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    Cuestionario Clonación Celular

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    BRIAN SALVADOR MORALES
    Este documento presenta un cuestionario con 7 preguntas sobre clonación celular y técnicas de ADN recombinante. Las preguntas requieren que el estudiante proponga primers de PCR, describa los pasos del proceso de clonación, determine la secuencia de aminoácidos resultante y dibuje esquemas de vectores de clonación con inserciones de ADN o ARN de interés.

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    BRIAN SALVADOR MORALES
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    Este documento presenta un cuestionario con 7 preguntas sobre clonación celular y técnicas de ADN recombinante. Las preguntas requieren que el estudiante proponga primers de PCR, describa los pasos del proceso de clonación, determine la secuencia de aminoácidos resultante y dibuje esquemas de vectores de clonación con inserciones de ADN o ARN de interés.

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    CUESTIONARIO

    PARA EL ANÁLISIS DE LA LECTURA: “CLONACIÓN CELULAR, TECNOLOGÍA DEL DNA RECOMBINANTE”


    CAPÍTULO 15 del libro Ingeniería genética de Ángel Herráez Capítulo 15.

    Realizar el siguiente cuestionario A MANO, EN LA LIBRETA U HOJAS RECICLABLES, de manera


    individual, sin copiar el de otros compañeros, pues trabajos idénticos se anularán sin
    posibilidad de reposición.
    1.- Explique con sus propias palabras para que sirve la clonación celular.
    2.- En relación a la 1ª. Etapa del proceso de clonación, explica con tus propias palabras cuál
    es la diferencia en el proceso de preparación de una muestra de ADN y una muestra de ARN
    3.- Escriba la secuencia de los cebadores de PCR “sentido y antisentido”, que podrían
    amplificar la siguiente secuencia: 5'GATGGCGATTAAAGCGCA 3’ para unirla después a un
    vector de clonación con sitios de restricción para HindIII y PtsI (checar diapositivas), para ello
    tome en cuenta cebadores de 5 nucleótidos de longitud de hibridación. Consulte las
    diapositivas “clonación-1ª-2ª y 3ª etapa” que están en el classroom.
    4.- Escriba la secuencia de los cebadores de PCR “sentido y antisentido”, que podrían
    amplificar la siguiente secuencia: 5’AAGUACUGAAUCCGAUUGGCAUAGGGUACAGUAA3’
    Diga cuales serían los pasos para completar las etapas 1, 2 y 3 de clonación para ésta
    secuencia si se quiere insertar en un vector que tiene un sitio de corte para EcoRI.

    5.- Suponga que tiene la siguiente secuencia de ADN, y debe proponer cómo insertar la
    secuencia correspondiente al RNAm de este gen en un vector como el siguiente :
    EcoRI

    a) diga cuáles serán los primers para amplificar por PCR al segmento de interés (18 pb cada
    primer incluido el sitio de restricción)

    1
    TAGCACTCAGATATAAACGTTCCCAGCAAGGCAATTTTACTTCTAACTGAAACTAGGGGCAAGGAG
    ACGA70

    71
    ACCATGGAAGTTAAACTTTAAGATGAAGAACAAAGCTGATAGTACTGATGCATTGGATCTTTGGA
    GAGGA140

    141
    TCTCAGAACTCAATAAACTTAATTTACAGGCTAAAACCTTAGAAGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAA
    AAAAA210
    B) Diga cuáles son los pasos para completar las fases 1 a la 3
    c) ¿Cuál será el número de aminoácidos que contendrá la proteína traducida de este gen?
    ___________________________
    D) dibuje el esquema final del vector de clonación con el inserto
    e) si el vector de clonación pesa 1000 pb, diga cuánto pesará después de la ligación con el
    inserto.
    6.- Se tiene la siguiente secuencia de ADN, y debe proponer cómo insertar la secuencia
    correspondiente a la proteína de este gen en un vector como el siguiente:
    BamHI

    EcoRI

    a) diga cuáles serán los primers para amplificar por PCR al segmento de interés que solo
    comprende el marco abierto de lectura (ORF), tome en cuenta18 pb para cada primer
    incluido el sitio de restricción
    Nota: para determinar el sitio +1, tome en cuenta una separación de 30 pb después del
    promotor TATA
    1
    TAGCACTCAGATGTAATCGTTCCCAGCAAGGCAATTTTACTTCTATAATGAAACTAGGGGCAAGGA
    GACG70

    71
    ACCAAGGAAGTTAAACTTTAAGATGAAGAACAAAGCTGATAGTACTGATGCATAGGATCTTTGGA
    GAGGA140

    141
    TCTCAGAACTCAATAAACTTAATTTACAGGCTAAAACCTTAGAAGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAA
    AAAA210

    B) Diga cuáles son los pasos para completar las fases 1 a la 3


    c) ¿Cuál será el número de aminoácidos que contendrá la proteína traducida de este gen?
    ___________________________
    D) dibuje el esquema final del vector de clonación con el inserto

    e) si el vector de clonación pesa 1500 pb diga cuánto pesará con el inserto después de la
    ligación.

    7.- Se tiene la siguiente secuencia de ARN, y debe proponer cómo insertar la secuencia
    correspondiente a la proteína de este gen en un vector como el siguiente:
    BamHI

    PvuI
    secuencia de RNAm…

    UAUAGCGCGAACAAGUACUGAAUCCGAUUGGCAUAGGGUACAGUAAUGUAUGUUCCUGU
    UGGUGCUGUU
    ACUGAACAAGGUUAGUUGAAUUUGGGUGGUCGUCAAACUGCUCGUAUUUUGAAAAAAAA
    AAAAAAAAAAA
    a) diga cuáles serán los primers para amplificar por PCR al segmento de interés que solo
    comprende el marco abierto de lectura (ORF), tome en cuenta18 pb para cada primer
    incluido el sitio de restricción.
    B) Diga cuáles son los pasos para completar las fases 1 a la 3
    c) ¿Cuál será el número de aminoácidos que contendrá la proteína traducida de este gen?
    ___________________________
    D) dibuje el esquema final del vector de clonación con el inserto
    e) si el vector de clonación pesa 1250 pb diga cuánto pesará con el inserto después de la
    ligación.

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