Práctica No.

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DETERMINACIÓN DE PERFIL LIPÍDICO
Modificación a modalidad virtual, segundo semestre, 2021

GUÍA GENERAL DE LA PRÁCTICA EN SU MODALIDAD VIRTUAL

Actividad Descripción Fecha

Entrega de pre- Los estudiantes deben entregar el pre-laboratorio que Día de la práctica
laboratorio incluye
(individual) Semana 18 al 22
● Diagrama de flujo determinación TAG, colesterol de octubre antes
total y HDL de las 14:00*
● Resolución del cuestionario
Envío de ambos documentos en formato PDF, subirlos
a las herramientas correspondientes que estarán
habilitadas en el Moodle del Laboratorio.
Exámenes cortos Examen corto post-laboratorio: antioxidantes: 14:05 a Día de la práctica
14:15 h, cada día de laboratorio (16:05 a 16:15 h,
laboratorios B y C, Nutrición). Semana 18 al 22
de octubre antes
Examen corto pre-laboratorio: determinación de de las 14:00*
perfil lipídico (incluye principio de las pruebas del
perfil lipídico); de 14:15 a 14:25 h (16:15 a 16:25 h,
laboratorios B y C, Nutrición).
NOTA: Encender las cámaras para realizar los cortos
Explicación del Los instructores de laboratorio, por medio de una Día de la práctica
fundamento presentación PowerPoint, realizan una explicación del
Semana 18 al 22
teórico de la fundamento teórico correspondiente a la práctica.
práctica, del Resuelven dudas, y entregan a cada grupo una serie de de octubre antes
procedimiento de datos para analizar y asignan artículos para realización de las 14:00*
la práctica y del de mapa mental.
desarrollo del caso
clínico.
Evaluaciones en Durante el desarrollo de la práctica, los estudiantes Día de la práctica
tiempo real deberán ir respondiendo evaluaciones en formularios
de Google. Al responderlas, también estarán Semana 18 al 22
registrando su asistencia. de octubre antes
de las 14:00*
Material de apoyo https://www.labxchange.org/library/items/lb:LabXcha Ver los videos
nge:df0bd3ba:video:1 antes de la
práctica
https://youtu.be/sE2v6fZcehc
https://youtu.be/8Pc14QYGsKc
Foro de preguntas Los estudiantes pueden hacer sus preguntas respecto Del 15 al 22 de
al tema de la práctica en el transcurso de la semana. octubre
Los instructores de laboratorio responden las
preguntas
Reporte de Cada grupo de laboratorio hace un reporte, siguiendo Semana del 25 al
laboratorio el formato que pueden descargar de la carpeta de 29 de octubre,
instructivos de laboratorio Moodle del Laboratorio y lo antes de las
entregan en formato PDF en la sección habilitada en el 14:00 horas del
Moodle de Laboratorio día que
corresponde a la
Examen post- Los estudiantes leerán el artículo asignado y práctica de
laboratorio elaborarán una infografía en la que presenten los laboratorio de
aspectos básicos solicitados en el anexo 1. cada grupo.
* Los estudiantes a quienes les correspondería realizar esta práctica el miércoles 20 de octubre
se les comunicará oportunamente la forma de reposición de la práctica.

PONDERACIÓN DE LA PRÁCTICA

Actividad Punteo por Punteo total de Porcentaje de la

práctica laboratorio nota de
laboratorio
sobre la zona
total del curso
Exámenes cortos pre práctica 0.75 p 4.5 p
Exámenes cortos post práctica* 0.75 p 4.5 p
Cuestionarios de retroalimentación 0.50 p 3.0 p
Reportes / vídeo-reporte 0.75 p 4.5 p
20%
Pre-laboratorios (diagramas de flujo y 0.17 p 1.0 p
cuestionarios)
Examen final de laboratorio - 2.5 p
Total 2.92 p 20 p
* Para esta práctica el examen post-práctica corresponde a la elaboración de una infografía.

INTRODUCCIÓN
La aterosclerosis es un proceso patológico que se caracteriza por la acumulación de grasa
y varios tipos de células en zonas específicas de la pared arterial, formando estrías grasas que
posteriormente se transformarán en placas de ateroma. Estas placas provocan un
estrechamiento de los vasos y contribuyen a un mal funcionamiento de éstos provocando la
reducción del aporte sanguíneo a órganos como el corazón y el cerebro. La placa de ateroma
puede presentar una rotura y causar un coágulo sanguíneo que obstruya la circulación y provocar
un episodio vascular isquémico agudo (no llega oxígeno al área). Clásicamente la aterosclerosis
se ha asociado a alteraciones en el metabolismo lipídico ya sea originadas por una ingesta
excesiva de grasas o enfermedades genéticas que alteran el metabolismo de los ácidos grasos
(dislipidemias) (Gil, 2010).

El perfil lipídico es un conjunto de pruebas de laboratorio que se solicita para evaluar

inicialmente el riesgo de desarrollar una enfermedad cardiovascular producto de una
dislipidemia, o sea, un trastorno en el metabolismo de lípidos. También es útil para el
seguimiento o control del paciente que se encuentra con una dieta o medicamentos para
disminuir el colesterol y, a su vez, el riesgo de enfermedad cardiovascular. El perfil lipídico está
constituido por la cuantificación analítica de los lípidos que son transportados en la sangre por
los diferentes tipos de lipoproteínas plasmáticas.

La determinación de estos parámetros es un procedimiento analítico básico para el

diagnóstico y seguimiento de enfermedades metabólicas, primarias o secundarias. Entre estos
parámetros analíticos se encuentran:
− Colesterol total
− Colesterol transportado por las LDL
− Colesterol transportado por las HDL
− Colesterol transportado por las VLDL
− Triglicéridos totales
− Apoproteínas

Tipo de muestra:
Las determinaciones de los componentes lipídicos requieren una preparación del
paciente para asegurar una correcta interpretación del análisis de lípidos. En el momento de la
extracción, el paciente se encuentra en condiciones óptimas sí:
- No ha variado sus hábitos de alimentación durante por lo menos 3 semanas,
- Presenta un peso corporal estable
- Ha realizado un AYUNO de 14 horas para la determinación de triglicéridos.

Un ayuno apropiado consiste en no ingerir alimento de ningún tipo, excepto agua y

posiblemente café negro (sin azúcar) a la mañana. La muestra en ayunas es esencial para el
análisis de triglicéridos, dado que sus niveles aumentan dentro de las 2 primeras horas del
período posprandial y alcanzan un máximo de 4 a 6 horas después.

Las muestras sin ayuno no son adecuadas para el análisis debido a que los resultados
elevados producidos por la asimilación normal de los alimentos no se pueden distinguir del
aumento por un metabolismo lipídico anormal o de los errores congénitos del metabolismo. La
falta de ayuno puede producir hiperquilomicronemia e hiperprebetalipoproteinemia, lo cual
interfiere en un determinado ensayo.

El consumo de etanol provoca elevaciones agudas pero transitorias en las

concentraciones séricas de triglicéridos. Esto es particularmente evidente en personas
hipertrigliceridémicas sensibles a hidratos de carbono. Por ende es aconsejable pedir al paciente
que se abstenga de beber alcohol 72 hrs antes del día de la extracción de sangre. Para
determinaciones de colesterol y fosfolípidos, el ayuno no es tan importante, si bien el período
de ayuno puede influir en los niveles de colesterol de un pequeño porcentaje de personas.

OBJETIVOS
Al finalizar la práctica el estudiante estará en la capacidad de:
● Conocer las consideraciones pre analíticas para la realización de un perfil lipídico.
● Determinar analíticamente los niveles de colesterol, triglicéridos y colesterol HDL de una
persona.
● Determinar indirectamente los niveles de colesterol LDL de una persona.
● Correlacionar los resultados del perfil lipídico con distintas condiciones normales o
patológicas.
MATERIAL BIOLÓGICO
● Suero o plasma humano

MATERIALES Y EQUIPO
● Micropipetas
● Tips
● Descartadores
● Espectrofotómetros

REACTIVOS
● Agua destilada
● Kit comercial para determinación de colesterol
● Kit comercial para determinación de triglicéridos
● Kit comercial para separación de colesterol HDL

IMPORTANTE
Asegúrese de haber leído el manual de toxicidades de los reactivos a utilizarse en esta práctica
(estructura, descripción, seguridad, toxicidad, descarte), así como saber cuál es el procedimiento
adecuado para el manejo de biológicos y el procedimiento a seguir en casos de emergencia que
pudieran surgir durante la práctica con estos reactivos. Para consultas por favor acceda a:

Manual Toxicidades - Depto. Bioquímica - USAC.pdf. Recuperado de:

https://drive.google.com/file/d/0B6jPwByhE5KJY0dTYklDZE1DaEE/view?resourcek
ey=0- 217Up_zcO9chh5VwqKXmAg

Guía de Respuesta en caso de Emergencia (GRE) 2020. Recuperado de:

https://www.phmsa.dot.gov/sites/phmsa.dot.gov/files/2020-07/GRE2020-WEB.pdf
PROCEDIMIENTO

A. DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS
Los métodos enzimáticos se basan en la determinación del glicerol contenido en las moléculas
de los triglicéridos, tras la hidrólisis (química o enzimática) para remover los ácidos grasos. El
reciente desarrollo del uso de enzimas (lipasa, usualmente combinada con una proteasa) para
catalizar la hidrólisis, ha posibilitado el empleo de métodos directos, rápidos y específicos.

Principio de la prueba: Los triglicéridos son enzimáticamente hidrolizados a glicerol y ácidos

grasos por la lipoproteín lipasa (LPL). El glicerol reacciona luego de acuerdo al siguiente
esquema:
LPL
Triglicéridos Glicerol + Ácidos grasos

Glicerol quinasa (GK)

Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfato + ADP
Glicerol-fosfato oxidasa (GPO)
Glicerol-3-fosfato + 02 dihidroacetona fosfato + H202

Peroxidasa (POD)
2 H202 + 2Clorofenol + 4-aminoantipirina Quinoneimida + HCl + 4H2O

La formación de quinoneimida es medida a 500 nm, y la intensidad de color producido es

directamente proporcional a la concentración de triglicéridos en la muestra.

Valores de Referencia:

Deseable ≤ 200 mg/dl

Límite superior 200 – 400 mg/dl
Riesgo elevado > 400 mg/dl
Procedimiento:

E
M
B S
U
L T
E
A Á
REACTIVO/TUBO S
N N
T
C D
R
O A
A
R
R
E
A
Reactivo
500 µl 500 µl 500 µl
CT
de trabajo
IV
O

A
G
5 µl -- --
U Agua
A destilada

ES
TA
N
Estándar -- 5 µl --
D
A
R 200 mg/dl
M Muestra
U
ES
-- -- 5 µl
T
R
A

e incubar 10 min a 370C/ 20 min a 250C

y leer en espectrofotómetro a 500 nm

R
ES
U
LT
A
D
O
 B. DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL

La determinación del colesterol total incluye las formas libres y esterificadas del
esteroide. En el suero o plasma dos tercios del colesterol total se encuentran en la forma
esterificada y el resto en la forma libre. Esto tiene ciertas implicaciones analíticas ya que en
algunas reacciones el desarrollo de color es más intenso con los esteres del colesterol que con
las formas libres, provocando una desviación positiva.

Por tal razón, el conocimiento de la química de los diversos métodos de análisis del
colesterol y el reconocimiento de sus limitaciones resultan de fundamental importancia en la
selección del método a emplearse en el laboratorio. Con mucha frecuencia las consideraciones
giran en torno a factores como simplicidad, velocidad, conveniencia por otro lado, exactitud y
precisión.

Principio:
Los métodos enzimáticos para colesterol utilizan en una primera etapa la colesterol esterasa
(CHE) para hidrolizar los ésteres de colesterol presentes en el suero dando colesterol libre y
ácidos grasos libres:
CHE
Esteres de colesterol colesterol + ácidos grasos
La segunda etapa utiliza la enzima colesterol oxidasa (CHO) en presencia de oxígeno,
para oxidar el colesterol (el libre hallado en el suero y el generado en la etapa 1), a Colest-4-en-
3-ona y peróxido de hidrógeno (H2O2):
CHO
Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona + H2O2
El peróxido reacciona con el cromógeno 4- aminoantipirina y p-hidroxibenzensulfonato
en presencia de peroxidasa (POD) formando el colorante de quimoneimina:

POD
2H2O2 + 4-aminoantipirina + p-hidroxibenzensulfonato Quinoneimina + 4H2O
(color
rojo)
La formación de quinoneimina es medida a 500 nm, y la intensidad de color producido
es directamente proporcional a la concentración de colesterol en la muestra
Valores de Referencia:
Deseable ≤ 200 mg/dl
Límite superior 200 – 240 mg/dl
Riesgo elevado > 240 mg/dl
Procedimiento:
E
M
B S
U
L T
E
A Á
REACTIVO/TUBO S
N N
T
C D
R
O A
A
R
R
E
A
500 µl 500 µl 500 µl
CT Reactivo
IV de trabajo
O

A
G
5 µl -- --
U
A Agua
destilada

ES
TA
N
-- 5 µl --
D Estándar
A
R 200 mg/dl
M
U Muestra
ES
-- -- 5 µl
T
R
A

e incubar 10 min a 370C/ 20 min a 250C

y leer en espectrofotómetro a 500 nm

R
ES
U
LT
A
D
O

Nota: Sueros muy lipémicos requieren de un «blanco de muestra». Agregar 10 μl de muestra a

1.0 ml de solución salina, mezclar y leer su absorbancia contra agua. Restar este valor al de la
absorbancia del paciente para obtener la lectura corregida.
 C. DETERMINACIÓN DE COLESTEROL HDL

Por definición la HDL (lipoproteínas de alta densidad) es la fracción de lipoproteínas

plasmáticas con una densidad en estado hidratado de 1.063 a 1.21 g/ml. Su movilidad
electroforética corresponde a las de las α1-globulinas. Siendo las lipoproteínas más densas, están
compuestas por 50% de proteínas y 50% de lípidos. Existen dos formas directas de medir HDL:

− Por ultra centrifugación analítica: Es un método más exacto y se considera de

referencia para la cuantificación de HDL y de otras fracciones lipoprotéicas. Sin
embargo, sólo unos pocos laboratorios pueden disponer de una ultracentrífuga
analítica y tener experiencia y tiempo una tarea tan laboriosa y tediosa.

− Por aislamiento de HDL y determinación gravimétrica de las partículas: Es un método

poco práctico ya que el trabajo gravimétrico consume mucho tiempo en comparación
con otras técnicas disponibles. Asimismo, no es tarea fácil aislar las lipoproteínas por
cromatografía en columna, electroforesis, ultracentrifugación preparatoria o bien por
precipitación con polianiones seguida de determinación gravimétrica de la cantidad de
HDL, una vez que el agua y las sales han sido eliminadas.

La fracción HDL aislada no se mide en su totalidad en lugar de ello se mide un

componente proteico o lipídico como método indirecto de cuantificar HDL. Las HDL se componen
de aproximadamente 50% de proteínas, de las cuales A-I y A-II son las apoproteínas principales,
siendo A-I cuantitativamente más importante.
Los lípidos constituyen el 50% de las moléculas de HDL; los fosfolípidos 28%; colesterol
el 18% y los triglicéridos un 4%. Por ende, los fosfolípidos son cuantitativamente los
componentes lipídicos más abundantes. Sin embargo, dado que el colesterol es más fácil de
medir que los fosfolípidos, este ha prevalecido como un medio indirecto de determinar las
concentraciones de HDL.

Hay numerosas técnicas disponibles para la cuantificación del HDL, pero todas tienen
dos etapas en común: 1) aislamiento de la HDL y 2) cuantificación del colesterol en la HDL aislada.
Los diversos métodos difieren principalmente en el modo en que se aísla la fracción HDL. El
análisis del colesterol se lleva a cabo en general mediante uno de los métodos disponibles.

Principio:

Cuando se combina el suero con el reactivo de polietilenglicol, todas las beta-

lipoproteínas se precipitan (LDL), quedándose la fracción alfa (HDL) en el sobrenadante. Este es
tratado como una muestra para la determinación de colesterol por medio de métodos
enzimáticos.
CHE
Esteres de colesterol colesterol + ácidos grasos

CHO
Colesterol + O2 Colest-4-en-3-ona + H2O2

POD
2H2O2 + 4-aminoantipirina + p-hidroxibenzensulfonato Quinonimina + 4H2O
(color rojo)
Valores de Referencia:

Deseable 40 - 75 mg/dl
Riesgo elevado <40 mg/dl

Procedimiento para aislamiento de HDL:

E
M
B S
U
L T
E
A Á
REACTIVO/TUBO S
N N
T
C D
R
O A
A
R
R
E
A
Reactivo
500 µl 500 µl 500 µl
CT
precipitante
IV
O

A
G
500 µl -- --
U Agua
A destilada

ES
TA
N
Estándar -- 500 µl --
D
A
R 200 mg/dl
M Muestra
U
ES
-- -- 500 µl
T
R
A

CT
X
10 min a 2300 – 3000 rpm
Separar el sobrenadante y realizar con éste la determinación de colesterol (como en
la prueba de colesterol total)
 D. CÁLCULO DE VLDL Y LDL

Si bien es posible aislar VLDL (densidad <1.006 g/ml) y determinar el contenido de

colesterol, el VLDL puede estimarse con bastante exactitud mediante el siguiente cálculo:
Triglicéridos (mg/dl)= Colesterol VLDL (mg/dl)
5
Las lipoproteínas de baja densidad (LDL) pueden calcularse por medio de la estimación
de Friedewald, Levy, Fredrickson siempre y cuando el valor de los triglicéridos no exceda de 400
mg/dL y el paciente no sufra de Hiperlipoproteinemia tipo III:
LDL = Colesterol total-(VLDL + HDL)
Colesterol LDL = Colesterol total - colesterol HDL - Triglicéridos
5

REFERENCIAS
Gil, A. (2010). Tratado de Nutrición: Bases Fisiológicas y bioquímicas de la nutrición. México:
Panamericana.
Ruiz, M., Arias, I., Rolón, G., Hernández, E., Garavito, G., Silvera-Redondo, C., (2016). Análisis del
polimorfismo del gen APOE en la población de Barranquilla, Colombia. Biomédica, 36,
16 de julio de 2016, De Google Académico Base de datos.

ACTIVIDAD MODALIDAD VIRTUAL

Cada grupo de estudiantes recibirá una serie de datos, correspondientes a las
mediciones espectrofotométricas necesarias para determinar colesterol total, colesterol HDL y
triglicéridos (valores de absorbancia de blanco, estándar y muestra para cada determinación). A
partir de dichos valores el grupo calculará y reportará los valores de dichos parámetros y
calculará los valores de VLDL y LDL.

Con los valores completos del perfil lipídico, el grupo interpretará los resultados
determinando cuáles parámetros se encuentran dentro del rango normal y cuáles se encuentran
alterados. Partiendo de esta información el grupo elaborará una discusión basándose en esta
interpretación e indicando el riesgo (o no) de ateroesclerosis observado a partir de esos
parámetros.

EXAMEN POST LABORATORIO

A partir del artículo asignado, cada grupo elaborará una infografía en la que se presenten
los aspectos básicos del artículo (anexo 1). La infografía será enviada al Moodle del laboratorio
una semana después de haber realizado la práctica, empleando la herramienta de entrega
habilitada para ese propósito.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es la aterosclerosis y cuáles son sus causas?

2. Indicar la importancia de la evaluar los niveles de colesterol LDL y la relación con el nivel de
triglicéridos.
3. ¿Qué es la lipoprotína a (Lpa)? Investigue y explique brevemente.
4. Indique la importancia de la determinación de lipoproteína A (Lpa) y su papel en la
detección de riesgo ateroesclerótico.
5. Mencione cuáles serían las recomendaciones nutricionales generales para una persona
que sufre de aterosclerosis.
ANEXO 1
Infografía

Una infografía es «una combinación de elementos visuales que aporta un despliegue

gráfico de la información. Se utiliza fundamentalmente para brindar una información
compleja mediante una presentación gráfica que puede sintetizar o esclarecer o hacer
más atractiva su lectura» (Manual de estilo de Clarín 1997, revisado en Minervini, 2005).
La infografía tiene una intención didáctica.

Las etapas de elaboración de una infografía son:

1. Recopilación de la información del tema que se desea exponer en la infografía;
implica conocer el tema y profundizarlo, para poder luego explicarlo de una
manera gráfica.
2. Organización y planeamiento de la infografía, elaboración de resúmenes de los
textos que se desean presentar, resaltando aspectos clave del tema, así como
recopilación de las imágenes / figuras / tablas y gráficas que se emplearán.
Recuerde que los elementos visuales son muy importantes en una infografía, los
cuales deben presentarse dando el crédito a los autores originales de los mismos.
3. Diseño y arte final organizando la información recopilada, no olvide que «cuanto
más compleja sea la información, más simple debe ser el estilo usado para
representarla».

En los siguientes enlaces se presenta información básica para la creación de infografías:

https://es.venngage.com/blog/que-es-una-infografia/
https://venngage.com/blog/como-hacer-una-infografia-en-5-pasos/

Para la elaboración de la infografía se puede emplear el programa que los estudiantes

deseen (ej: Canva). La versión final deberá ser enviada en formato PDF.
Aspectos que serán evaluados en la infografía

Aspecto Descripción general Ponderación

(100 %)
Identificación Se presenta la identificación clara del artículo 5
(datos completos), y del grupo de trabajo
Contenido Se presentan 3 o 4 ideas centrales* presentadas en 40
el artículo. La presentación es clara, en un lenguaje
que permita transmitir la información a la
población estudiantil y docente de la Facultad de
Ciencias Químicas y Farmacia. Utiliza un lenguaje
apropiado adaptado al público en general.
Integración Las ideas presentadas llevan un mismo hilo 10
conductor y se encuentra correctamente
integradas y relacionadas en el documento.
Relación con la La descripción de las ideas centrales del artículo se 15
carrera presenta desde el punto de vista de un profesional
de la carrera a la cual pertenece el grupo de
estudiantes o se muestra la relación del artículo
con la formación de un profesional en su área.
Conclusión A partir de la información presentada, el grupo 10
elabora una conclusión basada en los aspectos
presentados.
Ilustraciones Se presenta información gráfica (imágenes, figuras, 10
tablas, diagramas armados por el grupo) que
ayuden a ilustrar y entender mejor las ideas. Si son
tomadas de otro autor se debe dar el crédito
correspondiente (citar).
Organización Se utiliza de forma correcta el espacio disponible, 5
se utilizan colores que permitan la lectura clara del
material.
Referencias Se incluyen las referencias empleadas utilizando el 5
formato APA 7ma edición.
* Es posible que por la extensión y complejidad del artículo haya más de 3 o 4 ideas centrales
para desarrollar. El grupo será libre de escoger las ideas que resulten más atractivas y basar su
infografía en dichas ideas. Las ideas deberán presentarse de manera integrada.

Guatemala, octubre 2021

Departamento de Bioquímica
Elaboración: Departamento de Bioquímica
Adaptación a modalidad virtual, 2021: Rosario Hernández