DETERMINACION DE ALCOHOL EN ALCOHOL GEL 70% POR DESTILACIÓN

ÍNDICE DE CONTENIDO

CONTENIDO Página
EQUIPOS DE MEDICIÓN 2
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO 4
DISEÑO EXPERIMENTAL (METODOLOGÍA DE TRABAJO) 4
DISEÑO METODOLÓGICO 4
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO DEL MÉTODO A EVALUAR 5
OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES Y CRITERIOS DE DECISIÓN 6
RESULTADOS 10
SELECTIVIDAD 10
LINEALIDAD DEL SISTEMA 11
LINEALIDAD DEL MÉTODO 13
EXACTITUD 15
PRECISIÓN 18
REPRODUCIBILIDAD 19
PRECISIÓN INTERMEDIA 24
LÍMITE DE DETECCIÓN Y DE CUANTIFICACIÓN 25
ROBUSTEZ DEL MÉTODO 27
RESUMEN DE RESULTADOS 30
CONCLUSIONES 31
BIBLIOGRAFÍA 32
 EQUIPOS DE MEDICIÓN

 Los valores de pH se midieron potenciométricamente con ayuda de un pH-metro

(Fisher ACCUMET, Model 10), disponiéndose de soluciones certificadas para
verificar los chequeos de ajuste de rutina.
 Las masas se midieron con la Balanza Analítica OHAUS, Model AP 110S, la cual
cuenta con su Certificado de Calibración por LANAMET.
 La cristalería volumétrica utilizada fue verificada contra cristalería calibrada por un
Laboratorio de Calibración competente.
Las cuantificaciones se realizaron utilizando destilación simple.

6
Densímetro de vidrio para destilación, fabricado en Francia, con una
temperatura de referencia de 20° C.
Escala Gay Lussac de 0 a 100% de volumen de alcohol, con divisiones de 1%
vol.
Escala 10~40 ºCartier, con división de escala 0,5.
Resolución: 1% Gay Lussac / 0,5 °Cartier.
Longitud: 298 mm.
Calibración a 20ºC con agua destilada.
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
PROCEDIMIENTO
De la muestra libre de sedimento, y neutralizada exactamente con solución de
Hidróxido de Sodio 1 Normal, se toman 500 ml medidos a 20 ºC, se transfieren
cuantitativamente con 100 ml de agua a un matraz de destilación, el cual debe estar
conectado a un refrigerante, cuya extremidad inferior debe terminar en un tubo con una
punta cortada a bisel y descargando en un matraz aforado de 200 ml, se coloca el
alcoholímetro dentro del líquido.
CÁLCULOS Y RESULTADOS
Se toma la lectura, la cual debe corregirse si la muestra está a una temperatura
diferente a 15ºC, usando para ello la Tabla de corrección, obteniéndose en esta forma
el porciento de alcohol en volumen.
REPRODUCCIÓN DE LA PRUEBA
La diferencia entre las determinaciones efectuadas por duplicado, no debe exceder de
0.5 ºG:L: En caso contrario, repetir las determinaciones.
Criterio de Pureza: Debe contener no menos del 90,0 % y no más de 110,0 % de la
cantidad declarada de Alcohol (Alcohol Etílico).

DISEÑO EXPERIMENTAL (METODOLOGÍA GENERAL)

DISEÑO METODOLÓGICO
Tipo de estudio: Experimental, descriptivo.
Área de estudio: El estudio se llevará a cabo en el área de Control de Calidad del
Laboratorio FARMAQUIM, ubicado en Managua, Km 2 carretera a Norte semáforos de
adquisiciones del estado 1 c al sur ½ c al oeste
Universo: Producto Alcohol Gel, 70 %.
Población de estudio: Muestra de 3000 unidades.
Muestra: 20 unidades para la validación de cada parámetro.
Unidad de análisis: Alcohol gel 70 %, de un Lote específico.
Método de recolección: Las unidades para el análisis serán recolectados de forma
aleatoria del universo del Lote que sea destinado para la realización del Estudio de
Validación.
Procedimiento: El estudio de Validación se realizara de forma coordinada con el
Responsable de Aseguramiento de la Calidad, la Gerencia de Producción y el
Responsable de Control de Calidad del Laboratorio FARMAQUIM en apego al
Procedimiento General de Validación desarrollado para tal fin.
Plan de análisis: El Procesamiento Estadístico de los datos obtenidos se realizará
haciendo uso de Hojas de Cálculo de Excel diseñadas específicamente para tal fin (y
debidamente validadas en su funcionamiento y aplicabilidad), presentando la
información obtenida a través de tablas y gráficos.
PARÁMETROS DE DESEMPEÑO DEL MÉTODO A EVALUAR
Exactitud
Precisión
Especificidad/Selectividad
Límite de Detección
Límite de Cuantificación
Linealidad (del Método y del Sistema)
Intervalo de concentraciones de trabajo
Robustez

OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES Y CRITERIOS DE DECISIÓN

Especificidad: (Ver también exactitud)
Escala 0 ~ 100% vol. 10 ~ 45ºCartier
División de Escala: 1% vol. / 0,5°Cartier
Precisión: ± 2% vol. / ±1°Cartier aprox.
El alcoholímetro de Gay- Lussac mide la fuerza de los líquidos espirituosos a la
temperatura de 15ºC, es decir, el número de centésimas de alcohol puro en volumen.

Presenta una escala previamente calibrada, por lo que el enrase nos dará directamente
el porcentaje de alcohol.

La ley del 7 de julio de 1881, en Francia, pone como obligatorio el empleo del
alcoholímetro de Gay-Lussac para constatar el grado de alcohol con una precisión de
una décima de grado, ofreciendo estos aparatos todas las garantías de exactitud.

CRITERIO DE DECISION PARA LA SELECTIVIDAD: Se espera una correspondencia

entre los resultados del estándar y la muestra en el intervalo concentraciones sin
evidencias de desviaciones de resultados
Exactitud: La exactitud es el grado de identidad de los valores analíticos obtenidos con
el método y el contenido real del analito en la muestra. La exactitud del método se
evaluó en términos de la recuperación. La exactitud se calculó como el porcentaje de
recuperación de la cantidad valorada con respecto a la cantidad conocida de analito
añadida a la muestra o como la diferencia entre la medida de la valoración y el valor
verdadero aceptado, considerando los intervalos de confianza. Se prepararon seis
muestras enriquecidas a tres niveles (bajo, medio y alto en relación a la concentración
de cuantificación). Estas muestras se trataron igual que las muestras normales y los
estándares antes de obtener la correspondiente señal analítica. Se realizó el ensayo de
hipótesis estadístico de t de Student para determinar si el valor medio hallado y el valor
considerado verdadero no difieren estadísticamente a un nivel de confianza establecido
y con los grados de libertad que correspondan.
CRITERIO DE DECISIÓN PARA LA EXACTITUD: Si texp < ttab, el método analítico
desarrollado tiene la exactitud requerida, y ambos valores no son estadísticamente
diferentes. Mientras que, si t exp > ttab significa que el método analítico no es exacto y que
existe un error sistemático por defecto o por exceso que en valor absoluto es |µ-x med|,
donde µ representa el valor verdadero o esperado de concentración del analito.
PRECISIÓN
La precisión es una medida del grado de repetibilidad o de la reproducibilidad del
método analítico en condiciones normales de operación.
La precisión fue verificada evaluándose las condiciones de repetibilidad y precisión
intermedia.
Repetibilidad. Esta prueba se realizó analizando la muestra en un mismo laboratorio,
bajo las mismas condiciones de operación, por el mismo analista, con los mismos
aparatos y reactivos y en el curso de la misma serie de análisis efectuados. Se realizó
el siguiente ensayo:
Se analizó la muestra (materia prima y producto terminado) que en el ensayo fue tomada
como el cien por ciento (concentración normal de trabajo del método sometido a validación)
un mínimo de seis veces. Se estudió sobre el sistema, evaluando la dispersión de 6
determinaciones por cada uno de los niveles de concentración de los estándares del
principio activo cuantificado. La evaluación correspondió a todo el procedimiento, desde
la preparación de la muestra hasta la medición del analito por el instrumento,
obteniéndose las señales analíticas de las soluciones en un mismo día bajo las mismas
condiciones de trabajo, el mismo equipo, las mismas soluciones reactivas y el mismo
analista (n = 6) para la repetibilidad.
Precisión intermedia. Para la realización de esta prueba se analizó la muestra a la
concentración tomada como el cien por ciento y se obtuvieron variaciones en las
condiciones de análisis de la siguiente manera:
Un mismo analista, dos días diferentes de análisis, el mismo aparato o instrumento.
 Dos analistas diferentes, en el mismo día de análisis, el mismo aparato o
instrumento (para evaluar el reproducibilidad).
Se evaluaron dos variaciones en las condiciones de análisis y la muestra se analizó un
mínimo de seis veces con cada variación.
Las mediciones se realizaron en dos días diferentes (n = 12) sin variación del resto de
condiciones para evaluar la precisión intermedia. Se determinó el Coeficiente de
Variación (CV), después de realizar una comparación de las Varianzas aplicando el
Criterio de Fisher, para decidir si los dos conjuntos de datos se podían unir en uno solo
y se aplicó la prueba de ANOVA (Análisis de Varianza) de clasificación simple para
evaluar las varianzas Interdía.
CRITERIO DE DECISIÓN PARA LA PRECISIÓN: El coeficiente de Variación de los
resultados, tanto para los datos correspondientes a la Repetibilidad como para la
precisión Intermedia no debe ser mayor de 5%. Al aplicar el análisis de Varianza en la
Evaluación de la Repetibilidad Interdía se aplicó el criterio de Fisher, en cuyo caso el
valor experimental de F debe ser menor que el valor crítico.
LINEALIDAD
La linealidad de un ensayo analítico es su capacidad para obtener resultados de prueba
que sean proporcionales ya sea directamente, o por medio de una transformación
matemática bien definida, a la concentración del analito en muestras en un intervalo
dado.
El intervalo de un método analítico es la amplitud entre la concentración inferior y
superior de analito (incluyendo esos niveles) en la cual se puede determinar al analito
con un nivel adecuado de precisión, exactitud y linealidad utilizando el método según se
describe por escrito. El intervalo se expresa normalmente en las mismas unidades que
los resultados de la prueba (por ejemplo, porcentaje, mg/ml, partes por millón)
obtenidos mediante el método analítico.
CRITERIOS DE DECISIÓN SOBRE LA LINEALIDAD:
 treg >> ttab. Correlación significativa.
 tint < t tab. Intercepto significativamente diferente de cero.
 tpend > ttab. Pendiente significativamente diferente de cero.
Linealidad del Sistema. Para evaluar la Linealidad del Sistema se preparó una
solución del patrón del analito (solución madre) y a partir de ésta se realizaron las
diluciones necesarias obteniéndose como mínimo cinco diferentes concentraciones
(soluciones hijas). La curva de calibración se obtuvo con los resultados de las
soluciones hijas, las cuales se analizaron con el mismo método analítico, bajo las
mismas condiciones, el mismo aparato o instrumento, el mismo día y el mismo analista.
La linealidad determina la región de la curva respuesta o de cuantificación en que hay
relación directa entre la señal instrumental y la concentración del producto analizado. La
curva de calibración obtenida a partir de estas medidas fue analizada por medio de
regresión lineal, calculándose el coeficiente de correlación y de determinación, así
como la ecuación de la recta y los parámetros de dispersión del sistema. Además de la
prueba estadística de linealidad se practicaron ensayos de hipótesis tanto para el
Intercepto como para la pendiente para establecer su validez estadística.
Linealidad del Método. Para evaluar la Linealidad del Método se preparó una
solución de la muestra (solución madre) y a partir de ésta se realizaron las diluciones
necesarias obteniéndose como mínimo cinco diferentes concentraciones (soluciones
hijas). La curva de calibración se obtuvo con los resultados de las soluciones hijas, las
cuales se analizaron con el mismo método analítico, bajo las mismas condiciones, el
mismo aparato o instrumento, el mismo día y el mismo analista. La linealidad determina
la región de la curva respuesta o de cuantificación en que hay relación directa entre la
señal instrumental y la concentración del producto analizado. La curva de calibración
obtenida a partir de estas medidas fue analizada por medio de regresión lineal,
calculándose el coeficiente de correlación y de determinación, así como la ecuación de
la recta y los parámetros de dispersión del sistema. Además de la prueba estadística de
linealidad se practicaron ensayos de hipótesis tanto para el Intercepto como para la
pendiente para establecer su validez estadística.
Límite de detección y de Cuantificación. Los Límites de Detección y de
Cuantificación de un método representan una medida de la sensibilidad del mismo. En
un método analítico sensible, ligeros incrementos de concentración resultan en
incrementos notables de la señal o respuesta analítica. La determinación de los Límites
de Detección y de Cuantificación se realizó sobre los resultados obtenidos tanto para la
evaluación de la linealidad del método como para la evaluación del sistema. Tanto el
límite de detección como el de cuantificación se calcularon utilizando el criterio de Miller
que relaciona la varianza residual con el valor de la pendiente.
CRITERIO DE DECISION PARA LIMITE DE DETECCION Y DE CUANTIFICACION:
Los valores obtenidos para los límites de detección y cuantificación se comprobaron
experimentalmente mediante el análisis repetitivo de 10 muestras de dos soluciones
preparadas a las concentraciones obtenidas, evaluando los resultados mediante
Análisis de Varianza.

RESULTADOS
SELECTIVIDAD
El primer parámetro que se evaluó es el de la selectividad o especificidad del método.
la Destilación es la separación de los componentes de una mezcla homogénea liquida
cuyos puntos de ebullición son diferentes: estos se separan por vaporización y posterior
condensación.
La técnica se puede describir como sigue: la mezcla liquida se deposita en un matraz
de destilación se calienta hasta alcanzar la temperatura del componente más volátil. los
vapores se condensan en un sistema refrigerante y el condensado se recoge en un
matraz recolector. la destilación debe realizarse lentamente. pero sin interrupciones
para evitar estados de estabilidad y sobrecalentamiento del sistema debido a la
formación de burbujas de vapor en el seno del líquido. se introducen cuerpos de
ebullición que formen núcleos de burbujas y el líquido pueda hervir.
Gráfico. Evaluación de la Selectividad del Método en la determinación de Alcohol, en Alcohol Gel,
utilizando destilación simple.
LINEALIDAD DEL SISTEMA

La linealidad del Sistema se verificó utilizando patrón secundario de ALCOHOL,

debidamente cuantificado, para la preparación de las soluciones de estándares, en
apego al procedimiento para el Control de Calidad del Producto Terminado.
Se elaboraron cinco curvas de calibración con los estándares, en distintos momentos,
llevando a cabo todas las operaciones desde el inicio en su totalidad, para evaluar la
Variabilidad del Método. La evaluación de la variabilidad de la pendiente permitió
obtener un valor de Coeficiente de Variación 0,22% con un intervalo de confianza de
0,002 para el valor promedio de la pendiente. La curva de calibración promedio se
obtuvo graficando la señal analítica promedio de las cinco curvas contra las
concentraciones de estándar (30; 40; 50; 60 y 70 %). El método es lineal con un valor
de r = 1,0000 y de R2 = 1,0000.
Evaluación de la Linealidad del Sistema en la determinación de alcohol en Alcohol
gel 70%, por destilación simple

LINEALIDAD/VARIABILIDAD/SISTEMA  
Curva Curva Curva Curva
Conc. 1 2 3 Curva 4 5 PROM
30.000 30.50 30.20 30.50 30.30 30.40 30.10
40.000 40.20 40.10 40.50 40.00 40.20 40.20
50.000 50.50 50.30 50.20 50.50 50.20 50.34
60.000 60.50 60.30 60.50 60.50 60.20 60.40
70.000 70.20 70.10 70.00 70.30 70.10 70.14
Intercepto 0.530 0.200 0.840 0.070 0.520 0.096
Pendiente 0.997 1.000 0.990 1.005 0.994 1.003
Coef. Correl. 1.0000 1.0000 0.9999 0.9999 1.0000 1.0000
Coef. Determ. 0.9999 1.0000 0.9999 0.9999 1.0000 0.9999
Error Típico 0.1817 0.1155 0.1932 0.2183 0.063 0.1401
  VARIABILIDAD DE LA PENDIENTE    
  PROM S CV, % Int. Conf.    
  0.997 0.006 0.57 0.005    
 Evaluación de la linealidad del Sistema

80.000
f(x) = 10.03 x + 20.15
R² = 1
70.000

60.000

50.000

porcentaje
40.000

30.000

20.000

10.000

0.000
0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 12.000

porcentaje de alcohol

El criterio de linealidad que se estableció fue r ≥ 0.9950 y R² ≥ 0.9900. La evaluación

estadística indica que existe una Regresión Válida entre las variables concentración y
la señal analítica, por tanto la Linealidad del Sistema es Adecuada.
En la siguiente Tabla se presenta la Evaluación Estadística del Linealidad del Método
en la Determinación de alcohol en Alcohol gel 70%, por destilación.
Evaluación Estadística de la Linealidad del Sistema en la Determinación por
destilación simple de alcohol en Alcohol gel 70% (ttab = 12,71).

Parámetro Criterio de Aceptación Resultado

Coeficiente de Correlación. r ≥ 0,9950 1,0000 Conforme
Coeficiente de Determinación R2 ≥ 0,9900. 1,0000 Conforme
Regresión, Hipótesis nula treg > ttabla treg = 435,54 Conforme
Intercepto, Hipótesis nula texp < ttabla texp= 3,95 Conforme
Pendiente, Hipótesis nula texp > ttabla texp = 435,54 Conforme
LINEALIDAD DEL MÉTODO

Al evaluar la linealidad de un método destinado a control de calidad farmacéutico es

recomendable evaluar el comportamiento de la señal analítica en función de la concentración del
analito tanto estando éste sólo inicialmente (Linealidad del Sistema) como en presencia de los
componentes de la muestra (matriz). Para evaluar el segundo momento, se recurrió a elaborar
curvas de calibración en el granulado del producto, después de cuantificarlo debidamente, a fin
de verificar la proporcionalidad del incremento de la señal en presencia de los excipientes,
comprobando de esta manera lo que se da en llamar “Linealidad del Sistema”
La evaluación de la linealidad del sistema se llevó a cabo utilizando la muestra real, la cual se
cuantificó previamente en relación al contenido de principio activo y luego se prepararon cinco
soluciones, tomando en consideración la concentración encontrada de principio activo, a
concentraciones de 30; 40; 50; 60 y 70 % partiendo de una solución madre haciendo todas las
etapas independientes cada vez, para cada curva y para cada punto.
Los resultados estadísticamente obtenidos indicaron que para este intervalo de concentraciones se
obtiene un coeficiente de correlación de r = 1,0000 siendo el valor mínimo admisible 0,9950 y un
coeficiente de determinación R² = 1,0000, lo que establece una excelente regresión entre las
variables concentración y sus respuestas.
Para confirmar la Linealidad de dicha regresión, se aplicó un Ensayo de Hipótesis de Regresión
(test de Student), de acuerdo con el cual debe cumplirse que el valor de t regresión debe ser mayor al
valor de ttabla con una probabilidad de cometer error de p = 0,05 y n-2 grados de libertad. También
se demostró la validez estadística del intercepto y la pendiente con los ensayos de hipótesis
correspondientes.
 Evaluación Estadística de la Linealidad del Método en la Determinación de
alcohol, en alcohol gel 70%, por destilación simple.

LINEALIDAD/VARIABILIDAD/METODO  
Curva Curva Curva Curva
Conc. 1 2 3 Curva 4 5 PROM
30.000 30.60 30.30 30.40 30.30 30.30 30.10
40.000 40.20 40.50 40.60 40.10 40.10 40.30
50.000 50.30 50.50 50.30 50.40 50.30 50.36
60.000 60.50 60.50 60.40 60.40 60.10 60.38
70.000 70.00 70.20 70.00 70.20 70.00 70.08
Intercepto 0.770 0.500 0.840 0.230 0.460 0.224
Pendiente 0.991 0.998 0.990 1.001 0.994 1.000
Coef. Correl. 0.9999 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000
Coef. Determ. 0.9999 0.9999 0.9999 0.9999 1.0000 0.9999
Error Típico 0.2214 0.1592 0.1751 0.1494 0.110 0.1659
  VARIABILIDAD DE LA PENDIENTE    
  PROM S CV, % Int. Conf.    
  0.995 0.005 0.47 0.004    

Evaluación de la Linealidad del Método

80.000
f(x) = 10 x + 20.23
R² = 1
70.000

60.000

50.000
PORCENTAJE

40.000

30.000

20.000

10.000

0.000
0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 12.000
 Evaluación Estadística de la Linealidad del Método en la Determinación de
Alcohol en Alcohol Gel 70%, por destilación.

Parámetro Criterio de Resultado

Aceptación
Coeficiente de Correlación. r ≥ 0,9950. 1,0000 Conforme
Coeficiente de R2 ≥ 0,9900. 1,0000 Conforme
Determinación
Regresión, Hipótesis nula treg > ttabla treg = 384,71 Conforme
Intercepto, Hipótesis nula texp < ttabla texp = 3,26 Conforme
Pendiente, Hipótesis nula texp > ttabla texp = 384,71 Conforme
ttab = 3,182.

El criterio de linealidad que se estableció fue r ≥ 0.9950 y R² ≥ 0.9900. La evaluación

estadística indica que existe una Regresión Válida entre las variables concentración y
la señal analítica, por tanto la Linealidad del Método es Adecuada, la matriz no
afecta de forma significativa la proporcionalidad del incremento de la señal
analítica en función de la concentración.

EXACTITUD

Los valores referentes a la exactitud del método, obtenidos por medio de la prueba de
recuperación, El porcentaje de principio activo recuperado, a dos niveles de
concentración, muestra que el método presenta exactitud, es decir que los valores
obtenidos en la determinación no se diferencian estadísticamente del valor verdadero.
El ensayo de Hipótesis de t de Student para comparar el valor Promedio de las
concentraciones obtenidas con el valor esperado (utilizando la Hoja de Cálculo “Media
Muestral Poblacional Referencia”) demostró que no hay diferencia significativa entre la
concentración introducida y la recuperada, a un nivel de confianza de 95% y 4 grados
libertad (n = 5) a los dos niveles de concentración investigados.
 Validación de la Exactitud en la Determinación por destilación simple de alcohol, en
alcohol gel 70%, por Recuperación de Adiciones Conocidas, adicionando 10 % en la matriz
de la muestra.
VALIDACIÓN DE EXACTITUD POR RECUPERACIÓN DE ADICIONES
CONOCIDAS
Ensayo Conc. de Conc. Recuperación Adición Desviaciones Recuperación,
muestra + Muestra Calculada Conocida del Esperado %
Adicion
Conocida

1 59.7 50.5 9.2 10.0 -0.8 92.0

2 60.2 50.5 9.7 10.0 -0.3 97.0
3 60.5 50.5 10.0 10.0 0.0 100.0
4 59.5 50.5 9.0 10.0 -1.0 90.0
5 61.0 50.5 10.5 10.0 0.5 105.0
6 60.3 50.5 9.8 10.0 -0.2 98.0
PROM     9.70   -0.30 97.00
MIN     9.00   -1.00 90.00
MAX     10.50   0.50 105.00
RANGO     1.50   1.50 15.00
DESVEST     0.54   0.54 5.44
Interv.    
Conf 0.44     4.35
     
CONCLUSIÓN: DIFERENCIA NO SIGNIFICATIVA
Validación de la Exactitud en la Determinación por Destilación simple de alcohol,
en alcohol gel, por destilación, por Recuperación de Adiciones Conocidas,
adicionando 20 % en la matriz de la muestra.

VALIDACIÓN DE EXACTITUD POR RECUPERACIÓN DE ADICIONES CONOCIDAS

Conc. de
muestra + Conc. Recuperación Adición Desviaciones del Recuperación,
Ensayo
Adicion Muestra Calculada Conocida Esperado %
Conocida

1 70.10 50.30 19.8000 20.00 -0.2000 99.00

2 70.20 50.30 19.9000 20.00 -0.1000 99.50

3 70.00 50.30 19.7000 20.00 -0.3000 98.50

4 70.30 50.30 20.0000 20.00 0.0000 100.00

5 70.40 50.30 20.1000 20.00 0.1000 100.50

6 70.00 50.30 19.7000 20.00 -0.3000 98.50

DATOS     6   6 6

PROM     19.8667   -0.1333 99.33

MIN     19.7000   -0.3000 98.50

MAX     20.1000   0.1000 100.50

RANGO     0.4000   0.4000 2.00

DESVEST     0.1633   0.1633 0.82

Interv.
Conf     0.1307   0.1307 0.65

tcalc  0.102 ttab  2.57      

EL PROMEDIO DE RECUPERACIÓN CUMPLE CON LAS ESPECIFICACIONES
FARMACOPEICAS
PRECISIÓN

Para evaluar este proceso se utilizaron una serie de muestras a concentraciones

diferentes, tales como 50 %, 60 %, 70 %; la precisión fue determinada Intradía e
Interdía realizando los experimentos en las mismas condiciones de trabajo. Los
resultados de las pruebas de precisión muestran las variaciones obtenidas en la señal
analítica, el valor promedio de la señal y la Desviación Estándar Relativa (CV). La
repetibilidad en los valores de la señal analítica de los análisis intra e interdías con
bajos valores de CV (menores que 5,0 %) indican que el método es preciso. Los valores
de CV por debajo del 5% tanto en lo que concierne a repetibilidad (Intradía) como a
precisión intermedia (Interdía) son considerados aceptables.

REPETIBILIDAD (Intradía) REPETIBILIDAD (Intradía)

ANALISTA NÚMERO UNO  ANALISTA: NÚMERO DOS 
  Concentración de   Concentración de
Trabajo Trabajo
Ensayo 50 % 60 % 70% Ensayo 50 % 60 % 70%
Número Número
1 49.6 61.0 69.7 1 51.0 59.5 71.0
2 50.5 59.6 70.5 2 49.7 61.0 69.0
3 49.8 60.7 69.7 3 50.6 60.4 70.5
4 50.2 60.9 70.6 4 49.5 59.8 69.1
5 49.0 59.0 70.0 5 50.7 59.7 71.0
6 51.0 59.7 69.8 6 49.6 59.4 69.3
Media 50.02 60.15 70.05 Media 50.18 59.97 69.98
S 0.71 0.83 0.40 s 0.66 0.62 0.95
C.V., % 1.41 1.37 0.58 C.V.,% 1.31 1.03 1.36
Int. Conf 0.56 0.66 0.32 Int. Conf 0.52 0.49 0.76
REPRODUCIBILIDAD

Los resultados de las pruebas de reproducibilidad muestran las variaciones obtenidas

en la señal analítica, el valor promedio de la señal y la Desviación Estándar Relativa
(CV); Los valores de CV se presentan por debajo del 5% por lo que podemos afirmar
que la reproducibilidad del método es adecuada.

Reproducibilidad Intralaboratorio
  Concentración 60

Analista 1 Analista 2 Diferencia

Ensayo Número

1 60.2000 60.5000 -0.3

2 60.1000 60.5000 -0.4

3 60.0000 60.0000 0

4 60.5000 60.3000 0.2

5 60.3000 60.0000 0.3

6 60.0000 60.5000 -0.5

Media 60.2200 60.2600 -0.0400

s 0.1924 0.2510 0.3050

C.V., % 0.32 0.42 -762.40

t (Calculada) 0.78   -762.83

t(Tabla) 2.57    

  VARIANZAS DESIGUALES

MEDIAS SON IGUALES

COMPARACION DE DOS MEDIAS OBSERVADAS DE DOS SERIES INDEPENDIENTES
SERIE SERIE1 SERIE2
Tamaño/muestra 6 6
Promedio 60.22 60.26
VAR, estimada 0.037 0.06
CONDICION DE VALIDEZ DEL TEST
Las Variables en Estudio Serie1 y Serie2 deben ser normales
COMPARACION PRELIMINAR DE LAS VARIANZAS SEGÚN FISHER
Valor de FCalc (S1/S2)^2= 1.16 G.L. del numerador 5
Para Alpha = 5% F0.95 5.05 G.L. del denominador
5

HIPOTESIS DEL BILATERAL

Ho: EX1 = EX2
H1: EX1 < EX2
RESULTADOS DEL ESTADISTICO
Varianza Total s2 0.46367

G.L. de la ley de Student G.L. 10

Valor de t calculado tcalc 0.42

Alpha alpha/2 2.50%

ttab al 5% de significancia
t (0.975, GL) 2.228
CONCLUSION LAS MEDIAS SON IGUALES
 Reproducibilidad Intralaboratorio
  Concentración 70

Analista 1 Analista 2 Diferencia

Ensayo Número
1 70.0000 70.0000 0
2 65.7000 70.0000 -4.3
3 70.2000 70.2000 0
4 68.0000 68.3000 -0.3
5 65.0000 70.2000 -5.2
6 69.0000 68.3000 0.7
Media 67.7800 69.7400 -1.9600
s 2.3921 0.8112 2.5696
C.V., % 3.53 1.16 -131.10
t (Calculada) 0.16    
t(Tabla) 2.57    
  VARIANZAS DESIGUALES
MEDIAS SON IGUALES

COMPARACION DE DOS MEDIAS OBSERVADAS DE DOS SERIES INDEPENDIENTES

SERIE SERIE1 SERIE2
Tamaño/muestra 6 6
Promedio 67.78 69.74
VAR, estimada 4.82 0.87
CONDICION DE VALIDEZ DEL TEST
Las Variables en Estudio Serie1 y Serie2 deben ser normales
COMPARACION PRELIMINAR DE LAS VARIANZAS SEGÚN FISHER
Valor de FCalc (S1/S2)^2= 1.80 G.L. del numerador 5
Para Alpha = 5% F0.95 5.05 G.L. del denominador
5
 HIPOTESIS DEL BILATERAL
Ho: EX1 = EX2
H1: EX1 > EX2
RESULTADOS DEL ESTADISTICO
Varianza Total s2 0.53083

G.L. de la ley de Student G.L. 10

Valor de t calculado tcalc 0.44

Alpha alpha/2 2.50%

ttab al 5% de significancia
t (0.975, GL) 2.228
CONCLUSION LAS MEDIAS SON IGUALES
PRECISIÓN INTERMEDIA
Se obtuvieron resultados de coeficiente de variación menores que los que presenta la
repetibilidad lo que indica que el método presenta un nivel de variación menor del 5,0%.

PRECISIÓN INTERMEDIA (Repetibilidad Interdía)

  Concentración de Trabajo

Muestra 50.00 60.00 70.00

1 50.0000 60.2000 70.0000
2 50.2000 60.0000 70.1000
3 50.3000 60.3000 68.2000
4 50.5000 60.1000 65.0000
5 50.0000 60.2000 68.0000
6 50.3000 60.3000 70.0000
7 50.2000 60.5000 70.0000
8 50.5000 60.2000 70.1000
9 50.1000 60.6000 70.2000
10 50.3000 60.5000 70.1000
11 50.4000 60.0000 69.0000
12 50.5000 60.0000 70.0000
Media 50.2400 60.2900 69.1700
s 0.1776 0.1912 1.6806
C.V., % 0.35 0.32 2.43
Int. Conf 0.1005 0.1082 0.9509
Datos 12 12 12

CUMPLE CUMPLE CUMPLE

Adicionalmente, el análisis de varianza de un solo factor para los dos grupos de datos (día uno y
día dos) a cada concentración evaluada reflejó diferencias no significativas.
4.8. LÍMITE DE DETECCIÓN Y DE CUANTIFICACIÓN (LD Y LC)
La determinación de los Límites de Detección y de Cuantificación se realizó sobre las
muestras empleadas para la prueba de precisión, fueron calculados aplicando los
criterios de 3 y 10 veces el valor de la desviación estándar residual y dividiendo el valor
obtenido en cada caso entre la pendiente (Miller), respectivamente los valores logrado
sujeto a validación no presentan diferencias significativas entre los resultados obtenidos
para los limites empleados y los coeficientes variación entre ambos pudiendo decir así
que el método es suficientemente sensible
Los resultados de la evaluación tanto del Límite de Detección como del límite de
Cuantificación se presentan en la Figura 4.8.1, donde, además de los parámetros
básicos de la regresión lineal, se presentan los parámetros de dispersión del sistema y
la Curva de Calibración con sus correspondientes hipérbolas de regresión.
 REGRESION LINEAL SIMPLE, LIMITE DE DETECCION Y DE CUANTIFICACIÓN
CURVA PROMEDIO PARA ALCOHOL GEL, 70%
        FECHA 23/10/20

Esperado, Obtenido,
% % a (Intercepto) 0.44020 r 1.0000
30.0 30.4 b (pendiente) 1.0009 R2 1.0000
40.0 40.4 Varianza residual 0.0067684 Desviación Estándar de x/y 0.0823
Desviación Estándar Intervalo de Confianza de la
50.0 50.6 de la Pendiente 0.0026016 pendiente 0.0083
Desviación Estándar Intervalo de Confianza del
60.0 60.5 del Intercepto 0.1351839 Intercepto 0.4302
70.0 70.4 Límite de Detección 0.24660 Límite de Cuantificación 0.8220

12.0

10.0

8.0
Obtenido. %

6.0

4.0

2.0

0.0
30.0 35.0 40.0 45.0 50.0 55.0 60.0 65.0 70.0
Esperado, %
ROBUSTEZ DEL MÉTODO
Se implementó un modelo experimental tipo screening a fin de evaluar los factores que
pueden tener influencia en el proceso analítico.
Se investigaron aquellos factores que pueden tener un efecto real o una influencia que
es claramente distinguible de cualquier ruido de fondo del sistema.
Para tal fin, el diseño de experimentos correspondió al presentado en la siguiente tabla:

FACTORES BAJO
ESTUDIO
No. X1 X2 X3
1 -1 -1 -1
2 +1 -1 -1
3 +1 +1 -1
4 -1 +1 +1
5 +1 -1 +1
6 -1 +1 -1
7 -1 -1 +1
8 +1 +1 +1

La interpretación de la Tabla es como sigue:

4.9.1. Las X representan distintos factores bajo estudio (P. ej., Alícuota, Concentración
de ácido, Indicador, etc.).
4.9.2. Las filas representan un conjunto de factores bajo estudio que se combinan para
cada experimento.
4.9.3. Los valores +1 y -1 indican niveles de concentración o % de cada factor bajo
estudio (+1: Nivel alto, -1: Nivel Bajo.
4.9.4. Esta Tabla está diseñada para investigar 3 factores, pero perfectamente se
puede ampliar hasta siete factores de influencia.
 FACTORES BAJO ESTUDIO
pH Vol. Long. Onda
Aforo
-1 -1 -1
+1 -1 -1
+1 +1 -1
-1 +1 +1
+1 -1 +1
-1 +1 -1
-1 -1 +1
+1 +1 +1

  Tiempo Temperatur Vol. agua

a
Bajo 4 60 180
Alto 5 85 200

MODELO MATEMÁTICO:
y = ß0 + ß1x1 + ß2x2 + ß3x3 +ε

CÁLCULO DE LOS EFECTOS:

Constante βo 65.13
Tiempo β1 -1.62500
Temperatura β2 2.37500
Vol de agua β3 -1.62500

ECUACIÓN QUE DEFINE EL COMPORTAMIENTO DEL SISTEMA:

y = 65.13 -1.63 + 2.38x2 – 1.63x3

 2.50000
2.00000
1.50000
1.00000
0.50000
0.00000
-0.50000 β1
-1.00000 β2
Tiempo β3
-1.50000 Temperatura
Vol. agua
-2.00000

A partir del Gráfico anterior puede inferirse que el factor que mayor influencia en la
variable de salida (la cuantificación del principio activo) es la temperatura.
 RESUMEN DE RESULTADOS

PARÁMETRO ESPECIFICACIONES RESULTADOS

SELECTIVIDAD No debe presentar interferencias de  Conforme
matriz
PRECISIÓN INTRADÍA (REPETIBILIDAD)
 Coeficiente de Variación No mayor de 5%  Conforme
PRECISIÓN INTERDÍA (PRECISIÓN
INTERMEDIA) No mayor de 5%  Conforme
 Coeficiente de Variación
EXACTITUD
 Recuperación texp < ttab  Conforme
LINEALIDAD DEL MÉTODO
 Coeficiente de Correlación (r). Mínimo 0,9950  Conforme.
 Coeficiente de Determinación (R2) Mínimo 0,9900  Conforme.
 Test Estadístico para la regresión (P = texp >>ttabla  Conforme.
0,05 y n-2 grados de libertad).
 Coeficiente de variación (Pendiente). Máximo 5%  Conforme.
 Prueba de Linealidad de la Pendiente (P
= 0,05 y n-2 grados de Libertad). texp > ttabla  Conforme.
 Prueba de Proporcionalidad del
Intercepto (P = 0,05 y n-2 grados de texp < ttabla  Conforme.
libertad).

ROBUSTEZ Estable ante cambios de volumen y  Conforme

de tiempo. Debe tenerse especial
cuidado con el ajuste de temperatura
de destilación
CONCLUSIONES
Se estableció que el método es suficientemente específico en las condiciones validadas
para su ejecución, sin presentarse interferencias significativas por ninguno de los
constituyentes de la matriz del producto objeto de análisis.
Para evaluar le exactitud se aplicaron diferentes procedimientos experimentales y
estadísticos que responden a las características propias del método analítico validado.
Además, no se obtuvieron diferencias significativas entre la recuperación media y el
100% al aplicar la prueba de t de Student, confirmando la adecuada exactitud del
método.
El estudio de precisión mostró una buena repetibilidad y repetibilidad intermedia de los
resultados, de acuerdo a los criterios de aceptación, al realizar mediciones, en las
condiciones de implementación del método, tanto intradía como interdía.
Al evaluar estadísticamente la linealidad del método analítico validado, se obtuvieron
coeficientes de correlación y de determinación que demuestran que existe una
adecuada correlación entre las variables concentración y señal analítica obtenida. Para
confirmar dicha linealidad se aplicaron los siguientes Ensayos de Hipótesis: Hipótesis
nula del Intercepto e Hipótesis nula de la Pendiente.
Los Límites de Detección y de Cuantificación calculados para el método sujeto a
validación fueron corroborados experimentalmente. El método es suficientemente
sensible, para los fines de implementación proyectados, ya que no se encontraron
diferencias significativas entre los resultados obtenidos para cada límite y los
coeficientes de variación para cada uno de ellos fueron menores que el coeficiente de
variación permitido para el método.
El método es robusto ante pequeños cambios circunstanciales que pudieran
presentarse, relativos al tiempo de calentamiento y el volumen de agua. No obstante
debe tenerse especial cuidado con la temperatura de trabajo.
El método es adecuado para la determinación de alcohol en Alcohol gel 70%.

BIBLIOGRAFÍA

Manual de Procedimientos para el registro y Renovación de Productos

Farmacéuticos e Inscripción Sanitaria y Renovación de Productos Cosméticos
e Higiénicos. MINSA.
RTCA 11.03.39:06. Productos Farmacéuticos. Validación de Métodos
Analíticos para la Evaluación de la Calidad de los Medicamentos.
Huber L. Validation and Qualification in Analytical Laboratories. Informe
Healthcare USA Inc. New York, 2007.
The United States Pharmacopeia. The National Formulary.USP 40-NF 35.