Un citómetro de flujo tiene tres sistemas principales: un sistema hidráulico que controla el flujo de las células, un sistema óptico que incluye láseres y detectores de luz, y un sistema electrónico-informático. Este último convierte las señales ópticas en señales eléctricas usando detectores de luz y amplificadores, digitaliza los datos, y los visualiza a través de un software. La integración de estos sistemas permite el análisis rápido y preciso de un gran número de células.
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Un citómetro de flujo tiene tres sistemas principales: un sistema hidráulico que controla el flujo de las células, un sistema óptico que incluye láseres y detectores de luz, y un sistema electrónico-informático. Este último convierte las señales ópticas en señales eléctricas usando detectores de luz y amplificadores, digitaliza los datos, y los visualiza a través de un software. La integración de estos sistemas permite el análisis rápido y preciso de un gran número de células.
Un citómetro de flujo tiene tres sistemas principales: un sistema hidráulico que controla el flujo de las células, un sistema óptico que incluye láseres y detectores de luz, y un sistema electrónico-informático. Este último convierte las señales ópticas en señales eléctricas usando detectores de luz y amplificadores, digitaliza los datos, y los visualiza a través de un software. La integración de estos sistemas permite el análisis rápido y preciso de un gran número de células.
Un citómetro de flujo tiene tres sistemas principales: un sistema hidráulico que controla el flujo de las células, un sistema óptico que incluye láseres y detectores de luz, y un sistema electrónico-informático. Este último convierte las señales ópticas en señales eléctricas usando detectores de luz y amplificadores, digitaliza los datos, y los visualiza a través de un software. La integración de estos sistemas permite el análisis rápido y preciso de un gran número de células.
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Descripción
Un citómetro de flujo tiene tres sistemas principales:
Sistema hidráulico Se compone de un conjunto de controles neumáticos y fluídicos necesarios para establecer un flujo laminar que permita a la suspensión celular atravesar la cámara de flujo de forma estable e individualizada.
Sistema óptico Consta de: láser, filtros, lentes. La fuente de luz es producida normalmente por un o varios láser. En la mayoría de los citómetros se instala un láser de gas (comunmente argón) refrigerado por aire, que produce una luz monocromática de 488 nm como láser principal. Esta luz es utilizada para la excitación de la mayoría de los fluorocromos y provoca la dispersión de luz que nos informa de las características celulares. Las últimas tecnologías han desarrollado láser de estado sólido que están reemplazando a los láser de gas por su menor consumo y mayor durabilidad. La presencia de varios láser acompañando al primario nos permitirá ampliar el abanico de lectura de fluorocromos, desde el violeta hasta el rojo lejano. La luz dispersada y la fluorescencia será recogida por un sistema de filtros y espejos que dirigirán las señales a los sensores (fotodiodo/fotomultiplicadores).
Sistema electrónico-informático Los fotomultiplicadoresconvierten la luz dispersa (fotones) en señales eléctricas (voltaje). Estas señales analógicas, después de varios procesos de amplificación y conversión, serán digitalizadas para visualizarlos en el ordenador. Existen actualmente nuevos sistemas de conversión a valores digitales que permiten modificar valores de compensación de señales fluorescentes y escalas lin-log posteriormente a la adquisición de datos.
La perfecta integración de estos sistemas permite un rápido y preciso análisis de un elevado número de células en poco tiempo.
Sistema electrónico Convierte las señales ópticas a señales electrónicas usando detectores de luz y amplificadores de señal. •Cada medida tomada de cada detector es referida como un parámetro. •Los datos son adquiridos como una lista de valores de cada parámetro (variable) por cada evento (célula) •La conversión de la señal de voltaje analógico a digital da como resultado valores que son mostrados en un eje dividido en canales. •Cada canal corresponde a un valor de voltaje de la señal. Sistema electrónico: visualización Los datos se muestran en forma de una gráfica a través de un programa (software). Proceso
La suspensión celular es preparada previamente con anticuerpos monoclonales conjugados con diferentes fluorocromos (FITC, PE, PerCP, PECy5, APC, etc.) o sondas fluorescentes (PI, DHR, DiOC,...) y es introducida en el sistema hidráulico de manera que las células atraviesen individualmente la cámara de flujo,
donde el haz del laser intercepta las células. El contacto del haz del láser con una célula produce dos tipos diferentes de dispersión: frontal y lateral (90º). La dispersión frontal (Forward Scatter) nos da información acerca del tamaño celular, mientras que la dispersión lateral (Side Scatter) nos informa de la complejidad celular. Los fluorocromos de los anticuerpos monoclonales o sondas presentes en la membrana o el interior celular son a la vez excitados por la luz del láser y generan fluorescencias que son recogidas por el sistema óptico para su posterior procesamiento y digitalización.
Aplicaciones
Detección de subpoblaciones celulares (inmunofenotipado)
