PRACTICA RESUELTA 01b. NATURALEZA QUIMICA DE LAS ENZIMAS

Primera Unidad Fundamentos Bioquímicos, Enzimología y Biología Molecular de las membranas biológicas
PRACTICA N° 01b
- NATURALEZA QUÍMICA DE LAS ENZIMAS Y ACTIVIDAD ENZIMÁTICA - -
INTRODUCCION:
Las enzimas son proteínas relativamente frágiles con tendencia a sufrir desnaturalización e inactivación, por efecto de diversos
agentes físicos y químicos como: temperatura, ácidos, álcalis fuertes, sales pesadas, pH, etc.
Las enzimas se encuentran en pequeñas concentraciones en los materiales biológicos, resultando complicada su individualización o
purificación. Para poder verificar directamente las propiedades comunes de la naturaleza proteica que las caracterizan,
experimentalmente se pueden utilizar las propiedades de catalizadores específicos que tienen las enzimas, como indicador de las
alteraciones que pueden sufrir éstas cuando son sometidas a la acción de diferentes agentes físicos y químicos.
La finalidad de la presente práctica, es evidenciar la característica proteica de la enzima que al exponerse a agentes físicos y
químicos varían su comportamiento y actividad catalítica.
PROCEDIMIENTO:
1) Preparar: el primer sistema denominado: SISTEMA A. Rotular previamente los tubos y colocar en cada uno lo que se indica en
el siguiente cuadro:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml)
I II III IV V VI
Amilasa al 1% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
NaOH 1N - 2.4 - - - -
HCl 3N - - 2.4 - - -
Ácido Tricloro acético 20% - - - 2.4 - -
Sulfato de Cobre al 20% - - - - 2.4 -
Buffer fosfato 0.1M / pH 6.6 2.4 - - - - 2.4
a. Observar el aspecto y color producido.
b. Dejar los 5 primeros tubos del sistema en reposo por 10 minutos a la temperatura ambiente.
c. Colocar el tubo VI en un baño de agua hirviendo por 10 minutos.
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1 6
2) Durante este lapso, preparar el segundo sistema llamado SISTEMA B:

TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml)
I II III IV V VI
Almidón al 1.0% en solución acuosa 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Buffer fosfato 0.1 M / pH 6.6 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
NaCl 0.15 M 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4 1.4
Agua Destilada 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
Pre incubar por dos minutos a 37 °C
Agregar enzima tratada, del sistema (A) 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6 0.6
Dejar en incubación a 37 °C por 20 minutos
2
3) A continuación, armar el siguiente sistema:
TUBOS DE ENSAYO
COMPONENTES (en ml)
I II III IV V VI
Acido Clorhídrico 0.05N 5 5 5 5 5 5
Del sistema (B), extraer y agregar 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Solución yodada 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
4) Observar el color producido.
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ACTIVIDADES A DESARROLLAR POR EL ALUMNO:
Explique bioquímicamente lo encontrado en los tubos del resultado final producido.
CUESTIONARIO:
1) Explique los cambios de color producidos en los diversos sistemas.
Los cambios de color se deben por la presencia de la enzima. En el tubo 1 la enzima esta activa y por esa razón está
degradando y cuando el lugol o yodo se ajunta con el almidón obtiene el color azul petróleo. Pero en este caso del tubo 1 no
notamos azul petróleo porque no se mezcló con el yodo y se está degradando.
2) Explique la teoría de la acción molecular de las enzimas sobre sus respectivos sustratos.
Las enzimas son catalizadores específicos, cada enzima cataliza un solo tipo de reacción, y casi siempre actúa sobre un único
sustrato o sobre un grupo muy reducidos de ellos. El sustrato se una a una región concreta de la enzima, cual es llamada centro
activo, este centro activo comprende la enzima y su sustrato un sitio de unión formado por los aminoácidos que están en
contacto directo con el sustrato y en la unión al centro activo catalizado, que es formado por aminoácidos directamente
implicados en el mecanismo de la reacción. Cuando ya están formados los productos, la enzima puede comenzar un nuevo
ciclo de reacción.
3) Identifique las sales pesadas empleadas en la práctica y explique su mecanismo de acción.
 NaOH: cuando se neutraliza con algún ácido libera gran cantidad de calor, el cual puede ser suficiente para hacer que el
material combustible en contacto con el hidróxido haga ignición.
 NACL: cofactor de la enzima, sustancias desnaturalizantes de las enzimas
4) Identifique los ácidos y bases fuertes empleadas en la práctica y explique su mecanismo de acción.
 ACIDOS:
 Ácidos clorhídricos: Son los que realizan la función de la desnaturalización de las proteínas; además actúa
como medio esterilizador de bacterias.
 Ácido tricolor acético: Son los que actúan como separación de proteínas de la epidemia.
3
 BASES FUERTES:
 NaOH: Es un disolvente al agua que genera una gran cantidad de calor, también es muy soluble el etanol y
metanol. Reacciona con ácidos, compuestos orgánicos halogenados y también con metales, como el aluminio,
estaño y zinc, generando hidrogeno.
5) ¿Cómo actúa la temperatura sobre la estructura proteica de la enzima?
En general, los aumentos de temperatura aceleran las reacciones químicas: por cada 10ºC de incremento, la velocidad de
reacción se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general.
Ejemplo:
REFERENCIAS:
1) Murray R. Harper Bioquímica Ilustrada. 31° edición, México 2019.
2) UCV. Protocolo de seguridad en laboratorios. Trujillo 2018.
3.-Timberlake, K. (2013). Química general, orgánica y biológica: estructuras de la vida. México: Pearson
4.-Worthington Biochemical Corporación. (2015). Specificity o enzimas (Especificidad enzimática).
5.- Purves, W. K., Sadava, D. E., Orians, G. H. y Heller, H.C. (2003). What are the chemical events at active sites of enzymes?
(¿Cuáles son los eventos químicos que ocurren en los sitios activos de las enzimas?). En Life: The science of biology (7a ed., p.p.
115-116). Sunderland, MA: Sinauer Associates.

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2) Durante este lapso, preparar el segundo sistema llamado SISTEMA B:

4) Observar el color producido.

ACTIVIDADES A DESARROLLAR POR EL ALUMNO:

Explique bioquímicamente lo encontrado en los tubos del resultado final producido.

1) Explique los cambios de color producidos en los diversos sistemas.

3) Identifique las sales pesadas empleadas en la práctica y explique su mecanismo de acción.

5) ¿Cómo actúa la temperatura sobre la estructura proteica de la enzima?

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