Citometria de Flujo
Citometria de Flujo
Citometria de Flujo
Sistema hidráulico
Se compone de un conjunto de controles neumáticos y fluídicos necesarios para establecer un flujo laminar que permita a la suspensión celular atravesar la
cámara de flujo de forma estable e individualizada.
Sistema óptico
Consta de: láser, filtros, lentes.
La fuente de luz es producida normalmente por un o varios láser. En la mayoría de los citómetros se instala un láser de gas (comunmente argón) refrigerado
por aire, que produce una luz monocromática de 488 nm como láser principal. Esta luz es utilizada para la excitación de la mayoría de los fluorocromos y
provoca la dispersión de luz que nos informa de las características celulares. Las últimas tecnologías han desarrollado láser de estado sólido que están
reemplazando a los láser de gas por su menor consumo y mayor durabilidad. La presencia de varios láser acompañando al primario nos permitirá ampliar el
abanico de lectura de fluorocromos, desde el violeta hasta el rojo lejano. La luz dispersada y la fluorescencia será recogida por un sistema de filtros y espejos
que dirigirán las señales a los sensores (fotodiodo/fotomultiplicadores).
Sistema electrónico-informático
Los fotomultiplicadoresconvierten la luz dispersa (fotones) en señales eléctricas (voltaje). Estas señales analógicas, después de varios procesos de
amplificación y conversión, serán digitalizadas para visualizarlos en el ordenador. Existen actualmente nuevos sistemas de conversión a valores digitales que
permiten modificar valores de compensación de señales fluorescentes y escalas lin-log posteriormente a la adquisición de datos.
La perfecta integración de estos sistemas permite un rápido y preciso análisis de un elevado número de células en poco tiempo.
Sistema electrónico Convierte las señales ópticas a señales electrónicas usando detectores de luz y
amplificadores de señal.
•Cada medida tomada de cada detector es referida como un parámetro.
•Los datos son adquiridos como una lista de valores de cada parámetro (variable) por cada evento
(célula)
•La conversión de la señal de voltaje analógico a digital da como resultado valores que son
mostrados en un eje dividido en canales.
•Cada canal corresponde a un valor de voltaje de la señal.
Sistema electrónico: visualización Los datos se muestran en forma de una gráfica a través de un
programa (software).
Proceso
La suspensión celular es preparada previamente con anticuerpos monoclonales conjugados con diferentes fluorocromos (FITC, PE, PerCP, PECy5, APC, etc.) o
sondas fluorescentes (PI, DHR, DiOC,...) y es introducida en el sistema hidráulico de manera que las células atraviesen individualmente la cámara de flujo,
donde el haz del laser intercepta las células. El contacto del haz del láser con una célula produce dos tipos diferentes de dispersión: frontal y lateral (90º). La
dispersión frontal (Forward Scatter) nos da información acerca del tamaño celular, mientras que la dispersión lateral (Side Scatter) nos informa de
la complejidad celular. Los fluorocromos de los anticuerpos monoclonales o sondas presentes en la membrana o el interior celular son a la vez excitados por la
luz del láser y generan fluorescencias que son recogidas por el sistema óptico para su posterior procesamiento y digitalización.
Aplicaciones
VCVCVN
APLICACIONES