La transferencia de oxígeno desde el aire hasta el medio de cultivo en los bioprocesos es un fenómeno

complejo que depende de variables diversas. Sin embargo, dicho fenómeno puede explicarse y modelarse
satisfactoriamente a partir de la teoría de la capa límite propuesta originalmente por Whitman (1923). La
transferencia de interfase de masa incluye tres pasos de transferencia: la transferencia de masa de las
condiciones globales de una fase a la superficie interfasial, la transferencia a través de la interfase, a la
segunda fase y, finalmente, la transferencia de las condiciones globales de la segunda fase. La teoría de la capa
límite utiliza dos suposiciones principales: que la rapidez de transferencia de masa entre las dos fases está
controlada por la rapidez de difusión a través de las fases que se encuentran en ambos lados de la interfase y
que no hay ninguna resistencia a la transferencia de la composición en difusión a través de la interfase.

La transferencia del componente A de la fase gaseosa a la líquida se puede observar gráficamente en la

Figura 3.1, con un gradiente de presión parcial de la composición global gaseosa, p A,G, a la composición
interfasial de gas, pA,i y un gradiente de concentración en el líquido, de cA,L. Si no existe resistencia
alguna en la superficie interfasial p A,i y cA,i son concentraciones de equilibrio; estos son los valores de la
concentración que se obtendrían si las dos fases hubieran estado en contacto durante un período
infinito de tiempo. Las concentraciones p A,i y cA,i se encuentran relacionadas por medio de relaciones
termodinámicas tales como la ley de Henry y la ley de Raoult. La presión parcial interfasial, pA,i, puede
ser menor, igual o mayor que c A,i, dependiendo de las condiciones de equilibrio a la temperatura y
presión del sistema. Cuando la transferencia se realiza de la fase líquida a la gaseosa, c A,L será mayor que
cA,i y pA,i será mayor que pA,G.

Figura 3.1. Gradientes de concentración entre dos fases en contacto.

El flujo del componente A de una fase a la otra se puede describir por medio de la ecuación (3.1)

𝐽0𝐴 = 𝑘𝐺 · (𝑝𝐴,𝐺 − 𝑝𝐴,i) = 𝑘𝐿 · (𝐶𝐴,i − 𝐶𝐴,𝐿) (3.1

)

Siendo Jo la intensidad de flujo molar del componente A (mol ∙ m -2 s-1) a través de la interfase gas-líquido:
kG y kL son los coeficientes de transferencia de masa locales para el gas y el líquido respectivamente.
Debido a que las concentraciones interfasiales no son medibles directamente y considerando el
coeficiente global de transferencia de masa, la ecuación (3.1) puede reescribirse como:

𝐴
𝐽0 = 𝐾𝐺 · (𝑝
𝐴
* *
𝐴,𝐺 − 𝑝 ) = 𝐾𝐿 · (𝐶 − 𝐶𝐴,𝐿) (3.2)

Donde pA* es la presión parcial del componente A en el equilibrio con la fase líquida, CA* es la
concentración de saturación del componente en el líquido en equilibrio con la fase gaseosa. K G y KL son
los coeficientes globales de transferencia de masa en el gas y en el líquido respectivamente. Si se utiliza
la ley de Henry y se combinan las ecuaciones (3.1) y (3.2) se obtiene:

1 1 1 (3.3)
= +
𝐾𝐿 𝐻𝑘𝐺 𝑘𝐿

Siendo H la constante de la ley de Henry. Tomando en consideración que el oxígeno es ligeramente

soluble en agua (es decir, que H es muy grande), se puede suponer que la mayor resistencia para la
transferencia de masa proviene del lado líquido de la interfase por lo que la resistencia proveniente de
la fase gaseosa puede ser omitida generando que K L = kL. La transferencia másica de oxígeno por unidad
de volumen del reactor, N O2, se obtiene de multiplicar la intensidad de flujo promedio por el área
interfasial por unidad de volumen gas-líquido (a). Se tiene así la expresión (3.4)

𝑁02 = 𝐽0 · 𝑎 = 𝑘𝐿 · 𝑎 · (𝐶�* − 𝐶𝐴,𝐿) (3.4)

�

Debido a la dificultad de medir kL y a separadamente, usualmente el producto k La es el que se mide y

este parámetro, conocido como el coeficiente volumétrico de transferencia de masa, caracteriza el
transporte de oxígeno del gas al líquido.

La determinación del kLa en biorreactores es esencial para establecer la eficiencia de la aireación y para
cuantificar los efectos de las variables de operación en la provisión de oxígeno disuelto. Diferentes
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métodos se han desarrollado para determinar la tasa de transferencia de oxígeno en biorreactores y la

selección de un método en particular depende de distintos factores :

1. Los sistemas de aireación y de homogenización utilizados

2. El tipo de biorreactor y su diseño mecánico
3. La composición del medio de fermentación
4. El posible efecto de la presencia del microorganismo

El balance de masa para el oxígeno disuelto en una fase líquida bien mezclada puede verse como:

𝑑𝐶 (3.5)
= 𝑂𝑇𝑅 − 𝑂𝑈𝑅
𝑑𝑡

Donde,

dC/dt = tasa de acumulación del oxígeno en la fase líquida, mol ∙ L -1 ∙ s-1

OTR = tasa de transferencia del oxígeno del gas al líquido, mol ∙ L-1 ∙ s-1

OUR = tasa de utilización del oxígeno por parte de los microorganismos, mol ∙ L-1 ∙ s-1

La OTR puede calcularse utilizando la ecuación (3.4) mientras que la OUR puede ser expresada como
qO2∙Cx, donde el primer término corresponde a la tasa específica de consumo del microorganismo
empleado y el segundo a la concentración del microorganismo en el medio.

Los métodos más comunes utilizados para medir la tasa de transferencia de oxígeno en los bioprocesos
microbianos pueden clasificarse dependiendo de si la medición se realiza en ausencia de
microorganismos o con células muertas o si se hace en presencia de biomasa que consume oxígeno
durante el período de medición.

3.2.1. Métodos de medición del kLa sin consumo biológico de oxígeno

En ausencia de biomasa, cuando se cuenta con células que no están respirando o cuando no se están
llevando a cabo reacciones bioquímicas, OUR = 0. En este caso la ecuación (3.5) puede simplificarse a:

𝑑𝐶 (3.6)
= 𝑘𝐿𝑎 · (𝐶*𝐴− 𝐶𝐴,𝐿 )
𝑑𝑡

Los métodos a continuación se basan en la ecuación (3.6) y las técnicas para medir la concentración de
oxígeno disuelto se dividen en dos grupos: los métodos químicos y los métodos físicos.

Método de oxidación de sulfito de sodio: este método se basa en la reacción del sulfito de sodio, un
agente reductor, con el oxígeno disuelto para producir sulfato en la presencia de un catalizador
(usualmente un catión divalente como Cu 2+ o Co2+). El método fue descrito por primera vez por Cooper
(1944) e involucra la siguiente reacción:

2 𝑆𝑂3−2 + 𝑂2 → 2 𝑆𝑂4−2 (3.7)

Existe un rango de concentración de sulfito de sodio (desde 0.02 a 0.8 M) para el cual la reacción es tan
rápida que la concentración de oxígeno puede suponerse como de cero. La velocidad de reacción es
mucho mayor que la velocidad de transferencia de oxígeno; por lo tanto, la tasa de oxidación es
controlada por la tasa de transferencia de masa y si se mide esta tasa de oxidación se puede obtener la
tasa de transferencia de oxígeno. Al utilizar este método es necesario tener presente que la velocidad de
reacción es una función compleja de la concentración del catalizador y de las condiciones operacionales
y que estás deben ser controladas para obtener mediciones reproducibles (Linek, 1981).

El procedimiento experimental consiste en el llenado del reactor con una disolución 1 N de sulfito de
sodio que contenga al menos una concentración 1 mM de ión Cu 2+, activar la entrada de aire y comenzar
el conteo cuando el aire sale del burbujeador. Se deja que la reacción de oxidación ocurra por unos
minutos y luego de eso se detiene el flujo de aire, la agitación. Durante el proceso se toman alícuotas de
la disolución que se mezclan con un exceso de reactivo estándar de yodo para luego titular las muestras
con una disolución estándar de tiosulfato de sodio utilizando almidón como indicador. Las reacciones
que se llevan a cabo son las siguientes:

𝑆𝑂4−2 + 2𝐻+ + 2𝐼− → 𝑆𝑂−23 + 𝐼2 + 𝐻2𝑂 (3.8)

2 𝑆2𝑂3−2 + 𝐼2 → 𝑆4𝑂−2
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+ 2𝐼− (3.9)

La cantidad de sulfito residual también puede ser estimada indirectamente con la estequiometría de la
reacción (3.8) por medio de determinación colorimétrica de la concentración de yodo como lo describe
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Yang (1992). Una vez que la concentración de sulfito se ha determinado en función del
tiempo, la tasa de consumo de sulfito se determina y el kLa puede ser calculado de la
forma:

𝑑𝐶3𝑆0−2 (3.10)
− = 2 · 𝑘𝐿𝑎02· 𝐶*
𝑑𝑡

Este método es muy simple de utilizar pero presenta la limitación de que la hidrodinámica
de la disolución cambia al agregar el sulfato de sodio lo cual genera que las estimaciones
del kLa suelan ser mayores que las que son en la realidad (García-Ochoa, 2009).

Método de absorción de CO2: este método fue propuesto por Danckwerts (1966) y consiste
en la absorción de dióxido de carbono en una disolución alcalina. Las reacciones que
ocurren son las siguientes:

𝐻𝐶𝑂3− → 𝐶𝑂2 + 𝑂𝐻− (3.11)

𝐻𝐶𝑂3− + 𝐻+ → 𝐶𝑂2 + 𝐻2𝑂 (3.12)

Para determinar el valor de KLA, es necesario utilizar una grafica como la que se muestra

Donde la línea continua se obtiene con ciertos valores de la velocidad de rotación de los
impulsores (N) y flujo de aire (Fa), mientras que a línea segmentada se obtiene de valores más
altos de N o Fa.
La pendiente nos ayuda a obtener el valor de la velocidad de transferencia de oxígeno (VTO),
donde una mayor pendiente representa una mayor VTO y, en consecuencia, un mayor valor de
KLA.

V ts 2−V ts1
m=
t 2−t 1
De donde se obtiene la VTO:

(V ts 2−V ts 1) N ts Eq
N O =VTO=
2
(t 2−t 1 )V m

Donde:

V ts =Volumen de tiosulfato gastado .

N ts =Normalidad del tiosulfato .

Eq=Equivalente de oxígeno a tiosulfato ( 0.25 ) .

V m =Volumen de lamuestra .

t=Tiempo .
Finalmente, para la obtención del KLA, es necesario usar la siguiente ecuación:

VTO
KLA=
C ¿L

Ventajas y desventajas de este método

Ventajas:

 Es el más empleado por los fabricantes de biorreactores, ya que con este método se
“calibra “o caracteriza con este método.
 Ofrece valores por arriba de lo esperado, puesto que la reacción es muy rápida.

Desventajas:

 No aplica con sistemas de fermentación.

 Se debe evitar disoluciones de oxígeno durante el manejo de las muestras.
 Evitar tener en solución sustancias interferentes con la reacción.
 El sulfito es muy corrosivo.
 Es un método caro.