Sesión 02 - Práctica - Inhibidores de Cadena Respiratoria

UNIVERSIDAD PRIVADA ANTENOR ORREGO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE ENFERMERÍA
INHIBIDORES DE CADENA RESPIRATORIA
- PROFESORA:
PADILLA ZUÑIGA, AGUSTIN
- CURSO:
BIOQUÍMICA
- INTEGRANTES:
➢ Contreras Huaylla Anita
➢ Cruzado Oliva, Cielo
➢ Dominguez Valdiviezo, Yelvin
➢ Waschl Garcia, Karen
➢ Espejo Melquiades, Maricela
➢ Flores Ramos , Rosmery
TRUJILLO-PERÚ
2021
ACCION DE INHIBIDORES ENZIMATICOS EN LA CADENA
RESPIRATORIA INTRODUCCION
La cadena transportadora de electrones es un proceso que se produce en la
membrana interna mitocondrial, que mediante reacciones bioquímicas de la
Fosforilación Oxidativa producen adenosín trifosfato (ATP), que es el compuesto
energético que utilizan los seres vivos mediante reacciones de óxido-reducción. Las
fuentes de energía como la glucosa son inicialmente metabolizados en el citoplasma
y los productos obtenidos son llevados a la matriz mitocondrial donde continua el
metabolismo en el ciclo de Krebs. Los electrones se transportan desde moléculas
poco oxidantes como el NADH Y FADH2 hasta el oxígeno. Una vez que los
electrones son entregados al oxígeno, se forma agua, los protones son bombeados
hacia el espacio entre las membranas, lo que crea un gradiente de protones con una
carga muy positiva fuera de la matriz y una carga muy negativa adentro. Este
gradiente obliga a los protones a volver a entrar a la mitocondria por una enzima
llamada ATP sintasa que, con la fuerza de entrada de los protones, forma ATP y
agua metabólica.
Los inhibidores de la respiración son sustancias que inhiben el transporte de

electrones en la cadena respiratoria, y de acuerdo al lugar donde actúan pueden
reunirse en cuatro grupos principales; aquellos que bloquean el paso de electrones a
nivel del complejo I (NADH-deshidrogenasa) como los barbitúricos, piericidina A
(antibiótico), rotenona (insecticida); los que bloquean el complejo II (Succinato-
deshidrogenasa), el malonato; los bloqueadores del complejo III (citocromo b y c1)
como la antimicina y los que impiden el paso de electrones del complejo IV
(Citocromo-oxidasa) con el oxígeno, como el cianuro, monóxido de carbono. Existen
otros compuestos denominados desacopladores de la fosforilación oxidativa. Estos
agentes debilitan o destruyen completamente el firme acoplamiento normal entre
oxidación y fosforilación. Con el desacoplamiento aumentan las velocidades de
oxidación mientras que la fosforilación disminuye, quiere decir que disminuye la
producción de ATP, lo cual da como resultado la producción de calor extra que
puede manifestarse en forma de calor, afectando de forma indirecta a muchos
procesos celulares como el transporte de iones y la permeabilidad de la membrana.
Los agentes desacopladores aumentan la permeabilidad de las membranas
mitocondriales internas frente a los protones. Entre los desacopladores comunes se
cuentan el 2,4-dinitrofenol, la termogenina, entre otros.
PROCEDIMIENTO
1. Sacrifique un cobayo y separe el hígado colocándolo en un vaso de precipitación

con solución salina a 0ºC y córtelo en trozos pequeños.
2. Coloque los trozos de hígado en un mortero conteniendo aproximadamente 1
gramo de arena y 5 mL de buffer fosfato pH 7,0. Homogenícelo hasta obtener una
pasta fina y vuelva a agregar 5 mL del mismo buffer.
3. Centrifugue el homogenizado a 4000 rpm por 5 minutos, luego separe el
sobrenadante y consérvelo en un tubo de ensayo sumergido en hielo. Rotúlelo
como HH (homogenizado de hígado).
Arme el siguiente esquema de trabajo:

Tubo I II III IV V
Homogenizado de Hígado (HH) mL 1 1 1 1 1
Succinato de sodio (mL) 1 - 1 1 1
Malonato de sodio (mL) - - 1 - -
Cianuro de potasio (mL) - - - 1 -
Bicloruro de mercurio (mL) - - - - 1
Azul de metileno (mL) 1 1 1 1 1
Agua destilada (mL) 1 2 - - -
4. Agitar los tubos y añadir 0,5 mL de aceite mineral suavemente por las paredes de cada tubo.
5. Incubar a 37°C durante 30 minutos.
6. Observar e interpretar los resultados obtenidos.
RESULTADOS
CUESTIONARIO
1) ¿Cuál es la estructura de la cadena respiratoria y explique

su funcionamiento?
Su principal función es el transporte coordinado de protones y electrones, para producir
energía en forma de ATP a partir de ADP y fosfato inorgánico. El transporte de
electrones genera energía que es utilizada para transportar protones de la matriz
mitocondrial al espacio intermembrana situado entre las membranas mitocondriales
externa e interna. Este proceso genera un gradiente electroquímico de protones, que es
utilizado por el complejo V (ATP sintasa) para generar ATP a medida que los protones
fluyen de nuevo desde el espacio intermembrana a la matriz mitocondrial. El ATP
generado es exportado al citoplasma a través del transportador de nucleótidos de
adenina (ANT).
De las aproximadamente 85 proteínas que constituyen la cadena, únicamente 13 están

codificadas por el ADNmt, estando el resto codificadas por el ADN. Siete de estas trece
proteínas, las denominadas ND 1,2,3, 4 L,5 y 6, son componentes del complejo I o
NADH: ubiquinona oxidorreductasa; una de ellas (citocromo b) es un componente del
complejo III o ubiquinol: citocromo c oxidorreductasa; tres (CO I, II, III) forman parte del
complejo IV o citocromo c oxidasa, y dos de la ATP sintetasa del complejo V. El resto de
las proteínas de estos complejos, así como todo el complejo II, están codificados por el
ADNn, se deben sintetizar en ribosomas del citoplasma y posteriormente importarse a la
mitocondria, ensamblándose con las proteínas codificadas en el ADNmt.
2) ¿Explique el fundamento de la Teoría quimiosmótica de

Mitchel
La teoría quimiosmótica, explica cómo la energía derivada del

transporte de electrones por la cadena respiratoria se utiliza para
producir ATP a partir de ADP y Pi. En el acoplamiento
quimiosmótico tiene lugar dos acontecimientos diferentes: 1) se
establece un gradiente de protones a través de la membrana
mitocondrial interna y 2) la energía potencial almacenada en el
gradiente se libera y es capturada en la formación de ATP a partir
de ADP y fosfato.
❖ La membrana interna es permeable a los H+|

❖ El transporte de e- a través de la cadena respiratoria está
asociado al transporte de H+ desde la matriz hacia el espacio
intermembranas
❖ Se conserva la energía de oxidacion de los procesos
metabólicos en forma de potencial electroquímico,ya que se
genera una gradiente electroquímico de H+
❖ La cadena respiratoria está acoplada a la síntesis de ATP
❖ Se sintetizan 3 ATP por cada par de e- pasados al O2 si el
dador es NADH, y 2 ATP por cada par de e- pasados al O2 si el
dolor es succinato
❖ esto por acción de la ATP sintasa
3) Fundamente porque se usó el succinato de sodio en la práctica.
- Se usó SUCCINATO DE SODIO, porque interviene en el ciclo de Krebs, reduciendo

al flavín adenín dinucleótido (FAD), una coenzima, y permitiendo así la generación de
energía por fosforilación oxidativa, tras la cesión de electrones a intermediarios de la
cadena de transporte de electrones, según la reacción siguiente:
● succinato + FAD → fumarato + FADH2.
4) Explique los mecanismos de inhibición que ejercen el malonato, bicloruro
de mercurio y cianuro.
Entonces las mitocondrias de las células del tejido muscular triturado tienen el
complejo enzimático preciso para la descarboxilación oxidativa del piruvato a
acetil-CoA, así como los enzimas del ciclo del ácido cítrico. La velocidad de
oxidación del piruvato está determinada por la velocidad a la que entra el acetil-
CoA en el ciclo del ácido cítrico, lo que depende de la disponibilidad de
oxalacetato como aceptar, esto es, el aumento de concentración de oxalacetato
incrementa el flujo de acetil-Coa a través del ciclo. El succinato añadido se puede
convertir en oxalacetato por medio de los enzimas del ciclo y, por tanto, estimula
la oxidación del piruvato. El malonato es un inhibidor competitivo de la reacción de
la succinato deshidrogenasa y bloquea la transformación del succinato a fumarato.
El malonato bloquea el flujo de metabolitos a través del ciclo, deteniendo
completamente la oxidación del piruvato.
En la etapa número 4 se genera la segunda molécula de CO2 por un complejo
multienzimático con la formación de succinil - CoA esta reacción es virtualmente
idéntica a la reacción de la piruvato deshidrogenasa, ya que en ambas reacciones
se produce la oxidación de alfa- cetoácido con perdida de grupo carbonilo en
formas de dióxido de carbono, la energía de oxidación de alfa - cetoglutarato se
conservan mediante la formación del enlace tioéster en el succinil- CoA esta
reacción es irreversible y el complejo enzimático que la lleva a cabo se denomina
COMPLEJO ALFA - CETOGLUTARATO DESHIDROGENASA este complejo
enzimático es inhibido por mercurio y arsénico.
El cianuro actúa en el sistema nervioso central acumulando calcio intracelular y
liberando neurotransmisores excitatorios que inhiben enzimas que protegen al
cerebro contra la lesión por oxidación. Los sitios más afectados son la sustancia
gris, el hipocampo, el cuerpo estriado y el cuerpo calloso.
5) ¿Explique el funcionamiento de la fosforilación oxidativa y cómo actúan

los desacopladores?
La fosforilación oxidativa es el proceso por el que se forma ATP como resultado
de la transferencia de electrones desde el NADH o del FADH2 al O2 a través de
una serie de transportadores de electrones.
En los organismos aeróbicos, esta es la principal fuente de ATP. La fosforilación
oxidativa genera 26 de las 30 moléculas de ATP que se forman cuando la glucosa
se oxida que se forma cuando la glucosa se oxida completamente a CO2 y H2O.
El flujo de electrones desde el NADH o el FADH2 al O2 a través de complejos
proteicos localizados en la membrana interna mitocondrial, provoca el bombeo de
protones hacia el exterior de la matriz mitocondrial.
Los desacopladores, actúan disipando el gradiente de protones, son moléculas
hidrofóbicas con un protón disociable, que pueden atravesar la membrana
mitocondrial interna transportando protones.
En presencia de estas moléculas el transporte de electrones se realiza de manera
normal, se consume NADH,FADH2, y O2 pero no se produce ATP: los
desacopladores disipan la fuerza protón motriz. La energía se libera en forma de
calor.
Termogenina es un ejemplo de aprovechamiento del desacoplamiento de la
cadena de transporte electrónica para generar calor. Las mitocondrias del tejido
adiposo pardo poseen grandes cantidades de termogénesis (UCP-1). Y se activa
en presencia de ácidos grasos generados a partir de triacilglicéridos.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1) Rodwell V, Bender D, Botham K, Kenelly P, Weil A. Harper Bioquímica ilustrada, 30 ed. Mc

Graw Hill 2016. Cap.11, 12,13. Pg 113-138
2) Chávez E, Martínez F, Flores O. Oxidaciones biológicas y bioenergéticas: Martinez F, Pardo
J, Riveros H. eds. Bioquímica de Laguna y Piña 8 ed, 2018; 393-416
3) Da Poian A, Castanho M. Integrative Human Biochemistry. A texbook for Medical Biochemistry.
New York. 2015; pg 194-216.
4) J.G. Posadas, A. Ugarte, G. Domínguez. Neumología y Cirugía del Tórax, transporte y la
utilización tisular de oxígeno de la atmósfera a la mitocondria. vol. 65 (2): 60-67, 2006

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Los inhibidores de la respiración son sustancias que inhiben el transporte de

1. Sacrifique un cobayo y separe el hígado colocándolo en un vaso de precipitación

Arme el siguiente esquema de trabajo:

Homogenizado de Hígado (HH) mL 1 1 1 1 1

Succinato de sodio (mL) 1 - 1 1 1

Malonato de sodio (mL) - - 1 - -

Cianuro de potasio (mL) - - - 1 -

Bicloruro de mercurio (mL) - - - - 1

Azul de metileno (mL) 1 1 1 1 1

Agua destilada (mL) 1 2 - - -

1) ¿Cuál es la estructura de la cadena respiratoria y explique

De las aproximadamente 85 proteínas que constituyen la cadena, únicamente 13 están

2) ¿Explique el fundamento de la Teoría quimiosmótica de

La teoría quimiosmótica, explica cómo la energía derivada del

❖ La membrana interna es permeable a los H+|

3) Fundamente porque se usó el succinato de sodio en la práctica.

- Se usó SUCCINATO DE SODIO, porque interviene en el ciclo de Krebs, reduciendo

5) ¿Explique el funcionamiento de la fosforilación oxidativa y cómo actúan

1) Rodwell V, Bender D, Botham K, Kenelly P, Weil A. Harper Bioquímica ilustrada, 30 ed. Mc

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