PRÁCTICA 8: RECONOCIMIENTO DE DNA EQUIPO 3

Laboratorio de Bioquímica II
Lunes de 16:00 a 18:00
● Vila Madrid Manuela Monserrat
Otoño 2021
● Garcia Anaya Marcos
NRC: 13971
Docente: M.C. Leticia Georgina ¿Se puede aislar nucleoproteínas de hígado e identificarlas por ● Castillo Ortega Karina
García Albarrán una reacción colorimétrica?

INTRODUCCIÓN PROCEDIMIENTO
Bases nitrogenadas: son compuestos biológicos queDefinición
contienen nitrógeno que forman los nucleósidos, que a su vez son componentes de
de carbohidrato
los nucleótidos, con todos estos monómeros que constituyen los bloques de construcción básicos de ácidos nucleicos.

Un nucleósido es una molécula monomérica orgánica glusosilamida, que integra las macromoléculas de los
ácidos nucleicos y que resulta de la unión covalente entre una base nitrogenada con una pentosa, que
COMPETENCIA
puede ser ribosa o desoxirribosa. Ejemplos de nucleósidos son la citidina, uridina, adenosina, guanosina,
timidina y la inosina. Identifica la presencia de desoxirribonucleoproteínas a partir de hígado de rata.
Los nucleósidos pueden ser de dos tipos, dependiendo de la pentosa que contengan:
●
●
Ribonucleósidos: la pentosa es la ribosa
Desoxirribonucleósidos: la pentosa es la 2-desoxirribosa MATERIALES Y REACTIVOS
Un nucleótido es una molécula formada por una base nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina en el ADN; adenina, guanina, uracilo o ● Hígado de rata
citosina en el ARN), un grupo fosfato y un azúcar (desoxirribosa en el ADN; ribosa en el ARN). ● Mortero con pistilo
● NaCl 1N
Polinucleótido: son cadenas lineales de nucleótidos en los que los grupos fosfato están esterificados a los ● Vidrio de reloj
● Agua destilada
hidroxilos 5' y 3' de dos nucleótidos consecutivos . Como consecuencia, cada polinucleótido contiene ● Vaso de precipitados de 500ml y de 250ml
únicamente un OH libre en el grupo fosfato en posición 5' (extremo 5' fosfato) y un OH libre en posición 3' ● Reactivo de difenilamina
● Probeta
(extremo 3'). Por convención, la secuencia de los polinucleótidos se representa en el sentido 5' y 3'. Los dos
● Tubos para centrífuga
● NaOH al 4%
polinucleótidos presentes en los seres vivos son el ácido ribonucleico (RNA) y el ácido desoxirribonucleico
(DNA). ● Pinzas para tubos de ensaye
● Baño maría
DNA ● Gradilla
● Pipetas de 5 y 10 ml
Es un ácido nucleico que contiene las instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de
todos los organismos vivos.
Características HOJAS DE SEGURIDAD
El ADN tiene una parte central con un azúcar y un fosfato, a la que se enlazan unas moléculas llamadas
bases. La desoxirribosa se refiere al azúcar, y el nucleico es el ácido formado por el fosfato y la base
nitrogenada. Estas bases pueden ser de 4 tipos: Adenina, citosina, timina y guanina, nombradas
normalmente como A, C, T, G. Y el orden en que se combinen una después de la otra, es lo que codifica la
información genética. El ADN se organiza estructuralmente en cromosomas. A nivel funcional se organiza en
genes, que son piezas de ADN que generan características físicas específicas.
Función
Esencial para la herencia, la codificación para las proteínas, y ofrecer las instrucciones para la vida y sus
procesos. La DNA dicta cómo un ser humano o un animal se convierte y se reproduce, y muere eventual.

RNA
El ácido ribonucleico (ARN) es una molécula similar a la de ADN. A diferencia del ADN, el ARN es de
CUESTIONARIO
cadena sencilla. Una hebra de ARN tiene un eje constituido por un azúcar (ribosa) y grupos de fosfato
de forma alterna. Unidos a cada azúcar se encuentra una de las cuatro bases adenina (A), uracilo (U),
citosina (C) o guanina (G). Hay diferentes tipos de ARN en la célula: ARN mensajero (ARNm), ARN 1. Escriba la estructura de los cuatro nucleótidos que podemos encontrar en el DNA.
ribosomal (ARNr) y ARN de transferencia (ARNt).
Características
Consta de solo cuatro nucleótidos diferentes: todos los nucleótidos tienen una estructura común: un grupo
El azúcar presente en el RNA es la ribosa. Esto indica que en la posición 2' del anillo del azúcar hay un fosfato unido por un enlace fosfodiéster a una pentosa (una molécula de azúcar de cinco carbonos, que para el
grupo hidroxilo (OH) libre. Por este motivo, el RNA es químicamente inestable, de forma que en una
disolución acuosa se hidroliza fácilmente. En el RNA la base que se aparea con la A es U, a diferencia
del DNA, en el cual la A se aparea con T. En la mayor parte de los casos es un polímero
ADN es una desoxirribosa) que a su vez está unida a una base orgánica o también conocida como base
monocatenario, pero en ciertos casos puede presentar zonas en su secuencia con apareamientos
intracatenarios. nitrogenada (adenina, timina, guanina y citosina).
Función
● Actúa como intermediario en el flujo de información que se produce entre el propio ADN y la
proteína.
● Sirve para traducir la información que designa la secuencia de los componentes que van a formar
las proteínas.
● Además, es un componente básico para los ribosomas.

Tipos de ARN presentes en la célula

2. ¿Qué función tienen los cromosomas?
Dependiendo de la función final que lleven a cabo, se identifican habitualmente hasta tres tipos
Los cromosomas son esenciales para el proceso de división celular, replicación, división y creación de células
diferentes de ARN en la célula:

● ARN para sintetizar proteínas: Son aquellos que llevan la información sobre la secuencia de hijas. Tienen una única función principal que es mantener firme al ADN y las proteínas juntos en las células
aminoácidos.
● ARN reguladores: En este caso se encargan de que los flujosde
Clasificación delos
información y las síntesis se lleven
de monosacáridos eucariotas, es decir, el cromosoma contiene no solo el código genético, sino muchas de las proteínas
a cabo en cantidades normales.
● ARN catalítico: El ARN también cumple una función biocatalizadora, por ejemplo, uniéndose a responsables de ayudar a expresarlo. Su forma y estructura complejas dictan la frecuencia con la que los
proteínas para formar ribonucleoproteínas.
genes pueden traducirse en proteínas y qué genes se traducen. Este proceso se conoce como expresión
génica y es responsable de la creación de organismos.
3. ¿Cuál es la composición de los cromosomas?

FUNDAMENTOS Escencialmente, los cromosomas se componen de ADN, pero de una manera más específica, la molécula de

Al agregar sal al hígado triturado podemos hacer que el ADN se separe de las histonas y con esto hacemos que nuestro ADN no se ADN está hecha de bases nitrogenadas, citosina y timina, que son pirimidinas, y adenina y guanina, que son
contamine ya que las cargas quedan neutralizadas y no puede formar enlaces, posteriormente en la centrifuga precipitaran. purinas. Estas hebras de ADN están emparejadas y forman una estructura de doble hélice, en la que las hebras
La homogeneización, mecánica o química, consiste en romper las uniones entre las células para facilitar la interacción con las soluciones de
lisis que ayudan a liberar el material genético, es por ello que se tritura el higado. se ordenan de forma antiparalela. Estas cadenas de ADN luego se envuelven alrededor de proteínas llamadas
histonas. Las ocho proteínas histonas son dos de cada una de las siguientes: H2A, H2B, H3 y H4. Esta
1. Una fuente importante de nucleoproteínas son los tejidos ricos en núcleos (leucocitos, espermatozoides, células hepáticas, etc.). En
soluciones salinas concentradas la desoxirribonucleoproteinas forman diluciones muy viscosas y se solubilizan en soluciones salinas estructura del ADN envuelto alrededor de las ocho proteínas histonas se llama nucleosoma. Estas estructuras
diluidas. Las nucleoproteínas son solubles en agua y soluciones de alta concentración iónica, pero son insolubles en soluciones de baja
de nucleosomas están relacionadas entre sí a través de otra proteína histona H1, que cumple la función de
concentración iónica (0.05- 0.25 mol/L) esta propiedad es usada en su extracción. Las nucleoproteínas de DNA son solubles en soluciones
salinas concentradas, pero son insolubles en soluciones salinas diluidas. Al ser precipitadas, las nucleoproteínas se sedimentan en forma compactar aún más el material de ADN y crear una estructura de cromatina más compleja llamada solenoide.
de hilos. Una de las técnicas empleadas para diferenciar nucleoproteínas de DNA de las nucleoproteínas de RNA es la reacción con
difenilamina, que frente a las nucleoproteínas de DNA da una coloración azul a diferencia del color verde que da frente a las
Estos solenoides luego forman estructuras más complejas a través del enrollamiento para formar
nucleoproteínas de RNA.
RESULTADOS superenrollamientos, que luego permiten la formación de la estructura conocida como cromosoma a través de
interacciones especializadas proteína-proteína y fuerzas intermoleculares. Una región llamada centrómero es
una constricción en el medio del cromosoma.
4. ¿Qué diferencia existe entre los nucleótidos de DNA y los de RNA?

2. Una de la técnicas mas empleada para la diferenciación de nucleoproteínas del DNA de las de RNA es la reacción con difenilamina, que frente a las
DISCUSIÓN Estructuralmente, son dos diferencias importantes:

nucleoproteínas de DNA da una coloración azul, mientras que con nucleoproteínas de RNA da una coloración verde Al tener las núcleo proteínas en el
▪ El ADN contiene una desoxirribosa (como azúcar), mientras que el ADN tiene en su estructura a una ribosa.
tubo de ensaye junto con la difenilamina y el NaOH, el propósito es mantener el pH optimo para la reacción de hidrolisis acida que se va efectuar gracias
▪ En el ADN, las bases nitrogenadas son adenina, timina, guanina y citosina. El ARN tiene adenina, uracilo,
a la difenilamina que esta preparada con H2SO4 y al someterlo al calor se produce el rompimiento de los enlaces fosfodiéster entre la pentosa y el
grupo fosfato, así como también una reacción entre la pentosa y las bases púricas (la hidrolisis acida remueve todas las bases púricas por las hidrolisis guanina y citosina, siendo el uracilo la base nitrogenada que sustituye a la timina.
Clasificación de los de polisacáridos
de uniones N glicosídicas entre pentosa y las bases son afectar las uniones fosfodiéster del esqueleto nucleotídico, por lo que obtendremos como
producto ácidos nucleicos sin bases púricas). La 2 desoxirribosa sufre una deshidratación lo cual lleva a la formación de β hidroxilevulinilaldehido que en
contacto con la difenilamina adquiere una coloración azul, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de DNA presente . CONCLUSIÓN
– Al tener las nucleoproteínas en el tubo de
ensaye junto con la difenilamina y el hidróxido
de sodio y someterlo a calor originamos un
rompimiento del enlace fosfodiéster entre la
pentosa y el grupo fosfato, así como también
una reacción de hidrolisis entre la pentosa y las
bases purinicas. La 2-desoxirribosa sufre una
deshidratación lo cual lleva a la formación de BIBLIOGRAFÍA
βhidroxilevulinilaldehido que en contacto con la
difenilamina adquiere una coloración azul, cuya BOHINSKI. 1991 Bioquímica. 5ed., México D.F., Editorial Pearson
intensidad es proporcional a la cantidad de
DNA presente.
David L, Lehninger Principios de bioquímica, 6ta Edición, Editorial Omega.
DAVILA MARQUEZ, R. M., GARCIA ALBARRAN, L., AGUILAR ALONSO, P., MORALES LARA, L., VERA LOPEZ, O., & NAVARRO CRUZ, A. R.
(2010). AYUDAS DIDACTICAS BIOQUIMICA I. MÉXICO