TEMA 1 - HISTORIA DE LA MICROBIOLOGÍA

Definición de microbiología
• Ciencia que estudia los seres vivos que no se pueden ver a simple vista
• Definición implica que su objeto de estudio está determinado por la metodología:
o Microscopio
o Técnicas de cultivo puro en laboratorio
o etc

Fases en la historia de la Microbiología

1. Periodo especulativo (desde la antigüedad hasta primeros microscopios)
2. Primeros microscopistas (1675 -mediados del s. XIX)
3. Cultivo de microorganismos (hasta finales del siglo XIX)
4. Hasta nuestros días: multitud de enfoques en el estudio microbiano. Ciencias “emancipadas”
(Virología, Inmunología)

¿Qué es la microbiología?
• Estudio de los organismos microscópicos
• 3 palabras griegas: mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencia) ´´estudio de la vida microscópica´´
• Surgió como ciencia tras el descubrimiento y perfeccionamiento del microscopio.
¿Qué son los microorganismos?
• Organismos que no pueden ser observados a simple vista, al menos en parte de su ciclo.
• Organismos que viven como células aisladas o entidades que contienen ácidos nucleicos capaces de
replicarse, por lo menos en parte de su ciclo.
• Incluidos: algas, hongos, protozoarios, bacterias y virus.

¿Cómo afectan nuestra vida?

• Diversos tipos de microorganismos son causantes de enfermedades y abundan casi en cualquier
lugar por lo que permanentemente estamos expuestos a un contagio.
• Pueden afectarnos en el aspecto económico ya que le producen enfermedades a los animales y a
las plantas dañando las cosechas y las clases de ganados y otros animales domésticos que sirven
como fuente de alimento.
• M.O. de utilidad industrial: más de cien especies microbianas son usadas en la producción de
sustancias que no pueden ser obtenidas de forma más fácil o más barata por otros medios.
• Ventajas: tamaño, alta tasa metabólica, posibilidad de cultivarse a gran escala, estabilidad genética,
etc.
¿Cómo afectan nuestra vida?
• M.o. en la producción de alimentos:
• yogures y quesos (Roquefort, Brie, etc.)
• Biotecnología
• alcohol producido por levaduras
• ácido oxálico utilizado en tintes y colorantes.
• ácido propenoico (ácido acrílico) utilizado como intermediario en la producción de plásticos.
• ácido láctico empleado para acidificar alimentos y como anticongelante.
• ácido acético
• enzimas utilizadas para aplicaciones tan diversas, como la eliminación de manchas en los tejidos
(incorporación de enzimas a detergentes)
• conversión de harina de maíz en miel utilizada como endulcorante
• Industria farmacéutica: producción de antibióticos, drogas, hormonas (insulina y GH), factores de
crecimiento, interferón, eritropoyetina, etc.

Ramas de la Microbiología
• General
• Industrial
• Medica
• Veterinaria
• Alimentos
• Sistémica

Epidemias
• Descritas a lo largo de toda la historia de la humanidad.
• Atribuidas en la antigüedad a hechizos o magia.
• SIN EXPLICACIÓN HASTA EL SIGLO XVII.

Anton van Leeuwenhoek (1632-1723)

• Pionero en descubrimientos sobre los protozoos, los glóbulos rojos de la sangre, el sistema de
capilares y los ciclos vitales de los insectos.
• Construyó como entretenimiento diminutas lentes biconvexas montadas sobre platinas de latón,
que se sostenían muy cerca del ojo. A través de ellos podía observar objetos, que montaba sobre la
cabeza de un alfiler, ampliándolos hasta trescientas veces.
• Otros: red de capilares (de Malpighi), glóbulos rojos, protozoos y bacterias en agua “animáculos” y
espermatozoides de insectos y humanos.
• Demostró los huevos de gorgojos, pulgas y mejillones y que estos no surgían espontáneamente a
partir de granos de trigo y arena.
• Describió el ciclo vital de las hormigas mostrando que las larvas y pupas proceden de huevos,
examinó plantas y tejidos musculares, y describió tres tipos de bacterias: bacilos, cocos y espirilos.
 • Mantuvo en secreto el arte de construir sus lentes, por lo que no se realizaron nuevas
observaciones de bacterias hasta que se desarrolló el microscopio compuesto en el siglo XIX.

Sus primeros dibujos fueron publicados en 1684

Robert Hooke (1635-1702)

Lazzaro Spallanzani (1729-1799)

Robert Koch (1843-1910)

• Iniciador de la bacteriología médica moderna. Estudió botánica, física y matemáticas y MEDICINA.
• Otros intereses: arqueología, antropología, las enfermedades ocupacionales, como el
envenenamiento por plomo, y la bacteriología.
• En 1870 demostró que el carbunco infeccioso o ántrax sólo se desarrollaba en los ratones cuando el
material inyectado en su torrente sanguíneo contenía bastones o esporas viables del Bacillus
anthracis.
• Mostró cómo trabajar con dichos microorganismos, cómo obtenerlos a partir de animales
infectados, cómo cultivarlos artificialmente y cómo destruirlos.
• En 1881 dio a conocer sus estudios sobre la tuberculosis y al año siguiente anunció que había
aislado el bacilo responsable de la enfermedad.
 • Después se dedicó al estudio del cólera, que en 1883 había alcanzado niveles de epidemia en la
India. Identificó al bacilo causante y descubrió que era transmitido a los seres humanos sobre todo
a través del agua.
• Más tarde viajó a África, donde estudió las causas de las enfermedades transmitidas por insectos.
• Desde 1891 fue director del Instituto de Enfermedades Infecciosas de Berlín creado para la
investigación médica hasta su jubilación en 1904.
• En 1905 obtuvo el Premio Nobel de Fisiología y Medicina. Murió el 27 de mayo de 1910 en el
balneario alemán de Baden-Baden.

Postulados de Koch (1882)

• El agente patógeno debe estar presente en los individuos enfermos
• El microorganismo debe poder aislarse del huésped enfermo en cultivo puro
• El microorganismo crecido en cultivo puro, al inocularse en animales sanos, induce en ellos la
enfermedad
• De estos animales experimentales inoculados y ya enfermos, se puede volver a aislar el
microorganismo

Postulados moleculares de Koch: 1980

La escuela de Koch aísla numerosos agentes patógenos
• Cólera (1883)
• Difteria (1884)
• Tétanos (1885)
• Neumonía (1886)
• Meningitis (1887)
• Peste (1894)
• Sífilis (1905)

Louis Pasteur (1822-1895)

• Químico y biólogo francés que fundó la ciencia de la microbiología.
• Comenzó investigando los procesos de fermentación del vino y la cerveza y descubrió la existencia
de las bacterias que interferían en este proceso.
• En 1861 introdujo los términos de aeróbico y anaeróbico, según las características de crecimiento
de las levaduras.
• Aplicó sus conclusiones al estudio de la causa y el desarrollo de las enfermedades y
• demostró la teoría de los gérmenes como causantes de las mismas.
• Introdujo el término “virus” sin hacer distinción y “vacuna” en honor a Jenner
• Desarrolló vacunas que consiguieron salvar miles de vidas: cólera aviar, antrax y rabia

Ferdinand Julius Cohn (1828-1898)

• Considerado fundador de la microbiología moderna y padre de la bacteriología.
• En 1872 propuso la clasificación de las bacterias: género, especie y variedades.
• Describió otros microorganismos patógenos transmitidos por agua contaminada, distintos al V.
cholerae
Otros eventos importantes del siglo XIX
• 1878: Joseph Lister publica sus estudios sobre la fermentación de la leche Bacterium lactis
• 1879: Albert Neisser identifica al agente causal de la gonorrea
 • 1880: Alphonse Laverin encuentra al parásito de la malaria en glóbulos rojos.
• 1881: Paul Erlich utiliza el azul de metileno

Siglo XX
• Aerobiosis y anaerobiosis
• En 1938 se observaron por primera vez los virus gracias a la invención del microscopio electrónico.
• En las décadas de 1960 y 1970 se descubrieron numerosos virus y se determinaron sus
características físicas y químicas.
• Diversas técnicas innovadoras: microscopio electrónico de barrido o las técnicas de secuenciación
del ácido desoxirribonucleico (ADN).
• Descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo en 1982 ha abierto una vía de
estudio dentro de la microbiología (simples proteínas desprovistas de material genético)
• En 1988 Kary Mullis utiliza la enzima de Thermus aquaticus para estabilizar la PCR (premio Nobel en
1993)

Alexander Fleming (1881-1955)

• Descubrió que algunas colonias crecidas de S. aureus eran destruidas por el crecimiento del hongo
Penicillium
• Realizó la extracción del compuesto activo: penicilina

Karl Woese (1928-2012)

Por análisis de rARN 16S

Microscopios
• Ojo humano 0.2 mm.
• Microscopio óptico, resolución máxima 0.2 micras (1 micra).
• Microscopio electrónico, resolución máxima 0.5nm
Ejemplo: Staphylococcus aureus

Causas bacterianas importantes de mortalidad

• Tuberculosis
• Tétanos
• Cólera
• Tos ferina

LAS BACTERIAS

Unicelulares que pertenecen al grupo de los protistos inferiores. Son células de tamaño variable cuyo
límite inferior está en las 0,2 y el superior en las 50 ; sus dimensiones medias oscilan entre 0,5 y 1 .

Grupos Bacterianos
• ARQUEOBACTERIAS: "fósiles vivientes" pues viven en habitats que parecen corresponder con los
que existieron en la Tierra primitiva. Por ejemplo, en ambientes termales donde se alcanzan
temperaturas por encima del punto de ebullición del agua. (Ej. Pyrococcus furiosus cuya
Temperatura óptima de crecimiento es 104°C.) También pueden vivir en medios halófilos (muy
salados), (Ej.: Halobacterium
 • EUBACTERIAS: Son las bacterias típicas. (Escherichia coli) Se trata de microorganismos unicelulares
procariotas, cuyo tamaño oscila entre 1 y 10 micras (como son muy pequeñas no necesitan
citoesqueleto), y adaptados a vivir en cualquier ambiente,
Las hay autótrofas: fotosintéticas y quimiosintéticas, y heterótrofas: saprofitas, simbióticas y parasitarias.

¿Qué tan pequeño?

Unidades de medida en Microscopía
Micra (m ) : una millonésima de metro.
Nanómetro (nm) – Milimicra (mm): Mil millonésima de metro
Ángstrom (Å): diez mil millonésima de metro

1 micra (m ) = 10-3 mm = 10-6 m

1 nanómetro (nm) = 1 milimicra (m m ) = 10-3m = 10-6 mm =10-9 m
1 angstrom (Å.) = 10-1nm = 10 -10 m

Por ejemplo
Tamaños moléculares y atómicos: Angstrom
Longitudes de onda de radiación electromagnética: nanómetros Tamaños de bacterias, circuitos de
microprocesadores: micra

Clasificación según su forma

Las más comunes:
1) Cocos; 2) Bacilos; 3) Vibrios; 4) Espirilos
Otras formas son: filamentos, anillos casi cerrados, con prolongaciones (prostecas)

MORFOLOGIA DE LAS BACTERIAS

Relación entre forma y el modo de vida

Cocos Bacilos Espirilos y Vibrios

 • Forma redondeada • Forma alargada, • Forma de hélice y
(relación superficie volumen cilindrica (mayor relación de coma
mínima) superficie volumen) • Viven en medios
• Poca relación con el exterior • Obtienen nutrientes de viscosos
• Viven en medios ricos en manera más eficaz • Pequeño diámetro
nutrientes • Viven en medios pobres en • Atraviesan
• Se transmiten por el aire nutrientes (suelos, aguas) fácilmente las
• Muy resistentes • Menos resistentes mucosas
• Suelen ser patógenas • Suelen • Patógenas por
contacto directo o
ser
saprófitas mediante vectores

Agrupaciones de cocos

Estructura Bacteriana

1) Cápsula; 2) pared; 3) membrana; 4) mesosomas; 5) ribosomas; 6) flagelo; 7) ADN, cromosoma o genoma; 8)

plásmidos.
TEMA 2 - CLASIFICACION DE LAS BACTERIAS
DEFINICIONES
• CLASIFICACION ordenamiento taxa
• NOMENCLATURA tecnicas experimentales
• TAXONOMIA reglas internacionales
CRITERIOS PARA LA CLASIFICACION DE BACTERIAS
• Observacion microscopica, procedimientos de tincion, produccion de pigmentos, produccion de
enzimas, uso de anticuerpos especificos, pruebas bioquimicas para funciones metabolicas,
medicion de sensibilidad a los antibioticos.
Clon o Cepa
• Clon o cepa = Poblacion de celulas geneticamente identicas derivadas de la division sucesiva de 1
sola celula.
• Morfologia de una bacteria= resultado de la expresion de un gran numero de genes
• Que controlan enzimas que a su vez determinan la sintesis de diversos componentes estructurales.
• Es una caracteristica estable geneticamente y no sufre amplios cambios como resultados de
mutacionesde un solo gen ,se determina con microscopio.
Intervalo Taxonomico.
• REINO Procarionte
• DIVISION Gracilicutes
• CLASE Escotobacterias
• ORDEN Eubacteriales
• FAMILIA Enterobacteriaceae
• GENERO Escherichia
• ESPECIE coli
NOMENCLATURA
Sistema binomial Nombre del género y la especie
Escherichia coli E. coli
Bacillus subtilis B. subtilis
Las reglas de la nomenclatura están descriptas en
The International Code of Nomenclature of Bacteria

TAXONOMIA CONVENCIONAL O NUMERICA

Algunas características fenotípicas de valor taxonómico
• Morfología
• Tinción de Gram
• Tipo de nutrición: fototrofía, quimiotrofía Estructura química de la pared celular
• Presencia de inclusiones celulares y acumulación de productos de reserva
• Estructura química de la cápsula
• Capacidad para usar diferentes fuentes de carbono, nitrógeno, azufre Productos de la fermentación
• Requerimientos y tolerancias a los gases, temperatura, pH Sensibilidad a antibióticos
• Patogenicidad
• Relaciones simbióticas
• Características inmunológicas
• Habitat
TAXONOMÍA NUMÉRICA Y AGRUPAMIENTO JERÁRQUICO

Coeficiente de similitud

Se comparan muchas características de dos microorganismos, 1 y 2,

a: Nº de características positivas en los dos microorganismos
b: Nº de características positivas en 1 y negativas en 2
c: Nº de características positivas en 2 y negativas en 1

Construcción de una matriz de similitud

Agrupamiento de acuerdo al porcentaje de similitud

Construcción de dendrogramas

• Se examina un gran número de características fenotípicas de las bacterias 1, 2, 3, 4 y 5. Las

similitudes entre las bacterias analizadas se expresan como porcentajes en una matriz de similitud
• Las bacterias que se parecen son agrupadas
• El producto de los análisis de agrupamiento se expresa como dendrogramas.
Taxonomía molecular Porcentaje de G+C

• Organismos con fenotipos muy semejantes no siempre poseen % G+C similares

• Si dos organismos que se creían cercanamente relacionados por sus propiedades, tienen % G+C
muy diferentes, seguramente métodos más cuidadosos de análisis indicarán que no son tan
cercanos como se creía
• Dos organismos con idéntico % G+C no necesariamente son relacionados, pueden ser taxonómica y
filogenéticamente no relacionados porque sus secuencias son diferentes

Trabajando con ácidos nucleicos. Herramientas

Extracción y purificación del DNA
 • El DNA debe estar libre de otros compuestos celulares. Las proteínas se eliminan con fenol.
• La solución final acuosa debe tratarse con RNAasa para eliminar el RNA.
• Si la solución final de DNA se ha manipulado con cuidado, la longitud de los fragmentos será de una
centésima de la longitud del cromosoma

Detección del DNA

• Uno de los métodos más utilizados es por absorción en el UV (260nm)
• El DNA bicatenario absorbe menos que el monocatenario, ya que el apareamiento de las bases
reduce la absorción en el UV

Centrifugación del DNA en gradiente de densidad

• Las moléculas con mayor GC tienen mayor densidad.
• La densidad se determina por centrifugación en gradientes de densidad de cloruro de cesio.
• Si se añadió bromuro de etidio se observa bajo luz UV
El colorante fluorescente bromuro de etidio es el más empleado para detectar DNA, ya que se combina con
el DNA fuertemente, intercalándose.

Desnaturalización de los ácidos nucleicos

• Si se observa la absorbancia a 260nm a medida que se calienta un DNA bicatenario, se obtiene el
Tm, que está en función del contenido G+C.
• A mayor % G+C, mayor Tm

Hibridización de ácidos nucleicos

• Compara las secuencias de sus DNA’s
• Si dos organismos tienen muchos genes similares o idénticos, tendrán muchas secuencias similares
en sus DNA’s (gran homología). Esos DNA’s hibridizarán en una proporción acorde a las similitudes
de sus secuencias.
• Es un procedimiento útil para resolver relaciones a nivel de especie o menor
Hibridización genómica como herramienta taxonómica

a) El DNA se prepara a partir de organismos testigos. El DNA de uno de los organismos (organismo 1) está
marcado con 32Pi.
b) Experimento de hibridización. Se han probado todas las combinaciones, en cada experimento se
añadió DNA no marcado para impedir el reapareamiento del DNA marcado. Luego de la hibridización
se separa el DNA hibridizado del no hibridizado para medir solamente la radiactividad del DNA
hibridizado.
c) Resultado obtenido. La radiactividad en el control se toma como el 100% del valor de hibridización

Árbol filogenético universal

• Debe estar universalmente distribuído en el grupo elegido para el estudio

• Debe tener funciones homólogas para cada organismo
• Se deben poder alinear para identificar secuencias homólogas y heterólogas
• La secuencia elegida debe cambiar a una velocidad conmensurable con la distancia evolutiva
medida. Cuanto mayor sea la distancia filogenética medida, menor debe ser la velocidad a la cual la
secuencia cambia
rRNA como cronómetro evolutivo
En procariotas: 5S 16S 23S
En eucariotas: 18S
• Molécula antigua
• Funcionalmente constante
• Universalmente distribuida
• Moderadamente bien conservada

Preparación de un árbol de distancias filogenéticas a partir de secuencias de rRNA 16S

TEMA 3 - ESTRUCTURA CELULAR DE LAS BACTERIAS
ESTRUCTURA CELULA PROCARIOTA

ESTRUCTURA DE LA CÉLULA BACTERIANA

dos regiones distinguibles: • NUCLEO nucleoide o cuerpo nuclear:
Contiene: DNA circular y único, doble
• CITOPLASMA, finamente granular,
tira, replegado sobre sí mismo múltiples
basófilo
veces no requiere aparato mitótico

MEMBRANA CITOPLASMÁTICA
mosaico de proteínas entre una bicapa de fosfolípidos donde se insertan más de 100 proteínas diferentes

Membrana interna:
• Transporte y fosforilación oxidativa, Membrana externa:
• Excreción de enzimas
• Permite difusión de moléculas pequeñas
• Secreción de proteínas
• Impide la entrada de lisozima
• Síntesis de lípidos
• Porinas proteínas con uniones no
• Inserción de flagelos
covalentes al peptidoglicán
• Más de 100 zonas de adhesión
• Receptores de fagos y bacteriocinas
(adhesinas)
PARED CELULAR
Estructura rígida, fuerte, debido a sustancia llamada MUREINA (latín murus = pared), mucopéptido o
peptidoglicán.
Muy compleja, enlaces cruzados permiten flexibilidad en cambios osmóticos
• Gram positivas electrodensa: 20 a 50 nm con ácidos teicoicos
• Gram negativas más fina, con existencia de membrana externa

PARED BACTERIANA
• Cubierta rígida que rodea el protoplasma
• Poseen todas las bacterias excepto:
o Micoplasmas
o Thermoplasma
o Formas L
• Espesor entre 10 a 80 nm (8 nm memb)
• 20% del peso seco de la bacteria
• Clasificación de las bacterias según afinidad tintorial en Gram (+) o (-)
• Protección ante cambios de presión osmótica

Principales funciones de la pared:

• Protección osmótica
• Confiere carácter tintorial
• Confiere la forma
• Portadora de determinantes antigénicos principales
• Papel importante en división celular
• Determina formas y agrupación: cadenas, pares, racimos, etc.
Remoción de la pared con penicilina o enzimas formas L (protoplastos) o esferoplastos
Penicilina y otros antibióticos inhiben síntesis de pared por varias vías

PARED BACTERIANA Composición

Pared de bacterias Gram +
 1. Peptidoglicano
2. Matriz (polímeros)
2.1 Ácidos teicoicos
2.2 Ácidos teicurónicos
2.3 Ácidos lipoteicoicos

3. Proteínas Asociadas a Membrana

1. PEPTIDOGLICANO
Peptido + glicano
(1 Tetrapéptido + 1 Disacárido)x
L-ala---D-glu---m-diaminopimélico---D-ala + NAG --ß1 4--NAM
Lisozima
PEPTIDOGLICANO
• Forman monocapas (1 nm)
• Existe entrecruzamientos tanto entre cadenas adyacentes en el mismo nivel como entre niveles
distintos.
• Resultado: Red tridimensional gruesa y más compacta que en Gram (-)
• El grado de compacidad varía entre especies, y depende de:
o Nº de NAM que contengan tetrapétidos que participen en entrecruzamientos
o longitud del puente peptídico
o Ello condiciona a su vez la intensidad de la gram- positividad en la tinción de Gram.

ESQUEMA ESTRUCTURAL BASICO PAREDGRAMPOSITIVAS

FUNCIONES DEL P.G

 • Gran rigidez contrarresta las fuerzas osmóticas (aguanta presiones de unas 5 a 15 atmósferas).
• Notable flexibilidad
• Condiciona la forma celular
La disposición espacial del P.G es la responsable principal de esta forma.
o Cocos
o Bacilos
o Bacterias en espiral

2. MATRIZ
2.1 Ácidos teicoicos
• Presentes en muchas bacterias Gram+, pero no en todas.
• Son polímeros de glicerol-fosfato o ribitol-fosfato
• Pueden ser de hasta 30 unidades.
• Están unidos covalentemente al peptidoglucano
• Es variable según las especies
• No se sintetizan en limitación de fosfato
• limitación de fosfato se sintetizan 2.2 ácidos teicurónicos (atu)

2.2 ácidos teicurónicos (atu)

• Los atu son polímeros formados por la alternancia de ácidos urónicos

2.3 Ácidos lipoteicoicos

• Presentes en todas las bacterias Gram +
• Aun en condiciones de carencia de fosfato
• Variación de los Ac. Teicóicos (ácidos glicerol-teicoicos)
• Se encuentran unidos a la membrana citoplásmica.*
• Su extremo terminal queda expuesto al exterior
• Suministran especificidad antigénica

Funciones de los polímeros de la matriz

• Suministrar una carga neta (-) a la PC
Para que? Captar cationes (Mg++) que participan en actividades enzimáticas de la membrana citoplásmica
o del espacio periplásmico. (morfogénesis y división de la PC)
• Son buenos antígenos: Ag somático O de las bacterias Gram-positivas.
• En algunas bacterias actúan como receptores específicos para la adsorción de ciertos bacteriófagos.

PARED DE BACTERIAS GRAMNEGATIVAS

PARED DE BACTERIAS GRAMNEGATIVAS
1. MEMBRANA EXTERNA
• Bicapa lipídica no típica exclusiva de bact gram(-)
• Características:
o Altamente asimétrica
o 60% de proteínas y un 40% lipopolisacárido – LPS - (exclusiva de esta membrana externa)
o M ext.  LPS y M int.  LPP

Membrana externa - Composición química y estructura

COMPONENTES
1.1 Fosfolípidos (FL): La composición en FL es similar a la de la membrana citoplásmica.
1.2 Lipopolisacárido (LPS): también conocida con el nombre de endotoxina
 Glucolípido complejo compuesto de 3 regiones
o Lípido A: porción más proximal, de carácter hidrofóbico
o Región intermedia: llamada oligosacárido medular
o Región distal (cadena lateral específica) antígeno somático O (hidrofílico)

LPS - Composición química y estructura

PAPELES Y FUNCIONES DEL LPS
• Papel estructural: Le da menor fluidez y mayor resistencia física (Lípido A)
• Poco permeable a muchas moléculas hidrofóbicas incluyendo antibióticos.
• Se une a cationes divalentes (como Mg+2 o Zn+2)
• Endotoxina de las bacterias Gram-negativas (Lípido A) - productor de síntomas –
• Efectos beneficiosos: Estimula algunos mecanismos defensivos del ospedador. (C´)
• Antígeno somático O: Especificidad y virulencia

1.3 Proteínas de Memb. Ext.

Están intercaladas en la membrana
Funciones:
• Estabilidad a la memb
 • Transp de moléculas
• Receptores de fagos
Varias clases, mas importantes:
PORINAS:
• Forman trímeros con canales interiores
• Atraviesan la membrana de lado a lado
• Permiten el paso de sustancias en relación al tamaño de los canales (moléculas entre 500 y 700 D).
2 LIPOPROTEÍNA
Función estructural
• Estabiliza el complejo peptidoglucano – membrana externa

3. EL ESPACIO PERIPLÁSMICO
Se sitúa entre la membrana interna y la membrana citoplasmatica
• Volumen: representa un 20 - 40% del volumen celular total.
• Principal función: Osmorregulación (Olig Der Mem) alta osmolaridad y baja osmolaridad.
• Contenido: “gel periplásmico”
o RNasa y fosfatasa  digieren moléculas que por sí mismas no pueden pasar al citoplasma.
o Penicilinasa: Evitan la destrucción de PG
o Proteínas de transporte de nutrientes (p. ej., de maltosa)
o Proteínas de unión a estímulos químicos.
o Proteínas implicadas en el transporte de electrones (en bacterias desnitrificantes y
quimiolitoautotrofas)

4. PEPTIDOGLICANO
En el enlace que se da entre tetrapéptidos, participan solamente el 50% de ellos.
• El resultado:
o capa simple de PG (de 1 nm de espesor)
o A modo de malla floja
o Con grandes poros (zonas donde no hay enlaces peptídicos).
• En el gram:
o El alcohol acetona produce una deshidratación que tiende a contraer la estructura del PG, pero
los poros son grandes  la violeta sale y la bacteria se tiñe con el colorante de contraste
(Fucsina o safranina)

MEMBRANA INTERNA O CITOPLASMATICA

Es igual a la de cualquier célula o bacteria grampositiva.
DIFERENCIA PARED DE BACTERIAS GRAM(-) Y GRAM(+)
…

PARED CELULAR DE LAS BACTERIAS ÁCIDO ALCOHOL RESISTENTES

• Son una variante de la pared de grampositivas
• Pared celular muy compleja con abundantes lípidos.
• No se tiñen bien con el colorante de Gram
Composición química:
o Peptidoglucano especial (la diferencia NAM por N-glucolil-murámico)
o un arabinogalactano de gran peso molecular.
o ácidos micólicos
o Lípidos superficiales

Lípidos superficiales constituyentes de la pared de las bacterias A.A.R

• Micolatos de trehalosa: Constituyen el llamado factor de crecimiento en cuerdas (cord factor)
responsables de la agregación de las bacterias en forma de “cuerdas” (factor de virulencia)
• Sulfolípidos de trehalosa: Importantes factores de virulencia. En M. tuberculosis funcionan como
evasinas (evade la acción de los MØ inhibiendo la formación del fagolisosoma)
• Micósidos: Factores de virulencia
• Ceras: Unión de ácidos micólicos con ftioceroles
Propiedades que le confieren:
• Gran impermeabilidad de la P.C
• Gran resistencia a la desecación
• Gran resistencia a sustancias antibacterianas

BACTERIAS SIN PARED Son bacterias pequeñas

Características
• Pleomórficas
• Gran plasticidad
• Afinidad por las membranas celulares
• Sensibilidad a la lisis osmótica
• Resistencia a los AB que actúan sobre la pared
Existen como bacterias sin pared (Micoplasmas) o como bacterias que han perdido su pared (formas L,
protoplastos o esferoplastos.)
CÁPSULA
Material extracelular, compuesta por polisacáridos o polipéptidos
- Estructura condensada: cápsula
- Polímeros enrejados:“glicocálix“ (superficies húmedas)
Protege de la fagocitosis y de los virus que puedan fijarse a la pared.
Facilita adherencia al mucus del hospedero
FLAGELOS
• Apéndices filiformes 3 a 12 micrómetros diámetro
• Composición proteica (flagelina) Confieren motilidad
• Actúan como adhesinas
• Se colorean con técnicas especiales (ácido tánico)
Su disposición depende de las diversas especies u órdenes:
• Monotricos (polares): Pseudomonas
• Peritricos: orden Eubacteriales
• Lofotricos
• Anfitricos: Vibrios

Otras funciones:
• Quimiotaxis
• Función antigénica
• Filamento axial en bacterias espirilares
Mas de 40 genes involucrados
La energía la proporciona la fuerza protomotriz

PILI O FIMBRIAS
• Varillas cilíndricas rígidas, cortas, compuestas por proteínas (pilina)
• Función principal: adhesión a superficies mucosas
• Su presencia promueve la colonización inicial
• Aumenta la susceptibilidad a la fagocitosis
• Su pérdida después de colonización parece promover invasión tisular
• Participan en la coagregación de las bacterias
• Intervienen en la conjugación

ESTRUCTURAS INTERNAS
Citoplasma
Alto contenido en agua y diversas sustancias (enzimas, carbohidratos, lípidos, otras proteínas y sustancias
inorgánicas) Diferentes reacciones químicas, anabólicas y metabólicas tienen lugar en el citoplasma bacteriano
Nucleoide
• Ausencia de membrana nuclear y aparato mitótico
• Fibrillas de ADN, enroscado alrededor de un centro de ARN
• Cromosoma único, de aprox.1 mm de longitud
Algunas bacterias contienen también pequeñas moléculas circulares de ADN extracromosómico, (plásmidos)
Ribosomas
• Estructuras compuestas de ácido ribonucleico (ARN) y proteínas, diámetro aproximado de 20 nm,
muy abundantes y dispersas por el citoplasma
• Menores que los de las células eucarióticas (coeficiente de 70S)
• Centros activos para síntesis de proteínas
• A veces agrupados en largas cadenas (polirribosomas)
Otras estructuras citoplasmáticas
GRÁNULOS
Material de reserva en forma de gránulos citoplasmáticos (de volutina, azufre, glucógeno y lipídicos)
ESPORAS
Estructuras especiales o “célula en reposo”
Altamente resistentes a desecación, calor y agentes químicos
Determinadas genéticamente

PRINCIPALES FORMAS Y AGRUPACIONES BACTERIANAS

Mayoría bacterias diámetro 1 micrómetro (10-3 mm)
Formas fundamentales:
• Cocos (esféricas)
• Bacilos (bastones)
• Espirilos (curvos: vibrios, espirilos y espiroquetas)
• Formas intermedias (coco-bacilos, bacilos fusiformes, formas filamentosas, etc.)
Según el modo de división se agruparán en:
- Pares (diplo) - Racimos (estafilo)
- Cadenas (estrepto) - Tétradas (sarcina)

COLORACIONES EN BACTERIOLOGÍA
GRAM:
Carácter taxonómico importante
Se relaciona con muchas otras propiedades morfológicas y patogénicas de bacterias
SE BASA EN ESTRUCTURA DE LA PARED
ZIEHL- NEELSEN:
Se basa en retención de carbolfucsina por bacterias acidorresistentes
Importante en control de Tuberculosis y Lepra
Otras coloraciones:
• Coloraciones negativas
• Coloraciones de flagelos, cápsula, núcleo, esporas, etc.

NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN BACTERIANA

Nomenclatura binominal de Linneo (género y especie)
Clasificación:
- Fenotípica;
• MORFOLOGÍA MICRO Y MACROSCÓPICA
• CARACTERES BIOQUÍMICOS
• ESTRUCTURA ANTIGÉNICA
• SENSIBILIDAD A ANTIBIÓTICOS
• SENSIBILIDAD A BACTERIÓFAGOS

MORFOLOGÍA MICRO Y MACROSCÓPICA

Morfología, coloración, aspecto y tamaño de colonias, presencia hemólisis, pigmentación, otros
Marcadores bioquímicos (BIOTIPAJE)
• Capacidad para fermentar algunos carbohidratos
• Utilización de diferentes compuestos como fuente carbono
• Presencia de proteasas, nucleasas, aminopeptidasas, etc

CLASIFICACIÓN HASTA ESPECIE DE AISLAMIENTOS CON IMPORTANCIA CLÍNICA

MUY ÚTILES PARA PROPÓSITOS EPIDEMIOLÓGICOS
(determinar si microorganismos de igual género y especie proceden de la misma fuente)

Muchas bacterias poseen antígenos únicos y se usan anticuerpos específicos para detectarlos
 SEROTIPAJE
Importante en microorganismos bioquímicamente inertes, difíciles de cultivar, asociados a síndromes clínicos
específicos, que necesitan ser identificados rápidamente o para propósitos epidemiológicos
Patrón de antibiograma (antibiotipia)
Patrón de sensibilidad a bacteriófagos (fagotipaje)
Útiles en estudios epidemiológicos
Clasificación analítica
Basada en el análisis de componentes de las bacterias (género,
especie y subespecie) por cromatografía o electroforesis
• Ácidos grasos de la pared
• Lípidos de la pared
• Proteínas de la célula bacteriana
• Electroforesis de enzimas

Clasificación genotípica
• Inicialmente se basó en relación guanina-citosina
• Hibridización del ADN bacteriano (extraído y enfrentado a sondas específicas conocidas)
• Análisis de la secuencia del ácido nucleico
• Análisis del ADN plasmídico
• Análisis del ARN ribosomal (ribotipaje)
• Análisis de fragmentos del ADN cromosomal

Metabolismo microbiano
• Síntesis de macromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos, polisacáridos, lípidos)a partir de precursores
• A partir de una plantilla (ADN y proteínas)
• Dirigidos por enzimas (lípidos y carbohidratos)
• Estos elementos se autoensamblan y originan diversas estructuras celulares
Todas las rutas biosintéticas requieren ATP (y otros enlaces ricos en energía GTP, UTP, Acetil Co-A)
El ATP se genera por fosforilación a nivel de sustrato y por
transporte de electrones, ambos a nivel de membrana
Modos de metabolismo:
• Oxidación biológica
o Fermentación exclusiva de bacterias
o Respiración exclusiva de bacterias y algunos hongos
• Fotosíntesis
Fermentación: proceso en que compuestos orgánicos sirven como donadores o aceptores de electrones.
Principales sustratos CARBOHIDRATOS (también ácidos orgánicos y otros)
• Anaerobios estrictos
• Anaerobios facultativos
• Anaerobios aerotolerantes
Respiración: proceso metabólico en que tanto compuestos orgánicos como inorgánicos donan electrones,
pero sólo los inorgánicos los aceptan (reducción)
• Aerobios (último aceptor oxígeno)
• Anaerobios (último aceptor sulfatos nitratos y carbonatos)
LA RESPIRACIÓN AEROBIA ES LA MÁS EFICIENTE Y COMPLETA

Los microorganismos tienen además, vías biosintéticas para componentes especiales:

• Componentes de la pared (peptidoglicán y lipopolisacárido)
• Polímeros capsulares
• Gránulos de reserva

Cultivo y crecimiento de los microorganismos

Proceso de propagación de microorganismos, proporcionándoles condiciones nutricionales y ambientales
adecuadas

Requerimientos:
Fuente de energía metabólica (respiración, fermentación)
Factores nutricionales (fuentes de carbono, nitrógeno, azufre, fósforo, vitaminas, elementos trazas –iones
potasio, zinc, calcio, hierro, sodio, cloro, etc)
Factores ambientales (ph, concentración O2 temperatura, humedad, presión osmótica, radiación)

Métodos de cultivo:
• Siembra en placa
• Siembra en medio líquido (dilución)
• Siembra en medios especiales (cultivos celulares o animales)
En los microorganismos:
CRECIMIENTO = MULTIPLICACIÓN
La expresión matemática del crecimiento de un microorganismo es la Curva de Crecimiento
Fase I: lag o de retraso Fase IV: desaceleración o retardada
Fase II: aceleración positiva Fase V: estacionaria máxima
Fase III: exponencial o logarítmica Fase VI: declinación o muerte

TEMA 4 - Crecimiento, supervivencia y muerte de microorganismos

Supervivencia de los microoganismos en el ambiente natural
La población de microorganismos en la biosfera es constante su crecimiento se equilibra por la muerte.
Los microorganismos compiten en el ambiente natural en condiciones de tensión nutrimental lo que produce
un estado fisiológico diferente al observado en el laboratorio.

Crecimiento
Aumento ordenado de todos los componentes de un organismo y no solamente de alguno de ellos.
En organismos unicelulares el crecimiento conduce a un aumento en el número de células más que un
aumento en el tamaño celular.

División celular: fisión binaria

En el laboratorio, organismos estudiados como cultivos puros crecidos con abundancia de nutrientes a muy
altas densidades (cultivo estático o continuo)
En la naturaleza - los microorganismos usualmente existen en biofilms - grupos de diferentes
microorganismos organizados en capas sobre una superficie - cooperatividad, competencia.

Cuando los nutrientes escasean, aumenta la ventaja de estar asociado a superficies

• Quimiotaxis
 • Producción de exopolisacáridos (Colonizadores 1arios)
• Colonizadores 2darios
Compleja comunicación célula-célula
Acumulación de moléculas “señal” que co-regulan la transcripción
Actúan a nivel global afectando muchas funciones celulares
Crecimiento de poblaciones

Generación (n): número de divisiones celulares que ocurren en un determinado tiempo

Velocidad de crecimiento:
cambio del número de generaciones por unidad de tiempo

Tiempo de generación (tG) :

tiempo necesario para la formación de dos células a partir de una.
tiempo requerido para duplicar el número de células de una población

.
tG E.coli puede ser tan rápido como 20 min. en medio nutriente.

Cuando el tiempo de duplicación es constante el crecimiento es exponencial

Crecimiento de un microorganismo en batch

Crecimiento en cultivo en lote (batch)

• Fase lag - adaptación al nuevo ambiente
• Fase exponencial (log) - velocidad máxima de crecimiento bajo condiciones particulares, tiempo de
generación mínimo
• Fase estacionaria - sin crecimiento neto vc = vm
o nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
o acumulación de desechos, inhibición del crecimiento
• Fase de muerte - vm > vc
vc = velocidad de división celular
vm = velocidad de muerte celular

Recuento de totales por cámara de Petroff-Hausser

• método rápido
• no distingue células vivas y muertas
• baja sensibilidad: límite de detección alto (106cél/mL)

Método indirecto- Recuento en placa

 • células viables
• tiempo y condiciones de incubación
• límite de detección 1-10 ufc/mL

Turbidimetría
• método rápido
• no distingue células vivas y muertas
• baja sensibilidad
Evaluación del crecimiento
1- Determinación del número de microorganismos
• Métodos directos: recuento total
Recuento microscópico directo
Conteo electrónico
• Métodos indirectos: recuento de viables
Recuento en placa
Filtración por membrana e incubación
Número más probable (NMP)
2- Determinación de la masa celular
Medida de la masa o volumen Determinación del contenido de N, C, P, Turbidimetría
3- Determinación de la actividad celular
Actividad enzimática Concentración de un metabolito Medida de la respiración

Efecto del ambiente sobre los microorganismos

Los microorganismos están ampliamente distribuídos en la naturaleza, en ambientes muy variables como
suelos, aguas, aire, superficie de vegetales, animales.
El carácter mayoritariamente unicelular o muy simple de los microorganismos los hace muy vulnerables a
cambios en el ambiente
Microorganismos vegetales animales
Complejidad de la organización
Dependencia con el ambiente
Fórmula global: C5 H7 O2 N.
Requerimientos del crecimiento microbiano

agua
fuente de energía

NUTRIENTES macronutrientes
micronutrientes,
factores de crecimiento

temperatura
pH
CONDICIONES luz
DE CULTIVO aireación
actividad de agua
potencial redox

Temperatura
Los microorganismos se encuentran en casi todos los ambientes, incluso ambientes muy extremos.
Según el rango de temperatura de crecimiento se clasifican en:

Temperaturas extremas: sicrófilos microorganismos capaces de crecer a bajas temperaturas.

  Sicrófilos obligados
< 0-20°C, óptimo < 15oC
 Sicrófilos facultativos
0-35°C, óptimo 20-30oC
Adaptaciones a la sicrofilia:
- membranas ricas en ácidos grasos insaturados

Termófilos
Capaces de crecer a temperaturas superiores a 45ºC.
Adaptaciones a la termofilia:
 enzimas y proteínas estables al calor
 membranas ricas en ácidos grasos saturados

Temperaturas de crecimiento máximas para diferentes organismos (°C)

• Sicrófilos - rango: < 0-20°C, óptimo < 15oC
o organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada), bacterias: Pseudomonas,
Flavobacterium, Alcaligenes
o membrana contiene alto % de ácidos grasos insaturados

• Sicrótrofos o Sicrófilos facultativos - rango: 0-35°C, óptimo 20-30oC

o Pseudomonas - crecen en el refrigerador

• Mesófilos - rango: 15-45° C, óptimo: 30-40°C

o la mayoría de los microorganismos (del suelo, aguas, patógenos)

• Termófilos - rango: 40-70°C, óptimo de 55-65oC

o membrana contiene alto % de ácidos grasos saturados
o enzimas estables al calor
o Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje
 • Hipertermófilos - rango: 80-113°C, óptimo > 90oC
o Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)

Oxígeno
 Aerobios
o obligados: requieren oxígeno (21% o más).

Ej. Bacillus, hongos, etc.

o microaerofílicos: requieren niveles menores que el atmosférico (5-10%).

Ej. Azospirillum
 Anaerobios
o facultativos: no requieren oxígeno, mejor desarrollo con oxígeno.

Ej. levaduras, E. coli

o aerotolerantes: no son sensibles al oxígeno (crecen en presencia o ausencia de oxígeno).

Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.

o obligados: no toleran el oxígeno, mueren en su presencia.

Ej. Methanobacterium, Clostridium

Formas tóxicas del oxígeno

H O (peróxido), O - (superóxido), OH. (radical hidroxilo)
• Se producen fotoquímica y durante la respiración
• Altamente reactivos
• oxidan macromoléculas y demás componentes orgánicos
• Enzimas que destruyen las forma tóxicas del oxígeno:

Ensayo de presencia de catalasa

H2O2 + H2O2 2 H2 O + O 2

Ensayo de tolerancia al oxígeno

Cultivos en anaerobiosis
• tubos con medio de cultivo llenos por completo.
• medios con sustancias que reaccionan con el oxígeno y lo excluyen.
• dispositivo especial (cámara anaeróbica)
• jarra de anaerobiosis

Efecto del ambiente físico

Factores físicos que afectan el crecimiento microbiano:
• Temperatura
• Oxígeno
• pH
• Presión osmótica
• Radiaciones

Clasificación de los microorganismos según su pH óptimo

Presión osmótica
Ambiente hipertónico
Concentración de agua es mayor adentro de la célula, tiende a salir agua: plasmolisis
Ambiente hipotónico
 Concentración de agua es mayor afuera, tiende a entrar agua a la célula:plasmoptisis (irreversible)
Ambiente isotónico
Concentración de agua es igual afuera que adentro de la célula, existe un equilibrio: óptimo
crecimiento

Actividad de agua (aw)

La disponibilidad de agua se expresa como actividad de agua (aw) y varía entre 0 y 1.
Ej.: suelo agrícola 0,9-1,0; harinas 0,7; fiambres 0,85
Clasificación de los microorganismos según su capacidad para crecer en ambientes con distinta actividad de
agua
• halófilos: crecen en ambientes salinos
• osmófilos: crecen en ambientes con alta
concentración de azúcar
• xerófilos: crecen en ambientes muy secos

Efecto del ambiente físico

Factores físicos que afectan el crecimiento microbiano:
• Temperatura
• Oxígeno y otros gases
• pH
• Presión osmótica
• Radiaciones

Luz visible
• Muy beneficiosa (fotosíntesis)
• Daño: pigmentos fotosensibilizadores (clorofila, citocromos), transfieren energía al O2 (O2 activado)
muy reactivo y letal
• desactivado por pigmentos carotenoides.

Radiación ultravioleta (UV)

Longitud de onda corta, entre 10 y 400nm y alta energía.
• UV 260nm es la más nociva por ser el máximo de absorción del ADN.
• Modo de acción principal: provoca dímeros de timina y se inhibe la replicación del ADN.
• Las lámparas UV son muy usadas en cámaras de flujo laminar (filtración), complementan efecto
germicida

Radiación ionizante
Longitud de onda muy corta, energía alta, producen ionización: radicales libres (OH.), oxida dobles enlaces,
rompe anillos aromáticos.
• rayos X: producidos atificialmente
• rayos gama: por la desintegración de radioisótopos
• bajas dosis: mutaciones muerte niveles superiores letal
• Se usan para esterilizar objetos, algunas endosporas pueden resistir altas dosis

Requerimientos del crecimiento microbiano

agua
fuente de energía

NUTRIENTES macronutrientes
micronutrientes,
factores de crecimiento

temperatura
pH
CONDICIONES luz
DE CULTIVO aireación
actividad de agua
potencial redox

Grupos nutricionales

• Fuentes de energía
o fotótrofos - utilizan luz
o quimiótrofos - utilizan compuestos
orgánicos: organótrofos
 inorgánicos: litótrofos
• Fuentes de carbono
o autótrofos - CO2
o heterótrofos - compuestos orgánicos
o Metilótrofos – Compuestos de un carbono (metanol, metilaminas)

Nutrientes
1- Fuente de energía Luz
Química
2- Macronutrientes
C K

O Mg
H Na
N 95% Ca
S Fe
P

3- Micronutrientes (elementos traza)

Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
• Vitaminas
• Purinas y pirimidinas
• Aminoácidos

Macronutrientes

Factores de crecimiento

 protótrofo :
o sintetizan vitaminas, amino ácidos, nucleótidos, lípidos
o crecen en un medio mínimo compuesto de sales inorgánicas (MgSO4, NH4Cl, K2HPO4, FeCl3,
CaCl2) con fuente de carbono orgánica

 auxótrofo: requieren factores de crecimiento

o purinas y pirimidinas ADN, ARN
o aminoácidos esenciales síntesis proteica
o vitaminas coenzimas

Algunos son muy exigentes, lo cual significa que necesitan muchos factores
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
• Se llama cultivo al proceso de multiplicar microorganismos mediante las condiciones ambientales
adecuadas.

• Los microorganismos en crecimiento realizan copias de si mismos y requieren los elementos que se
encuentran en su composicion quimica.

• Factor de crecimiento ph, t

Crecimiento ¨phcrecimiento¨ ph, T, aireacion.

Medios de cultivo

agua
NUTRIENTES

Según la composición
• definidos o sintéticos: composición química conocida
• no definidos o complejos: composición química no definida, enriquecidos con peptonas, extracto de
carne, de levadura, sangre

Según la naturaleza física

líquidos
sólidos - solidificante: agar-agar, sílico-gel
semi-sólidos

Cultivo
Aislamiento Primario
MEDIOS DE CULTIVO
• Agar XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato)
o Desoxicolato de sodio
o Xilosa, Lactosa, Sacarosa
o Rojo Fenol
o sodio
o Citrato amónico férrico
o Tiosulfato de
• Agar Hektoen
o Sales biliares
o Lactosa, sacarosa
o Tiosulfato de sodio
 o Citratro amónico férrico
o Azul de Timol

Medios de cultivo
selectivos o inhibitorios:
contienen sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos permitiendo el crecimiento de
otros o cuya composición permite el desarrollo de un grupo determinado
antibióticos;
agua, sales, luz, para algas,
alta concentración NaCl

diferenciales:
Contienen indicadores para diferenciar los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en él.
Ej. azúcar fermentecible: lactosa, indicador: rojo neutro

TEMA 5 - METABOLISMO Y NUTRICION BACTERIANA

Funcion del metabolismo en la biosintesis y el crecimiento.
Requiere la polimerizacion de elementos bioquimicos constitutivos: proteinas,acidos nucleicos,polisacaridos y
lipidos.

FUNCION DEL METABOLISMO EN LA BIOSINTESIS Y EL CRECIMIENTO

El metabolismo microbiano se puede dividir en 4 categorias generales:
1. Vias para la interconversion de metabolitos focales.
2. Vias de asimilacion para formar metabolitos focales.
3. Secuencias biosinteticaspara la conversion de met. Focales a productos terminales.
4. Vias que producen energia metabolica para el crecimiento y la conservacion.
Metabolismo microbiano productor de energia

COMPUESTOS RICOS EN ENERGÍA :

⦿ Compuestos ricos en energía:
• Adenosina trifosfato ( ATP )
• Guanosina trifosfato ( GTP )
• Acetil fosfato
• Ácido 1,3-difosfoglicérido
• Ácido fosfoenolpirúvico ( PEP )

El ATP actúa como transportador de energía o como intermediario entre aquellas reacciones que
proporcionan energía y las que la consumen.
UTILIZACIÓN DE LA ENERGÍA POR LOS MICROORGANISMOS
La célula microbiana utiliza la energía para:
• El movimiento.
• La producción de calor.
• La electricidad.
• Biolumniscencia.

La célula microbiana utiliza la energía química para:

• Sintetizar grandes moléculas a partir de otras más pequeñas.
• Transportar sustancias hacia la célula microbiana y organizarlas en su interior.
• Sacar las sustancias de desecho de la célula microbiana o para realizar la secreción
• El trabajo mecánico de las células microbianas.
Transporte de Nutrientes.
• Difusión simple o pasiva
• Difusión facilitada
• Traslocación en grupo
• Transporte activo

Metabolismo Bacteriano
• Conjunto de reacciones bioquímicas catabólicas y anabólicas, que transforman las sustancias
nutritivas para obtener energía.
• Anabolismo: reacciones de síntesis.
• Catabolismo: degradación de compuestos orgánicos.
• Reacciones Endorganicas.
• Reacciones Exorganicas.

METABOLITOS FOCALES Y SU INTERCONVERSION

• Interconversion de Glucosa 6 fosfato y carbohidratos por medio de esteres fosfatados de
carbohidratos con diferentes longitudes de cadena (CH2O)n.
• Formacion y utilizacion de fosfoenol-piruvato donde los fosfatos de triosa se convierten a
fosfoenolpiruvato mediante reacciones como la oxidacion del gliceraldehido 3 P por el NAD+.
(E.coli).
• Formacion y utilizacion del oxalacetato.
• Formacion de ą-cetoglutarato a partir de piruvato.

VIAS DE ASIMILACION
• CRECIMIENTO CON ACETATO,esto se logra por acoplamiento de las reacciones del ciclo del acido
tricarboxilico.
• CRECIMIENTO CON DIOXIDO DE CARBONO(Ciclo de Calvin).Celulas autotrofas.
• Cel.autorofas requieren Despolimerasas y Oxigenasas.

DESPOLIMERASAS
Varios microorganismos elaboran Despolimerasas extracelulares que hidrolizan proteinas,acidos y lipidos.
El patron de actividad de las despolimerasas puede ser util en la identificacion de microorganismos.

OXIGENASAS
• Son enzimas que emplean de manera directa al oxigeno
molecular.

Energía
La transformación de la energía, generación de ATP, puede ser mediante 3 vías principales:
1. La respiración, que tiene lugar en presencia de O2 y da como resultado CO2 y H2O, es un proceso
de oxidación.
2. La fermentación: en condiciones sin oxigeno.
3. La fotosíntesis: que obtiene la energía por absorción de luz visible a través de la clorofila.

Nutrición Microbiana
Las células están compuestas de:
1. Macromoléculas: polisacáridos, lípidos, ácidos nucleicos y proteínas (Las proteínas son las mas
abundantes).
2. Agua. El agua es el solvente ideal para los organismos vivos debido a su polaridad y a su cohesión

Enzimas
• Catalizadores biológicos de naturaleza proteica.
• Su accionar es esencial en el metabolismo bacteriano.
• Actúan de manera especifica a través de un sitio activo, produciendo un efecto catalítico sobre las
moléculas del sustrato, convirtiéndola en un producto especifico.
• Funcionan en forma secuencial: sistema multienzimatico.

Fermentaciones
• Una fermentación en una reacción de oxidación – reducción interna equilibrada en la que algunos
átomos de la fuente de energía (donador de electrones) se reducen, mientras otros se oxidan y la
energía se produce por fosforilación a nivel de sustrato.
• Una ruta bioquimica muy usada para la fermentacion de la glucosa es la glucolisis, tambien
denominada via de Embden-Meyerhof .
• La glicolisis se puede dividir en en 3 etapas principales:

Ruta de producción de energía por combustión y por respiración celular

La glucólisis, ruta metabólica común a todos los organismos

A partir la glicólisis pueden darse la respiración aerobia o la anaerobia.

Ciclo de Krebs o Ciclo del ácido tricarboxílico (ATC)

Vias reductivas.
Algunos microorganismos viven en ambientes extremadamente reductores.
ASIMILACION DEL NITROGENO: diversas bacterias y cianobacterias usan un sistema nitrogenasa
multicomponente.

FOTOSÍNTESIS
FASES DE LA FOTOSÍNTESIS

• Fase lumínica

QUIMIOSÍNTESIS
LAS BACTERIAS QUIMIOSINTÉTICAS:
• No necesitan nutrientes orgánicos porque utilizan bióxido de carbono para producir sus nutrientes
• Obtienen la energía de la oxidación de compuestos inorgánicos como hidrógeno molecular,
amoníaco, nitrito, tiosulfato, etc.
Los electrones resultantes entran en la cadena respiratoria con producción de ATP.

RESPIRACIÓN: DESASIMILACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS Y LIBERACIÓN DE ENERGÍA

RESPIRACIÓN: Proceso por el cual la célula microbiana libera la energía almacenada en los alimentos.
• Respiración aerobia.
• Fermentación
• Respiración anaerobia.

RESPIRACION AEROBIA

FERMENTACIÓN O RESPIRACIÓN ANAEROBIA

• En ausencia de oxígeno, para actuar como aceptor final, el ácido pirúvico sirve a sí mismo como
aceptor.
Cuando el aceptor de electrones es un ácido orgánico se le llama fermentación, cuando el aceptor es una
sustancia inorgánica como NO2, NO3, SO4, CO3 y fumarato

CATABOLISMO DE PROTEÍNAS
Las proteínas son demasiado grandes para atravesar las membranas
Los microorganismos excretan proteasas que hidrolizan las proteínas exógenas a péptidos.
Proteasas Peptidasas
Proteínas Péptidos Aminoácidos

• Los esqueletos carbonados de los aminoácidos entran en el ciclo atc para sufrir una mayor
oxidación vía acetil coa, ácido cetoglutárico ácido succínico, ácido fumárico o ácido oxaloacético
TEMA 6 - CULTIVO DE MICROORGANISMOS
CULTIVO DE MICROORGANISMOS

• Se llama cultivo al proceso de multiplicar microorganismos mediante las condiciones ambientales

adecuadas.
• Los microorganismos en crecimiento realizan copias de si mismos y requieren los elementos que se
encuentran en su composicion quimica.
• F.de crecimiento ph,t crecimiento¨phcrecimiento¨ph,T,aireacion.

Medios de cultivo

Medios de cultivo
Según la composición
• definidos o sintéticos: composición química conocida
• no definidos o complejos: composición química no definida, enriquecidos con peptonas, extracto de
carne, de levadura, sangre

Según la naturaleza física

• líquidos
• sólidos - solidificante: agar-agar, sílico-gel
• semi-sólidos

Cultivo
Aislamiento Primario
MEDIOS DE CULTIVO
• Agar XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato) • Agar Hektoen
o Desoxicolato de sodio o Sales biliares
o Xilosa, Lactosa, Sacarosa o Lactosa, sacarosa
o Rojo Fenol o Tiosulfato de sodio
o sodio o Citratro amónico férrico
o Citrato amónico férrico o Azul de Timol
o Tiosulfato de
Cultivo en medio enriquecido

Técnica de vertido en placa

Técnico de estripado en placa

Medios de cultivo
selectivos o inhibitorios: contienen sustancias que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos
permitiendo el crecimiento de otros o cuya composición permite el desarrollo de un grupo determinado
• antibióticos;
• agua, sales, luz, para algas,
• alta concentración NaCl
diferenciales: contienen indicadores para diferenciar los distintos tipos de microorganismos que puedan
crecer en él.
Ej. azúcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro
Component Amount Function of component
Beef extract 1.5 g Source of vitamins and other growth factors
Yeast extract 3.0 g Source of vitamins and other growth factors
Peptone 6.0 g Source of amino acids, N, S, and P
Glucose 1.0 g C and energy source
Agar 15.0 g Inert solidifying agent
water 1000 ml
pH 6.6

Component Amount Function of component

Casamino acids 7.5 g Source of amino acids, N, S and P
Yeast extract 10.0 g Source of growth factors
Trisodium citrate 3.0 g C and energy source
KCl 2.0 g K+ source
MgSO4 7 H2O 20.0 g S and Mg++ source
FeCl2 0.023 g Fe++ source
NaCl 250 g Na+ source for halophiles and inhibitory to nonhalophiles
water 1000 ml
pH 7.4

Component Amount Function of component

sucrose 10.0 g C and energy source
K2HPO4 2.5 g pH buffer; P and K source
KH2PO4 2.5 g pH buffer; P and K source
(NH4)2HPO4 1.0 g pH buffer; N and P source
MgSO4 7H2O 0.20 g S and Mg++ source
FeSO4 7H2O 0.01 g Fe++ source
MnSO4 7H2O 0.007 g Mn++ Source
water 985 ml
pH 7.0

Component Amount Function of component

NH4Cl 0.52 g N source
KH2PO4 0.28 g P and K source
MgSO4 7H2O 0.25 g S and Mg++ source
CaCl2 2H2O 0.07 g Ca++ source
Elemental Sulfur 1.56 g Energy source
CO2 5%* C source
water 1000 ml
pH 3.0
Cultivos en anaerobiosis
• tubos con medio de cultivo llenos por completo.
• medios con sustancias que reaccionan con el oxígeno y lo excluyen.
• dispositivo especial (cámara anaeróbica)
• jarra de anaerobiosis

Efecto del ambiente físico

Factores físicos que afectan el crecimiento microbiano:
• Temperatura
• Oxígeno
• pH
• Presión osmótica
• Radiaciones

Clasificación de los microorganismos según su pH óptimo

Presión osmótica
Ambiente hipertónico
Concentración de agua es mayor adentro de la célula, tiende a salir agua: plasmolisis
Ambiente hipotónico
Concentración de agua es mayor afuera, tiende a entrar agua a la célula: plasmoptisis (irreversible)
Ambiente isotónico
Concentración de agua es igual afuera que adentro de la célula, existe un equilibrio: óptimo
crecimiento
Actividad de agua (aw)
La disponibilidad de agua se expresa como actividad de agua (aw) y varía entre 0 y 1.
Ej.: suelo agrícola 0,9-1,0; harinas 0,7; fiambres 0,85
Clasificación de los microorganismos según su capacidad para crecer en
ambientes con distinta actividad de agua
• halófilos: crecen en ambientes salinos
• osmófilos: crecen en ambientes con alta concentración de azúcar
• xerófilos: crecen en ambientes muy secos

Efecto del ambiente físico

Factores físicos que afectan el crecimiento microbiano:
• Temperatura
• Oxígeno y otros gases
• pH
• Presión osmótica
• Radiaciones

Luz visible
• Muy beneficiosa (fotosíntesis)
• Daño: pigmentos fotosensibilizadores (clorofila, citocromos), transfieren energía al O2 (O2 activado)
muy reactivo y letal
• desactivado por pigmentos carotenoides.

Radiación ultravioleta (UV)

 • Longitud de onda corta, entre 10 y 400nm y alta energía.
• UV 260nm es la más nociva por ser el máximo de absorción del ADN.
• Modo de acción principal: provoca dímeros de timina y se inhibe la replicación del ADN.
• Las lámparas UV son muy usadas en cámaras de flujo laminar (filtración), complementan efecto
germicida
Radiación ionizante
• Longitud de onda muy corta, energía alta, producen ionización:
radicales libres (OH.), oxida dobles enlaces, rompe anillos aromáticos.
• rayos X: producidos atificialmente
• rayos gama: por la desintegración de radioisótopos
• bajas dosis: mutaciones muerte niveles superiores letal
• Se usan para esterilizar objetos, algunas endosporas pueden resistir altas dosis

Grupos nutricionales
• Fuentes de energía
o fotótrofos - utilizan luz
o quimiótrofos - utilizan compuestos

orgánicos: organótrofos
inorgánicos: litótrofos
• Fuentes de carbono
o autótrofos - CO2
o heterótrofos - compuestos orgánicos
o Metilótrofos – Compuestos de un carbono (metanol, metilaminas)

Nutrientes
1- Fuente de energía Luz
Química
2- Macronutrientes
C K

O Mg
H Na
N 95% Ca
S Fe
P

3- Micronutrientes (elementos traza)

Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
• Vitaminas
• Purinas y pirimidinas
• Aminoácidos

Macronutrientes

Factores de crecimiento
  protótrofo :
o sintetizan vitaminas, amino ácidos, nucleótidos, lípidos
o crecen en un medio mínimo compuesto de sales inorgánicas (MgSO4, NH4Cl, K2HPO4, FeCl3,
CaCl2) con fuente de carbono orgánica

 auxótrofo: requieren factores de crecimiento

o purinas y pirimidinas ADN, ARN
o aminoácidos esenciales síntesis proteica
o vitaminas coenzimas

Algunos son muy exigentes, lo cual significa que necesitan muchos factores

TEMA 7 - GENETICA BACTERIANA

CONCEPTO DE GENETICA
La genética es el estudio de la variabilidad y la herencia de las características de un organismo, sea eucaritico o
procariotico.

¿COMO ESTA CODIFICADA LA INFORMACION GENETICA BACTERIANA?

En la molecula del acido desoxirribonucleico, ADN, cuya propiedad de replicación es esencial el genotipo y el
fenotipo

DIFERENCIA ENTRE GENOTIPO Y FENOTIPO

• GENOTIPO: Rasgos ganeticamente determinados
• FENOTIPO; Define las caracteristicas observables

QUE ES EL ADN?
Sustancia responsable de la transmision de informacion hereditaria.

Caracteristicas del ADN

Es una molécula larga, compuesta por dos filamentos, cada uno unido por un nucleótidos unidos entre si que
consta de 3 partes.

PARTES DE LOS NUCLEOTIDOS

• Base Nitrogenada: Purina o Pirimidina
• Azúcar de 5 carbonos: Desoxirribosa.
• Molécula de Fosfato: Acido fosfórico.

COMO ES EL ADN BACTERIANO?

QUE ES EL ARN?
Acido Ribonucleico, tiene semejanza con el ADN, pero son diferentes. Actúa transmitiendo información
codificada en el ADN para sintetizar proteínas.

VARIACIONES FENOTIPICAS O TEMPORALES

Que son las variaciones fenotipicas?

Son modificaciones del fenotipo, debidas generalmentea cambios ambientales sin relación con el genoma, el
cual no es transmitido hereditariamente

CARACTERISTICAS DESTACADAS
• Implica la mayoría de las bacterias que se encuentran en el cultivo
• Cuando se restablecen las condiciones originales del cultivo, se produce retorno al fenotipo inicial

Como pueden ser ñas variaciones fenotipicas o temporales?

• Morfológicas: cambios de forma, tamaño, tinción, o perdida de cápsula, espora o flagelos. Cambian
con el pH y temperatura
• Cromógenas: producen pigmentos que caracterizan sus colonias. Estos desaparecen temporalmente
con condiciones ambientales
• Enzimáticas: las bacterias solo producen estas enzimas si el medio en el que se desarrollan, inducen a
su producción
• De tinción: Grampositivas de un cultivo viejo pierden la capacidad de retener el colorante primario
durante la decoloración de alcohol acetona

VARIACIONES GENOTIPICAS O PERMANENTES

Por que esta determinado el genotipo?
El genotipo de una célula bacteriana está determinado por la información genética de su cromosoma

Que es un Gen?
Unidad funcional de la herencia. Cada gen consta de cientos de pares de nucleótidos. Cualquier gen es
capaz de mutar, produciendo esto a veces su muerte

Que son las mutaciones?

Las mutaciones son acontecimientos raros y al azar producidos de manera espontánea, sin tener en
cuenta los requerimientos el ambiente.
Que es una cepa?
Cultivo puro de microorganismos compuesto por los descendientes de una sola célula
Que es una cepa silvestre o protótrofa?
 Cepa progenitora que crece en un medio mínimo
Como aislar a una celula mutante?
Puede hacerse de varias formas, una de esta incorporando al medio de cultivo un antibiótico para
seleccionar así los mutantes resistentes al antibiótico que crecen sobre elmedio de cultivo.
Mutacion espontanes
Aquellas que surgen normalmente como consecuencia de errores durante el proceso de replicación del
ADN. Ocurren en condiciones normales de cultivo y existen varias situaciones que cambian la secuencia
de bases Purina-pirimidina del ADN.
Que es una cepa auxotrofa?
Son aquellas que requieren medios de cultivos mas complejos. Estos requerimientos pueden ser
nutricionales superiores a los de cepas progenitoras.
Que es una replica en placa?
Es una de las técnicas mas utilizadas para seleccionar una cepa mutante con requerimientos
nutricionales superiores a lo de la cepa progenitora.

CAMBIOS EN LA MUTACION ESPONTANEA

• Sustitución: sustituye un nucleótido por otro.
o por transmisión
o Por transversion
• Inserción o adición: cuando se adicionan una o varias nucleótidos a los ya existentes
• Delección, supresión o pérdida: cuando se pierden uno o mas nucleótidos

TIPOS DE SUSTITUCION
• Sustitución por transición: cuando se sustituye una base purina por otra purina.
• Sustitución por transversión: cuando se sustituye una base purina por una pirimidina o viceversa.

MUTACIONES INDUCIDAS
Cuando se aplica aun población bacteriana algún tipo de agente inductor de mutaciones, conocido como
agente mutágeno o sustancia mutagénica.

TIPOS DE MUTANTES BACTERANIOS

 • Mutantes que exhiben tolerancia aumentada a agentes inhibitorios en particular antibióticos.
• Mutantes que demuestran capacidad de fermentación alterada, bien sea aumentada o disminuida para
elaborar producto final
• Mutantes con deficiencia nutricional que requieren para el desarrollo un medio mas complejo que el
cultivo original al que se derivan
• Mutantes que demuestran cambios en la forma de colonia o capacidad de producir pigmentos.

OTROS TIPOS DE MUTANTES

• Mutantes que presentan cambios en la estructura química de las células.
• Mutantes resistentes a la acción de los bacteriófagos (virus que infectan las bacterias).
• Mutantes que muestran algún cambio en los aspectos morfológicos, como perdida de la capacidad de
producir esporos, cápsulas o flagelos.

RECOMBINACION BACTERIANA

Que es una recombinación bacteriana?

Es la formación de un nuevo genotipo por redistribución de los genes, después de un intercambio genético
entre dos cromosomas diferentes que poseen genes similares. Estos cromosomas se llaman homólogos.

TRANFERENCIAS BACTERIANAS
La transferencia del ADN de las células donadoras a las células receptoras que dan origen a formas
recombinadas, se produce por 3 mecanismos distintos: conjugación, transducción y transformación

Conjugación
El mecanismo de apareamiento depende del contacto célula– célula.

Bacterias productoras de factor F

 • Eschericha coli: Colicina
• Pseuomona aeruginosa: Piocina
• Serratia marcescens: Marceìna
• Enterbacter aerogenes: Aerocina

Que es un factor F?
Las células donadoras contienen una pieza circular pequeña y extracromosomal de ADN, esa pieza se conoce
como plásmido, y se le ha llamado factor de fertilidad, factor sexo o factor F +.
Las células receptoras se simbolizan así: factor F-
El cruce entre dos cepas f- son estériles
Solamente el cruce de dos cepas contrarias produce recombinantes aunque excepcionalmente pero con baja
frecuencia una f+ y otra f+ logran el cruce.

TRANSFORMACION

Que es la transformación?
Consiste en el paso de un fragmento de ADN de una bacteria a otra por la adsorción. El fragmento de ADN es
llamado exógeno y se recombina con el cromosoma de la bacteria que lo recibe, reemplazando un segmento
homologo.

Quien fue GRIFFITH?

Experimentó por primera vez, en 1928 la transformación de la genética bacteriana

EXPERIMENTO DE GRIFFITH
 • Cepa II-S: lisos y capsulados
• Cepa II-R: rugosos y sin capsula
• Cepa III-S: lisos y muertos por calor.

Que es transduccion?
Consiste en la transferencia de una pieza de ADN de una bacteria a otra por medio de un bacteriófago

ESQUEMATIZACION
 Fases de la transducción:
1) fijación del fago a la bacteria;
2) respuesta lítica;
3) transducción del fragmento de ADN a otra
bacteria;
4) integración del ADN en el genoma.

BACTERIOFAGO
Son agentes infecciosos que se replican como un parásito obligado en bacterias. El fago extracelular es
metabólicamente inerte y consiste principalmente de proteínas más ácido nucleico (ADN o ARN).

PARTES DE UN BACTERIOFAGO
Las proteínas del fago protegen su material
genético (cápside). Existen varios tipos
morfológicosde fagos, los hay poliédricos,
filamentosos ycomplejos. Estosúltimos, tienen
cabezas poliédricas a las cuales se une una cola y a
veces otros apéndices.

Y que son profagos?

Son genomas virales que se integran al genoma
bacteriano. Las bacterias que portan los profagos
se llaman bacterias lisogénicas.
GENETICA BACTERIANA
GENETICA MICROBIANA
• Define y analiza la herencia.
• Unidad de herencia es el Gen.
• Gen que lleva informacion en su secuencia de nucleotidos para una propiedad bioquimica o fisiologica
especifica.
• Fenotipo propiedades estructurales y fisiologicas de un organismo.
• La base quimica para la variacion en el Fenotipo es un cambio en el Genotipo.

ORGANIZACIÓN DE LOS GENES-CROMOSOMA BACTERIANO

• Molécula de ADN bicatenario circular
• Contiene 1000 a 9000 kilobases (Kb)
• Es una unidad de replicación. Tiene un origen de replicación, genes que codifican las proteínas
necesarias para la replicación

Replicación del cromosoma bacteriano

• Es semiconservativa y bidireccional.
• La pieza central es la DNA polimerasa. Actúa por el agregado de desoxirribonucleótidos al extremo
3’OH libre de una molécula cebadora o primer.
• La DNA polimerasa tiene una función correctora de bases mal apareadas.
• Durante la iniciación se alivia el superenrollamiento por acción de la topoisomerasa y las helicasas que
separan las cadenas complementarias.

Replicación del cromosoma bacteriano (Semiconservativa)

• Una de las cadenas puede copiarse en forma continua pero la otra debe hacerlo en fragmentos.
 • Los fragmentos son luego unidos por la ligasa.
• Los cebadores de RNA son removidos y los huecos son rellenados por la DNA polimerasa I.

Enzimas de la Replicación
• Topoisomerasa y Helicasas: alivian el superenrollamiento y separan las cadenas complementarias
• DNA pol III : Síntesis de nueva cadena de DNA (incluye actividad correctora)
• DNA pol I: Remueve cebadores y rellena los huecos de la cadena retrasada
• Ligasa: Une los fragmentos de la cadena retrasada

ELEMENTOS GENETICOS EXTRACROMOSOMALES

• plásmidos
• episomas

PLASMIDOS
• Moléculas de DNA de doble cadena circular covalentemente cerradas
• Llevan una pequeña parte de la información genética que no es esencial para la vida e la bacteria
• Tienen sus propios orígenes de replicación, se replican en forma autónoma
• Le confieren a las bacterias propiedades especiales que pueden representar una ventaja con respecto
a las bacterias que no lo poseen. Ej. Resistencia a antibióticos.
• No son capaces de integrarse al cromosoma.

EPISOMAS
• Un episoma es un plásmido capaz de existir integrado o no integrado en el cromosoma bacteriano.
• Pueden replicarse en forma autónoma pero también pueden integrarse al cromosoma bacteriano y
duplicarse junto con el resto de los genes cromosómicos.
• Un mismo elemento genético puede existir como plásmido en una bacteria y como episoma en otra.

Experimento de Griffith
Transferencia de plásmidos conjugativos entre bacterias

Resistencia transmisible a drogas

Factores de Resistencia
• Los plásmidos a menudo confieren resistencia a los antibióticos a las bacterias que los contienen.
• Los factores R o plásmidos R contienen genes que codifican enzimas capaces de destruir o modificar
antibióticos.
• Algunos plásmidos pueden contener varios genes de resistencia.
• Estos genes por lo general se encuentran en un elemento transponible

ELEMENTOS MOVILES o TRANSPONIBLES

 • SECUENCIAS DE INSERCION (SI)
• TRANSPOSONES (TN)

SECUENCIAS DE INSERCION
• Las SI poseen entre 800 y 1400 pb, y son los elementos transponibles más sencillos.
• Contienen solo los genes que codifican las enzimas necesarias para su transposición.
• Presentan a ambos lados secuencias terminales cortas inversamente repetidas IR (palindrómicas) de 10
a 40 pb.

TRANSPOSONES
• Los transposones son secuencias de inserción que contienen genes extra. (Ej. Resistencia a antibióticos)
• Los llamados transposones compuestos se componen de una región central que contiene los genes
extra, flanqueados a ambos lados por elementos SI, de secuencia idéntica o muy similar.

Transposición de transposones
• Los transposones son fragmentos discretos de DNA que tienen la propiedad de “saltar” de una posición
a otra dentro del cromosoma o del cromosoma a un plásmido o viceversa.
• Se trata de un proceso de transposición replicadora y recombinación ilegítima.

Los TRANSPOSONES son de gran importancia en la diseminación de la resistencia a antibióticos

• Contienen genes de resistencia a antibióticos y desempeñan un papel fundamental en la generación de
plásmidos R.

• Los plásmidos de múltiple resistencia a fármacos a menudo se originan por acumulación de

transposones en un único plásmido.

• Dado que los transposones se desplazan entre los plásmidos y los cromosomas primarios los genes de
resistencia pueden intercambiarse produciendo una mayor diseminación de la resistencia a
antibióticos.

Los elementos móviles tienen efecto mutagénico

• Al insertarse en un gen interrumpen la continuidad del código genético
• Algunos transposones contienen codones STOP, y pueden bloquear la traducción.
 • Otros pueden contener promotores, por lo que activan genes cercanos al punto de inserción.

Diferencia entre plásmido y transposón

• Los transposones son INCAPACES de reproducirse en forma autónoma y de existir con independencia
del cromosoma

GENOTIPO Y FENOTIPO
• Genotipo es el conjunto de los caracteres genéticos que la bacteria posee capaz de transmitirse a la
descendencia.
• Fenotipo es el conjunto de caracteres manifestados por interacción del genotipo y el medio ambiente

Variaciones fenotípicas
• Afectan a la mayoría de la población
• Son reversibles

Las variaciones fenotípicas pueden ser:

• Morfológicas
• Cromógenas
• Enzimáticas
• Patogénicas

OPERON LACTOSA

Variaciones genotípicas
• Mutaciones
• Transferencia de material genético
MUTACIONES
Mutación es cualquier alteración permanente en la secuencia de ADN (cambio genotípico)
• Son cambios hereditarios.
• No necesariamente son irreversibles, ya que existen mecanismos de reparación y reversión.
• Pueden ser espontáneas o inducidas por agente mutágenos.
Mutagénesis inducida
Agentes Físicos:
• Luz UV
• Radiaciones de alta energía
Agentes Químicos:
• Agentes que modifican las purinas o pirimidinas de manera de provocar errores en el apareamiento de
bases.
Ej. Ácido nitroso y agentes alquilantes.

• Agentes que interactúan con el DNA y su estructura secundaria, promoviendo errores en la replicación.
Ej. Colorantes de acridina.

• Análogos de bases que son incorporados en el DNA y provocan errores de incorporación o de

duplicación.

Reversión de mutaciones
• Un organismo mutante puede recuperar su fenotipo salvaje por una segunda mutación denominada
retromutación.
• Puede ser una segunda mutación en el mismo sitio afectado por la mutación primitiva (retromutación
verdadera) o en un sitio distinto dentro del mismo gen o en otro (mutación supresora).
• Producen un cambio compensatorio que restaura la actividad del producto génico alterado.
TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENETICO
Las bacterias intercambian material genético por tres mecanismos fundamentales:
• TRANSFORMACION
• CONJUGACION
• TRANSDUCCION

TRANSFORMACION

CONJUGACION
• La transferencia de genes es producida por el contacto directo de las células dadora y receptora
mediada por el pili sexual.
• El pili sexual está codificado por el factor de fertilidad F, localizado en un episoma

El factor F puede existir en 3 estados:

• Como episoma de replicación autónoma: F+
• Como parte integral del cromosoma: Hfr
• Como episoma que contiene pequeños fragmentos del cromosoma: F’
TRANSDUCCION
• Fenómeno por el que se transfiere un fragmento de ADN de una bacteria a otra por medio de un fago
(ADN bicatenario).

CICLO LITICO Y LISOGENICO DE UN FAGO

1. TRANSDUCCION GENERALIZADA

2. TRANSDUCCION RESTRINGIDA O ESPECIALIZADA

ISLAS DE PATOGENECIDAD
 • Son genes específicos para determinantes patogénicos estos genes se agrupan juntos en el DNA en
Bloques de hasta 200 kpb. Por ejm virulencia de bacterias.

• Adhesinas, invasinas y exotoxinas.

TEMA 8 - PATOGENIA DE LA INFECCIÓN BACTERIANA

Definiciones de salud y enfermedad
 • Salud es "el estado en el que un ser orgánico ejerce normalmente sus funciones".
Diccionario de la Lengua Española

• Salud es "un estado de completo bienestar físico, mental y social, y no sólo la ausencia de molestias o
enfermedades".
Organización Mundial de la Salud (OMS)

• Enfermedad es "alteración más o menos grave de la salud".

Diccionario de la Lengua Española

IDENTIFICACION DE BACTERIAS QUE CAUSAN ENFERMEDADES

POSTULADOS DE KOCH :
• El microorganismo debe encontrarse en todos los casos de la enfermedad y su distribucion en el
organismo debe concordar con las lesiones observadas.
• El microorganismo se debe cultivar in vitro durante varias generaciones.
• Cuando este tipo de cultivo puro se inocula en un animal suceptible debe causar la enfermedad tipica.
• El microorganismo se debe aislar de nuevo a partir de las lesiones de las enfermedades producidas en
forma expeimental.

Agente etiologico: propiedades

Infectividad: capacidad del agente biológico de penetrar y multiplicarse en el organismo de otro ser vivo, a
partir de su puerta de entrada.
Invasividad: capacidad que tiene el agente (organismo) de invadir tejidos vecinos a
partir de la puerta de entrada.
Toxigenicidad: capacidad de algunos organismos biológicos de producir sustancias
tóxicas para el organismo a afectar (Hombre). (Endotoxinas – Exotoxinas)
Enzimogenicidad: capacidad del agente biológico de producir enzimas que actúen sobre los tejidos de los
organismos.
Patogenecidad: potencial del agente biológico para producir enfermedades de
cualquier ser vivo.
Virulencia: grado de severidad (patogenecidad) de un agente biológico.
Mutagenecidad: capacidad de algunos organismos de alterar o modificar características de su especie bajo
condiciones especiales. Los cambios se dan en uno o varios genes. (VIH, Gripe Aviar).
Inmunogenicidad o antigenicidad: capacidad de los agentes biológicos de impresionar al sistema
inmunocompetente de los seres vivos, provocando en estos una respuesta ante su presencia. Producción de
anticuerpos, o sea una reacción Ag- Ac

Transmisión de la infección
La forma en que los agentes biológicos serán o van a ser trasladados al huésped susceptible.
Vías: directa (persona a persona) o indirecta
• Vía directa: Inmediata (contacto físico, como relaciones sexuales, transfusión, transplacentaria,
transparto) o mediata (no necesita contacto físico)
• Vía indirecta: Aerógena, Vectorial (Vector: agente vivo que transporta un agente infeccioso),
Inanimada (agua, alimento contaminado, objeto contaminado, fomites).Ej Salmonella ,Campylobacter
infectan animales y son transmitidas en productos alim.

• Puerta de entrada:
o Lugar donde penetra el agente infeccioso al hospedero susceptible.
o Puede ser artificial o natural.
• Artificiales: punción, ruptura traumática en piel.
• Naturales: Fosas nasales, boca, ano, piel y mucosas
• Anormales: Quemaduras,Lasceraciones en piel y otras lesiones.

Proceso infeccioso
• Una vez dentro del cuerpo ,las bacterias se adhieren asus celulas huesped (cel. Epiteliales)siendo el
Sitio primario de infeccion,luego se multiplican y diseminan a travez de los tejidos o por el sistema
linfatico hasta el torrente sanguineo.(BACTERIEMIA) .
• B.Transitoria y B. permanente.
Ej :Pneumonia pneumococica.

GENOMICA Y PATOGENECIDAD BACTERIANA

• Bacterias Haploides (intercc. Gen.ltdas) cambian sus cromosomas, adaptacion y supervivencia a
determinados entornos ambientales.
• Naturaleza clonal de las bacterias patógenas Ej :1 solo clon N.meningitides serogrupoA en ≠areas
geograficas .
• Elementos geneticos moviles
• Islotes de patogenecidad.

REGULACION DE LOS FACTORES DE Virulencia

Una serie de señales ambientales regulan la expresión de los genes de virulencia y son:
T, disponibilidad de hierro, osmolalidad, fase del desarrollo, PH, Ca o nutrientes
Ej: gen de toxina difterica de C. diphteriae aumenta cuando se cultiva en medios con poco Fe.
FACTORES DE VIRULENCIA : Factores de adherencia ,Toxinas, Exotoxinas, pilosidades, fimbrias.
Los factores o determinantes de virulencia son características genéticas, bioquímicas, estructurales de las
bacterias que interactúan con factores del hospedero y causan daño.

INVASION DE CELULAS Y TEJIDOS DEL HUESPED

• Salmonella invade los tejidos atravez de la union entre las c◦ epiteliales, otras como Yersinia, N.
gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis invaden tipos especiales de celulas y luego penetran a los tejidos.
Una vez dentro de la c◦ la bacteria permanece encerrada en una vacuola la membrana de la vacuola se
disuelve y la bacteria se dispersa en el citoplasma.
• La presencia de signos y síntomas implica enfermedad.
Patogenicidad y virulencia son términos que se relacionan con la capacidad de un organismo para
causar daño a un hospedero susceptible.
La patogenicidad se refiere a los mecanismos de infección y desarrollo de la enfermedad; la virulencia
es la medida (grado) de patogenicidad.

Factores de Virulencia
El proceso infeccioso, comprende, habitualmente, varios pasos:
• Los pili, fimbrias, promueven la colonización, ya que se adhieren a receptores en células y blanco e
impiden la fagocitosis. Ejemplos: los pili de Neisseriae gonorrhoeae facilitan la adhesión a células
epiteliales y mucosas y confieren resistencia a la fagocitosis; las fimbrias de Streptococcus pyogenes,
que cuentan con el factor de virulencia principal, la proteína M.

• Las adhesinas, proteínas estructurales diferentes a los pili, presentes en una gran proporción de
bacterias. Ejemplos: proteína A de la pared celular de Staphylococcus aureus; S. pyogenes se une al
epitelio faríngeo mediante la proteína F, el ácido lipoteicóico (de pared celular) y la proteína M (pilis).

• La cápsula, polímero extracelular, generalmente polisacárido, protege contra la fagocitosis. El

glucocálix tiene una función por demás importante en la adhesión de las bacterias. Ejemplo: P.
aeruginosa, e impide la fagocitosis.

• Factores enzimáticos (invasinas en algunos textos):

Ejemplos: neuraminidasas que degradan el ácido neuramínico, componente del epitelio de la mucosa
intestinal (Shigella dysenteriae); la colagenasa de Clostridium perfringens que degrada el colágeno
muscular.
Algunas bacterias dependen de un solo factor de virulencia, como Clostridium tetani y Corynebacterium
diphteriae, que producen toxinas.
Existen dos tipos de toxinas bacterianas:
• Lipopolisacáridos (LPS), parte integral de la pared celular de las bacterias Gram negativas,
termoestables, son endotoxinas, liberadas a la circulación con la lisis bacteriana. Consisten de
Polisacárido O (antígeno somático) y el Lípido A.

• Proteínas, productos solubles, termolábiles, liberados por células bacterianas Gram positivas y
negativas durante la fase exponencial de crecimiento, denominadas también exotoxinas. Algunas de
ellas se consideran las sustancias más venenosas conocidas, como la exotoxina de C. tetani, la
tetanospasmina.

o Los superantígenos son exotoxinas poco usuales. Suprimen la especificidad de

respuesta de las células T y el efecto tóxico se debe a la liberación masiva de citocinas
por parte de las células Th - ejemplo: el Síndrome de choque tóxico producido por
algunas cepas de Staphylococcus aureus.
o Toxinas que alteran la integridad de las membranas plasmáticas: hemolisinas,
formadoras de poros, que destruyen eritrocitos y otras células (Streptococcus,
Staphylococcus) ).

• Las endotoxinas son liberadas cuando ocurre la lisis de los microorganismos;

• las exotoxinas son secretadas por estos, o liberadas por lisis. Ambos tipos actúan en tejidos cercanos o
distantes al sitio de invasión, o pueden ser un factor de la misma.

Factores antifagocíticos
• Muchas bacterias evaden la fagocitosis al absorber componentes del huésped sano en su superficie
celular. Por ejm: S. aureus con su proteína A de sup., S. Peumoniae, N. meningitides poseen capsula de
polisacaridos.
• Otras bacterias producen factores solubles o toxinas que inhiben la quimiotaxis de los leucocitos por ej:
Capnocytophaga y Bordetella.

SISTEMAS BACTERIANOS DE SECRECION

Las bacterias Gram Negativas poseen paredes celulares de gran complejidad y rigidez para secretar proteínas
fuera requieren sistemas de secreción (sec) los hay :
 • Sistema de sec Tipo I
• Sistema de secrecion Tipo II
• Sistema de secrecion Tipo III
• Sistema de secrecion tipo IV
• Sistema de secrecion Tipo V

Funcion de las biopeliculas bacterianas

• Conglomerado de bacterias interactivas adheridas a una superficie solida dentro de vuna matriz de
exopolisacaridos.
• Pueden estar conformadas por 1 sola especie de bacterias o varias especies en conjunto a veces
participan las levaduras y los hongos.(S.aureus ,P.aeruginosa ,Candida)

TEMA 9 - MICROBIOTA NORMAL DEL CUERPO HUMANO

DEFINICION
Es el conjunto de poblaciones de microorganismos que conviven con el huesped en estado normal sin causarle
enfermedad.
Su composicion es carácteristica para la especie humana,tanto en los microorganismos que la componen
como en su numero y distribucion.
Factores:edad,alimentacion,clima,ph y hormonas modifican la flora normal.
HUMAN MICROBIOME PROJECT(comunidades microbianas).

• Se refiere a la población de microorganismos que habita en la piel y mucosas de las personas sanas.
• Esta flora normal, conocida como microbiota normal, proporciona la primera línea de defensa contra
los microorganismos patógenos.
• Ayuda a la digestión,
• Participa en la degradación de toxinas
• Contribuye a la maduración del sistema inmunitario.

La piel y mucosas albergan gran variedad de microorganismos que se clasifican en 2 grupos:

1) la flora residente:
• Consta de variedades fijas de microorganismos que suelen encontrarse en determinada región a
determinada edad.
• Si se modifica, se reestablece por si misma de inmediato.
2) la flora transitoria:
• Consta de microorganismos apatógenos o potencialmente patógenos que habitan en la piel o mucosas,
durante varias horas, días o semanas.
• Provienen del medio ambiente, no generan enfermedades ni se establecen permanentemente en la
superficie.
• Probablemente los microorganismos que se cultivan en el laboratorio representan solo una fracción de
los que forman parte de la flora microbiana residente o transitoria.

PARTICIPACIÓN DE LA MICROBIOTA NATURAL

Los microorganismos que permanecen constantemente en la superficie del cuerpo son comensales.
Su presencia en determinada área depende de ciertos factores fisiológicos como:
• Temperatura
• Humedad
• Determinados nutrientes y sustancias inhibidoras.
 • La flora natural de ciertas áreas tienen una función importante para conservar la salud y la función
normal.

• En las mucosas y piel, la flora natural evita la colonización de otros microorganismos patógenos y las
enfermedades que estos causan por medio de interferencia bacteriana.

• Los miembros de la flora normal generan enfermedades en ciertas circunstancias.

• Estos microorganismos se han adaptado a la forma no invasora de vida definida por las limitaciones del
ambiente.

• Si se les separa forzadamente de las limitaciones de ese entorno y se les introduce en la circulación
sanguínea o los tejidos, estos microorganismos algunas veces son patógenos.

• Cuando un gran numero de estos microorganismos se introduce en la circulación, algunas veces se

alojan en las válvulas cardiacas deformadas o prótesis valvulares generando una endocarditis
infecciosa.

MICROBIOTA NORMAL DE LA PIEL

La piel, al encontrarse expuesta constantemente al ambiente y en contacto con el mismo, es un medio idóneo
para la permanencia de microorganismos transitorios.
Hospeda a una flora natural constante y definida que es modificada en distintas regiones anatómicas por las
secreciones, el uso de ciertas prendas o la proximidad a las mucosas.
Los microorganismos predominantes de la piel son bacilos difteroides aerobios y anaerobios, estafilococo no
hemolítico, bacilos grampositivos, aerobios y formadores de esporas que habitan en el aire, ambiente y tierra,
enterococo y estreptococo

• En los pliegues cutáneos con frecuencia existen hongos y levaduras.

• En las áreas donde abundan las secreciones sebáceas existen micobacterias apatógenas.
• Los principales factores para eliminar a los microorganismos no naturales de la piel son el pH reducido,
los ácidos grasos en las secreciones sebáceas y la presencia de lisozimas.
• Se puede reducir el número de microorganismos superficiales frotándose diaria y vigorosamente con
jabón que contenga hexaclorofeno o algún otro desinfectante.
• Las bacterias tanto anaerobias como aerobias se unen para producir infecciones sinérgicas (gangrena,
fascitis necrosante, celulitis) de la piel y tejidos blandos.
MICROBIOTA NORMAL DE LA BOCA Y VÍAS RESPIRATORIAS SUPERIORES
 • La flora de la nariz consta principalmente de corinebacterias, estafilococos y estreptococos.

• Frecuentemente las mucosas de la boca y faringe son estériles al nacimiento, pero se contaminan al
atravesar el canal del parto.

• En las primeras 4 a 12 horas después del nacimiento, el estreptococos viridans se establece como el
miembro principal de la flora normal y lo sigue siendo por toda la vida.

• Cuando emergen los dientes se establecen espiroquetas anaerobias, especies de prevotella, especies
de fusobacterium, especies de rothia y de capnocytophaga, además de algunos vibrios anaerobios y
lactobacilos.

• Normalmente existen especies de Actinomyces en el tejido amigdalino y las encías de los adultos
Algunas veces se acompañan de diversos protozoarios.

• En la faringe y tráquea se establece una flora similar, mientras que en los bronquios sanos el numero
de bacterias es menor.

• Las infecciones de la boca y aparato respiratorio por lo general son causadas por flora buconasal mixta,
incluidos anaerobios.

• Las infecciones periodontales, abscesos peribucales, sinusitis y mastoditis son causados por P.
melaninogenica, fusobacteria y peptostreptococci.

• La aspiración de la saliva contiene hasta 10² de estos microorganismos aerobios, genera neumonía
necrosante, absceso pulmonar y empiema.

PARTICIPACIÓN DE LA MICROBIOTA BUCAL NORMAL EN LA CARIES DENTAL

 • La caries es una desintegración de los dientes que empieza en la superficie y avanza hacia el interior.
• Se desmineraliza el esmalte superficial.
• La descomposición ulterior de la dentina y cemento comprende la digestión bacteriana de la matriz
proteínica.
• La placa dental se ha considerado como una biopelicula compleja
• Se puede definir como una acumulación de microorganismos dentro de una matriz.

• En la placa dental los primeros microorganismos que generan una capa de lodo son básicamente cocos
y bacilos grampositivos que forman microcolonias en la superficie del esmalte dura y uniforme.

• Existe una correlación importante entre la presencia de S. mutans y caries en determinadas áreas del
esmalte.

• El segundo paso esencial en la formación de caries es la producción de grandes cantidades de acido por
parte de los estreptococos y lactobacilos de la placa.

• Los microorganismos proteolíticos, incluidos actinomicetos y bacilos, participan en la acción

microbiana sobre la dentina después de la lesión del esmalte.

• Conforma la biopelicula madura en ausencia de una buena higiene dental, se produce un enlace
cruzado con especies de fusobacterium seguidos de bacterias gramnegativas.

• Para detener la caries es necesario extirpar la placa, limitar el consumo de sacarosa

o Alimentarse bien con un insumo suficiente de proteínas.
o Reducir la producción de acido en la boca
o Limitando los carbohidratos disponibles y limpiarla con frecuencia.

• Las bolsas periodontales en las encías son fuentes especialmente abundantes de microorganismos.
• Rara vez se encuentran en otros sitios.

Capnocytophaga y rothia dentocariosa

• Participan en la flora microbiana compleja de la enfermedad periodontal
• Con destrucción ósea prominente.

MICROBIOTA NORMAL DEL INTESTINO

 • Al nacimiento, el intestino es estéril,
• Pero poco después se introducen microorganismos con el alimento.
• En los niños alimentados al seno materno, el intestino contiene un gran numero de estreptococos
• Productores de acido láctico y lactobacilos.

• Conforme los hábitos alimentarios adquieren el patrón de adulto, la flora intestinal cambia.

• La alimentación repercute en la composición relativa de la flora tanto intestinal como fecal.

• En el adulto sano, el esófago contiene microorganismos que llegan con la saliva y los alimentos.

• El pH acido normal del estomago lo protege de las infecciones causadas por algunos microorganismos
patógenos intestinales, por ejemplo, el cólera.

• Conforme el pH del contenido intestinal se alcaliniza, la flora residente aumenta de manera gradual.

• Durante la diarrea, el contenido bacteriano disminuye de manera considerable

• En la estasis intestinal la cuenta se eleva.

• En el colon del adulto sano, entre 96 y 99 de la flora bacteriana consta de anaerobios:

• Especies de bacteriodes (fragilis)

o Fusobacterium
o Lactobacilos anaerobios
o Cocos anaerobios grampositivos

• La flora fecal normal contiene mas de 100 tipos distintos de microorganismos, que se pueden cultivar
en forma sistemática en el laboratorio.

• Existen mas de 500 especies de bacterias en el colon y muchas mas que probablemente se
desconocen.
Las funciones importantes de la Microbiota intestinal se pueden dividir en 3 categorías principales:
 1. funciones protectoras
2. formación y función del sistema inmunitario de las mucosas.
3. funciones metabólicas.

• En el hombre, los antimicrobianos que se administran por vía oral suprimen temporalmente los
componentes sensibles a los fármacos de la flora fecal.
• En el consumo de grandes cantidades de Lactobacilos acidophilus permite el establecimiento temporal
de este microorganismo en el intestino y la supresión parcial concomitante de otra microflora
intestinal.
• La flora anaerobia del colon, incluidos B. fragilis, clostridios y peptoestreptococos, participa en la
formación de los absceso que se originan durante la perforación intestinal.
• La microflora intestinal normalmente es útil para el hospedador.
• En las personas con predisposición genética, algunos componentes de la flora generan enfermedades.
• Se cree que la enfermedad inflamatoria intestinal esta vinculada con la perdida de la tolerancia
inmunitaria a los antígenos bacterianos.

MICROBIOTA NORMAL DE LA URETRA

• La porción anterior de la uretra en ambos sexos contiene un pequeño numero del mismo tipo de
microorganismos encontrados en la piel y perineo.

• La orina de la micción normal contiene aprox. 10² a 104/ ml de estos microorganismos.

MICROBIOTA NORMAL DE LA VAGINA

• Poco después del nacimiento, aparecen lactobacilos aerobios en la vagina y persisten siempre y cuando
el pH permanezca acido.( varias semanas).

• Cuando el pH se neutraliza (permanece así hasta la pubertad) la flora es mixta a base de cocos y
bacilos.

• Durante la pubertad, reaparecen los lactobacilos aerobios y anaerobios en gran cantidad y contribuyen
a mantener el pH acido al producir acido a partir de carbohidratos.
 • Cuando los lactobacilos se suprimen por la administración de antimicrobianos, aumenta el numero de
levaduras u otras bacterias causando irritación e inflamación.

• Después de la menopausia, el numero de lactobacilos disminuye de nuevo y se reestablece una flora

mixta.

• La flora vaginal normal comprende estreptococo del grupo B hasta en 25% de las mujeres en edad de
reproducción.

La flora vaginal normal también comprende:

• con frecuencia estreptococo α hemolítico
• Estreptococos anaerobios
• Especies de prevotella
• Clostridios
• Gardnerella vaginalis
• En ocasiones especies de listeria o mobiluncus.
El moco cervical posee actividad antibacteriana y contiene lisozimas.

MICROBIOTA NORMAL DE LA CONJUNTIVA

Predominan:
• Difteroides, S.epidermidis y estreptococos no hemolíticos.
• También existen Neisseria y bacilos gram- similares a Haemophilus.
• Esta flora normalmente es regulada por la circulación de lagrimas, que contienen lisozimas
antibacterianas.

TEMA 10 - GÉNERO STAPHYLOCOCCUS

Género Staphylococcus
Familia: Micrococcaceae
3 Géneros:
• Staphylococcus (patógeno)
• Micrococcus (no-patógeno)
• Planococcus (habitats marinos)

Staphylo (gr) = racimo de uvas

• Contiene unas 40 especies y muchas subespecies
• Cocos, inmóviles, anaerobios facultativos
• Gram-positivo en racimos
• No forman esporas
• Fermentadores de azúcares sin producir gas.

Propiedades generales
• En este género se encuentran organismos de los más resistentes al stress ambiental de todas las
bacterias no formadoras de esporas.
• Resisten a la deshidratación, son relativamente resistentes al calor y toleran la acción de muchos de los
desinfectantes más comunes.

Colonización
• Aprox. 80% de la población está colonizada por S. aureus (transitoriamente)
• 20-30% está colonizada permanentemente
• Fosas nasales, garganta, perineo, axilas y recto.
• Personal de salud, diabéticos y dializados tienden a estar más colonizados.

Especies patógenas: piogénicas

Manifestación clínica distintiva: un absceso
• Granos, pústulas o forúnculos
• Invasión a tejidos más profundos puede causar:
o Neumonía
o Osteomielitis
o Meningitis
o Artritis
• Intoxicaciones:
o Síndrome del Shock Tóxico
o Intoxicación alimenticia
 • En el trópico: piomiositis (muy común)

S. aureus
Miembro “normal” de la membrana nasal, nasofaringe, piel, perineo, tracto gastrointestinal y genital.

Causante de:
Forúnculos, carbúnculos, impétigo, necrólisis epidérmica tóxica, neumonía, osteomielitis, meningitis,
endocarditis, mastitis, bacteremia, abscesos, enterocolitis, infección urogenital, síndrome del shock tóxico.

Staphylococcus aureus: principal especie patógena

• Forma colonias amarillentas en la mayoría de medios de cultivo.
• Pigmento: beta-caroteno

Componentes y Productos:
Cápsula

 La mayoría de estafilococos producen microcápsulas.

 Se han identificado 11 tipos
o Tipo 5 y tipo 8 (75% de infecciones humanas)
o Tipo 5: S. aureus meticilino-resistentes
 Todos los tipos son químicamente relacionados
Proteínas de Superficie
• Proteína A
o Adhesina
o Antifagocítica
o Pro-inflamatoria (neumonía)
• Componentes de superficie microbiana que reconocen moléculas adhesivas de la matriz extracelular
(MSCRAMM)
o en la colonización en el tejido del hospedero.

Fisiopatología
• Toxinas alfa, beta, gamma y delta
• Exfoliatina
• Enterotoxinas
• TSST-1 Síndrome del shock toxico
• PVL: piel necrótica, neumonía y osteomielitis
Componentes y Productos:
Toxinas
Citotoxinas
• Formadoras de poros (daño celular) Toxinas pirogénicas
Toxinas pirogenicas
• Liberación de citocinas de la respuesta inmune.
Enterotoxinas A y E
• Intoxicación alimenticia y TSS-1
• Resistentes al calor (100ºC/30 min)
• Producción favorecida en flanes, leche cruda, crema, helado, salsas, pescado.
Toxinas exfoliativas (epidermolíticas)
• A y B: causan eritema y separación
• Leucocidina (toxina leucocitolítica) Panton-Valentine leukocidin
o Asociada con infecciones pulmonares y piel necrótica

Enzimas
• Proteolíticas: facilitan la diseminación al tejido adyacente
o Hialuronidasa, proteasa y lipasa.
• Beta-lactamasa: inactiva a la penicilina
• Coagulasa: factor activador de protrombina
o Convierte al fibrinógeno en fibrina
• Catalasa
o Inactiva el peróxido de hidrógeno que producen los fagocitos
• Hemolisinas

HEMOLISINAS
• Hemolisinas:
a, b, g, d
• Todas tienen características antigénicas distintas
• Casi todas las cepas de S. aureus producen una o una combinación de
hemolisinas.
• a : se une al receptor en la célula del hospedero y causa lisis osmótica
• b : esfingomielinasa*
o Degrada membranas con esfingomielina
o La mayoría de S. aureus no produce esta hemolisina
• d : péptido pequeño con papel desconocido
PATOGENICIDAD
• Botriomicosis: reacción granulomatosa supurativa
• Infecciones supurativas
• Septicemia
• Pioderma
• Mastitis
• Infecciones urinarias
• Enterocolitis
• Neumonía, amigdalitis

PUERTAS DE ENTRADA
• Folículo piloso
• Rasguño o cortada
• Punción con aguja
• Herida quirúrgica /suturas
• Tracto respiratorio
• Tracto GI

BOTRIOMICOSIS
Lesión solitaria o como unas pocas lesiones que suelen producirse en el área de los genitales y, a veces, en la
cara y el tronco.
En la mayor parte de los casos, el factor desencadenante es un cuerpo extraño como una espina de pescado,
una astilla, etc.

Celulitis
• Inflamación de las células
• Indica diseminación aguda de la infección en la dermis y tejido subcutáneo con dolor, eritema y calor.

Enfermedad exfoliante de la piel

Varios síndromes
• Ritter’s (pénfigo neonatorum)
o Dermatitis exfoliativa generalizada en el r.n.
• Necrólisis epidérmica tóxica en niños y ocasionalmente adultos
• Impétigo buloso y escarlatina estafilocócica
• Síndrome de la piel escaldada
• La exfoliatina hidroliza la desmogleína 1 y altera las uniones con los desmosomas.
Síndrome del shock tóxico (SST)
• Inicio repentino de fiebre, escalofríos, vómitos, diarrea, dolores musculares y erupción en la piel.
• Rápido progreso a hipotensión severa y disfunción multisistémica por hiperestimulación inmune
• Descamación, especialmente en las palmas y plantas de los pies.
o Descamación de las capas externas de la piel
o Puede ocurrir 1-2 semanas después de que se establece la enfermedad
• Asociado al uso de tampones y dispositivos intravaginales contraceptivos
• También ocurre como complicación de abscesos de piel o cirugía.
• Grupos de riesgo
o Mujeres menstruando
o Mujeres usando contraceptivos de barrera
o Individuos sometidos a cirugía nasal
o Individuos con infección de heridas postoperatorias

Intoxicación alimenticia por S. aureus

• Alimentos: carnes, productos cárnicos, huevos y especialmente ensaladas a base de mayonesa… leche
cruda (infección de la ubre)

• Causada por una enterotoxina termo-estable La comida es cocinada, las bacterias se mueren y aún
provoca enfermedad…

• Considerada la forma más común de intoxicación alimenticia (probablemente sub-registrada)

Estafilococos coagulasa negativa

Producen un expolisacárido (slime) que promueve la adherencia de cuerpo extraño y resistencia a la
fagocitosis

Patogenicidad de S. epidermidis
Implicada en implantes de cirugía plástica
o Las células pueden unirse a la fibronectina (depositada por el hospedero sobre los implantes)
o Las células pueden producir una especie de película sobre el implante – no un glicocálix sino un
ácido teicoico secretado.

Patogenicidad de S. saprophyticus
-coagulasa negativa
-Infección urinaria
Aislamiento, Cultivo e Identificación
• Muestras: pus (hisopados), secreción, tejidos dañados, productos lácteos.
• Medios de cultivo comunes: agar sangre
• Incubación de 24 horas:
o Colonias redondas, lisas, lustrosas, pigmentación dorada.
o Gram positivos, racimos
o Hemólisis
• Identificación definitiva: o coagulasa positiva
o Fermentación de manitol

TRATAMIENTO
• OXACILINA
• NAFCILINA
• VANCOMICINA
• CEFAZOLINA
• LINCOMICINA
• CLINDAMICINA
• DICLOXACILINA
• TSX
• MINOCICLINA

Susceptibilidad antimicrobiana Emergencia de cepas resistentes

• Principal problema: emergencia de cepas multirresistentes (MRS) de estafilococos.
• La mayoría de estafilococos son ahora penicilino-resistentes
• Cepas MRs responsables de brotes nosocomiales de SST
• Algunas cepas ahora oxacilino-resistentes
• Único antibiótico de elección = vancomicina

Resistencia a antibióticos
• Cepas de S. aureus aisladas en hospitales son resistentes a antibióticos
• Existen cepas resistentes a todos los antibióticos usados comúnmente
• La Vancomicina es una alternativa
o Se ha documentado resistencia a Vancomicin (VRSA)
• Opciones: linezolida, rifampicina, trimetoprimsulfa.
• S. aureus meticilino-resistente
o MRSA
 Meticilina fue desarrollada a finales de los 50s
 MRSA fueron identificados en 1961
 No se usa más clínicamente
• Incremento de MRSA
o 1974 → 2% de las infecciones estafilocócicas
o 1995 → aumentó a 22%
o 2004 → 63%
o 2010 → ??
• MRSA transmitido principalmente a pacientes vía manos de trabajadores de salud
• Todos los trabajadores de salud deben lavar sus manos con agua y jabón o usar un sanitizador con base
de alcohol.
TEMA 11 - STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
• Cocos lanceolados Gram (+).
• Disposición en diplos o cadenas cortas.
• Presentan cápsula (polisacárido)= virulencia.
• Sensible a optoquina y es lisado por sales biliares.
• Alfa hemolítico (hemolisis parcial = verde)
• Requieren 10% CO2 para crecer.
• Se encuentran en nasofaringe (5-40%) sanos
• Sensibles a penicilina y eritromicina.
• Cápsula es inmunogénica – 83 tipos distintos.
• Cultivos con la edad se tornan gram negativos
• Sensibles a la optaquina, S. virdans no
• Se multiplica en los tejidos, no produce toxinas significativas, virulencioa en función de la capsula que
evita o retarda la fagocitosis

Streptococcus pneumoniae-pared
Características generales
• Son habitantes normales de las vías respiratorias superiores en 5 a 40% de los humanos
• Pueden causar neumonía, sinusitis, otitis, bronquitis, bacteremia, meningitis
Estructura Antigénica
• La porción somática del neumococo contiene una proteína M característica para cada tipo y un
carbohidrato común a todos los neumococos
TRATAMIENTO
• La penicilina G es el fármaco de elección

ANTIGENO DE LA PARED CELULAR especifico de grupo

Carbohidrato que se encuentra en la pared celular y constituye la base de los grupos serologicos (grupos de
Lancefield A-U, K-U) Centrifugacion de los cultivos, extraccion acido clorhidrico caliente, acido nitroso,
formamida, lisis enzimatica de m. estrept. con pepsina o tripsina o 15 lb de presion durante 15 min.

S. pneumoniae………
• 5 al 10% adultos portadores en algún momento (causa principal de neumonía extrahospitalaria)
• 60 % en poblaciones cerradas.
• Lactantes son colonizados(3-4m).
• IncidenciaMaxima de colonizacion 40% (2-3a).

• 84 serotipos (según polisacárido capsular)

o Adultos tipos 1 - 8 (75% neumonías)
o Niños tipos 6, 14, 19, 23 infecciones en general
• Gran resistencia de mucosa respiratoria

Factores predisponentes
• Infecciones graves por envejecimiento del sistema inmunitario.Ac nulos.
• Depuracion mucociliar comprometida.
• Enf.cronicas subyacentes
• Diabetes
• Tasa de ataque Raza Negra > raza blanca.
• Desnutrición
• Debilidad general
• Anomalías respiratorias EPOC o CA broncogeno
• Alcoholismo
• Otros: inmunodeficiencias, déficit Complemento, trastornos circulatorios, nefrosis, sicklemia,
intoxicación medicamentosa
DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
Diagnóstico de laboratorio (neumococo)

 Hemocultivo
 Esputo: abundantes polimorfonucleares, ausencia células epiteliales presencia diplococos
lanceolados
 Pus senos perinasales
 Líquido pleural
 Exudado ótico
• Examen microscópico de frotis: organismos típicos
• Cultivo: agar sangre 5-10% CO2: colonias típicas y tipo de hemólisis
• Pruebas presuntivas: optoquina y solubilidad en bilis
• Serotipaje: basado en polisacárido capsular
• Inyección intraperitoneal esputo en ratones
ENTEROCOCCUS
Género: Enterococcus
Estreptococcus del grupo D
Enterococcus (Kalina 1970)
Enterococcus (Schleifer 1984)
Enterococcus faecalis
Enterococcus faecium
(Incluye 12 especies)

Enterococcus TAXONOMIA
• Estreptococcus del grupo D
• Residentes normales del tubo digestivo.
• Alta Resistencia  2da causa de IIH.
• Se transmiten por las manos del personal hosp.
• Las especies más importantes son:
.E.faecalis---80-90% enf. humanos.
.E.faecium---10-15% enf. Humanos.

E. Faecalis Adquisicion endogena

• Endogenos, poco virulentos.

Adquisicion exogena
Enterococcus exogenos = clones
• Resistentes al medio ambiente
• Colonizan e invaden tejidos
• Reemplazan flora microbiana (uso ATB)
• Transfieren plasmidos a enterococcus endogenos
Factores de virulencia
• Produce citolisina/hemolisina
• Sustancia de agregacionfacilita intercambio de los plasmidos, facilita adherencia a c intestinales y
renales
• 40 %Poseen ESP (extracelular surface protein)
• Acidos lipoteicoicos constituyen el Ag del grupo D induce > virulencia y formacion de TNF e Interferon.
• 50-65% produce cocolisina (Metalopeptidasa extracelular) que inactiva a la endotelina
(peptidovasoactivo).
Importancia clinica
• Infecciones urinarias complicadas. (cistitis, pielonefritis, prostatitis, absc).
• Bacteriemia, endocarditis, infecciones intraabdominales y pelvianas
• IHO, sepsis neonatal. La mayoria IIH.

STREPTOCOCCUS Agalactiae
Estreptococcus ß hemolitico del grupo B S. Agalactiae
• El Ag del grupo B de Lancefield, contiene un polimero de ramnosa glucosamina fijo a la capa de
peptidoglicano.
• Causa importante de enfermedad neonatal y perinatal.
• 10-35 %de mujeres colonizadas en vagina y recto (col. vaginal asintomática)

S. Agalactiae….
La enfermedad Neonatal:
. Inicio Temprano Inc. 0.7 a 3.7 en 1000 nacidos vivos.
. Inicio tardio Inc. 0.5 en 1000 a 1.8 en 1000 nacidos vivos (clinicamente evidente entre 7 d y 3m).
Bacteriemia por meningitis asociada es la forma clinica predominante. A mediados del 1980 se redujo la tasa
de mortalidad al 15%.
En 1996 el CDC hicieron recomendaciones sobre el cultivo.

Protocolo para cultivo de S. Agalactiae

• Hisopados vaginales y rectales en caldo de Tood Hewithcon 10u/ml de ácido nalidixico, 15u/ml de
colistina y 10mgr de extracto de levadura. (incubar 18 -24 HRS. SUBCULTIVAR EN AGAR
SANGRE DE CARNERO.
• IDENTIFICACION BQM CON hidrolisis del hipurato, prueba CAMP. Serologia Coa, o aglutinacion de
latex.