Tema 3

Bases Moleculares de la Adaptación al Medio Marino.
2020-2021
. Fuencisla San Juan
Tema 3. Adaptación de las Enzimas a las

necesidades metabólicas
Bases Moleculares de la Adaptación al Medio Marino
1. Necesidad del control metabólico

Todos los seres vivos luchan por mantenerse vivos, mantener la homeostasis y optimizar
su crecimiento y reproducción ante cambios continuos en el medio interno y externo.
Una célula lleva a cabo miles de reacciones simultáneamente y cada secuencia está
controlada para que no se acumulen ni falten intermediarios o productos.
La actividad de las enzimas debe ser controlada en todos los organismos in vivo, ya que sin
este control todos los procesos tenderían al equilibrio con su entorno (aumentando la
entropía del sistema).
Ej. - no se podría almacenar glucógeno como reserva

energética, ya que hay una enzima (GP) que cataliza su
degradación a glucosa, que posteriormente se oxidaría a
CO2 + H2O.
- la existencia de depósitos de glucógeno implica que la
GP está regulada y sólo actúa cuando es necesario
degradar glucógeno.
- hay diversos mecanismos que permiten modificar la
velocidad de degradación del glucógeno en varios
órdenes de magnitud bajo diferentes circunstancias.
La mayoría de las funciones fisiológicas y moleculares son la suma de muchos procesos

individuales unidos en una secuencia.
Incluso si se precisan grandes cambios de flujo, las concentraciones de los intermediarios
de la ruta se modifican poco.
Por tanto, todas las reacciones deben estar reguladas y coordinadas entre sí.
REPOSO EJERCICIO INTENSO

REPOSO EJERCICIO INTENSO
1.1. Tipos de enzimas por su función en el metabolismo

Podemos distinguir 3 tipos de enzimas:
1. Enzimas clave:
- en el inicio de un proceso metabólico
- sensibles a señales y mecanismos “on-off”
- altamente reguladas (diversos mecanismos)
Ej. Glucógeno fosforilasa
2. Enzimas de puntos de ramificación:

Glucógeno
- situadas en los puntos de ramificación de una ruta
metabólica Glucolisis
- su actividad es determinada por las necesidades
celulares del momento
- hacen variar el flujo metabólico hacia una u otra
rama de la ruta
Ej. Glucosa-6-P DH
Ruta de las pentosas-fosfato
3. Catalizadores altamente eficaces:

- sin poseer en sí propiedades reguladoras
Ej. Fosfogluco mutasa

Estos tres tipos de enzimas deben estar coordinadas entre sí y con las necesidades del
organismo:
- la maquinaria metabólica de las células de un órgano o tejido debe ser sensible a señales externas, de
forma que las rutas activas y sus velocidades sean las apropiadas en un momento determinado
- las necesidades metabólicas varían en los diferentes estadios de desarrollo, con las diferentes situaciones
ambientales y con la función de tejidos y órganos diferentes
- enzimas y rutas metabólicas completas no son necesarias constantemente, por lo que su síntesis y actividad
deben ser controlados
La regulación de la velocidad, dirección y funcionamiento de las diferentes rutas

metabólicas, para que sean las adecuadas en cada momento y circunstancia, constituye
uno de los niveles fundamentales de la Adaptación Bioquímica:
- Control de la concentración de enzima
REGULACIÓN ENZIMÁTICA
- Control de la actividad enzimática
- la cantidad de enzima puede modificarse en respuesta a cambios en el entorno (ej. los nutrientes). Es una
regulación a largo plazo
- la actividad de las enzimas presentes se puede modificar para permitir una respuesta rápida a cambios en las
condiciones
La actividad potencial de las enzimas en las células se establece

por un equilibrio entre la síntesis y la degradación pero su
actividad necesita un control más preciso espacial y temporal.
2. Control de la concentración de enzima

La necesidad de una determinada proteína varía con:
- estado de desarrollo
- estado fisiológico
- condiciones nutricionales y ambientales
- la especialización y diferenciación tisular
La concentración de una proteína supone un equilibrio entre su síntesis y degradación
- transcripcional
La síntesis de proteínas es regulada a distintos niveles: - traduccional - ensamblaje
- postraduccional
- activación
Los sitemas de regulación difieren en procariotas y eucariotas
1. Regulación Transcripcional
La tasa de síntesis de una enzima es regulada, normalmente por mecanismos genéticos

que actúan a nivel de la transcripción, sintetizándose en cada momento sólo las que se
necesitan y bloqueando la transcripción de las que no necesitan.
La unidad de transcripción de un gen consta de 3 regiones: promotora, estructural

codificante y de terminación
región codificante
región promotora región terminación
Los genes pueden ser:

• constitutivos ("housekeeping"): se expresan cte en prácticamente todas las células
de una especie u organismo, no regulada (expresión génica constitutiva)
• inducibles: la expresión aumenta en respuesta a señales moleculares (inducción)
• reprimibles: la expresión disminuye en respuesta a señales moleculares (represión)
Economía metabólica: las enzimas inducibles sólo se sintetizan si se necesitan

La transcripción es mediada y regulada mediante unión de proteínas represoras o

activadoras a secuencias específicas del ADN:
• bloqueando la transcripción regulación negativa
• unión y actividad de RNA polimerasa regulación positiva.
La unión del represor y activador al ADN es regulada por la unión de una pequeña
molécula señal que induce un cambio conformacional en represor y activador que:
• origina su disociación del ADN (a, c)
• provoca su unión al DNA (b, d)
a) c)
b) d)
a) Regulación de la transcripción en procariotas

Regulación coordinada de varios enzimas de una ruta metabólica, codificados por un
mRNA policistrónico
Modelo del OPERÓN de F. Jacob y J. L. Monod (Nobel, 1965) Para explicar el control
transcripcional en procariotas
En cada operón se diferencian dos clases de genes:

- genes estructurales (E): codifican 1 ó más cadenas polipeptídicas de la molécula enzimática
- gen regulador (R): codifica “proteína represora” (PR), que es el agente que controla la expresión
y dos subregiones en la región promotora que intervienen en la regulación:

- promotor (P): donde se une la ARN-polimerasa que va a transcribir el gen
- gen operador (O): que posee una secuencia que es reconocida por la proteína represora
Ej. operón lac: regulación negativa e inducible

regula la síntesis de enzimas del metabolismo de lactosa
1. Elemento de regulación negativa: Represor Lac (sensible a los niveles de lactosa)
- la proteína represora se une al operador impidiendo el avance de la ARN-polimerasa y la
transcripción a ARNm se interrumpe: represión génica
- moléculas pequeñas (INDUCTORES) bloquean al represor impidiendo su unión al operador y

permitiendo la transcripción y la síntesis de las enzimas que estaban reprimidas.
2. Elemento de regulación positiva: PAC (sensible a los niveles de glucosa)

- Mantiene reprimidos los genes implicados en el catabolismo de lactosa y otros azúcares en
presencia de glucosa
- PAC (proteína activadora activada por catabolitos), capaz de ligar AMPc
a)
b)
- El promotor del operón lac es débil y cuando hay lactosa y glucosa, la RNA-polimerasa
tiene dificultades para reconocerlo y se sintetiza poco mRNA (a)
- Cuando disminuye la glucosa, ↑cAMP que se une a la CAP, el complejo CAP-cAMP activa la
unión de la RNA-polimerasa al promotor aumentando la transcripción (b)
En algunos casos la transcripción de los genes estructurales es regulada por los

productos finales de la vía metabólica, que actúan como CORREPRESORES
Ej. operón Trp: regulación negativa y reprimible

regula la síntesis de enzimas que intervienen en la síntesis de triptófano
1. Elemento de regulación negativa: Represor-Correpresor

2. Atenuación de la transcripción
- proceso para ajustar la velocidad de la transcripción y síntesis de Trp
- responde a la [tRNA-trp] en lugar de a la [Trp] e interrumpe la transcripción una vez
iniciada antes de que la RNA polimerasa transcriba los genes estructurales
- es posible porque en procariotas (carecen de núcleo) los ribosomas empiezan traducir
el ARNm mientras la polimerasa todavía está transcribiendo la secuencia de ADN.
- responde a diferentes [Trp] variando la velocidad de síntesis ∼700 veces.

b) Regulación de la transcripción en eucariotas

- El acceso a los promotores está restringido por la estructura de la cromatina
- Predominan los mecanismos de regulación positiva
- Presentan proteínas reguladoras multiméricas máss grandes y complejas (factores de transcripción)
- La transcripción está separada de la traducción en el espacio y el tiempo
1. Condensación de la cromatina
- condensación del ADN superior a 10 nm impiden la unión de
los ft y RNA-polimerasa al ADN eucromatina
- la cromatina tiene que estar en forma de eucromatina

(cromatina activa)
- el empaquetamiento de la cromatina es controlado por
modificación covalente de las histonas: acetilación residuos Lys
heterocromatina
reduce el número de ⊕
debilita unión al DNA
Grado de acetilación bajo: Grado de acetilación alto:

Cromatina más condensada Cromatina menos condensada
transcripcionalmente inactiva. transcripcionalmente activa.
Los genes no se expresan. Los genes se expresan.
2. Señales epigenéticas
- el marcador epigenético mejor conocido es la metilación del DNA
- la metilación de las regiones promotoras reprime la expresión de los genes
- se produce en dinucleótidos CG (CpG, siendo “p” el enlace fosfato entre ambos nucleótidos)
Transcripción activa Transcripción inactiva
TF X X
RNA-pol
MeCP1,
MeCP2
Promotor Promotor Promotor
- genes con islotes CpG del promotor no metilados o hipometilados: transcripción activa
- genes con islotes CpG del promotor metilados (o hipermetilados): bloqueo de la transcripción
- mecanismos del bloqueo de la transcripción por metilación:
a) algún TF no se une al DNA metilado
b) reconocimiento del DNA metilado por “metil CpG binding proteins” (MeCP1,
MeCP2) que impiden la unión de los TF o bloquean el avance de la RNA-pol
c) MeCP1 y MeCP2 unidas a enzimas que modifican las histonas impidiendo
que el DNA se relaje.
- En eucariotas la región promotora es reconocida por los

factores de transcripción en lugar de por la RNA-
polimerasa
- Los factores de transcripción generales y proximales son

activos en todas las células y contribuyen a la expresión de
los genes constitutivos:
- Los factores de transcripción inducibles reconocen las
regiones promotoras distales
- Proteínas coactivadoras que no se unen al DNA

- Actúan enlazando factores de transcripción y la RNA-
polimerasa para formar el complejo de inicio de la
transcripción.
Ej. Factor de transcripción inducible por hipoxia (HIF-1)
- es una proteina compuesta por 2 subunidades: HIF-1a y HIF-1b

- en Normoxia, la HIF-1a se degrada por hidroxilación
- en hipoxia, la HIF-1a no se degrada y se une a la HIF-1b (HIF-1)
- HIF-1 activa dos clases de genes:
de proteínas que incrementen la liberación de O2 en tejidos
de proteínas que aumentan síntesis de ATP en anaerobiosis
- Otros factores de transcripción inducibles responden a estímulos externos

- Regulan la expresión génica en respuesta a diversas señales (hormonas, iones metálicos…):
activan la transcripción (potenciadores, activadores, intensificadores, amplificadores )
inhiben la transcripciónreducirla (silenciadores o inhibidores).
a) - hormonas lipofílicas atraviesan la membrana plasmática e

interaccionan con receptores citosólicos o nucleares actuando
como factores de transcripción
- se unen a secuencias promotoras activando la transcripción
de los genes que tienen estas secuencias en su promotor.
b) - hormonas hidrofílicas interaccionar con receptores de membrana

- activa la adenilato ciclasa, aumentando la síntesis de AMPc
- AMPc activa proteinquinasas (PKA)
- una de estas quinasas fosforila un factor de transcripción
denominado CREB, que se une a secuencias promotoras
actvivando la transcripción de determinados genes.
TRANSCRITO: molécula de RNA recién sintetizada
La mayoría de los transcritos de procariotas y eucariotas son

modificadoss después de su síntesis (maduración)
Maduración de rRNAs y tRNAs:

- eliminación de secuencias de extremos (corte)
- por eliminación de intrones (corte y empalme).
- también se modifican ciertas bases
Las etapas del proceso de maduración son reguladas, modificando

la velocidad o la eficacia de las reacciones de maduración
Maduración de mRNA de eucariotas:

- adición de casquete en el extremo 5'
- corte y empalme (splicing, ayuste) para eliminar intrones y unir exones (mediado por spliceosoma)
(la eliminación de intrones se produce durante la síntesis del RNA)
- adición de polímero de 200 a 250 adenilatos en el extremo 3‘, cola poli(A)
Espliceosoma: complejo formado por

La Cap es un nucleótido modificado: proteínas y RNAs, que elimina intrones Cola poli A
7-metil-guanosina, unido mediante un
enlace 5'- 5‘ trifosfato al extremo 5’.
CBC: complejo de
unión al casquete
A veces un mismo pre-RNA madura por distintas vías dependiendo de la célula considerada
A veces hay varias señales de poliadenilación o se realiza un splicing alternativo.
Ventajas:
A partir de un único gen se forman

distintos mRNAs que darán lugar a
diferentes proteínas adaptadas a las
necesidades de un tejido o de una
situación fisiológica determinada .
c) transporte al citoplasma y degradación del RNA

En eucariotas, los RNAs se sintetizan en el núcleo
Necesario transporte al citoplasma para la síntesis de proteínas
El transporte de tRNAs, rRNAs y mRNAs se produce a través de los poros nucleares
El transporte del mRNA es un punto clave de control
(≈ el 5% de los mRNAs sintetizados se translocan desde el núcleo al citoplasma)
Los mRNA que no se traducen tienen funciones reguladoras de la

expresión génica:
snRNA: - RNA nuclear pequeño (small nuclear RNA)

- participa en el procesamiento del RNA
Micro RNA: - 21 nucleótidos

- se une al RNAm inhibiendo su traducción (ribointerferencia)
siRNA: - RNA pequeños de interferencia (ribointerferencia)

- se unen al RNAm promoviendo su degradación
rnRNA: - RNA pequeño que forma parte de ribonucleoproteína

- dirige a las proteínas sintetizadas a su destino en la célula
lncRNA: - RNA largo no codificante (>200pb)

- oncogénesis, diferenciación celular, regulación ciclo celular…
Los mRNAs inestables codifican proteínas reguladoras de la transcripción, factores de crecimiento,

cuyos niveles han de cambiar rápidamente en las células.
De la estabilidad del mRNA en el citosol (10h-30min) depende la cantidad de proteína producida

Determinada por la velocidad de: - síntesis
- maduración
- transporte al citosol
- degradaciçon
En eucariotas: la vida media del mRNA 10 veces > procariotas
acortamiento gradual de la cola de poli-A (200 a 250 adenilatos)
(exonucleasa que va degradando a cola en dirección 3’a 5’)
AUG AAUAAA AAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
AUG AAUAAA AAAAAAAAAAAA
Exonucleasa 5’-3’ Exonucleasa 3’-5’
AUG AAUAAA
Resumiendo: - el control genético a nivel de la transcripción conduce a ↑ o ↓ cantidad enzima

- cambios en los tipos de enzimas
- Ventaja: control altamente específico y versátil
- Desventaja: proceso lento
(se necesitan horas para que una señal, inductora o represora, muestre su efecto a nivel de la [E])
2. Regulación Traduccional
Regulación en distintos momentos del proceso:

• activación de los aa: aminoacil-tRNA (aminoacil-tRNA sintetasa)
• velocidad de lectura del mRNA: peptidil transferasa; factores de elongación; translocasas
• unión mRNA-subunidad ribosómica (40S): principal control
• formación complejo ribosómico: unión a la subunidad 40S de los factores de iniciación
1. Modificación de la actividad de los factores de iniciación eIF-2 y eIF-4E

por modulación covalente (fosforilación-desfosforilación)
Ayuno, infecciones víricas, estrés ⇒ activan proteinquinasas que fosforilan eIF-2 y el eIF-4E
 el eIF2-GTP impulsa la unión de los tRNA a los ribosomas mediante la hidrólisis de GTP
- eIF2-GDP forma un complejo con eIF2B

- fosforilación del GDP a GTP
- liberación de la subunidad eIF2B
- eIF2-GTP para iniciar de nuevo la traducción
eIF2 fosforilado inhibe el intercambio GDP→GTP
bloquea síntesis de proteínas
 eIF4E reconoce la CAP (7-metilguanosintrifosfato) 5' del RNAm mensajero y lo une al ribosoma
eIF4E fosforilado aumenta la afinidad por el mRNA estimula traducción
La unión de proteínas 4E-BP al eIF-4E interrumpe la interacción con eIF-4G bloquea traducción
Regulación 4E-BP por fosforilación-desfosforilación:

factores de crecimiento, insulina ⇒ fosforilación de las 4E-BP
impidiendo su unión al eIF-4E y desbloquea traducción
ayuno, estrés ⇒ activan fosfatasas que desfosforilan las 4E-BP

se pueden asociar a eIF-4E y bloquea la traducción
2. Unión de proteínas represoras al mRNA (represores traduccionales)
3. Selección de mRNAs que son traducidos
Los mRNAs se pueden acumular y su traducción sólo se activa ante determinadas señales
Estos procesos están regulados por proteínas que se asocian con los mRNAs impidiendo su traducción
Ej. síntesis de ferritina por bloqueo del mRNA:
- almacena Fe para la biosíntesis de otras proteínas
- protege a la célula contra la toxicidad del Fe libre
- solo debe sintetizarse cuando hay hierro libre
, la proteína IRP se une al mRNA en la región 5’ y bloquea el inicio de la traducción
, la proteína IRP modifica su estructura y NO une mRNA y se inicia la traducción

El polipéptido formado debe:

- llegar a su destino
- plegarse a su configuración funcional (nativa)
- sufrir modificaciones químicas
modificaciones postraduccionales (mediante mecanismos enzimáticos o no enzimáticos)
La regulación a este nivel: velocidad a la que la cadena polipeptídica alcanza su estructura activa
Sólo desnaturalizadas pueden las proteínas atravesar las membranas de los orgánulos
Una vez en su destino celular, deben adquirir los niveles 3º y 4º de estructuración
El plegamiento de las proteínas está bajo el control de otras moléculas proteicas:

“proteínas de plegamiento, chaperonas y chaperoninas”
Estas proteínas son inducibles por factores de estrés que conllevan el mál plegamiento, interacciones
no deseadas entre macromoléculas y desnaturalización de las proteínas (proteínas de estrés)
Las más conocidas son las chaperonas HSP60 y HSP70 (Heath Shock Protein) y las chaperoninas I (de
procariotas y orgánulos eucariotas) y II (de arqueobacterias y citosol de eucariotas)
Los residuos hidrofóbicos de las

chaperonas interaccionan con los regiones
hidrofóbicas del péptido favoreciendo el
plegamiento
Aceleran el plegamiento, evitando la formación de agregados proteicos

Modificaciones postraducionales
- modificaciones covalentes después de su síntesis para su activación, regulación de su actividad o
situación en la célula
- aminoácidos que no se suelen modificar: Gly, Ala (pequeños), Leu, Ile, Val o Trp (hidrófobos)
Se han descrito más de 100 modificaciones postraducionales

Ejs.:
- Glucosilación: reconocimiento de otras moléculas
- Incorporación covalente de coenzimas:

biotina en la acetil-CoA carboxilasa
grupo hemo del citocromos
Fosforilación (reversible):
mecanismo rápido de activación/desactivación (Quinasas/Fosfatasas)
- Adenilación y uridilación (reversibles): - Metilación (reversible): por ej. metilación de histonas
- Acetilación (reversible): - Carboxilación:
- Adicción de a.grasos: proteínas de membrana - Proteolisis parcial (activación de zimógenos)

Degradación y reciclaje de proteínas
- existen 2 tipos de proteasas intracelulares:

• lisosomales
• no lisosomales
Proteasas lisosomales: catepsinas
- actúan sobre vesículas autofágicas formadas por el

RE liso: autofagosomas
- fusión autofagosoma-lisosomas: fagolisosoma, que
digiere el contenido del autofagosoma
actúa regulando la cantidad de proteínas

acción constante en el tiempo
Proteasas NO lisosomales
- se conocen tres tipos:

- calpaínas: activadas por Ca+2
- caspasas: cisteín proteasas
- proteosoma
Proteasoma
- dependiente de ATP
- actividades: quimiotripsina
tripsina
ATPasa
Para su degradación, las proteínas constitutivas son generalmente modificadas

Señales químicas para el recambio de reconocimiento:
- Ubiquitinización: unión covalente de varias moléculas de ubiquitina
- proteína 76 aa, altamnte conservada

- activación ubiquitina (gasto ATP)
- Oxidación de resíduos aminoácidicos
- Secuencia PEST: proteínas de vida corta presentan secuencias de 12-60 aa con abundantes
resíduos de prolina, glutamato, serina y treonina (PEST)
- Aminoácido N-terminal: - vida media de las proteínas varía en función del resíduo N-termonal
- Phe, Leu, Tyr, Trp, Lys o Arg en proteínas de vida corta
3. Control de la actividad enzimática

La función enzimática es inseparable de su estructura
La unión a sus sustratos y coenzimas depende de que los residuos aa

reactivos de la enzima se encuentren dispuestos de forma correcta
1. Configuración reactiva y estado de transición

La unión ES provoca un cambio conformacional en la enzima
cambio conformacional de la hexoquinasa

inducido por la unión de glucosa
La enzima adquiere así una “configuración reactiva”

o “estado de transición” en la que la Energía de
activación de la reacción disminuye
una vez transformado el sustrato se produce la

disociaciónde los productos
aumnetando la velocidad a la que se produce la

reacción
2. Cinética enzimática
Las reacciones más sencillas catalizadas enzimáticamente pueden ser descritas por varias etapas:
E+S ES ES++ EP E+P
Las velocidad de este tipo de reacciones depende de : - [E]

- [S]
La V inicial de la reacción:
- es directamente proporcional a la [E]
- sigue, generalmente, cinética de saturación respecto a [S]
In vivo: [E] velocidad de reacción
• [S] V aumenta linealmente respecto a [S]

(orden = 1)
• [S] V aumenta más despacio que la [S]
(orden <1)
• Hasta una [S] V alcanza un valor límite: Vmax
(orden = 0)
La relación entre [S] y V viene descrita por la ecuación de Michaelis Menten:
Cálculo: Linearización (Linewever-Burk)
Definición de Km (constante de Michaelis-Menten): “[S] a la que la V = ½ Vmax”
Depende de la afinidad de la enzima por su sustrato:

- Cuanto mayor es la afinidad de la enzima por el sustrato, menor Km
- El valor de Km es independiente de la [E]
a) Relación de Km y [S]: Significado funcional
1. Estudios comparativos de enzimas michaelianas revelan que in vivo [S] ≤ Km

Razones
en el entorno de la Km: - pequeños cambios en la [S] cambios grandes en la V de reacción
- pequeños cambios del valor de Km cambios grandes en la V de reacción
Forma de regulación de enzimas de puntos de ramificación y puntos medios de rutas metabólicas
2. Las afinidades de las enzimas de una ruta son interdependientes

- tienen que estar coordinadas para trabajar al mismo ritmo
- una mutación que suponga ↑ ó ↓ de la afinidad de una enzima por su sustrato
- acumulación de un determinado metabolito (tóxico)
- disminución de otro imprescindible para una determinada función
Km de enzimas homólogos (distintos organismos) varía en el mismo rango y orden de magnitud
UI/g tejido
3. Necesidad de isoenzimas (25ºC)
- distintos tejidos presentan necesidades

metabólicas diferentes
Necesidad de diferentes formas enzimáticas que
catalicen la misma reacción con características
cinéticas adecuadas a las necesidades metabólicas
concretas de cada tejido
b) Regulación de la actividad enzimática

Coordinación y regulación necesaria de la eficiencia de las enzimas individuales
Su actividad debe ajustarse a la disponibilidad de sustratos, utilización de productos y
necesidades generales de la célula.
• control a nivel de sustrato • control por retroinhibición
• regulación alostérica • modificación covalente • rotura proteolítica

¿Cómo se ajusta el flujo de sustratos a productos en cada etapa de una ruta metabólica?
Depende del tipo de enzima:
Enzimas próximas al equilibrio:

- la velocidad máxima produce cambios mínimos en la relación de [S]/[P]
- se necesitan altas [E] para producir cambios en la velocidad
Ej. Fosfoglicerato-mutasa: 2PGA ↔ 3PGA
Enzimas alostéricas (muy alejadas del equilibrio)

- los moduladores + y – cambian drásticamente la relación [S]/[P]
- [E] bajas producen grandes cambios en la velocidad
Ej. Fosfofructo-quinasa: F6P + ATP → FBP + ADP
Enzimas moduladas covalentemente (operan lejos del equilibrio)

- en casos extremos se encuentran en estados “on” y “off”.
- velocidad se modifica por cambios en el número centros catalíticos activos
- [E] bajas producen grandes cambios en la velocidad.
Ej. Piruvato-deshidrogenasa: Pyr + NAD + CoA → Acetil-CoA +C O2+ NADH

c) Eficacia de las enzimas michaelianas como estabilizadores de las

fluctuaciones de la [S]
La mayoría de las enzimas de una ruta metabolica presentan una cinética michaeliana y operan en
condiciones cercanas al equilibrio
Estas enzimas suelen encontrarse en grandes cantidades y/o tener Kcat muy elevadas para poder
alcanzar la velocidad de flujo requerida in vivo
La homeostasis es consecuencia de la estabilización de las [S] y [P] mediante cambios apropiados en

la velocidad y flujo de secuencias de reacciones metabólicas
Sin embargo, las enzimas con cinética de saturación

michaeliana presentan un orden cinético efectivo <1
cuando [S]= 0 ó cuando [S] se aproxima a la saturación
Son menos efectivas cuando más se necesita su

actuación para mantener la relación [S]/[P]
Soluciones:
1. Incorporar todos los componentes enzimáticos de una determinada ruta en un solo
conjunto (enzimas multifuncionales o complejos multienzimáticos)
Ejs ácido graso sintasa piruvato deshidrogenasa
Ventajas de las asociaciones multienzimáticas:

- compartimentalización de las rutas, que reduce la competencia por los sustratos comunes a otras rutas
metabólicas
- aumenta la eficacia: sus enzimas componentes pueden funcionar a [S]
extremadamente bajos, ya que disminuye la difusión de los metabolitos
intermediarios
- las enzimas componentes pueden responder coordinadamente a la modulación
de un único efector
Pero incluso en estos complejos el orden cinético es como máximo = 1
2. Diseño de ezimas con órdenes cinéticos > 1: Enzimas reguladoras, que se unen al
sustrato de forma cooperativa
Cooperatividad positiva
- supone una forma perfeccionada de estabilizar las fluctuaciones de [S]
- son enzimas polipeptídicas, con múltiples lugares de unión para el S
enzimas polipeptídicas con cinética michaeliana: los diferentes

lugares de unión del S no influyen unos en otros (Ej. Lactato DH)
enzimas reguladoras: unión del S a uno de los sitios influye en la

unión a los demás sitios, dando lugar a curvas de saturación
sigmoidales
- cuando una molécula S se une a una subunidad en estado R

(conformación relajada), esta subunidad asume la conformación T
(tensa) y modifica la afinidad por S de las subunidades vecinas
Km1 Km2 Km3 Km4
Estado R Estado T
Cooperatividad homotrópica positiva (Km1 >Km2>Km3>km4)

Linearización de cinética sigmoidal (ecuación de Hill) da también una medida de la cooperatividad

entre los diferentes lugares de unión, además de las constantes cinéticas de “afinidad” y Vmáx
log [V/(Vm-V)] = nH (log [S] –log S0,5)
nH: Coeficiente de Hill = pendiente

V/Vm-V
Es una medida cuantitativa de la cooperatividad:

Enzima
michaeliana
Pendiente
máx = 1 nH > cooperatividad
nH = 1 ∃ cooperatividad
nH > 1 ∃ cooperatividad positiva
nH < 1 ∃ cooperatividad negativa

[S]
El símbolo S0,5 : define la [S] a la que la velocidad de reacción = ½ Vmáx

ó la [S] a la que la cual log [V/(Vm-V)] = 0
Similar a Km para enzimas con cinéticas sigmoidales

Cooperatividad negativa
Algunas enzimas presentan cooperatividad negativa, con cinéticas de orde < 1
Ej. Fosfofructo quinasa ATP + F6P ADP + F1,6 biP
- enzima clave glucolítca

- encaminada a la formación de ATP
- es regula por la Carga Energética
- comportamiento singular con respecto al cosustrato ATP:
• la velocidad de reacción debería aumentar al aumentar el sustrato (ATP)
• sin embargo al ↑ [ATP], el orden de reacción se hace <<1
Adaptación sofisticadas de la estructura de la enzima: 2 lugares distintos de unión para el ATP
sitio catalítico: • ↑↑ afinidad por ATP: completamente saturado a concentraciones fisiológicas

• con curvas de saturación de ATP hiperbólicas
• con curvas de saturación de F6P sigmoidales
sitio regulador: • ↓↓ afinidad por el ATP

• ⇒ ↓ de la afinidad del sitio catalítico por el cosustrato F6P
Cooperatividad heterotrópica negativa (Km1<Km2)

Estos tipos de cinéticas, que suponen cambios estructurales de las enzimas son el resultado de
estrategias adaptativas:
- la PFK de Dictyostelium (g) tiene un comportamiento michaeliano para ambos sustratos (G6P y
ATP) en los momentos en que su metabolismo energético depende de la degradación de aa
- en estos casos, la glucolisis y la PFK suministran triosas fosfato y acetato (cetoácidos) para las
transaminaciones y la glucosa es almacenada como glucógeno (síntesis de sustancias
mucilaginosas)
3. Alosterismo como medio para controlar la actividad enzimática
Hemos definido “enzima reguladora” como a quellas que, bajo alguna circunstancia, presentan
cinética de saturación sigmoidal con respecto al sustrato
Estas enzimas, en su mayoría, también son influídas fuertemente por moduladores
- metabolitos sin ninguna relación química con el sustrato

- ↑[M]: señales que activan o inhiben la enzima
- poseen lugares específicos de unión sobre la estructura de la enzima, ≠ del
moduladores: centro activo, separados espacialmente y a veces, sobre subunidades
diferentes de la enzima
- Los sitios de unión de los moduladores pueden presentar también
cooperatividad (⇒ curvas sigmoidales)
Modelo de actuación de los moduladores alostéricos
Sitio efector
alostérico
Subunidad
reguladora
- Análogamente se define M0,5 como la [M] con

la que se consigue ½ de la activación o
inhibición máxima de la enzima
- Da una idea de la afinidad de la enzima por el

efector
Mecanismo de regulación de la actividad enzimática de los moduladores:
• a través de cambios conformacionales

• determinan la afinidad de la enzima por sus sutratos
• pequeños cambios en [M] ⇒ un aumento o disminución de la
actividad mucho más pronunciada y rápida
• activación o inhibición en cascada, porque generalmente se
unen también a la enzima de forma cooperativa: efecto en cascada
activador alostérico: favorece la

unión del sustrato
inhibidor alostérico: impide la unión

del sustrato
Ej. Influencia de moduladores + y - sobre la

actividad de la PFK
Ej. Influencia de moduladores + y - sobre la aspartato-transcarbamilasa (ATCasa)

• cataliza el primer paso de la síntesis de pirimidinas
• inhibida por el nucleótido CTP y UTP (productos finales la síntesis de pirimidinas)
• activada por ATP y GTP (productos finales de la síntesis de purinas)
⇒ La regulación de la ATCasa por NTPs asegura un balance adecuado de purinas y pirimidinas

Regulación por modificación covalente del control del flujo glucolítico
Princiapalmente fosforilación reversible Glucosa

Mediado por: • quinasas dependientes de cAMP
• quinasas dependientes de cGMP
• calcio/fosfolípidos.
Ej. E glucolíticas modulan su actividad de
esta forma durante la anoxia
PK: músculo bivalvo marino expuesto a condiciones

aeróbicas y anóxicas
- forma fosforilada (P)
- forma desfosforilada (DeP)
- barra (concentraciones de PEP in vivo: 0,15 a 0,30 µM)
- P es la forma predominante en condiciones de anoxia
&&&&

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Bases Moleculares de la Adaptación al Medio Marino.

Tema 3. Adaptación de las Enzimas a las

1. Necesidad del control metabólico

Ej. - no se podría almacenar glucógeno como reserva

La mayoría de las funciones fisiológicas y moleculares son la suma de muchos procesos

REPOSO EJERCICIO INTENSO

1.1. Tipos de enzimas por su función en el metabolismo

Ej. Glucógeno fosforilasa

2. Enzimas de puntos de ramificación:

3. Catalizadores altamente eficaces:

Ej. Fosfogluco mutasa

La regulación de la velocidad, dirección y funcionamiento de las diferentes rutas

La actividad potencial de las enzimas en las células se establece

2. Control de la concentración de enzima

La concentración de una proteína supone un equilibrio entre su síntesis y degradación

La tasa de síntesis de una enzima es regulada, normalmente por mecanismos genéticos

La unidad de transcripción de un gen consta de 3 regiones: promotora, estructural

región promotora región terminación

Los genes pueden ser:

Economía metabólica: las enzimas inducibles sólo se sintetizan si se necesitan

La transcripción es mediada y regulada mediante unión de proteínas represoras o

a) Regulación de la transcripción en procariotas

En cada operón se diferencian dos clases de genes:

y dos subregiones en la región promotora que intervienen en la regulación:

Ej. operón lac: regulación negativa e inducible

- moléculas pequeñas (INDUCTORES) bloquean al represor impidiendo su unión al operador y

2. Elemento de regulación positiva: PAC (sensible a los niveles de glucosa)

- PAC (proteína activadora activada por catabolitos), capaz de ligar AMPc

En algunos casos la transcripción de los genes estructurales es regulada por los

Ej. operón Trp: regulación negativa y reprimible

1. Elemento de regulación negativa: Represor-Correpresor

- responde a diferentes [Trp] variando la velocidad de síntesis ∼700 veces.

b) Regulación de la transcripción en eucariotas

- la cromatina tiene que estar en forma de eucromatina

Grado de acetilación bajo: Grado de acetilación alto:

Transcripción activa Transcripción inactiva

- En eucariotas la región promotora es reconocida por los

- Los factores de transcripción generales y proximales son

- Proteínas coactivadoras que no se unen al DNA

Ej. Factor de transcripción inducible por hipoxia (HIF-1)

- es una proteina compuesta por 2 subunidades: HIF-1a y HIF-1b

- Otros factores de transcripción inducibles responden a estímulos externos

a) - hormonas lipofílicas atraviesan la membrana plasmática e

b) - hormonas hidrofílicas interaccionar con receptores de membrana

TRANSCRITO: molécula de RNA recién sintetizada

La mayoría de los transcritos de procariotas y eucariotas son

Maduración de rRNAs y tRNAs:

Las etapas del proceso de maduración son reguladas, modificando

Maduración de mRNA de eucariotas:

Espliceosoma: complejo formado por

A partir de un único gen se forman

c) transporte al citoplasma y degradación del RNA

Los mRNA que no se traducen tienen funciones reguladoras de la

snRNA: - RNA nuclear pequeño (small nuclear RNA)

Micro RNA: - 21 nucleótidos

siRNA: - RNA pequeños de interferencia (ribointerferencia)

rnRNA: - RNA pequeño que forma parte de ribonucleoproteína

lncRNA: - RNA largo no codificante (>200pb)

Los mRNAs inestables codifican proteínas reguladoras de la transcripción, factores de crecimiento,