COMPLEJO MAYOR DE

HISTOCOMPATIBILIDAD. HLA

Dr. Luis David Callau Vargas.

GINECOLOGO OBSTETRA.
Fundador del HLA J. Dausset

J.Dausset 1925-2009 Premio Nobel 1998

INTRODUCCIÓN
• El sistema HLA permite la descriminación de lo
propio y extraño.
• La función esencial del HLA es presentar los
antígenos a las células responsables de la
repuesta inmune.
• Sistema universal todos los vertebrados lo tienen
y está representados en todas las células.
• Polymorphic + de 100 alelos
• Se trasmite por el brazo corto del Cr 6.
 INTRODUCCIÓN.
• Todos los mamíferos estudiados hasta el momento
poseen un grupo de genes, el Complejo Mayor de
Histocompatibilidad (CMH) o MHC del inglés
Major Histocompatibility Complex), cuyos
productos se asocian con el reconocimiento
intercelular y con la discriminación de lo propio / no
propio.
• El CMH juega un papel fundamental en el
desarrollo de la respuesta inmune.
• El CMH es un conjunto de genes alineados en una
región grande y continua del genoma.
• Las moléculas cuya función específica es la
presentación de antígenos a los linfocitos T (a través
del receptor de linfocitos T) están presentes en todas
las especies y reciben el nombre genérico de
Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC).
• Las moléculas del MHC son un conjunto de proteínas
que se encargan de la presentación antigénica y según
la especie el MHC recibe un nombre distinto, que en
humanos es ANTÍGENO LEUCOCITARIO HUMANO
(HLA).
• Normalmente también se utilizan como sinónimos
ANTÍGENOS HLA ó GENES HLA, haciendo referencia a
su gran variabilidad interindividual.
Human
Leukocyte
Antigen
APLICACIONES EN:
1. Medicina legal: se emplean en el reconocimiento de
cadáveres, en estudios de paternidad… como
marcadores polimórficos que nos dan un 70-80% de
la información global del individuo.
2. Trasplantes: su existencia es un impedimento para
que los trasplantes entre distintos individuos sean
aceptados, ya que como ya hemos dicho, las proteínas
del HLA se expresan en TODAS las células del
organismo.
3. - Las proteínas del MHC se clasifican en 2 clases:

HLA-I
HLA-II
La célula central de la respuesta inmune es el LINFOCITO T
COLABORADOR/“HELPER” (Th) ó CD4+.
El Th reconoce a los antígenos gracias al RECEPTOR DE LINFOCITOS T (TCR).
El reconocimiento de antígenos por parte de los distintos linfocitos B y T se realiza
de una manera muy distinta:
A - Las INMUNOGLOBULINAS de los linfocitos B son capaces de reconocer
antígenos solubles, muy grandes y complejos, sobre los que se pueden fijar y no
necesitan ser degradados.
B - Los RECEPTORES DE LINFOCITOS T (TCR) solo son capaces de reconocer
antígenos que hayan sido procesados/degradados dentro de una CÉLULA
PRESENTADORA DE ANTÍGENOS (CPA), que es una célula pequeña (de pocos
péptidos) que se incorpora dentro de las moléculas del COMPLEJO MAYOR DE
HISTOCOMPATIBILIDAD (MHC), es decir, los antígenos son incorporados a las
moléculas del MHC por las CPA y se presentan así al TCR, el cual presenta los
antígenos al linfocito T.
En conclusión, para que un TCR pueda reconocer a un
antígeno (para poder presentárselo al linfocito T) es
necesario que se dé esta interacción:

CPA-antígeno  MHC = CPA-antígeno-MHC  TCR 

linfocito T
REPRESENTACION ESQUEMATICA REGION HLA

N Engl J Med 2000, 343(10)

DEFINICIONES
GEN : SECUENCIA NUCLEOTIDICA QUE
CODIFICA PARA mRNA, tRNA o rRNA
ALELO : UNA DE LAS VARIAS FORMAS EN
QUE PUEDE EXISTIR UN GEN
LOCUS : LA POSICION FISICA DE UN GEN
EN UN CROMOSOMA (plural=loci)
N Engl J Med, vol 343(10)
 CLASES HLA

• Clase I: locus A, B y C todas las células nucleadas

• Plaquetas: HLA-B8
• Hematies: antígenos Bg.
• Estructura química: 1ª cadena pesada cr 6 (HLAG, 1ª
cadena ligera beta 2 microglobulina cr 15.
• Ensamblado por un péptido
• HLAG: células fetales e hígado
• Presentan los linfocitos: CD8
• Autosómica codominante.
Clase HLA
• Clase II: presentes en las células
presentadoras de antígeno.
• Presente en LinfocitosB, Monocitos,
Linfocitos activados
• Bioquimica;: 2 cadenas alfa y 2 cadenas
beta
• HLAD: Dr, DP, DQ.
• Los diferentes antígenos HLA II residen
en los dominios externos.
CLASE HLA Y ENFERMEDADES

• Enfermedades HLA
• Narcolepsia……………………………….HLA.Dr2
• Espondilitis anquilopoyética…………….HLA-B27
• Diabetes I…………………………………HLA-Dr3/Dr4
• Enfermedad celíaca……………………..DQ2/DQ6
• Hemocromatosis…………………………HLA A3 B14
• Psoriasis…………………………………..HLA Cw6
• Artritis reumatoidea………………………Dr1/Dr4
• Bechet……………………………………..HLA-B5.1
GENÉTICA HLA
• Cromosoma 6 brazo corto
• Entre las estructuras HLA clase I y
clase II , existe un grupo de genes
que corresponde a ciertos productos
del complemento (Bf,C2,C4,
citocromo 45 21hidrolasa
suprrarrenal.
• Desequilibrio de ligazón. A1B8Dr3
frecuente en nórdicos, A3B7Dr2 y
A2B12Dr7 frecuente en españa.
PATRONES DE EXPRESIÓN
• HLA clase I: se expresan en casi todas las
células nucleadas
• HLA clase II: expresión restringida. Se
encuentran en los Linfocitos B, Linfocitos
T activados, células dendríticas, células
tímicas epiteliales. Las células
endoteliales pueden ser inducidos para
que las expresen.
• Aunque la organización de los genes es algo diferente en las
distintas especies, en la mayoría se pueden apreciar tres
grandes zonas, que determinan tres tipos de moléculas:
• 1. Genes de clase I (CMH-I): determinan glicoproteínas de
membrana que aparecen en casi todas las células
nucleadas y sirven para presentar antígenos peptídicos de
células propias alteradas a los linfocitos T citotóxicos (TC).
• 2. Genes de clase II (CMH-II): determinan glicoproteínas de
membrana que sólo se expresan en células presentadoras
de antígeno (macrófagos, células dendríticas, linfocitos B) y
sirven para presentar antígenos peptídicos a linfócitos T
colaboradores (TH).
• 3. Genes de clase III (CMH-III): Codifican proteínas que
están relacionadas con el sistema inmune, como proteínas
del complemento o el factor de necrosis tumoral (TNF),
así como otras no relacionadas con la respuesta inmune.
MOLÉCULAS DE CLASE I
• Las moléculas de clase I están compuestas por dos cadenas:
• - Una glicoproteína polimórfica denominada cadena α
(codificada por genes del CMH).
• - Una molécula invariable (no polimórfica) mucho más pequeña
denominada microglobulina ß2 (codificada por genes de otro
cromosoma).
• La asociación de ambas cadenas es imprescindible para
que las moléculas de clase I se expresen en la superficie
de la membrana celular.
• La molécula de clase I se ancla en la membrana plasmática
mediante su segmento hidrofóbico transmembrana y el tallo
hidrofílico citoplasmático.
• La cadena α está organizada en tres dominios externos (ver
imagen): α1, α2 y α3. La microglobulina ß2 es similar a esos
dominios externos, con una considerable homología con el
dominio α3.
Genes más
• Los dominios α1 y α2 interaccionan formando una plataforma o importantes de clase
hendidura, que es el lugar de unión del péptido que será I: HLA-A, HLA-B y
presentado a los linfocitos T citotóxicos (TC). HLA-C.
DIFERENCIAS CLAVE ENTRE HLA I Y HLA II
HLA-I
• - Presentan antígenos a los Linfocitos T CITOTÓXICOS (Tc) o CD8+ (marcador específico
de membrana de los Tc: lo llevan en su membrana y es lo que nos permite saber que son
linfocitos T citotóxicos).
• - Distribución de las moléculas de HLA-I: están presentes EN LA MEMBRANA DE TODAS
LAS CÉLULAS NUCLEADAS DEL ORGANISMO, es decir, en todas las células excepto
glóbulos rojos o hematíes (no tienen núcleo) y plaquetas (son simples fragmentos
citoplasmáticos).
• - Presentan péptidos antigénicos que provienen del INTERIOR o PÉPTIDOS ENDÓGENOS
de la CPA, es decir, antígenos que ha sintetizado la propia célula que los presenta:
• Antígenos tumorales: cuando una célula sufre una transformación “rara” empieza a
producir proteínas cancerosas que se presentan por las HLA-I.
• Virus
• - Cuando presentan un péptido extraño activan al Tc, lo que conlleva a la destrucción de
la célula.
MOLÉCULAS DE CLASE II.
• Las moléculas de clase II son similares a las de
clase I en tanto que son glicoproteínas unidas a
membrana, con dominios externos, segmento
transmembrana y un segmento de anclaje
citoplasmático.
• Las moléculas de clase II sirven para presentar
antígenos procesados por las CPAs a los linfocitos
TH.
• Las moléculas de clase II están compuestas por
dos cadenas polipeptídicas diferentes
denominadas α y ß (codificadas por genes del
CMH).
• Cada una de ellas contiene dos dominios externos:
α1, α2, y ß1, ß 2.
• El dominio distal de la molécula de clase II del CMH
está compuesto por los dominios α1 y ß1, que forman
una hendidura de unión al antígeno. Genes más importantes
de clase II: HLA-DR,
HLA-DQ y HLA-DP.
DIFERENCIAS.
HLA-II
• - Presentan antígenos a los Linfocitos T COOPERADORES/“helper” (Th) o CD4+ (llevan en
su membrana la molécula CD4+ de forma específica).
• - Distribución de las moléculas de HLA-II: solo se expresan EN CÉLULAS PRESENTADORAS
DE ANTÍGENOS (APCs) ESPECIALIZADAS EN ESA FUNCIÓN FAGOCÍTICA de moléculas más
complejas
• Macrófagos tisulares y células dendríticas ( monocitos)
• Linfocitos B
• Linfocitos T activados (no en reposo)
• - Presentan péptidos antigénicos que provienen del EXTERIOR de la CPA, que la célula ha
fagocitado del exterior, es decir, no pasan por el núcleo celular:
• Bacterias
• Hongos
• - Cuando presentan un péptido extraño activan al Th, lo que conlleva una serie de
funciones efectoras finales como la proliferación de las células B…
• Obviamente estas células fagocíticas también podrán sufrir mutación cancerígena o ser
infectadas por virus (como el virus del VIH que afecta a los Linfocitos Th).
MOLÉCULAS DE CLASE III

• Las moléculas de clase III incluyen varios componentes

del complemento (C2, C4A, C4B y factor B) y los
factores de necrosis tumoral α y ß (TNF-α y TNF-ß).
• A diferencia de las moléculas de clase I y II, éstas no
son proteínas de membrana y no juegan ningún
papel en la presentación de antígeno.
• Se especula que la asociación genética de algunos
alelos del CMH con ciertas enfermedades puede, en
algunos casos, reflejar desórdenes en la regulación de la
región de clase III.
 CMH Y PRESENTACIÓN DE ANTÍGENO.

• Para que una proteína extraña sea reconocida por un linfocito T, debe ser
degradada en péptidos pequeños que luego tienen que formar complejos con
moléculas de clase I y/o II. Esta transformación de las proteínas en péptidos
asociados al CMH es denominada “procesamiento antigénico”.
• El que un antígeno sea procesado y presentado junto a una molécula de clase I o
una molécula de clase II está determinado por la ruta por la que el antígeno
penetra en la célula (por lo tanto podremos distinguir entre “antígeno endógeno”
y “antígeno exógeno”.
• La unión de un péptido a la hendidura de una molécula del CMH carece de la
especificad de la unión antígeno-anticuerpo. Una molécula dada del CMH
puede unirse selectivamente a una variedad de péptidos diferentes, pero con
estructuras similares.
• Como otras proteínas, las moléculas del CMH se sintetizan en polisomas
asociados al Retículo Endoplásmico Rugoso (RER). Las de clase I se unen a
los péptidos antigénicos en el RER mientras que la de clase II no.
• El “ANTÍGENO ENDÓGENO” es producido dentro de la célula
del hospedador. Las células expresan continuamente
péptidos propios unidos al CMH I, pero Los linfocitos T no
reaccionan frente a estos péptidos debidos a los fenómenos
de Tolerancia (Tema 19). Sin embargo, las células alteradas
expresan Ag diferentes: las proteínas víricas en una célula
infectada por un virus (Ag vírico), o las proteínas
sintetizadas por una célula tumoral (Ag tumoral).
• Estos antígenos endógenos se degradan en péptidos que se
unen a las moléculas de clase I dentro del retículo
endoplásmico, siendo el complejo transportado a la
superficie celular, donde serán presentados a los linfocitos T.
• Los linfocitos T CD8+ reconocen antígenos asociados a
moléculas de clase I y por ello se refiere a ellos como
restringidos a CMH de clase I.
• Un péptido procedente del procesamiento citosólico (en
complejos de tipo proteosoma) entra también al lumen del RER,
y allí logra la estabilización definitiva de la molécula de clase I
del CMH, por asociación de la cadena α con la microglobulina ß2.
Analizando estos pasos en detalle, podemos observar:
• • La cadena α del CMH recién sintetizada se asocia en el interior
del RER con la proteína calnexina, que mantiene dicha cadena en
una conformación parcialmente plegada.
• • Más tarde la microglobulina ß2 recién introducida al lumen del
RER, se une a la cadena α con lo que la calnexina queda
desplazada.
• • Mientras tanto, los péptidos procedentes del procesamiento en
el proteosoma entran al RER mediante el complejo de
transporte de péptidos antigénicos (proteínas TAP-1 y TAP-2).
• • El complejo formado por el CMH I unido al péptido abandona el
RER, hacia la superficie celular, de modo que finalmente quedará
expuesto al exterior.
• El “ANTÍGENO EXÓGENO” penetra en la célula
mediante endocitosis y fagocitosis. Las células
presentadoras de antígeno procesan este antígeno
exógeno en péptidos, a través de la ruta de
procesamiento endosómico.
• Los péptidos producidos se unen a la hendidura de
las moléculas de clase II. El conjunto CMH II-
péptido es exportado a la superficie celular .
Como la expresión del CMH de clase II está
limitada a las CPAs, la expresión de estos
complejos está limitada a este tipo de células.
• Los linfocitos T CD4+ reconocen el antígeno
asociado al CMH II, y por ello se refiere a ellos
como restringidos a CMH de clase II.
• Puesto que las CPAs expresan tanto moléculas de clase I como de clase
II, debe existir un mecanismo que evite que las moléculas de clase II se
unan al mismo grupo de péptidos que las de clase I . Para ello, al
sintetizarse las moléculas de clase II en el RER, se asocian con otra
molécula denominada cadena invariante (Ii) que interacciona con la
hendidura de unión al antígeno de la molécula de clase II, y por lo tanto
impide la unión de péptidos “endógenos”.
• La cadena Ii es escindida por proteasas, de modo que la molécula de
CMH-II queda unida a un fragmento (llamado CLIP), que sigue cubriendo
su surco. En algún momento de este proceso la vesícula "ascendente"
que contiene CLIP-CMH II se fusiona con una vesícula "descendente" que
contiene péptidos procedentes de endocitosis/fagocitosis de antígenos
exógenos. Posteriormente se produce el desplazamiento de CLIP y la
estabilización de la molécula.
POLIMORFISMO Y HLA
NOMENCLATURA

• Polimorfismo
Diversidad de alelos+ de 100 alelos.
Dificultad de encontrar a donantes idénticos
Variación en los AA que se situan en la unión del
péptidos.
Conversión génica. Una secuencia se remplaza por
otro.
Mutaciones puntuales
ALELOS DETERMINACIÓN

ANTICUERPOS Monoclonales frente a

los diferentes antígenos.

Técnicas de biología molecular. PCR

Citometría de flujo
ANTICUERPOS

• Anti-HLA: Clase I y Clase II

• Neutrófilos: Anti-NA

• Plaquetas: Anti- HPA

Trali
• TRALI: Transfusion-related acute lung
injury.
• Insuficiencia aguda respiratoria durante las 6
horas iniciales postransfusión.
• 1-8000 transfusiones de plasma.
• Mortalidad: 10%.
• Tercera causa de muerte por transfusión.
TRALI
• Clínica: disnea, secreción bronquial,
hipoxia,.
• Rx torax infiltración
• O2 bajo
• Mecanismo de producción:
• Anti-HLA I y II,
• Activación de Neutrófilos+ alteracion
endotelio vascular pulmonar.
• Politransfundidos mas afectados.
• Donantes mujeres por embarazos
previos.
Diagnóstico
•Neumonía
•Edema agudo de pulmon- Por
sobrecarga.
•Sepsis
TRATAMIENTO
•Soporte ventilatorio
•Corticoides
•Adrenergicos
•Evitar diuréticos
 Caso Clinico
• Hombre 66años
• Dignóstico. Mielofibrosis
• Politransfundido
• 14/04/09 RT a plaquetas, escalofríos, tiritona y
fiebre.
• 21/04/09 2u PQIF, se transfunde 20-ml de
Plasma.
• Escalofrio, Disnea, taquipnea SO2 79%
• A llevarlo a UCI paro cardiorespiratoria antes
de su ingreso
 DIAGNÓSTICO
• Se detecta anti-HLA en 2 de los 9 donantes
implicados.
• Uno en un recuento de plaquetas.
• Antigranulocitarios negativos.
• Confirmar: Prueba cruzada entre Linfocitos del
receptor, frente al suero de los donantes:
• HLA Clase I
• HLA ClaseII
• Granulocitos.
• Gracias.....