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    PCR Anidada

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    Maria Godoy
    Este documento presenta un seminario sobre la validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y gag del VIH-1 mediante PCR anidada en pacientes pediátricos. El objetivo fue validar los cebadores previamente reportados para detectar estos dos genes principales del VIH-1. Los resultados mostraron que los cebadores tuvieron una especificidad y eficiencia del 100%, confirmando que pueden ser utilizados para diagnóstico mediante PCR anidada.

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    PCR Anidada

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    Maria Godoy
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    Este documento presenta un seminario sobre la validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y gag del VIH-1 mediante PCR anidada en pacientes pediátricos. El objetivo fue validar los cebadores previamente reportados para detectar estos dos genes principales del VIH-1. Los resultados mostraron que los cebadores tuvieron una especificidad y eficiencia del 100%, confirmando que pueden ser utilizados para diagnóstico mediante PCR anidada.

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    Este documento presenta un seminario sobre la validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y gag del VIH-1 mediante PCR anidada en pacientes pediátricos. El objetivo fue validar los cebadores previamente reportados para detectar estos dos genes principales del VIH-1. Los resultados mostraron que los cebadores tuvieron una especificidad y eficiencia del 100%, confirmando que pueden ser utilizados para diagnóstico mediante PCR anidada.

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    PCR Anidada

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    Este documento presenta un seminario sobre la validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y gag del VIH-1 mediante PCR anidada en pacientes pediátricos. El objetivo fue validar los cebadores previamente reportados para detectar estos dos genes principales del VIH-1. Los resultados mostraron que los cebadores tuvieron una especificidad y eficiencia del 100%, confirmando que pueden ser utilizados para diagnóstico mediante PCR anidada.

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    Seminario 1: PCR anidada

    “Validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y


    gag mediante reacción en cadena de la polimerasa anidada en pacientes
    pediátricos con infección por Virus de Inmunodeficiencia Humana-1 y su
    confirmación por secuenciación”

    Integrantes: Marcela Alvarado, Romina Clavería, Fernando Godoy,


    Carla Morales, Teresa Quijada y Valentina Vallejos
    Ramo: Laboratorio Biología Molecular y Genética
    Docente: Katherine Araya
    Introducción
    Antecedentes del Problema: A través de la reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) anidada es
    posible detectar los dos genes principales del VIH-1: env y gag, pero la especificidad y eficacia de esta
    PCR depende en gran medida de los cebadores por lo que la validación de estos es esencial.

    Pregunta de Investigación : ¿Los cebadores específicos previamente reportados en la literatura son


    útiles para la detección de los genes del VIH-1, env y gag?

    Objetivo: Validar los cebadores específicos previamente reportados en la literatura y que se utilizan en
    la detección de dos genes principales del VIH-1, env y gag
    PCR anidada

    ● 2 pares de cebadores
    ● 1era reacción= cebadores
    externos
    ● 2da reacción = cebadores
    internos
    ● Gran especificidad
    Método
    PCR anidada

    1) Se desnaturaliza a 94º C
    ● ADNg paciente positivo de VIH-1 2) 55ºC (env) / 50ºC (gag)
    3) 72º C en ambos genes

    ● ADNg de la línea celular 8E5/LAV → 2da ronda, se aplican las


    (8E5) mismas condiciones

    Purificación de productos
    y secuencia automatizada:
    -Electroforesis en geles de agarosa
    Resultados

    Gen env Gen gag

    Banda 300 pb 800 pb

    Cebadores específicos Sí Sí

    Coincide con fragmento de Sí Sí


    ADN

    Especificidad analítica 100% 100%

    Sensibilidad analítica 10 cels/mm3 10 cels/mm3


    Discusión y Conclusión

    Las pruebas tradicionales no son ● Se validó los cebadores y se comprobó que


    útiles en pacientes pediátricos. Por la técnica tiene un límite.
    esto, la técnica PCR anidada cobra
    gran importancia. ● La determinación de los genes incide en los
    niveles de sobrevida de los pacientes.
    Concordancia con otros estudios.
    Diferencia explicada por la alta ● Este estudio puede servir como referencia
    tasa de mutación del VIH-1. adicional.

    Se confirma que los cebadores presentan una buena especificidad y eficiencia; y pueden ser
    utilizados en la estandarización de pruebas de PCR anidada para el diagnóstico
    Bibliografía

    ● Frango, A., Ramírez, A., Duarte, M., Alejos, M., Valladares, S., Eleizalde, M., Rangel, H., &
    Convit, A. (2020). Validación de cebadores específicos para la detección de los genes env y
    gag mediante reacción en cadena de la polimerasa anidada en pacientes pediátricos con
    infección por Virus de Inmunodeficiencia Humana-1 y su confirmación por secuenciación.
    Gaceta Médica de Caracas, 128(4), 525–536. https://doi.org/10.47307/gmc.2020.128.4.8

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