Informe - Determinacion de Proteinas

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ESTANDARIZACION DE SOLUCIONES

SENA REGIONAL VALLE DEL CAUCA


CENTRO AGROPECUARIO BUGA

DETERMINACION DE PROTEINAS

Tecnólogo en control y calidad en alimentos, Centro Agropecuario De Buga.


Servicio Nacional De Aprendizaje-Sena Guadalajara De Buga, Valle del Cauca

Aprendices: Carlos Andrés Chincha Ahumada, Sergio Andrés Gutiérrez Escobar

Instructora: Yuli Tatiana Montaño Escobar

RESUMEN: orgánicamente a sulfato de amonio. La


En el laboratorio de control de calidad en liberación de amoníaco por adición de
Guadalajara de Buga, en el área de hidróxido de sodio. Destilación al vapor y
fisicoquímica Sena CAB, se realizó la recoger el destilado en la solución de ácido
bórico. Valoración de acidimétrico de
determinación de proteínas de banano y
amonio. Este método corresponde al método
lentejas. Donde se Pesó 2 g de muestra para la determinación del nitrógeno total en
perfectamente molida y homogeneizada los distintos alimentos, por ejemplo,
luego se Pasó la muestra al tubo de productos dietéticos. Nitrógeno de nitratos y
digestión donde se adiciono 15 ml de nitritos no se determina con este método.
H2SO4 del 97% y una tableta catalizadora a
cada muestra adicionalmente se Precalentó PROTEÍNA: Son uno de los tipos de
moléculas básicas para la vida. Son
el digestor a 350ºC y se coloca la canasta
conjuntos de aminoácidos, por lo general
con los tubos, luego conectar y prender el numerosos (pueden tener varios millares de
Scrubber para atrapar vapores. Se debe aminoácidos en su composición), y por lo
Digestar 45 minutos o hasta que las tanto son de elevado peso molecular.
muestras se tornen verde brillante, dichas Si sólo llevan en su composición
muestras se las deja enfriar, Llevar los tubos aminoácidos se denominan proteínas
al destilador Buchí, Programar el equipo simples. Si contienen además otros
componentes orgánicos e inorgánicos, se
para que adicione automáticamente 30 ml
llaman proteínas conjugadas.
de agua y 70 ml de NaOH y destilar durante Constituyen las enzimas celulares que
4 minutos, Recoger el destilado sobre 100 hacen posible la existencia del metabolismo,
ml de Ácido Bórico al 2% con 2 gotas de los sillares estructurales de las membranas
indicador mixto, Titular cada una de las de la célula, cumplen un variadísimo número
muestras, hasta viraje de color, anotar los de funciones en el interior de ésta
mililitros gastados en dicha valoración. (transportadores, almacenadores, sistemas
de inmunidad etc.).

INTRODUCCIÓN:
Rápida mineralización de la muestra en
aproximadamente 370 ° C con ácido 1. OBJETIVO
sulfúrico y catalizador de Kjeldahl, una Establecer la metodología para
mezcla de cobre, sodio y / o sulfato de cuantificar el nitrógeno total
potasio, que transforma el nitrógeno ligado expresado como Proteína, en las
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muestras de materia prima y


productos terminados recibidas en el
Laboratorio de Control de Calidad de 2. Materiales, equipos y reactivos
Alimentos.

Balanza analítica Etanol


Bureta Hidróxido de Sodio
Tubos de digestión y soporte Indicador Rojo de Metilo
Digestor Buchi Indicador Verde de Bromocresol
Destilador Buchi Tabletas Catalizadoras
Erlenmeyer boca ancha 250 ml Agua destilada o de pureza equivalente
Probeta
Scrubber Buchi
Ácido Bórico (reactivo analítico)
Ácido Clorhídrico 0.1N
Ácido clorhídrico al 37%

Mediante la adición de una solución de


Hidróxido de Sodio (NaOH), es formada una
3. Procedimiento (Determinación de base de amonio (NH4OH) altamente volátil,
proteína) la cual es destilada con vapor y recolectada
La determinación se fundamenta en una en una solución de Acido Bórico.
cuantificación del nitrógeno que contiene
una muestra. El método Kjeldahl, consiste
en tratar la muestra con Acido Sulfúrico NH4HSO4 + NaOH ----------------
concentrado; este ácido destruye la materia
orgánica mediante una fuerte oxidación  NH4OH + NaHSO4
formando dióxido de carbono y agua por
acción del ácido con ciertos catalizadores. 4.3 TITULACIÓN:
El amoníaco formado es cuantificado
Para la determinación de proteína es mediante titulación con solución de Acido
utilizado el método Kjeldahl que consta de Clorhídrico 0.1N.
tres pasos:

4.1 DIGESTION:
NH 4OH + H 3BO3 ---------------
Consiste en tratar la muestra con Acido
Sulfúrico concentrado, éste ácido destruye la  NH4H2BO3
materia orgánica mediante una fuerte
oxidación donde los compuestos nitrógeno
NH 4H2BO3 + HCL ---------------
orgánico son convertidos cuantitativamente
en Sulfato de Amonio (NH4)2SO4. NH4Cl + H3BO3

MUESTRA + H 2SO4 -----------------


NH4HSO4 + CO2 + SO2 PREPARACION DE REACTIVOS:

- Hidróxido de Sodio 32 %
4.2 DESTILACIÓN: - Ácido Clorhídrico 0.1N
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- Ácido Bórico al 2%: Disolver 6 g de - Inmunofijación


Ácido Bórico en 600 ml de agua y - Cromatografía
calentar agitando constantemente,
enfriar y completar a volumen de 1.0 (TEMA3PROTEÍNASalumno.doc, s.f.)
l con agua destilada. Ajustar el pH a
4.5 con Ácido Bórico o agua según la
necesidad.
- Indicador mixto para Proteína: Pesar 4. Cálculos
1.0 g de Rojo de Metilo y 2.0 g de
Verde de Bromocresol. Diluir en Emplee la siguiente ecuación para
Etanol neutro y completar a 100 ml. calcular el porcentaje de nitrógeno total
en la muestra trabajada:

DETERMINACION DE PROTEINA: N∗( V 1−V 0)∗1.4007


- Pesar 2 g de muestra perfectamente %N =
P
molida y homogeneizada
- Pasar la muestra al tubo de %Proteína=%Nitrógeno∗F
digestión.
- Adicionar 15 ml de H2SO4 del 97% y
una tableta catalizadora.
- Precalentar el digestor a 350OC y
Donde:
colocar la canasta con los tubos,
%N = Porcentaje de Nitrógeno Total
conectar y prender el Scrubber para
N = Normalidad del HCL
atrapar vapores.
V1 (HCL) = Volumen de ácido gastado en la
- Digestar 45 minutos o hasta que las
titulación (mL)
muestras se tornen verde brillante,
1.4007= Equivalente del Nitrógeno
dejar enfriar.
%P= Peso en g de la muestra.
- Llevar los tubos al destilador Buchi.
V0= Volumen de HCL consumido en el
- Programar el equipo para que
blanco
adicione automáticamente 30 ml de
F= Factor de conversión para pasar de
agua y 70 ml de NaOH y destilar
contenido en nitrógeno a contenido en
durante 4 minutos.
proteínas. La mayoría de las proteínas
- Recoger el destilado sobre 100 ml de
contienen un 16% de N2, de modo que el
Ácido Bórico al 2% con 2 gotas de
factor de conversión es 6,25 (100/16 = 6,25),
indicador mixto.
pero se han obtenido empíricamente otros
- Titular cada una de las muestras,
factores de conversión en función de la
hasta viraje de color, anotar los
materia prima utilizada.
mililitros gastados en dicha
valoración.

MÉTODOS PARA DETERMINAR


ANALISIS DE PROTEÍNAS:

- Turbidimetría y nefelometría
- Inmunodifusión - Electroforesis
- Inmunoelectroforesis
- Inmunoelectroforesis en cohete
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN. En conclusión se logró obtener unos datos,


cuyos resultados estuvieron por debajo y por
Nombre # Contenido Peso Peso encima de lo establecido y conocido en la
de la de inicial final de la industria alimentaria.
muestra proteínas de la Muestra
muestra gr
gr (VANGUARDIA, s.f.)
Banano 1 1,2 g 1.0 g 2.4 g (CUERPOMENTE, s.f.)
lentejas 2 23.8 gr 1.0 g 2.1 g

% proteína banano

% nitrógeno 0,11 N * (8,6 mL-1 mL) * 1,4007/ 1


g= 1,17

% proteína=1,17 % * 83,33= 97,4 %

% proteína lentejas

% nitrógeno 0,11 N * (1,3 mL-1 mL) * 1,4007/ 1


5. Bibliografía
g= 0,046 %
% proteina 0,046% *4,34 = 0,19 % AOAC International: “Official Methods Of
Analysis”. 17aed. Gaithersburg, USA, 2000

CUERPOMENTE. (s.f.). Lentejas todas las propiedades y beneficios - Cuerpomente. Obtenido


de https://www.cuerpomente.com/guia-alimentos/lentejas

TEMA3PROTEÍNASalumno.doc. (s.f.). TEMA 3. Metodos para el analisis de proteinas . Obtenido


de TEMA3PROTEÍNASalumno.doc:
http://www4.ujaen.es/~esiles/TEMA3PROTEINASalumno.pdf

VANGUARDIA, L. (s.f.). Banana: propiedades, beneficios y valor nutricional del alimento.


Obtenido de LA VANGUARDIA:
https://www.lavanguardia.com/comer/frutas/20180921/451884334419/bananas-valor-
nutricional-propiedades-beneficios.html

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