización de
pudieran alterar la composición del pigmento. Las muestras se raíces alcanzaron valores en torno al 65 %, independientemente del
centrifugaron a 13200 rpm durante 20 min a 4 °C y se filtraron con tipo de lechuga. Cuando se aplicó el inóculo comercial, los
jeringa a través de un filtro de PTFE de 0,22 ÿm (Whatman, porcentajes de colonización micorrícica oscilaron entre 56 % en MV
Maidstone, Reino Unido). Los extractos se inyectaron (15 ÿL) en un y 62 % en CT (Fig. 1).
sistema HPLC de fase inversa Waters (Milford, MA, EE. UU.) La simbiosis micorrizal aumentó significativamente el crecimiento
siguiendo el método de García-Plazaola y Becerril (1999) con de los brotes en los tres tipos de lechugas (Fig. 2a), siendo la
algunas modificaciones (García-Plazaola y Esteban 2011; García- eficacia de G. fasciculatum similar a la del inóculo comercial para
Plazaola y Becerril 2001). El automuestreador 717 plus se equipó mejorar la biomasa de los brotes (DW de brotes) en CT y MV. Solo
con un termostato que mantiene la temperatura constante a 4 °C la aplicación del inóculo comercial a CT benefició significativamente
evitando la degradación o alteración del pigmento. Los pigmentos la biomasa de la raíz (DW de la raíz) (Fig. 2b).
fotosintéticos se midieron con un detector PDA (Waters modelo
996) en el rango de 250 a 700 nm. Los picos se detectaron e
integraron a 445 nm para el contenido de carotenoide y clorofila. carotenoides
Los pigmentos se identificaron y cuantificaron según García-
Plazaola y Becerril (1999). Los tiempos de retención y los factores Las cantidades de neoxantina (N), luteína (L) y ÿ-caroteno (ÿ-car)
de conversión de los pigmentos fueron los mismos descritos por siempre fueron significativamente más altas tanto en las hojas
García-Plazaola y Becerril (2001, 1999). Para los tocoferoles, la externas como internas de las CT micorrizas que en las plantas no
detección se llevó a cabo con un detector de fluorescencia (Waters micorrizas, independientemente de la especie de AMF inoculada
modelo 474) ajustado a ÿexc0295 nm y ÿem0340 nm y calibrado (Tabla 1). En comparación con las concentraciones en hojas de
con estándares de tocoferoles (Calbiochem, San Diego, CA). Dado
que no pudimos separar ÿ de ÿ-tocoferol en las condiciones G. fasciculatum
cromatográficas explicadas anteriormente, nos referimos a ellos Inóculo Comercial
a
solo como ÿ-ÿ-tocoferol en todo el trabajo, en la Fig. 4.
(%)
70 a
a
a
B
sesenta y cinco

B
60
Como la discusión se centra en la calidad nutricional de tres
Colonización
micorrizas
de

55
tipos de lechuga que se consumen como ensaladas, los resultados
50
se expresaron y discutieron sobre una base fresca.
45

40
análisis estadístico
35

30
Dentro de cada cultivar de lechuga, los datos se sometieron a un
Connecticut BRM MV
ANOVA de dos factores (factorial 3×2) (SPSS v. 15.0) para dividir
la varianza en los efectos principales. Se utilizó como primer factor Fig. 1 Porcentaje de colonización micorrízica (%) de raíces
la inoculación o no con HMA y el tipo de inóculo micorrícico (G. pertenecientes a lechugas Cogollos de Tudela (CT), Batavia Rubia
fasciculatum o inóculo comercial); el tipo de hoja (hoja exterior o Munguía (BRM) y Maravilla de Verano (MV) inoculadas con Glomus
fascicu latum (histogramas blancos) o con el inóculo comercial
interior) de cada planta de lechuga se incluyó como segundo factor.
( histogramas negros). Las mismas letras indican que los valores no
Diferencias significativas entre factores son significativamente diferentes (pÿ0.05)
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3122 Appl Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119–3128

a inoculum fue más efectivo que G. fasciculatum para inducir la

20
18 acumulación de N, V, A, Z, L y ÿ-car en MV, aunque esos
16 a
14 a aumentos se limitaron a las hojas exteriores.
planta-1)
(g

En comparación con los niveles encontrados en hojas de

Dispara
DW

12 Automóvil club británico

a B
10 B B
8 C
controles no micorrícicos (100 %), las concentraciones de
6 carotenoides en MV micorrízicos mostraron aumentos que
4
2
oscilaron entre 29 % para A en hojas internas de plantas
0 colonizadas por G. fasciculatum hasta niveles más de ocho
2 veces mayores para Z en hojas externas de plantas que recibieron el inóculo c
4
La asociación de lechugas con HMA no solo incrementó los
6
8 niveles de los principales carotenoides sino que también indujo
raíz
DW planta-1)
(g

10 a a la acumulación de lactucaxantina (Lx) (Cuadro 1). En

cama y desayuno a
12
14
comparación con sus respectivos controles no micorrízicos (100
a a %), los incrementos en Lx variaron desde 6.6 % en hojas
16 a
18 internas de CT después de la aplicación del inóculo comercial
20 B a
hasta más de cinco veces mayor en las hojas internas de BRM
que recibieron esta formulación comercial. de AMF.
NM Gf C.I. NM Gf C.I. NM Gf C.I.

Connecticut BRM MV
clorofilas
Fig. 2 Peso seco (PS) (en gramos por planta) de brotes (a) (histogramas
blancos) y raíces (b) (histogramas negros) de lechugas Cogollos de El efecto de la simbiosis micorrízica sobre los contenidos de
Tudela (CT), Batavia Rubia Munguía (BRM) y Maravilla de Verano
(MV), no inoculados con hongos micorrízicos (NM), inoculados con
clorofilas dependió de la variedad o cultivar de lechuga, tipo de
Glomus fasciculatum (Gf) e inoculados con el inóculo comercial (CI). hojas (externas o internas) y especie de HMA (Fig. 3a y b). G.
Los valores son medias (n03) ± SE. Dentro de cada gráfica (a o b) y fasciculatum fue menos eficaz que el inóculo comercial para
tipo de lechuga, las mismas letras indican que los valores no son mejorar los niveles de chl a (Fig. 3a) y chl b (Fig. 3b) en los tres
significativamente diferentes (pÿ0.05)
tipos de lechugas utilizadas en nuestro estudio.

sus respectivos controles no micorrícicos (100 %), los aumentos Las concentraciones de clorofilas en hojas externas e
en los niveles de los carotenoides antes mencionados variaron internas de CT inoculadas con G. fasciculatum fueron
desde alrededor del 24 % para N en las hojas externas e equivalentes, respectivamente, a 118.5 y 135.5 % (chl a) (Fig.
internas de plantas inoculadas con G. fasciculatum hasta más 3a) y 112.8 y 128.0 % (chl b) (Fig. 3b) de las concentraciones
de tres veces mayor para ÿ-car en hojas exteriores de las plantas medidas en sus controles sin micorrizas. En BRM asociado con
que recibieron el inóculo comercial. Por otro lado, los niveles de G. fasciculatum, las concentraciones de clorofilas en hojas
violaxantina (V) aumentaron tanto en las hojas externas como externas e internas fueron equivalentes, respectivamente, a
internas de CT solo después de la aplicación del inóculo 257.5 y 217.5 % (chl a) (Fig. 3a) y 265.0 % y 215.8 % (chl b)
comercial, y G. fasciculatum fue más efectivo que el inóculo (Fig. 3b) de los niveles cuantificados en sus controles no
comercial para inducir la acumulación de zeaxantina ( Z) en micorrízicos. La aplicación de G. fasciculatum a MV incrementó
ambos tipos de hojas. La simbiosis micorrízica benefició los contenidos de ambas clorofilas (225.5 %) en las hojas
claramente la acumulación de anteraxantina (A) en las hojas exteriores (Fig. 3a y b) pero disminuyó las concentraciones de
externas de CT, pero redujo los niveles de este carotenoide en chl a (53.9 %) (Fig. 3a) y chl b ( 50.1 %) (Fig. 3b) en las hojas
las hojas internas, siendo más relevante la disminución cuando internas en comparación con sus controles no inoculados.
las plantas recibieron la formulación comercial de AMF.
La aplicación del inóculo comercial permitió obtener niveles
En los dos cultivares pertenecientes a la variedad Capitata de clorofilas en hojas externas de CT y BRM más de dos o tres
(BRM y MV), la inoculación con HMA también indujo la veces superiores, respectivamente, a las acumuladas en hojas
acumulación de carotenoides en hojas (Cuadro 1). Sin embargo, equivalentes de sus controles no micorrízicos (Figs. 3a y b).
los resultados dependieron de la especie de HMA aplicada y/o
la posición de las hojas en la planta. En BRM, la inoculación con Las cantidades de clorofilas ayb en las hojas externas de la
G. fasciculatum resultó en niveles mejorados de N, V, A, Z, L y lechuga de hoja roja MV tratada con el inóculo comercial fueron
ÿ-car tanto en las hojas internas como externas, pero los 5 veces mayores que las de las hojas externas de sus
aumentos significativos en los niveles de los carotenoides respectivos controles sin micorrizas; sin embargo, los niveles de
mencionados se restringieron a las hojas externas. después de chl a (Fig. 3a) y chl b (Fig. 3b) en las hojas internas de las
la aplicación del inóculo comercial. Por otro lado, el comercial plantas con micorrizas fueron
 FW
peso
fresco,
NM
no
micorrizas,
Gf
plantas
inoculadas
con
Glomus
fasciculatum,
CI
plantas
inoculadas
con
el
inóculo
comercial. Los
principales
carotenoides
en
las
plantas
micorrizas
(hojas
externas
o
internas)
también
se
expresaron
como
porcentajes
(%
C)
de
sus
respectivos
controles
no
inoculados
(100
%). Los
valores
son
medias
de
tres
a
cinco
observaciones.
Dentro
de
cada
columna
ytipo
de
lechuga
los
datos
seguidos
de
la
misma
letra
indican
que
los
valores
no
difirieron
significativamente
(pÿ0.05).
Concentraciones
de MV BRM Connecticut Tabla
1Concentraciones
(ÿggÿ1
FW)
de
carotenoides
mayoritarios
en
hojas
externas
e
internas
de
plantas
lechuga
Cogollos
de
Tudela
(CT),
Batavia
Rubia
Munguía
(BRM)
yMaravilla
de
Verano
(MV)
ALLÍ novia Hojas
exteriores
NM ALLÍ novia Hojas
exteriores
NM ALLÍ novia Hojas
exteriores
NM
hojas
interiores hojas
exteriores hojas
interiores hojas
exteriores hojas
interiores hojas
interiores hojas
exteriores hojas
interiores hojas
exteriores hojas
interiores hojas
interiores hojas
exteriores hojas
interiores hojas
exteriores hojas
interiores
7.20
discos
compactos 23.53
a 8.62
discos
compactos 5,06
días 2.80c 4.72b 2.21c 3.99
aC 9.33b 8.90b 6.72c 7.19c 5.40
días ÿ1
mcg neoxantina
10.61
a.C. 12.39b 12.84
a 11.24
a 12.46
a
FW%C
ÿgg
ÿ1FW%C
58.1 465.0 69.6 209.7 100.0 100.0 126,7
4,92
días 321.8 213.6 281.7 100.0 100.0 129.8 230.7 123.8 124.4 100.0 100.0
37.08
a 8.08c 20.86
a 8.29c 3,79
días 6.00
discos
compactos 20.37
a 9.15
discos
compactos 9.95c 7,64
días violaxantina
12.61
a.C. 12.86
a.C. 15.84b 15.93b 17.06b 14.64b 14.25b
79.2 458.9
2.80a 80.7 347.7 218,7
0,46c 284.3 266.6
196,0
0,56
aC 100.0 100.0 129.8 100,0
0,22
días 100,0
0,77c 147.1 143,2
0,90c 119.8 100.0 100,0
0,39
días
0,55
aC 0.41c 0,28
días 0,53
días µgg
ÿ1FW%
C
µgg
ÿ1FW%
C
µgg
ÿ1FW%
C
µgg
ÿ1FW%
C
µgg
ÿ1FW%
C anteraxantina
1.35b 1.05
aC 1.28
a 1.10b 1.34b 1.72
a 1,72
días
52.4 682.9 128.6 136.6 100.0 100.0 127.3 166.2 209.1 142.9 100.0 100.0 30.8 343.6 52.3 441.0 100.0 100.0
0.73b 3.73
a 0,67b 0.99b 0.44b 0.34
de 0.50
discos
compactos 0.19
y 0,69c 0.78c 0,61c 0.51c Zeaxantina
1.16b 1.75
a 1.28b 1.54
a 1.21b 1.82
a
73.7 847.7 67.7 263.6 253.6
20.37a 263.2
6.18c 302.0 356.9
100.0 100.0 178.9 185.8 100.0 100.0 127.9 198.4 100.0 100.0
9.34
a.C. 37.00
a 9.21
aC 5.82c 3.80
discos
compactos 2,68
días 5.59c 9.51c 7.03
días luteína
13.97b 14.98b 13.85b 14.11b 17.73
a 16.13
en
adelante 10.16c
62.4 635.7
16.18a 61.5 240,0
12,10
millones 364,4
4,87
en
adelante 230,6
2,59c 247.8 252.2
8.63a
100.0 100.0 141.8 100.0 100.0 148.4 169.6 144.5 100.0 100.0
9.22
discos
compactos 5.06
un 3.01
aC 2.21
discos
compactos 4.64c 4.31c lactucaxantina
11.42b 9.33c 8.41
días 1,01
días 3.87c 6.88b 3.63c
135.8 175.5
46.79a 110.9 131.2 100,0
23,76
millones 100.0 501.0 220.4 256.4 136,2
24,14b 100.0 100.0 106,6
21,75b
200.2 127.8
22.07b 159.6 100.0 100.0
9.08
días 6.89
de 31.76
a 5.23
y 9.11
discos
compactos 31.46
a ÿ-
caroteno
17.03
discos
compactos 17,52
bcd 18.63
aC 11.34c 13.92c 14.88c 10.20
d
71.7 515.3 73.7 205.2 100.0 100.0 131.7 348.6 216.8 265.0 100.0 100.0 146.2 308.4 148.3 136.5 100.0 100.0
3123 Aplicación Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119 –3128
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3124 Appl Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119–3128

Fig. 3 Concentraciones de
clorofila a (chl a) (mggÿ1 FW) a hojas exteriores
(a) y clorofila b (chl b) (en hojas interiores
miligramos por gramo FW) (b) en 0.9 a
hojas exteriores (histogramas
blancos) e interiores (histogramas
0.8
negros) de lechugas Cogollos de 0.7
Tudela (CT), Batavia Rubia
Munguía (BRM) y Maravilla de 0.6 a
a
B
Verano (MV), no inoculadas con 0.5
hongos micorrízicos (NM), B
B
inoculadas con Glomus fasciculatum 0.4 B
c
(Gf) e inoculadas con el inóculo C cd cd
0.3 D
comercial (CI). Los valores son Y
C
medias (n07) ± SE. Dentro de cada 0.2 discos compactos

de D
gráfica (a o b) y tipo de lechuga, Y
0.1
las mismas letras indican que los
valores no son significativamente 0
diferentes (pÿ0.05). Las
concentraciones de chl a o chl b B
(hojas exteriores u hojas interiores) 0.35
en plantas micorrizas también se a

han expresado como porcentajes 0.30

de sus respectivos controles no
inoculados (C0100 %) y los valores 0.25
aparecen en la parte superior de
los histogramas correspondientes. 0.20 a
a B
Peso fresco FW
0.15 B
B B antes de Cristo

C
0.10 D
D discos compactos
discos compactos

discos compactos C D
0.05
discos compactos

0
NM Gf C.I. NM Gf C.I. NM Gf C.I.

Connecticut BRM MV

reducido al 50 % de los encontrados en las hojas internas de sus Discusión

controles no micorrícicos.
La aplicación de G. fasciculatum o del inóculo comercial benefició el
tocoferoles crecimiento de las lechugas. Es bien sabido que la simbiosis de
micorrizas puede beneficiar el crecimiento de las plantas debido
En plantas sin micorrizas, los niveles más bajos de ÿ-ÿ tocoferol se principalmente a la absorción de nutrientes con baja movilidad por las
midieron tanto en las hojas internas como externas de BRM. hifas externas (Jakobsen et al. 1994). Además, la asociación de
(Figura 4a). Sin embargo, la cantidad de ÿ-ÿ tocoferol aumentó micorrizas también puede inducir la acumulación de mayores
significativamente en BRM cuando las plantas se asociaron con AMF cantidades de agua de las plantas hospederas, especialmente cuando
y también lo hizo en micorrizas MV, independientemente del tipo de el suministro de agua está restringido (Goicoechea et al. 2004), lo
inóculo de micorrizas aplicado. Sin embargo, con la excepción de que también permite mejorar el crecimiento de las plantas. Este mayor
BRM colonizado por G. fasciculatum, los aumentos en las contenido de agua en la parte aérea, sin embargo, no se observó en L. sativa cv.
concentraciones de ÿ-ÿ tocoferol se restringieron a las hojas exteriores. Tafalla inoculada con G. intraradices o G. mosseae y cultivada bajo
En CT, solo la aplicación del inóculo comercial indujo una acumulación diferentes niveles de riego (Kohler et al.
significativa de ÿ-ÿ tocoferol en las hojas externas. Por el contrario, G. 2008). En nuestro estudio, la absorción de nutrientes en CT
fasciculatum aumentó los niveles de ÿ-tocoferol en las hojas internas micorrízicos también podría haberse visto favorecida por el mayor
de CT y BRM (Fig. 4b). Sin embargo, las mayores mejoras en las desarrollo de raíces (en términos de PS) después de aplicar la
cantidades de ÿ-Tocoferol se observaron en las hojas externas de los formulación comercial de AMF. La plasticidad de la raíz está
tres tipos de lechugas después de aplicar el inóculo comercial. influenciada por AMF, siendo el efecto más común el aumento de la
ramificación de la raíz (Berta et al. 1993). Otros posibles efectos de
AMF en el sistema de raíces del huésped son el DW de raíz mejorado y la longitud d
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Appl Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119–3128 3125

Fig. 4 Concentraciones de
(ÿ+ÿ)-Tocoferol (ÿggÿ1 FW) (a) y hojas exteriores
a 412,8
%

ÿ-Tocoferol (ÿggÿ1 FW) (b) en 14 hojas interiores

hojas exteriores (histogramas
blancos) e interiores (histogramas a
12
178,0
%

negros) de lechugas Cogollos de 266,1

%

Tudela (CT), Batavia Rubia 10

600,9
%

Munguía (BRM) y Maravilla de 117,8

%
104,5
% a
Verano (MV), no inoculadas con 8 369,3
%
100,0
%
B
100,0
%
a
hongos micorrízicos (NM),
85,4
%

100,0
%

inoculadas con Glomus FW)

g-1
(µg
ÿ
6 bb _
192,5
%

C B
50,9
%

C
(Tocoferol
+ )-

fasciculatum (Gf) e inoculadas B B 101,4

%

con el inóculo comercial (CI). Los

19,2
%

4 100,0
100
%
0 .
D
B Y
valores son medias (n07)±SE.
C
Dentro de cada gráfica (a o b) y 2 CC F
tipo de lechuga, las mismas letras
indican que los valores no son 0
significativamente diferentes B 326,3
%

(pÿ0.05). Las concentraciones de

3.0
(ÿ+ÿ)-tocoferol o ÿ-tocoferol (hojas
externas o internas) en plantas a
micorrícicas también se han 2.5
228,3
%

expresado como porcentajes de 536,0

% 181,5
%

sus respectivos controles no 2.0

a
inoculados (C0100 %) y los
valores aparecen en la parte
113,4
%

-Tocoferol
PF)
g-1
(µg
a B
ÿ 1.5 194,4
%
100,0
%

superior de los correspondientes

histogramas. Peso fresco FW. ND 100,0
%

C
107,6
%

1.0
100,0
%
B
no detectado 100,0
% B 19,4
%
B B
15,38
%

C D D
0.5 C DAKOTA
NORTE
DEL
DAKOTA
NORTE
DEL

D C Y
0
NM Gf C.I. NM Gf C.I. NM Gf C.I.

Connecticut BRM MV

observado por Berta et al. (1995) en Prunus cerasifera asociado la tasa de absorción del suelo y la acumulación adicional en las
con HMA. Estos últimos autores concluyeron que los AMF pueden hojas dependía de la variedad o cultivo de lechuga (Baslam et al.
afectar los procesos en el sistema radicular en diferentes niveles y 2011a), la especie de HMA utilizada (Baslam et al. 2011a) y la
no todos los efectos se deben a una mejor nutrición con fósforo o fuente de P aplicada a las plantas (Baslam et al. 2011a). otros 2011b).
una mayor edad fisiológica. El crecimiento mejorado en lechugas La simbiosis de micorrizas también aumentó los niveles de
inoculadas con AMF contrasta con la inhibición de la acumulación de biomasa
carotenoides totales (Baslam et al. 2011a), y las mejoras fueron más
ción en lechugas suplementada con ultravioleta (UV) quizás debido pronunciadas cuando las plantas de lechuga se cultivaron con un
al alto costo metabólico de los compuestos fenólicos para la suministro de agua restringido (Baslam y Goicoechea 2012). Por el
protección UV (Tsormpatsidis et al. 2010). contrario, el efecto de los AMF sobre los niveles de ascorbato total
Se ha informado ampliamente que las plantas asociadas con no fue muy claro (Baslam et al. 2011a).
AMF pueden tener mayores niveles y/o actividades de enzimas El presente estudio muestra que no solo se mejoró el crecimiento
involucradas en la eliminación de especies de oxígeno activado, y por la micorrización, sino que también se asignaron más recursos a
dichas mejoras se ven beneficiadas por una mayor absorción y la maquinaria fotosintética, como lo demuestra el mayor contenido
acumulación de Fe, Cu, Zn y Mn en los brotes. de plantas micorrizas. de clorofila y/o carotenoides, especialmente en las hojas que están
Sin embargo, el papel de los AMF en el estado de los antioxidantes más expuestas a claro (hojas exteriores). De acuerdo con nuestros
no enzimáticos que también pueden eliminar las especies de oxígeno resultados, Ulrichs et al. (2008) encontraron mayor contenido de
activado (es decir, carotenoides, glutatión, tocoferoles y ácido licopeno y ÿ-caroteno en frutos de plantas de tomate inoculadas con
ascórbico) en los tejidos de las plantas hospedantes necesita más Glomus sp. puede ser una consecuencia del rendimiento fotosintético
investigación (Evelin et al. 2009). Estudios de investigación previos mejorado en las plantas micorrícicas. Más recientemente, Giovannetti
realizados por nuestro grupo de trabajo demostraron que la et al. (2012) encontraron que G. intraradices puede mejorar el valor
asociación de plantas de lechuga con HMA facilitaba la absorción de nutricional y nutracéutico de los frutos de tomate a través de
los mencionados micronutrientes, aunque la
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3126 Appl Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119–3128

modificaciones del metabolismo secundario de la planta y sin (1996) observaron que Lx disminuía en las hojas de Euonymus
producción de compuestos mutagénicos; además, los frutos kiautschovicus al aumentar V+A+Z. Por el contrario, los niveles de
producidos por plantas de tomate micorrizadas mostraron una Lx fueron mayores en las hojas de todas las plantas de lechuga
mayor actividad antiestrogénica que los producidos por plantas no con micorrizas en comparación con sus respectivos controles sin
micorrizadas. Las concentraciones de N, L y ÿ-car en CT sin micorrizas y estos aumentos ocurrieron junto con mejoras de V, A
micorrizas fueron bastante similares a las medidas en las lechugas y Z (con la excepción de A en CT suministrado con el inóculo
de hoja verde Simpson Elite, Black-Seeded Simpson y Concept comercial) .
(Caldwell y Britz 2006). Los aumentos en los niveles totales de clorofilas (chl a y chl b)
Sin embargo, CT micorrizal acumuló niveles mejorados de estos pueden ser interesantes para la salud humana debido a la hipotética
carotenoides, con tales aumentos (especialmente aquellos actividad antiinflamatoria de estos pigmentos (Mulabagal et al.
obtenidos en hojas exteriores después de aplicar la formulación 2010). Las mejoras en las concentraciones de clorofilas observadas
comercial de AMF) siendo significativamente más altos que los en las lechugas verdes CT y BRM asociadas con AMF son
aumentos obtenidos por Caldwell y Britz (2006) al aplicar radiación comparables a las obtenidas al irradiar algunos tipos de lechugas
ultravioleta suplementaria en el invernadero a los tipos de lechugas de hoja verde (Crisp and Green, Marin y Simpson Elite) con UV-A
verdes antes mencionados. Mou (2005) encontró que las suplementario (320 –400 nm) más UV-B (290–320 nm)
concentraciones de ÿ-car y L en lechuga están altamente
correlacionadas y sugirió que este hallazgo es relevante para los (Caldwell y Britz 2006). Sin embargo, estos autores encontraron
mejoradores de lechuga interesados en mejorar la calidad nutricional que la aplicación de radiación ultravioleta suplementaria a varios
de este cultivo. De hecho, se ha demostrado que ÿ-car está tipos de lechugas de hoja roja siempre provocaba disminuciones
inversamente relacionado con el riesgo de enfermedades en los niveles tanto de chl a como de chl b, lo que contrasta con el
cardiovasculares y ciertos tipos de cáncer, mientras que L con los aumento de los niveles de clorofilas en las hojas externas de MV
trastornos relacionados con los ojos (Calvo 2005). Como se expone asociado con AMF. . La simbiosis micorrizal puede modificar la
en la sección de “Resultados”, la aplicación de AMF mejoró la duración del ciclo de vida al acortar el período vegetativo de las
acumulación de V y Z en la lechuga verde CT. Numerosos estudios plantas hospederas (Garmendia et al. 2004). Las plantas responden
muestran la necesidad de aumentar el consumo de V debido a que al envejecimiento de las hojas con un aumento inicial en el
su deficiencia provoca el desarrollo de ciertas enfermedades como contenido de pigmento (Pantin et al. 2012). En conjunto, estos dos
la degeneración macular que conduce a la pérdida irreversible de hallazgos podrían explicar, al menos parcialmente, por qué las
la visión (Ma y Lin 2010). Z protege a través de su capacidad para hojas exteriores de las lechugas con micorrizas acumularon más
absorber eficientemente la luz azul, reduciendo la cantidad de luz clorofilas y carotenoides que las hojas equivalentes de sus controles
que induce el daño oxidativo y extinguiendo las especies reactivas sin micorrizas. Los niveles de pigmentos en las hojas internas
de oxígeno (Demmig-Adams y Adams 2002). podrían explicarse por las diferencias en el microambiente de luz
La inoculación con AMF también mejoró las cantidades de causado tanto por el tamaño y número de hojas externas como por
carotenoides en las hojas externas de BRM y MV, los dos el tipo de cogollo producido por cada tipo de lechuga. Cuanto más
cultivares pertenecientes a la variedad Capitata, y G. fasciculatum grandes y numerosas sean las hojas exteriores y más redondeada
también beneficiaron la acumulación de carotenoides en las hojas internas.
y densa la cabeza de la lechuga, más sombreadas estarán las
hojas de BRM. En términos generales, los aumentos en las hojas interiores. Este es el tipo de cogollo que forman las lechugas
concentraciones de N, L y ÿ-car inducidos por AMF en la lechuga de la variedad Capitata (BRM y MV en nuestro estudio) al final de su crecimiento v
de hoja verde BRM fueron claramente más altos que los logrados Además, las plantas micorrízicas alcanzaron un tamaño mayor que
mediante la aplicación de radiación UV suplementaria a otras sus respectivos controles no micorrízicos, siendo este hallazgo
lechugas de hoja verde (Caldwell y Britz 2006). Además, estos especialmente relevante en MV tras la aplicación del inóculo
autores encontraron que, en el caso de las lechugas de hoja roja, comercial. Por lo tanto, la menor cantidad de clorofilas y/o
el uso de radiación UV suplementaria en el invernadero produjo carotenoides que presentan las hojas internas de las MV
disminuciones en los niveles de N, L y ÿ-car. Por el contrario, la micorrízicas en comparación con las encontradas en las hojas
inoculación de la lechuga de hoja roja MV con HMA aumentó internas de sus controles no micorrícicos puede deberse a un
significativamente las cantidades de estos y otros carotenoides en patrón de aclimatación (Valladares et al. 2012) a la menor incidencia
las hojas externas. de luz sobre las hojas internas de micorrizas MV, especialmente
Como explicaron Demmig-Adams y Adams (1996), mientras después de la aplicación del inóculo comercial.
que V, A, Z, L, N y ÿ-car son ubicuos entre las especies de plantas Existen algunos estudios (ver Reis et al. 2011 como ejemplo)
superiores, Lx está restringida a unos pocos taxones y ocurre en enfocados en la evaluación del potencial antioxidante y composición
varios géneros en la tribu Cichoriae de las Asteraceae. química de hongos ectomicorrízicos con raíces de varios arbustos
Este pigmento se ha caracterizado particularmente en la lechuga, y árboles. Entre los metabolitos determinados en hongos
donde está presente en todos los complejos captadores de luz micorrízicos silvestres aparecieron los tocoferoles, cuyos niveles
principales y secundarios del fotosistema II. Demmig-Adams y Adams fueron especialmente elevados en Suillus luteus (L.:
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Appl Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119–3128 3127

Papas fritas) Gris. Sin embargo, hasta donde sabemos, el El efecto debido al aumento de tamaño de las plantas asociado
presente estudio proporciona los primeros datos sobre el efecto a los HMA indica que la simbiosis micorrícica permitiría potenciar
de la simbiosis de micorrizas arbusculares sobre la acumulación la ingesta de compuestos con propiedades antioxidantes sin
de tocoferoles en tejidos de plantas incluidas en la dieta humana. incrementar el consumo de lechuga en la dieta.
Solo unos pocos estudios (Ginebra et al. 2010a, b) aportan
información sobre el efecto del hongo micorrícico G. intraradices
sobre el contenido de vitamina E en plantas con propiedades Agradecimientos Marouane Baslam ha recibido una beca de la Asociación de
medicinales (Salvia officinalis L. y Sideritis scardica Griseb). En Amigos de la Universidad de Navarra (ADA). Raquel Esteban recibió un contrato
estos últimos estudios, la simbiosis micorrícica mejoró levemente de médico especialista de la Universidad del País Vasco. Este estudio ha sido
financiado en parte por los proyectos de investigación UPV/EHU-GV IT-299-07
o no modificó los niveles de vitamina E en las plantas hospederas.
del Gobierno Vasco y BFU2010-15021 del Ministerio de Educación y Ciencia de
Concentraciones de ÿ-ÿ tocoferol y ÿ-tocoferol en plantas de España.
lechuga no micorrizadas var. Longifolia (CT) y var. Capitata (BRM Los autores están muy agradecidos a Adriana Hernández, de Atens, Tarragona,
y MV) fueron inferiores a los encontrados por Lizarazo et al. España, por proporcionar amablemente el inóculo comercial.

(2010) en L. sativa L. var. Romaine d'Hiver. Curiosamente,

independientemente del tipo de lechuga y de la especie de
micorriza, las hojas exteriores de las lechugas con micorriza Referencias
contenían más tocoferoles que las de control. Aparentemente,
este resultado representa una paradoja, ya que este antioxidante
Baslam M, Goicoechea N (2012) El déficit hídrico mejoró la capacidad de los
es una molécula típica que responde al estrés (Munné-Bosch
hongos micorrízicos arbusculares (HMA) para inducir la acumulación de
2005) y las lechugas micorrizadas mostraron un rendimiento y un crecimiento mucho antioxidantes
compuestos mejores. en hojas de lechuga. Mycorrhiza 22:347–359
Esto es de gran interés ya que los tocoferoles son constituyentes Baslam M, Garmendia I, Goicoechea N (2011a) Los hongos micorrizales

de la vitamina E, la cual es esencial para la salud humana arbusculares (AMF) mejoraron el crecimiento y la calidad nutricional de la
lechuga cultivada en invernadero. J Agric Food Chem 59:5504–5515
(Bramley et al. 2000). Los tocoferoles (principalmente ÿ-tocoferol)
Baslam M, Pascual I, Sánchez-Díaz M, Erro J, García-Mina JM, Goicoechea
muestran una potente actividad antioxidante en los sistemas N (2011b) la fuente de nutrición de fósforo. J Agric Food Chem 59:11129–11140
biológicos y, recientemente, Lira et al. (2011) sugirieron que la
suplementación con vitamina E podría ser efectiva para evitar la
obesidad. Sin embargo, los aumentos de tocoferoles observados
en las lechugas con micorrizas se restringieron a las hojas Berta G, Fusconi A, Trotta A (1993) Infección micorrícica VA y la morfología y
exteriores, que se quitan durante la cosecha. Los mayores niveles función de los sistemas radiculares. Bot de experiencia ambiental 33: 159–
173
de tocoferoles en las hojas externas (y, en consecuencia, más
Berta G, Trotta A, Fusconi A, Hooker JE, Munro M, Atkinson D, Giovannetti M,
viejas) concuerdan con los hallazgos de Lizarazo et al. (2010).
Morini S, Fortuna P, Tisserant B, Gianinazzi Pearson V, Gianinazzi S
Estos autores concluyeron que la acumulación de tocoferol con (1995) Cambios inducidos por micorrizas arbusculares en el crecimiento
el envejecimiento de las hojas representa un rasgo general en las de las plantas y la morfología del sistema radicular en Prunus cerasifera.
plantas, incluida la lechuga. En hojas de plantas superiores, los Árbol Physiol 15: 281–293
Borghi S (2003) Especial: IV gama (verduras). Cultivos Protegidos
tocoferoles son más abundantes en tilacoides y plastoglóbulos, 32:21–43
siendo estos últimos más numerosos y alcanzando mayor Bramley PM, Elmadfa I, Kafatos A, Kelly FJ, Manios Y, Roxborough HE, Schuch
diámetro en hojas senescentes (Munné Bosch y Alegre 2004). La W, Sheehy PJA, Wagner KH (2000) Revisión: vitamina E. J Sci Food Agr
hipótesis de que los HMA pueden haber acortado el ciclo de vida 80:913–938 Caldwell CR, Britz SJ (2006) ) Efecto de la radiación
ultravioleta suplementaria sobre la composición de carotenoides y clorofila de
de las lechugas (con la consiguiente diferencia en el estado
cultivares de lechuga de hoja cultivada en invernadero (Lactuca sativa L.).
fenológico de las plantas micorrízicas y no micorrízicas) también J Food Compos Anal 19:637–644 Calvo MM (2005) Luteína: un ingrediente
podría explicar por qué las hojas externas de las lechugas valioso de frutas y verduras.
micorrícicas acumularon mayor cantidad de tocoferol que las
Crit Rev Food Sci 45:671–696
hojas externas de las no micorrícicas. -controles de micorrizas.
Demmig-Adams B, Adams WW III (1996) Composición de clorofila y carotenoides
Cualesquiera que sean las razones de tal acumulación, los en hojas de Euonymus kiautschovicus aclimatadas a diferentes grados de
presentes resultados destacan que la micorrización no solo estrés por luz en el campo. Aust J Plant Physiol 23:649–659 Demmig-
mejora el crecimiento de la lechuga, sino también el contenido de vitamina Adams
E. B, Adams WW (2002) Antioxidantes en la fotosíntesis y en la
nutrición humana. Science 298:2149–2153 Evelin H, Kapoor R, Giri B (2009)
En conclusión, nuestro estudio ha demostrado que la Hongos micorrízicos arbusculares en el alivio del estrés salino: una
asociación de lechugas de hoja verde y roja con HMA constituye revisión. Ann Bot 104:1263–1280 García-Plazaola JI, Becerril JM (1999) Un
una alternativa factible tanto a la ingeniería genética como a la método HPLC rápido para medir antioxidantes lipofílicos en plantas

aplicación de radiación ultravioleta suplementaria para mejorar la estresadas: determinación simultánea de carotenoides y tocoferoles. Phytochem
Anal 10:307–313 García-Plazaola JI, Becerril JM (2001) Cambios
calidad nutricional de este cultivo. Además, el hecho de que se
estacionales en pigmentos fotosintéticos y antioxidantes en haya (Fagus
produjeran niveles elevados de carotenoides, clorofilas y sylvatica) en una
tocoferoles en las lechugas micorrizadas a pesar de la dilución
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3128 Appl Microbiol Biotechnol (2013) 97:3119–3128

Clima mediterráneo: implicaciones para el diagnóstico de disminución de árboles. Lizarazo K, Fernández-Marín B, Becerril JM, García-Plazaola JI (2010) El envejecimiento
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