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GUÍA PARA CORTES ANATÓMICOS DE LA MADERA

Book · October 2018

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3 authors:

Cesar Emiliano Feijoo Feijoo Danny Ramón Armijos

Universidad Nacional de Loja (UNL) Universidad Nacional de Loja (UNL)
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Darwin Alexander Pucha Cofrep

Universidad Nacional de Loja (UNL)
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corta en árboles tropicales para el manejo forestal sostenible al sur del Ecuador] View project

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i
 Facultad Agropecuaria y de Recursos Naturales Renovables
Carrera de Ingeniería Forestal
Laboratorio de Anatomía de Maderas Tropicales

GUÍA PARA CORTES ANATÓMICOS DE LA MADERA

Autores:
Cesar Emiliano Feijoo Feijoo
Danny Daniel Ramón Armijos
Darwin Alexander Pucha Cofrep

Video Tutorial en Línea: “Preparación de cortes anatómicos

de madera en especies tropicales”

URL: https://www.youtube.com/watch?v=dRHEKOIhrkU

ISBN: 978-9978-355-37-4

Revisión de pares:
Ing. Fabián Tamayo
Universidad Estatal Amazónica del Puyo, Ecuador.

Ing. Johana Muñoz Mg.Sc.

Universidad Nacional de Loja, Ecuador.

Octubre, 2018
Loja, Ecuador

i
 CONTENIDO

1. INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................... 1
2. METODOLOGÍA .......................................................................................................................... 2
2.1 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS .................................................................................................... 3
2.1.1 Materiales de campo .............................................................................................................. 3
2.1.2 Materiales de laboratorio ....................................................................................................... 3
2.1.3 Reactivos................................................................................................................................. 3
2.1.4 Equipos ................................................................................................................................... 3
2.2 OBTENCIÓN DE CORTES ANATÓMICOS DE MADERA. ................................................................................. 3
2.2.1 Corte transversal, tangencial, y radial .................................................................................... 4
2.2.2 Corte transversal completo de xilema y corteza con el uso de parafina................................. 6
2.2.3 Etiquetado de muestras ........................................................................................................ 10
2.3 TINCIÓN, LAVADO Y DESHIDRATACIÓN DE LAS FINAS LÁMINAS DE MADERA ................................................. 11
2.3.1 Preparación del Tinte ............................................................................................................ 11
2.3.1.1 Preparación de la solución de Safranina .......................................................................... 12
2.3.1.2 Preparación de la solución de Astrablue .......................................................................... 12
2.3.2 Tinción de muestras de madera............................................................................................ 12
2.4 SELLADO PERMANENTE Y SECADO ...................................................................................................... 14
2.4.1 Sellado permanente .............................................................................................................. 14
2.4.2 Secado de las muestras ........................................................................................................ 15
2.5 DIGITALIZACIÓN DE IMÁGENES ANATÓMICAS Y CONFIGURACIÓN DEL SOFTWARE ......................................... 17
2.5.1 Observación digital de la muestra anatómica. ..................................................................... 17
2.5.2 Ajuste de color, matiz, brillo, etc. ......................................................................................... 19
2.5.3 Configuración de la escala en la imagen .............................................................................. 20
2.5.4 Captura y guardado de imágenes......................................................................................... 21
2.5.5 Combinación de múltiples imágenes .................................................................................... 22
3. ANEXOS: EJEMPLOS DE CORTES MICROSCÓPICOS DE LA MADERA .............................................27
Cortes transversales, tangencial, y radial de la madera .................................................................... 27
Cortes transversales con médula, xilema, y corteza .......................................................................... 28
4. AGRADECIMIENTOS ..................................................................................................................29
5. REFERENCIAS ............................................................................................................................30

ii
 ÍNDICE DE FIGURAS
Figura 1. Estructura de la madera mostrando sus tres planos ...................................................... 2
Figura 2. Colocación de la cuchilla en el micrótomo. .................................................................. 4
Figura 3. Identificación del plano de corte. .................................................................................. 4
Figura 4. Instalación del cubo de madera en el micrótomo ......................................................... 4
Figura 5. Calibración del ancho del corte, con el tornillo graduado ............................................ 5
Figura 6. Ubicación del corte de madera entre un porta y cubre objetos ..................................... 5
Figura 7. Análisis del corte de madera en el microscopio. .......................................................... 6
Figura 8. Selección de pequeñas ramas lignificadas con un diámetro menor a 1cm. .................. 6
Figura 9. Medición (Izq.) y corte (Der.) de pequeñas ramas en secciones de 2,5 cm. ................. 7
Figura 10. Fijación de los moldes en una superficie plana ......................................................... 7
Figura 11. Relleno de 1 a 1,5cm de Parafina en el molde. ........................................................... 7
Figura 12. Colocación (Izq.) y fijación (Der.) de la muestra en el centro del molde. .................. 8
Figura 13. Reposo de 10 a 15min para la solidificación de la parafina. ...................................... 8
Figura 14. Extracción de la muestra con parafina desde su molde. ............................................. 8
Figura 15. Medición y extracción del exceso de parafina ............................................................ 9
Figura 16. Ubicación de la muestra en el micrótomo. ................................................................. 9
Figura 17. Corte de finas láminas de madera de 2-5 µm.............................................................. 9
Figura 18. Separación de láminas de madera de la parafina. ..................................................... 10
Figura 19. Selección, montaje y etiquetado de las finas láminas de madera ............................. 10
Figura 20. Formato de etiquetado de cortes anatómicos ............................................................ 11
Figura 21. Tinción de muestras. ................................................................................................. 12
Figura 22. Corte transversal de Handroanthus billbergii, .......................................................... 13
Figura 23. Reposo de la muestra de 5 a 10 min. ........................................................................ 13
Figura 24. Verificación de muestras libres de excedente de tinte .............................................. 14
Figura 25. Compuestos químicos formaldehído y diluyente ...................................................... 14
Figura 26. Colocación de la muestra deshidratada en un portaobjetos. ..................................... 14
Figura 27. Colocación de Bálsamo de Canadá con ayuda de una jeringa. ................................. 15
Figura 28. Colocación del cubre objetos sobre el bálsamo. ....................................................... 15
Figura 29. Colocación de plástico resistente al calor. ................................................................ 16
Figura 30. Muestras montadas en una placa metálica y presionadas con imanes. ..................... 16
Figura 31. Secado y limpieza de muestras. ................................................................................ 16
Figura 32. Microscopio Olympus modelo BX41TF con cámara digital .................................... 17
Figura 33. Software para la digitalización de imágenes ............................................................ 18
Figura 34. Verificación del número de lente del microscopio ................................................... 18
Figura 35. Calibración manual de imagen ................................................................................. 19
Figura 36. Ajuste de la cámara en dirección de los tejidos ........................................................ 20
Figura 37. Insertar escala sobre la fotografía capturada ............................................................. 20
Figura 38. Configuración de la escala sobre la imagen con las opciones del Micrómetro ........ 21
Figura 39. Guardado digital de imágenes................................................................................... 22
Figura 40. Combinación de imágenes. ....................................................................................... 23
Figura 41 Software ..................................................................................................................... 24
Figura 42. Importación de imágenes. ......................................................................................... 24
Figura 43. Unión de imágenes ................................................................................................... 25
Figura 44. Proceso de completar el área de la imagen. .............................................................. 26
Figura 45. Guardado de la imagen unida. .................................................................................. 26

iii
1. INTRODUCCIÓN

El consumo de madera en regiones tropicales es cada vez mayor, mientras que el conocimiento
técnico y científico para optimizar su uso es muy limitado tomando en cuenta que aún no se
tiene una descripción completa de las características anatómicas, físicas y mecánicas de las
principales especies maderables o comerciales. Generar más información sobre las
características y propiedades de cada tipo de madera amplía las alternativas de consumo, sobre
todo en regiones con alta diversidad forestal. El potencial de una madera está determinado por
sus propiedades y características físico-mecánicas, macroscópicas y microscópicas que
dependen de las condiciones de sitio y climáticas. Como ya lo mencionó Rendle (1932), el
vínculo entre la silvicultura y la botánica está en el estudio de la Anatomía de la Madera. Así
como en la botánica el estudio de los árboles por sus características morfológicas permite la
identificación y clasificación taxonómica. La madera analizada desde sus características
microscópicas también nos permite llegar a un nivel de clasificación e identificación
taxonómica. Las diferencias de las características microscópicas anatómicas es como una
huella digital para identificar una especie maderable de otra.

Por ello, la presente guía técnica intenta ser una herramienta didáctica de gran utilidad para el
estudio de anatomía de la madera para estudiantes universitarios, técnicos, o quienes estén
relacionados con el estudio anatómico de las maderas. En esta guía se explica paso a paso la
metodología utilizada en el Laboratorio de Anatomía de Maderas Tropicales de la Universidad
Nacional de Loja (Ecuador) para la realización de cortes anatómicos incluyendo un propio
método de bajo coste para obtener resultados de buena calidad. De esta manera damos nuestro
aporte para contribuir en la generación de conocimiento en especies maderables locales sobre
todo en las de mayor demanda y valor comercial. Por lo tanto, los objetivos específicos de esta
guía están encaminados para que el estudiante o técnico pueda:

- Realizar, tinturar, y sellar un corte anatómico de la madera en su plano transversal,

tangencial, y radial.
- Realizar, tinturar, y sellar un corte transversal completo que incluya médula, xilema, y
corteza con el uso de parafina.
- Digitalizar los cortes anatómicos

1
2. METODOLOGÍA

La madera, leño, o xilema se caracteriza por ser un material heterogéneo y anisotrópico, es

decir sus propiedades y características anatómicas difieren de acuerdo con su plano de
observación. Existen notables diferencias anatómicas entre especies leñosas de Angiospermas
(maderas duras) y Gimnospermas (maderas suaves), especialmente con la prescencia y
ausencia de vasos. Los planos de corte analizados en anatomía de la madera son tres, un
transversal y dos longitudinales (tangencial y radial, ver Figura 1). Puertas et al. (2013) los
describe de la siguiente manera:

• Transversal: Es la sección que resulta al cortar una pieza de madera en dirección

perpendicular al eje longitudinal del tronco.
• Longitudinal Tangencial: Es el corte longitudinal a los anillos de crecimiento y
perpendicular a los radios
• Longitudinal Radial: Es el corte longitudinal paralelo a los radios y perpendicular a los
anillos de crecimiento.

Figura 1. Estructura de la madera mostrando sus tres planos: transversal (Tr), tangencial (Ta) y radial
(R), así como anillos de crecimiento y el eje longitudinal. Modificado de Franke y Quenneville (2011).

2
2.1 Materiales, equipos y reactivos

2.1.1 Materiales de campo 2.1.3 Reactivos

✓ Muestras de madera de 1cm3 ✓ Agua destilada
✓ Muestras de ramas forestales, ✓ Alcohol potable al 50%, 75%, y
diámetro ≤ 1cm y 2,5 cm longitud. 96%
✓ Bálsamo de Canadá
2.1.2 Materiales de laboratorio ✓ Diluyente Sintético
✓ Cajas Petri ✓ Formaldehído o Metanal
✓ Cuchillas para micrótomo ✓ Parafina (vela)
✓ Fosforera ✓ Tintes (Astrablau o Azul de
✓ Imanes metileno y Safranina)
✓ Jeringa
✓ Lámina plástica 2.1.4 Equipos
✓ Moldes plásticos (pipetas recicladas) ✓ Micrótomo
✓ Pinceles de cerda fina ✓ Estufa
✓ Pinza quirúrgica ✓ Hornilla o placa calentadora
✓ Pipetas ✓ Estereoscopio
✓ Placa metálica ✓ Microscopio con cámara digital
✓ Podadora de mano ✓ Computadora con Software para
✓ Portaobjetos capturar imágenes digitales
✓ Cubreobjetos
✓ Regla milimetrada
✓ Varilla metálica o alambre

2.2 Obtención de cortes anatómicos de madera.

- Para la obtención de cortes anatómicos en el micrótomo se requiere de una muestra de

madera de 1 cm3.

- Es fundamental que en la muestra de madera estén bien orientados los tres planos de corte,
o al menos el plano de corte sobre el cual nos interesa hacer el corte anatómico (Figura 1).

“El éxito de un buen corte depende de la orientación de la muestra de madera en sus planos
de corte”

3
 2.2.1 Corte transversal, tangencial, y radial

- Primeramente, se ajusta una cuchilla

en el micrótomo con mucha
precaución, verificando que quede
alineada y firme (Figura 2).

Figura 2. Colocación de la cuchilla en el

micrótomo.

- Luego se identifica el plano

anatómico a cortar. Para realizar un
corte radial es mejor si se marca la
dirección de los radios sobre el plano
transversal, y posteriormente los
cortes se van haciendo siguiendo estas
direcciones (Figura 3)

Figura 3. Identificación del plano de corte.

Las líneas muestran la dirección de los radios
sobre un plano transversal.

- Posterior se instala el cubo de madera en el micrótomo y se humedece el plano a cortar con

agua destilada, esto con el fin de mantener asepsia en las muestras, en un medio libre de
impurezas (Figura 4).

Figura 4. Instalación del cubo de madera en el micrótomo, e hidratación del plano a

cortar.

4
 - Se ajusta la cuchilla lo más cerca al
cubo de madera. Se realizan cortes
finos de prueba hasta igualar toda la
superficie del cubo de madera. Para
obtener los cortes definitivos se gira
el tornillo graduado del micrótomo
de 2 a 5 micras, tratando de obtener
un corte de madera completo lo más Figura 5. Calibración del ancho del corte, con
el tornillo graduado (2-5 µm).
delgado posible (Figura 5). Sin
embargo, el espesor del corte puede
variar dependiendo de la especie
maderable.

- Con un pincel o una pinza se toma el corte de madera, se coloca en un portaobjetos, en caso
de que se enrolle con ayuda del pincel húmedo se extiende cuidadosamente, enseguida se
coloca el respectivo cubreobjetos, para su posterior traslado y visualización en el
microscopio (Figura 6).

Figura 6. Ubicación del corte de madera entre un porta y cubre objetos, con la ayuda de un pincel.

5
 - Seguidamente, se verifica la
calidad del corte en el
microscopio (Figura 7).

Figura 7. Análisis del corte de madera en el

microscopio.

2.2.2 Corte transversal completo de xilema y corteza con el uso de parafina

Este proceso se lo realiza en cortes tranversales completos de una pequeña rama para evitar
el desprendimiento de la corteza. Sin embargo, no en todas las especies hay este problema,
sobre todo cuando las muestras son frescas la corteza permanece firme junto al xilema.
El uso de parafina permitirá obtener un corte completo de ramas con médula, xilema,
floema, y corteza evitando principalmente que la corteza se desprenda del resto del corte y
así poder visualizarlo y analizarlo en el microscopio.

- Para este procedimiento,

primero se seleccionan ramas
pequeñas con un máximo de 1
cm de diámetro que son
generalmente las ramas más
jóvenes del árbol, dado que entre
menor diámetro será menor el
número de fotografías para su
posterior digitalización (Figura
8). Figura 8. Selección de pequeñas ramas
lignificadas con un diámetro menor a 1cm.

- Una vez seleccionadas las ramas, con una podadora se corta en secciones de 2,5 cm de
longitud, y se las etiqueta para su registro e identificación (Figura 9).

6
Figura 9. Medición (Izq.) y corte (Der.) de pequeñas ramas en secciones de 2,5 cm.

- Luego para realizar el tratamiento de las muestras con cera. Se derrite una pequeña cantidad
de parafina líquida o cera, sobre una superficie plana y firme para adherir temporalmente el
molde plástico sobre esta, (los moldes se obtuvieron de pipetas plásticas recicladas) (Figura
10).

Figura 10. Fijación de los moldes en una superficie plana. Primero se coloca unas gotas sobre una
superficie (Izq.) y sobre ello se fijan los moldes plásticos (Der.).

- Posterior a ello, hay que derretir

y dejar caer una pequeña
cantidad de parafina líquida en
el interior de los moldes. El
líquido debe llenar la base del
molde aproximadamente de 1 a
1,5 cm del total del recipiente
(Figura 11).
Figura 11. Relleno de 1 a 1,5cm de parafina en el
molde.

- Seguidamente ubicar la muestra en el centro del molde, y fijar con 2-4 gotas de parafina
derretida alrededor de la misma. Se trata que siempre la muestra quede fija en el centro del

7
 molde, para ello se puede presionar con el dedo la parte superior de rama por unos segundos
hasta que la parafina se solidifique (Figura 12).

Figura 12. Colocación (Izq.) y fijación (Der.) de la muestra en el centro del molde.

- Una vez cubierta la muestra con parafina, se la deja reposar de 10 a 15 min, para que se
solidifique completamente (Figura 13).
- Los moldes se retiran con la ayuda de una cuchilla o estilete realizando un corte en el
extremo del molde, se procede a desprender la muestra con parafina cuidadosamente
(Figura 14).

Figura 13. Reposo de 10 a 15min para Figura 14. Extracción de la muestra con parafina
la solidificación de la parafina. desde su molde.

- Antes de realizar los cortes, y para un mejor ajuste de la muestra en el micrótomo se deja
la pequeña rama cubierta en uno de sus extremos con sólo 0,5 cm de parafina. Para ello
primero se mide y se retira el exceso de parafina con un bisturí cuidadosamente sin dañar
la muestra (Figura 15).

8
Figura 15. Medición y extracción del exceso de parafina de la muestra hasta que quede
cubierta sólo con una longitud de 0,5 cm de parafina sólida.

- Se ubica la muestra con la sección libre de parafina en la prensa del micrótomo, y se

coloca una caja petri con agua destilada en la parte inferior de la cuchilla para que los
cortes caigan sobre el agua y no se dañen (Figura 16).

Figura 16. Ubicación de la muestra en el micrótomo.

- Los cortes tienen que ser lo

más fino posible. Para ello se
calibra el micrótomo de 2-5
µm, y los cortes que caen
sobre la caja Petri se los deja
en reposo en un tiempo de 5 a
8 minutos para que
automáticamente se
desprenda la parafina de cada Figura 17. Corte de finas láminas de madera de 2-5 µm.
corte (Figura 17).

9
- En aquellos cortes donde no se
ha desprendido la parafina, con
la ayuda de un pincel fino y con
mucho cuidado, se mueve
suavemente las muestras que
están dentro del agua destilada
hasta que la parafina que las
cubre se vaya desprendiendo
(Figura 18). Figura 18. Separación de láminas de madera de la
parafina.

- Se selecciona y coloca las

mejores muestras en un
portaobjetos, y se las etiqueta
para su mejor identificación
(Figura 19).

Figura 19. Selección, montaje y etiquetado de las finas

láminas de madera en sus respectivos portaobjetos.

2.2.3 Etiquetado de muestras

Para una mejor organización e identificación de las muestras, en el laboratorio se utiliza el

formato de etiquetado que se muestra a continuación (Figura 20).

10
Figura 20. Formato de etiquetado de cortes anatómicos, donde incluye nombre de especie, origen de
muestra, tipo de corte, fecha, etc.

2.3 Tinción, lavado y deshidratación de las finas láminas de madera

2.3.1 Preparación del Tinte

De acuerdo a Gärtner y Schweingruber (2013) la combinación Safranina /Astrablue crea los

mejores contrastes entre diferentes tipos de paredes celulares. En donde la Safranina tiñe las
estructuras de células lignificadas de color rojo, y el Astrablue tiñe las estructuras de celulosa
o no lignificadas de color azul. Recuerde como sustituto al Astrablue se puede utilizar Azul de
Metileno.

Para preparar el tinte se debe usar una proporción de 1:1 entre soluciones de
Safranina/Astrablue (¡no en polvo!). No hay necesidad de teñir usando un tinte después del
otro, en su lugar se pueden mezclar y teñir las diferentes estructuras de la madera
simultáneamente.

11
 2.3.1.1 Preparación de la solución de Safranina

<< Colocar 0,8 g de polvo de safranina en 100 ml de agua destilada >>

- Nunca use agua común o de la llave para este procedimiento. Debido a que no se desea
agentes patógenos o extraños que degraden la calidad del tinte. Agitar fuertemente la
solución hasta que ésta quede de color rojo oscuro y no queden restos o grumos sin
disolver.
- Cuando se agita la solución, se crea una cierta cantidad de espuma, ésta no afecta la
mezcla y desaparecerá después de unas pocas horas.

2.3.1.2 Preparación de la solución de Astrablue

<< Colocar 0,8 g de polvo de Astrablue en 100 ml de agua destilada + 2 ml de ácido acético >>
(Sin el ácido acético, el tinte no se mantendrá estable)

- Nunca use agua común o de la llave para este procedimiento. Cierre el recipiente
fuertemente y agítelo hasta que la solución sea azul oscura y no queden restos o grumos
sin disolver. El polvo de Astrablue requiere una sacudida más intensa y más larga que
la Safranina para eliminar todos los grumos (Gärtner y Schweingruber, 2013).

2.3.2 Tinción de muestras de madera

- Para la tinción de los cortes

anatómicos se coloca una
gota de tinte sobre la muestra
comprobando que cubra toda
la superficie (Figura 21).

Figura 21. Tinción de muestras.

- El tinte preparado con el método indicado anteriormente sirve para diferenciar los
diferentes tipos de tejidos en la madera. (Figura 22).

12
- Una vez colocado el tinte sobre toda la muestra, se deja en reposo de 5 a 10 minutos
dependiendo de la dureza de la madera (Figura 23).

Figura 22. Corte transversal de Figura 23. Reposo de la muestra de 5 a 10

Handroanthus billbergii, donde se diferencia min.
fácilmente los tejidos tinturados con
Astrablau y Safranina.

Pasado el tiempo de reposo, con la ayuda de una pipeta se lava muestra en el siguiente orden:
primero con agua destilada, luego con alcohol al 50%, posteriormente con alcohol al 75% y
finalmente con alcohol al 96%, el uso de alcohol en diferentes concentraciones permitirá un
mejor lavado de las muestras, liberándola de los excesos del tinte. Se utiliza una caja Petri vacía
para depositar los residuos del lavado de la muestra (Figura 24.a).

Gärtner y Schweingruber (2013)

Figura 24.a Vista esquemática y fotografía del

proceso de limpieza con una pipeta para que los
líquidos corran libremente sobre la muestra.
Es mejor inclinar el portaobjetos y colocar la pipeta en la parte superior para ir lavando con agua
destilada y alcohol en este orden: agua destilada, alcohol al 50%, 75%, y 96%.

13
 - Para pasar de un lavado a otro, se verifica primero que la muestra está libre de excedentes
de tinte. Para ello, se verifica hasta que el agua destilada o alcohol después de cada lavado
se tornen de color transparente. Una vez verificado esto, se continúa con el siguiente lavado
(Figura 24.b).
- Finalmente, para extraer toda el agua de la lámina celular o realizar una deshidratación con
mayor fuerza se agrega una gota de Formaldehído (Formol) o Diluyente sobre toda la
superficie de la muestra, normalmente para realizar este tipo de deshidratación se utiliza el
Xilol (Figura 25).

Figura 24.b Verificación de muestras libres Figura 25. Compuestos químicos

de excedente de tinte durante el lavado. formaldehído y diluyente aplicados para
deshidratación de muestras.

2.4 Sellado permanente y secado

2.4.1 Sellado permanente

- Para guardar las muestras

por largo tiempo (más de un
año) se realiza el sellado
permanente. Para ello se
realiza una selección de las
mejores muestras ya
deshidratadas y se las ubica
en un portaobjetos limpio
(Figura 26). Figura 26. Colocación de la muestra deshidratada en un
portaobjetos.

14
- Antes de colocar el
Bálsamo de Canadá se debe
verificar que la muestra esté
libre de residuos y líquidos.
- Luego, con la ayuda de una
jeringa sin aguja se extrae
una porción de Bálsamo de
Canadá y se coloca una gota
a un extremo de la muestra
(Figura 27).
Figura 27. Colocación de Bálsamo de Canadá con ayuda de
una jeringa.

- Seguidamente con mucha

precaución y con la ayuda de una
pinza, se coloca inclinadamente el
cubreobjetos sobre la muestra desde
el extremo donde está el Bálsamo
Canadá. De tal forma que éste se
extienda sobre toda la muestra.
Finalmente, se presiona con
precaución con la ayuda de una
varilla metálica o alambre, evitando Figura 28. Colocación del cubreobjetos sobre el bálsamo.
que queden burbujas en la muestra
(Figura 28).

2.4.2 Secado de las muestras

- Para el secado se colocan las muestras con Bálsamo Canadá entre una lámina de plástico
resistente al calor, esto puede ser una funda plástica ziploc o mica plástica (Figura 29).

- Luego, se colocan estas muestras protegidas con la lámina plástica sobre una placa
metálica, y sobre éstas se coloca un imán para tener presión constante durante todo tiempo

15
 de secado para evitar que queden burbujas de aire entre las muestras con el Bálsamo de
Canadá (Figura 30).

Figura 29. Colocación de plástico resistente al Figura 30. Muestras montadas en una placa
calor. metálica y presionadas con imanes.

- Posteriormente, las placas metálicas con las muestras se deben colocar en la estufa a una
temperatura de 60°C por 24 horas o hasta que se seque completamente, en algunos casos
necesitan hasta 48 horas sobre todo si se colocó mucha cantidad de Bálsamo de Canadá
(Figura 31 Izq.).
- Transcurrido el tiempo de secado se sacan las muestras de la estufa. Se retira la cubierta
plástica cuidadosamente y en las muestras con restos de Bálsamo Canadá sobre el
cubreobjetos se limpian con una cuchilla haciendo un raspado por toda el área que está con
excedentes y luego se procede a observar la muestra en el microscopio para verificar la
calidad de los cortes anatómicos (Figura 31 Derecha).

Figura 31. Secado y limpieza de muestras. Las muestras son colocadas en una estufa durante
24 horas a 60° C (Izquierda), y luego raspadas para quitar el exceso de Bálsamo de Canadá
sobre los cubreobjetos (Derecha).

16
2.5 Digitalización de imágenes anatómicas y configuración del software

2.5.1 Observación digital de la muestra anatómica

- Para configurar la calidad de imagen, primero se coloca el portaobjetos con una muestra en
el microscopio (para esta guía se utilizó un microscopio marca Olympus modelo BX41TF,
(ver Figura 32). A través del objetivo binocular del microscopio se observa la muestra y
luego se selecciona y enfoca un área de interés para tomar la fotografía digital.

Figura 32. Microscopio Olympus modelo BX41TF con cámara digital (Izquierda). A la
derecha la fecha indica la perilla Bertrand para el cambio de imagen del lente analógico al lente
de la cámara digital. Imagen mofidicada de Olympus (2004).

- Para pasar la imagen que se observa a través del objetivo binocular al lente de la cámara
digital se hala totalmente la perilla Bertrand (en inglés: Bertrand lens knob) como se indica
en la (Figura 32 Derecha), y para regresar a modo analógico y ver directamente desde el
microscopio se empuja totalmente la perilla Bertrand.

17
 - Una vez que se pasa la imagen al lente de la cámara digital
con la perilla Bertrand, se abre el Software Infinity
Analyze (Infinity Software, 2016) (Figura 33) y se verifica
que la imagen del corte anatómico aparezca en el monitor.
Aquí se vuelve a enfocar nuevamente hasta tener la mejor
visibilidad del corte anatómico.

Figura 33. Software para la digitalización de imágenes Infinity Analyze e Infinity Capture v.6
(Infinity Software, 2016).

- Es muy importante chequear que el número de lente del microscopio coincida con el
número de lente en la configuración del software. Esto es para que la escala de la imagen
salga con las medidas precisas al momento de realizar las captura, en la (Figura 34) se
muestra como el lente 4x del microscopio coincide con la configuración del lente en el
Software Infinity Analyze.

Figura 34. Verificación del número de lente del microscopio (Izquierda) con el número del lente en
el software (Derecha).

18
 2.5.2 Ajuste de color, matiz, brillo, etc.

- Para ajustar automáticamente la imagen digital a un color más natural simplemente se abre
el software Infinity Capture (Figura 33). Luego se lo puede cerrar o mantener abierto, y se
regresa al software Infinity Analyze.

- Sin embargo, para tener un ajuste más personalizado, se puede utilizar los valores de
configuración de la (Figura 35) para realizar cambios manualmente en los parámetros de
exposición, ganancia, gama, saturación, matiz, brillo y contraste.

Figura 35. Calibración manual de imagen

a través de los controles de la cámara en el Software Infinity Analyze v.6.

- Tome en cuenta que antes de

realizar la captura de una imagen,
se ajusta primero la dirección de
la muestra. Para ello los radios
tanto en cortes transversales o
tangenciales siempre deben estar
en sentido vertical. Y los radios en

19
 un corte radial deben estar en
sentido horizontal (Figura 36).

Figura 36. Ajuste de la cámara en dirección de los tejidos (arriba). Las fechas indican en qué
dirección deben estar los radios en un corte transversal (abajo izq.) y en un corte radial (abajo der.)

2.5.3 Configuración de la escala en la imagen

- Para insertar la escala se va al menú “Anotar” y luego se da clic en “Micrómetro” (Figura

37). De preferencia se ubica la escala en la parte inferior derecha.
- Una vez insertada la escala se la puede personalizar dando doble clic sobre la misma y
aparece el menú “Micrómetro”, aquí se puede cambiar todos parámetros que se consideren
necesarios (Figura 38).

Para imágenes tomadas con el lente 4X y 10X se ajusta a una longitud de 100µm. Mientras que
para imágenes con el lente 20X y 40X se ajusta a una longitud de 50µm (Figura 38).

Figura 37. Insertar escala sobre la fotografía capturada. Menú Anotar -> Micrómetro

20
 Figura 38. Configuración de la escala sobre la imagen con las opciones del Micrómetro

2.5.4 Captura y guardado de imágenes

Finalmente, cuando ya están ajustados todos los parámetros de la imagen digital se procede a
la captura de la misma. Esto se puede realizar de dos formas, a través del botón “Captar”
(Figura 34 Der.) o directamente desde el menú Archivo en “Guardar como”. A esta imagen se
le asigna un nombre y se la guarda en una carpeta determinada, preferentemente con el formato
JPGE (Figura 39).

21
 Figura 39. Guardado digital de imágenes en una carpeta seleccionada con la nomenclatura
del laboratorio.

El código utilizado en nuestro laboratorio para nombrar los archivos de las imágenes
capturadas son basados en las indicaciones de la (Figura 20), y se componen de los siguientes
elementos:
• Las dos primeras letras del género seguido de las dos primeras letras de la especie,
• La inicial del origen de la muestra (Albura, Duramen o Rama),
• La abreviatura del tipo de corte,
• El número de lente, y
• El número de la imagen capturada, todo separado por un guion bajo.

Ejemplo de un corte tangencial de albura a un lente de 4X de la especie Podocarpus oleifolius:

pool_A_Tg_4x_01.jpg

2.5.5 Combinación de múltiples imágenes

- Una vez ajustados todos los parámetros de la imagen digital, se procede a la captura de las
imágenes, para lo cual se puede empezar por la parte superior izquierda. Con la ayuda de
las perillas de movimiento de platinas del microscopio, y siguiendo una secuencia de
izquierda a derecha o viceversa se realiza las capturas hasta completar toda el área de la
muestra a digitalizar (Figura 40a y 40c).
- Se debe tener en cuenta que las capturas de imagen deben tener un mínimo del 20% de
área común compartida, entre una y otra para que el programa pueda identificar y unificar
con mayor facilidad patrones iguales (Figura 40b y 40d).
- A cada imagen capturada se le asigna un nombre y se la guarda en una carpeta determinada
(Figura 39). Recuerde que el nombre de cada captura debe ser guardado de manera

22
 secuencial de acuerdo al orden mencionado anteriormente en el capítulo “2.5.4. Captura y
guardado de imágenes”, pero en este caso se omite la opción de Albura y Duramen.

Ej. Rama de Handroanthus chrysanthus: hach_Tr_4x_01.jpg

a) b)

c) d)

Figura 40. Esquema de los pasos para la combinación de imágenes. a) Desplazamiento de la platina
del microscopio a través de las perillas de derecha – izquierda, arriba – abajo y viceversa. b) Área en
común que debería haber entre imágenes capturadas, véase como las fotografías A y B comparten un
área en común (mínimo 20%) para dar lugar a una nueva imagen unificada C. c) Ejemplo de la
dirección y secuencia de captura de imágenes para una sección transversal completa. d) Imagen
unificada de una rama de Handroanthus bilbergii a partir de varias capturas que comparten áreas en
común.

23
- Para realizar la composición, unificación o mosaico a partir
de varias imágenes, se puede utilizar cualquier Software de
edición de fotografía digital que tengan estas opciones. Entre
los más populares está la opción “Photomerge” de Adobe
Photoshop. Sin embargo, en esta guía se muestran los
Figura 41 Software
principales pasos para realizar este procedimiento con el Image Composite
software Imagen Composite Editor de la división Microsoft Editor.
Research de Microsoft por ser de licencia libre o freeware
(Figura 41).

- Una vez instalado el

software, se lo abre y se da
clic sobre el primer botón de
la parte superior llamado
“New Panorama From
Images”.
- Inmediatamente aparecerá
una nueva ventana para
explorar la ubicación de las
imágenes que se quiere
adjuntar.
- Se selecciona y carga todas
las capturas obtenidas del
corte anatómico transversal
con corteza (Figura 42).
Figura 42. Importación de imágenes.

24
- A continuación, se da clic en
la opción siguiente “2
STITCH”, y
automáticamente el software
empezará a analizar y unir las
imágenes. El tiempo para
completar esta tarea depende
mucho del tipo de procesador
que tenga el ordenador
(Figura 43).

Figura 43. Unión automática de imágenes

25
- Luego se da clic en la opción
“3 CROP” y se activa la
opción “Auto complete” para
rellenar automáticamente las
áreas vacías de la imagen
unida (Figura 44).

Figura 44. Proceso de completar áreas vacías de la

imagen unificada.

- Finalmente se da clic en “4
EXPORT”, y se elige la
opción Export to disk donde
aparecerá una nueva ventana
para seleccionar la dirección
de guardado de la imagen
unificada. Aquí se nombra la
imagen de acuerdo al código
Figura 45. Guardado de la imagen unida.
indicado en la sección “2.5.5.
Combinación de múltiples
imágenes” de esta guía.
- Ej. Rama de Handroanthus
chrysanthus:
hach_Tr_4x_01.jpg (Figura
45).

26
3. ANEXOS: Ejemplos de cortes microscópicos de la madera

Cortes transversales, tangencial, y radial de la madera

Cinchona officinalis
Lente 4x:
Plano transversal Plano tangencial Plano radial

Erithryna velutina
Lente 10x:
Plano transversal Plano tangencial Plano radial

Cedrela odorata
Lente 20X:
Plano transversal Plano tangencial Plano radial

27
Cortes transversales con médula, xilema, y corteza

Cinchona officinalis

Juglans neotropica

Handroanthus billbergii

28
4. AGRADECIMIENTOS

Un especial agradecimiento al proyecto de investigación “Determinación de los turnos

biológicos de corta para el manejo forestal sostenible al sur del Ecuador” de la Universidad
Nacional de Loja por hacer posible la siguiente guía práctica de laboratorio. Un agradecimiento
a los estudiantes del VI ciclo de la carrera de Ingeniería Forestal por las fotografías de cortes
anatómicos realizadas en el Laboratorio de Dendrocronología y Anatomía de la Maderas
Tropicales de la Universidad Nacional de Loja. Agradecemos también a la Ing. Lucía
Quichimbo por su colaboración y asistencia en la preparación de muestras anatómicas para la
presente guía.
Finalmente, nuestros más sinceros agradecimientos al Ing. Nikolay Aguirre Ph.D. (durante su
periodo como Director de Investigaciones de la UNL), y a Radio Universitaria 98.5 FM en
nombre del Lcdo. Hugo Ortega e Ing. Paulina Jara, y a la compañera Milena Cueva Coronel
por su apoyo y colaboración en la elaboración del video tutorial de ésta guía.

29
5. REFERENCIAS

Franke, B., y Quenneville, P. (2011). Numerical Modeling of the Failure Behavior of Dowel
Connections in Wood. Journal of Engineering Mechanics,137(3), 186-195.
doi:10.1061/(asce)em.1943-7889.0000217

García, E. (2003). La madera y su anatomía: Anomalías y defectos, estructura microscópica

de coníferas y frondosas, identificación de maderas, descripción de especies y pared
celular. Mundi-Prensa Fundación Conde del Valle de Salazar. ISBN: 8484761533

Gärtner, H., Schweingruber, F. (2013). Staining cell walls, Microscopic Preparation

Techniques for Plant Stem Analysis. Remagen-Oberwinter Suiza: Verlag Dr. Kessel. ISBN:
978-3-941300-76-7

Lumenera Corporation (2016). Infinity Analyze e Infinity Capture (Version 6) [Windows].

Ottawa, Canada.

Olympus (2004). Instructions BX51/52-P,BX41-P POLARIZING MICROSCOPE (Manual).

Japon: Olympus Corporation.

Puertas, S. P., Salnicov, L. G., y Espinoza, M. (2013). Manual de transformación de la madera

del proyecto: “Utilización industrial y mercado de diez especies maderables potenciales
de bosques secundarios y primarios residuales” Lima. Recuperado de
http://www.itto.int/files/itto_project_db_input/2929/Technical/Technical%20report%20-
%20Manual%20de%20transformacion%20de%20la%20madera.pdf

Rendle, B. J. (1932). Wood Anatomy as a Link between Botany and Forestry. Nature,
130(3292), 834-836. doi:10.1038/130834a0

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