LINEA LIQUIDA

Amilasa 405
C Método cinético a 405 nm para la determinación de
AA
amilasa en suero, plasma u orina. Sustrato CNPG3

SIGNIFICACION CLINICA ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE

La amilasa, producida principalmente en el páncreas exó- ALMACENAMIENTO
crino y en las glándulas salivales, escinde los enlaces α-1-4 Reactivo Provisto: estable en refrigerador (2-10oC) hasta
glucosídicos de los polisacáridos (almidón y glucógeno). la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Se encuentra elevada en el suero de pacientes con pan-
creatitis aguda alcanzando los valores más elevados entre INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
las 24 y 30 horas posteriores al ataque, declinando luego REACTIVOS
para volver a los niveles normales entre las 24 y 48 horas El Reactivo A puede presentar una coloración amarillenta
siguientes. que no afecta su funcionamiento.
También se ve aumentada en este caso la excreción urinaria Cuando el espectrofotómetro ha sido llevado a cero con
de la enzima, persistiendo la hiperamilasuria 3 a 5 días, luego agua destilada, las lecturas de absorbancia del Reactivo A
de que la actividad sérica ha alcanzado los niveles normales. superiores a 0,500 D.O. (a 405 nm) son indicio de deterioro
También es posible encontrar valores aumentados en cual- del mismo.
quier caso de "abdomen agudo" o intervención quirúrgica en
regiones próximas al páncreas. MUESTRA
La parotiditis bacteriana y paperas se asocian también con Suero, plasma heparinizado u orina
elevaciones en los niveles de amilasa sérica. a) Recolección: si se utiliza suero, obtener de la manera
usual. Separar el suero del coágulo lo más rápidamente
FUNDAMENTOS DEL METODO posible. En caso de usar plasma éste debe ser heparinizado.
La α-amilasa hidroliza el sustrato definido 2-cloro-p-nitrofenil- Si se emplea orina, la determinación puede efectuarse en
α-D-maltotriósido (CNP-G3) para liberar 2-cloro-p-nitrofenol una muestra de orina ocasional.
(CNP), formándose 2-cloro-nitrofenil-α-D-maltósido (CNP- b) Aditivos: en caso de usar plasma, debe utilizarse hepa-
G2), maltotriosa (G3) y glucosa. El CNP absorbe a 405 nm y la rina para su obtención. Si se usa orina ver d).
velocidad de aparición del color es directamente proporcional c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan
a la actividad enzimática. interferencias por bilirrubina hasta 22 mg/dl (220 mg/l),
hemoglobina hasta 180 mg/dl, triglicéridos hasta 1400 mg/dl
REACTIVOS PROVISTOS (14 g/l), ni heparina hasta 50 U/ml.
A. Reactivo A: solución conteniendo CNP-G3 2,25 mmol/l, En el caso de orina no debe agregarse ácido clorhídrico
cloruro de calcio 5 mmol/l, cloruro de sodio 70 mmol/l, tiocia- como conservador.
nato de potasio 900 mmol/l y buffer MES pH 6, 100 mmol/l. Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las
drogas en el presente método.
INSTRUCCIONES PARA SU USO d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: en
Reactivo A: listo para usar. suero la amilasa es estable durante una semana a tempe-
ratura ambiente (si se evita la contaminación bacteriana) o
PRECAUCIONES varios meses refrigerada.
El Reactivo A es para uso diagnóstico "in vitro". En orina, si la muestra no se procesa en el día, es conve-
El Reactivo A es irritante. H319: Provoca irritación ocular niente ajustar el pH aproximadamente a 7 (con hidróxido de
grave. P262: Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. sodio) dado que el pH ácido inactiva la enzima irreversible-
P305 + P351 + P338: EN CASO DE CONTACTO CON LOS mente. A pH 7 puede conservarse refrigerada por lo menos
OJOS: Enjuagar cuidadosamente con agua durante varios 10 días sin pérdida de actividad, si no existe contaminación
minutos. Quitar las lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. bacteriana.
Seguir enjuagando. P302 + P352: EN CASO DE CONTACTO
CON LA PIEL: Lavar con agua y jabón abundantes. P280: MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección. - Espectrofotómetro.
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales - Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. - Cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de - Baño de agua a la temperatura de reacción seleccionada.
acuerdo a la normativa local vigente. - Cronómetro.

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CONDICIONES DE REACCION ** Estos valores de referencia se obtuvieron de una población
- Longitud de onda: 405 nm sana (n = 40), de ambos sexos, con edades comprendidas
- Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37oC entre 17 y 40 años, con una dieta mixta normal, sin síntomas
- Tiempo de reacción: 2 minutos de enfermedad aparente.
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
PROCEDIMIENTO valores de referencia.
A) 25-30oC CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SI
En una cubeta mantenida a la temperatura seleccionada, Amilasa (U/l) x 0,017 = Amilasa (ukat/l)
colocar:
Reactivo A 2 ml LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Preincubar 3-4 minutos. Luego agregar:
No pipetear con la boca.
Muestra 100 ul Constituye una causa de resultado erróneo la contaminación
del Reactivo A con saliva, dada la elevada actividad amilásica
Mezclar inmediatamente y leer absorbancia luego de 1
de la misma. En tal caso, descartar el Reactivo.
y 2 minutos. Determinar la diferencia entre la segunda
Evitar el contacto con elementos de goma (tapones, contra-
y la primera lectura. Utilizar este valor para los cálculos.
tapas) que deterioran el Reactivo A.
Se pueden disminuir proporcionalmente los volúmenes
usando 1 ml de Reactivo A y 50 ul de Muestra.
PERFORMANCE
B) 37oC a) Reproducibilidad: procesando simultáneamente repli-
Como la actividad a esta temperatura es mayor, emplear cados de una misma muestra en un mismo día se obtiene:
50 ul de Muestra. Seguir el procedimiento según A). Nivel D.S. C.V.
Se pueden disminuir los volúmenes usando 1 ml de 51 U/l ± 0,978 U/l 1,9 %
Reactivo A y 20 ul de Muestra.
467 U/l ± 2,139 U/l 0,46 %
b) Sensibilidad: depende del fotómetro empleado. En es-
CALCULO DE LOS RESULTADOS pectrofotómetro a 405 nm con cubetas de caras paralelas de
Amilasa (U/l) = ∆A/min x factor* 1 cm de espesor, para un ∆A/min de 0,001 el mínimo cambio
de actividad detectable será de 4 U/l (a 37oC).
Temperatura Reactivo A Muestra Factor c) Linealidad: la reacción es lineal hasta una actividad de
2 ml 100 ul 1.628 amilasa de 2000 U/l. Para valores superiores, usar muestra
25-30 C
o
1 ml 50 ul 1.628 diluida con solución salina, repetir la determinación y multi-
plicar el resultado por el factor de dilución.
37oC 2 ml 50 ul 3.178
1 ml 20 ul 3.953
PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOS
*los factores están calculados de acuerdo a la siguiente Para las instrucciones de programación consulte el manual
fórmula general: del usuario del analizador en uso.
VT
Factor = PRESENTACION
VM x b x εCNP x 10-3 - 1 x 37 ml (Cód. 1008142)*
donde: - 3 x 10 ml (Cód. 1021404)
VT: volumen total - 3 x 10 ml (Cód. 1009326)
VM: volumen de muestra - 4 x 20 ml (Cód. 1009243)
b: paso óptico - 4 x 20 ml (Cód. 1009603)
εCNP: coeficiente de absortividad milimolar del CNP - 4 x 20 ml (Cód. 1009910)
10-3: factor de conversión (absortividad milimolar a micromolar)
BIBLIOGRAFIA
METODO DE CONTROL DE CALIDAD - Rauscher, E. et al - Clin. Chem. 31/1:14, 1985.
Si la muestra a ensayar es suero, procesar 2 niveles de un - Tietz, N. - Clinical Guide to Laboratory Tests - W.B. Saunders Co., 1983.
material de control de calidad (Standatrol S-E 2 niveles) con - Lorenzo, L.; Demaría, I.; Setta, F.; Taborda, M. - 44th Na-
actividades conocidas de amilasa, con cada determinación. tional Meeting, AACC, 19-23 julio, 1992, Chicago, Illinois.
Clin. Chem. 38/6:935, Abs. 3, 1992.
VALORES DE REFERENCIA - Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
Molecular - Química Clínica 15/1:51, 1996.
Temperatura 25oC 30oC* 37oC - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
Suero hasta 84 U/l 100 U/l 125 U/l AACC Press, 4th ed., 2001.
Orina ocasional hasta** 455 U/l 540 U/l 680 U/l - NCCLS document “Evaluation of the Linearity of Quantita-
* Calculados tive Analytical Methods”, EP6-P (1986).

*
Marcado CE pendiente 861261024 / 01 p. 2/9
 LINHA LÍQUIDA

Amilasa 405
C Método cinético a 405 nm para a determinação de
AA
amilase em soro, plasma ou urina. Substrato CNPG3

SIGNIFICADO CLÍNICO ESTABILIDADE E INSTRUÇÕES DE

A amilase, produzida principalmente no pâncreas exócrino e ARMAZENAMENTO
nas glândulas salivares; divide as uniões α 1-4 glicosídicas dos Reagente Fornecido: estável sob refrigeração (2-10oC) até
polissacarídeos (amido e glicógeno). Encontra-se aumentada no a data de vencimento indicada na embalagem.
soro de pacientes com pancreatite aguda, alcançando os valores
mais elevados entre 24 e 30 horas após o ataque, declinando INDÍCIOS DE INSTABILIDADE OU DETERIORAÇÃO
logo para voltar aos níveis normais nas 24 e 48 horas seguintes. DOS REAGENTES
A excreção urinária da enzima também está aumentada O Reagente A pode desenvolver uma coloração amarelada
neste caso, persistindo a hiperamilasúria por 3 a 5 dias, que não afeta seu funcionamento.
tão logo a atividade sérica tenha alcançado níveis normais. Quando o espectrofotômetro for zerado com água destilada,
Também é possível encontrar valores aumentados em qual- leituras de absorbância do Reagente A superiores a 0,500 D.O.
quer caso de “abdômen agudo” ou intervenção cirúrgica em (a 405 nm) são indício de deterioração do mesmo.
regiões próximas ao pâncreas.
As parotidites bacterianas e caxumba também estão relacio- AMOSTRA
nadas com elevações nos níveis de amilase sérica. Soro, plasma heparinizado ou urina
a) Coleta: caso seja utilizado soro, obter da maneira
FUNDAMENTOS DO MÉTODO usual, separando o soro do coágulo o mais rapidamente
A α-amilase hidrolisa o substrato definido 2-cloro-p-nitrofenil- possível.
α-D-maltotriósido (CNP-G3) para liberar 2-cloro-p-nitrofenol No caso de se utilizar plasma, este deve ser heparinizado.
(CNP), formando-se 2-cloro-nitrofenil-α-D-maltósido (CNP- Se for empregada urina, a determinação pode ser feita em
G2), maltotriose (G3) e glicose. O CNP absorve a 405 nm e amostra de urina ocasional.
a velo-cidade de formação da cor é diretamente proporcional b) Aditivos: caso de se utilizar plasma, deve-se utilizar
à atividade enzimática. heparina para a sua obtenção. Se for utilizada urina, ver d).
c) Substâncias interferentes conhecidas: não se obser-
REAGENTES FORNECIDOS vam interferências por bilirrubina até 22 mg/dl (220 mg/l),
A. Reagente A: solução contendo CNP-G3 2,25 mmol/l, clo- hemoglobina até 180 g/dl, triglicerídeos até 1400 mg/dl (14 g/l),
reto de cálcio 5 mmol/l, cloreto de sódio 70 mmol/l, tiocianato nem heparina até 50 U/ml. No caso de urina, não se deve adi-
de potássio 900 mmol/l e tampão MES pH 6, 100 mmol/l. cionar ácido clorídrico como conservante.
Referência bibliográfica de Young para efeitos de drogas
INSTRUÇÕES DE USO neste método.
Reagente A: pronto para uso. d) Estabilidade e instruções de armazenamento: no soro,
a amilase é estável durante uma semana a temperatura
PRECAUÇÕES ambiente (se a contaminação bacteriana for evitada) ou
O Reagente A é para uso diagnóstico "in vitro". vários meses sob refrigeração.
O Reagente A é irritante. H319 Provoca irritação ocular grave. Na urina, se a amostra não for processada no dia, é con-
P262 Não pode entrar em contacto com os olhos, a pele ou veniente ajustar o pH aproximadamente a 7 (com hidróxido
a roupa. P305 + P351 + P338 SE ENTRAR EM CONTACTO de sódio), dado que o pH ácido inativa a enzima irreversi-
COM OS OLHOS: enxaguar cuidadosamente com água du- velmente. A pH 7, pode ser conservada sob refrigeração
rante vários minutos. Se usar lentes de contacto, retire-as, se pelo menos 10 dias, sem perda de atividade, se não houver
tal lhe for possível. Continuar a enxaguar. P302 + P352 SE contaminação bacteriana.
ENTRAR EM CONTACTO COM A PELE: lavar com sabonete
e água abundantes. P280 Usar luvas de protecção/vestuário MATERIAL NECESSÁRIO (não fornecido)
de protecção/protecção ocular/protecção facial. - Espectrofotômetro.
Utilizar os reagentes observando as precauções habituais - Micropipetas e pipetas para medir os volumes indicados.
de trabalho no laboratório de análises clínicas. - Cubetas espectrofotométricas de faces paralelas.
Todos os reagentes e as amostras devem ser descartadas - Banho-maria à temperatura de reação selecionada.
conforme à regulação local vigente. - Cronômetro.

861261024 / 01 p. 3/9
CONDIÇÕES DE REAÇÃO ** Estes valores de referência obtiveram-se a partir de uma
- Comprimento de onda: 405 nm população sadia (n = 40), de ambos sexos, com idades
- Temperatura de reação: 25, 30 ou 37oC compreendidas entre 17 e 40 anos, com uma ingesta normal,
- Tempo de reação: 2 minutos sem sintomas de doença aparente.
Recomenda-se que cada laboratório estabeleça sues pró-
prios valores de referência.
PROCEDIMENTO
A) 25-30oC CONVERSÃO DE UNIDADES AO SISTEMA SI
Em uma cubeta mantida à temperatura selecionada, Amilase (U/l) x 0,017 = Amilase (ukat/l)
colocar:
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
Reagente A 2 ml
Vide Substâncias interferentes conhecidas em AMOSTRA.
Preincubar por 3-4 minutos. Adicionar, a seguir: Não pipetar com a boca.
A contaminação do Reagente A com saliva, constitui uma causa
Amostra 100 ul
de resultado errôneo, desde que a mesma contém elevada
Misturar imediatamente e ler a absorbância nos tempos atividade amilásica. Em tal caso, deve-se descartar o Reagente.
1 e 2 minutos. Determinar a diferença entre a segunda Evitar o contato com elementos de borracha (tampões,
e a primeira leitura. Utilizar este valor para os cálculos. batoques) porque deterioram o Reagente A.
Podem-se diminuir proporcionalmente os volumes utili-
zando 1 ml de Reagente A e 50 ul de Amostra. DESEMPENHO
B) 37oC a) Reprodutibilidade: processando simultaneamente dupli-
Como a atividade a esta temperatura é maior, empregar catas de uma mesma amostra em um mesmo dia, é obtido:
50 ul de Amostra. Seguir o procedimento segundo A). Nível D.P. C.V.
Podem-se diminuir os volumes utilizando 1 ml de Rea- 51 U/l ± 0,978 U/l 1,9 %
gente A e 20 ul de Amostra. 467 U/l ± 2,139 U/l 0,46 %
b) Sensibilidade: depende do fotômetro empregado. Em
CÁLCULO DOS RESULTADOS espectrofotômetro a 405 nm com cubetas de faces paralelas
Amilase (U/I) = ∆A/min x fator* de 1 cm de espessura, para um ∆A/min de 0,001 a menor
alteração detectável será de 4 U/l (a 37oC).
Temperatura Reagente A Amostra Fator c) Linearidade: a reção é linear até uma atividade de ami-
lase de 2000 U/l. Para valores superiores deve-se utilizar
2 ml 100 ul 1.628
25-30 Co
amostra diluída com solução salina, repetir a determinação
1 ml 50 ul 1.628
e multiplicar o resultado pelo fator de diluição.
37oC 2 ml 50 ul 3.178
1 ml 20 ul 3.953 PARÂMETROS PARA ANALISADORES AUTOMÁTICOS
Para a programação consultar o manual de uso do analisador
*os fatores são calculados segundo a seguinte fórmula geral:
a ser utilizado.
VT
Fator = APRESENTAÇÃO
VA x b x εCNP x 10-3 - 1 x 37 ml (Cód. 1008142)*
onde: - 3 x 10 ml (Cód. 1021404)
VT: volume total - 3 x 10 ml (Cód. 1009326)
VA: volume da amostra - 4 x 20 ml (Cód. 1009243)
b:passo óptico - 4 x 20 ml (Cód. 1009603)
εCNP: coeficiente de absortividade milimolar do CNP - 4 x 20 ml (Cód. 1009910)
10-3: fator de conversão (absortividade milimolar a micromolar)
REFERÊNCIA
MÉTODO DE CONTROLE DE QUALIDADE - Rauscher, E. et al - Clin. Chem. 31/1:14 (1985).
Se a amostra a ensaiar for soro, processar 2 níveis de um ma- - Tietz, N. - Clinical Guide to Laboratory Tests - W.B. Saunders Co., 1983.
terial de controle de qualidade (Standatrol S-E 2 niveles) com - Lorenzo, L.; Demaría, I.; Setta, F.; Taborda, M. - 44th Na-
atividades conhecidas de amilase, com cada determinação. tional Meeting, AACC, 19-23 julio, 1992, Chicago, Illinois.
- Clin. Chem. 38/6:935, Abs.3, 1992.
VALORES DE REFERÊNCIA - Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
Molecular - Química Clínica 15/1:51, 1996.
Temperatura 25oC 30oC* 37oC
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
Soro até 84 U/l 100 U/l 125 U/l AACC Press, 4th ed., 2001.
Urina ocasional até** 455 U/l 540 U/l 680 U/l - NCCLS document “Evaluation of the Linearity of Quantita-
* Calculados tive Analytical Methods”, EP6-P (1986).

* Marcação CE pendente 861261024 / 01 p. 4/9

 LIQUID LINE

Amilasa 405
C AA
Kinetic method at 405 nm for the determination of
amylase in serum, plasma or urine. CNPG3 substrate

SUMMARY STABILITY AND STORAGE INSTRUCTIONS

Amylase, mainly produced in the exocrine fraction of the Provided Reagent: stable in refrigerator (2-10oC) until the
pancreas and salivary glands, splits α-1-4 glycosidic bonds expiration date shown on the box.
of polysaccharides (starch and glycogen).
Serum amylase levels increase in patients with acute pancre- INSTABILITY OR DETERIORATION OF REAGENTS
atitis, reaching its highest values between 24 and 30 hours The Reagent A may develop a yellowish coloration that does
after onset, then returning to normal levels during the 24 to 48 not affect its performance. Suspect deterioration of Reagent
following hours. In this case the urinary output of the enzyme A if absorbance readings are higher than 0.500 O.D. (at
is also increased, hyperamylasuria lasting 3 to 5 days, once 405 nm) after setting instrument to zero with distilled water.
serum activity has reached normal levels.
It is also possible to find increased values in cases of “acute SAMPLE
abdomen” or surgical operation surrounding the pancreas. Serum, heparinized plasma or urine
Both bacterial parotiditis and mumps, which obstruct salivary a) Collection: if serum is used, collect in the usual way.
amylase secretion, are also related to increases of serum Separate serum from clot as soon as possible. In case
amylase levels. plasma is used, it should be heparinized. If urine is used,
assay can be performed on an occasional urine sample.
PRINCIPLE b) Additives: in case plasma is used, use heparin for col-
α-amylase hydrolyzes the 2-chloro-p-nitrophenyl-α-D-mal- lection. If urine is used, refer to d).
totrioside (CNP-G3) definite substrate to release 2-chloro-p- c) Known interfering substances: no interferences are
nitrophenol (CNP), resulting in 2-chloro-nitrophenyl-α-D-malt- observed by: bilirubin up to 22 mg/dl (220 mg/l), hemoglobin
oside (CNP-G2), maltotriose (G3) and glucose. CNP absorbs up to 180 mg/dl, triglycerides up to 1400 mg/dl (14 g/l), nor
at 405 nm and color development is directly proportional to heparin up to 50 U/ml.
enzyme activity. Do not add hydrochloric acid as preservative for urine.
The use of a definite substrate, a substance of known struc- See Young, D.S. in References for effect of drugs on the
ture and molecular weight, enables expression of results in present method.
U/I and does not require additional enzymes. d) Stability and storage instructions: serum amylase is
stable for one week at room temperature (provided bac-
PROVIDED REAGENTS terial contamination is avoided) or for several months in
A. Reagent A: solution containing 2.25 mmol/l CNP-G3, 5 mmol/l refrigerator.
calcium chloride, 70 mmol/l sodium chloride, 900 mmol/l If urine amylase sample is not assayed on the same day,
potassium thiocyanate and MES buffer pH 6, 100 mmol/l. it is advisable to set pH at about 7 (with sodium hydroxide)
since acid pH irreversibly inactivates the enzyme. With a pH
INSTRUCTIONS FOR USE 7, sample could be kept for at least 10 days in refrigerator
Reagent A: ready to use. without any loss of activity, provided there is no bacterial
contamination.
WARNINGS
The Reagent A is for “in vitro” diagnostic use. REQUIRED MATERIAL (non-provided)
Reagent A is irritant. H319: Causes serious eye irritation. P262 - Spectrophotometer
Do not get in eyes, on skin, or on clothing. P305 + P351 + P338 - Micropipettes and pipettes to measure stated volumes
IF IN EYES: Rinse cautiously with water for several minutes. - Spectrophotometric square cuvettes
Remove contact lenses, if present and easy to do. Continue - Water bath at selected reaction temperature
rinsing. P302 + P352 IF ON SKIN: Wash with plenty of soap - Stopwatch
and water. P280 Wear protective gloves/protective clothing/eye
protection/face protection. ASSAY CONDITIONS
Use the reagents according to the working procedures for - Wavelength: 405 nm
clinical laboratories. The reagents and samples should be - Reaction temperature: 25, 30 or 37oC
discarded according to the local regulations in force. - Reaction time: 2 minutes

861261024 / 01 p. 5/9
 SI SYSTEM UNITS CONVERSION
PROCEDURE Amylase (U/l) x 0.017 = Amylase (ukat/l)
A) 25-30oC
PROCEDURE LIMITATIONS
In a cuvette at the selected temperature, place:
See Known interfering substances under SAMPLE.
Reagent A 2 ml Never pipette by mouth.
Preincubate 3-4 minutes. Then add: The contamination of the Reagent A with saliva constitutes
cause of erroneous results, since it contains elevated amy-
Sample 100 ul
lase activity. In this case, discard the Reagent.
Mix at once and read absorbance after 1 and 2 minutes. Avoid the contact with rubber elements (rubber caps, inside
Determine the difference between second and first read- covers) which deteriorate the Reagent A.
ings. Use this value for calculations. Volumes can be
proportionally reduced using 1 ml Reagent A and 50 ul PERFORMANCE
Sample. a) Reproducibility: simultaneously processing replicates
of the same sample in the same day, the following values
B) 37oC
were obtained:
Since the activity is greater at this temperature, use 50 ul
as sample. Follow the same procedure as indicated in A). Level S.D. C.V.
Volumes can be reduced using 1 ml Reagent A and 20 ul 51 U/l ± 0.978 U/l 1.9 %
Sample. 467 U/l ± 2.139 U/l 0.46 %
b) Sensitivity: depends on the photometer used. In spec-
trophotometer at 405 nm (with 1 cm optical length square
CALCULATIONS cuvettes) for ∆A/min of 0.001, the smallest detectable activity
Amylase (U/l) = ∆A/min x factor* change will be of 4 U/l (at 37oC).
Temperature Reagent A Sample Factor c) Linearity: the reaction is linear up to 2000 U/l amylase
activity. For higher values use sample diluted with saline
25-30 C o
2 ml 100 ul 1,628 solution, repeat the test and multiply the results by the dilu-
1 ml 50 ul 1,628 tion factor.
37oC 2 ml 50 ul 3,178 PARAMETERS FOR AUTOANALYZERS
1 ml 20 ul 3,953 For programming instructions check the user manual of the
*the factors are calculated following the formula below: autoanalyzer in use.
TV WIENER LAB PROVIDES
Factor =
SV x b x εCNP x 10-3 - 1 x 37 ml (Cat. Nº 1008142)*
- 3 x 10 ml (Cat. Nº 1021404).
where: - 3 x 10 ml (Cat. Nº 1009326).
TV: total volume - 4 x 20 ml (Cat. Nº 1009243).
SV: sample volume - 4 x 20 ml (Cat. Nº 1009603).
b: light pass - 4 x 20 ml (Cat. Nº 1009910).
εCNP: CNP milimolar absorption oefficient
10-3: conversion factor (milimolar to micromolar) REFERENCES
- Rauscher, E. et al - Clin. Chem. 31/1:14, 1985.
QUALITY CONTROL METHOD - Tietz, N. - Clinical Guide to Laboratory Tests - W.B. Saun-
Each time the test is performed, analyze two levels of a qual- ders Co., 1983.
ity control material (Standatrol S-E 2 niveles) with known - Lorenzo, L.; Demaría, I.; Setta, F.; Taborda, M. - 44th Na-
amylase activity. tional Meeting, AACC, 19-23 julio, 1992, Chicago, Illinois.
Clin. Chem. 38/6:935, Abs. 3, 1992.
REFERENCE VALUES - Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología
Temperature 25oC 30oC* 37oC Molecular - Química Clínica 15/1:51, 1996.
Serum up to 84 U/l 100 U/l 125 U/l - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
Occasional urine up to** 455 U/l 540 U/l 680 U/l AACC Press, 4th ed., 2001.
*Calculated
**These reference values were obtained from a healthy
population (n = 40), of box sexes, aged between 17 and
40 years old, with a normal diet and with no symptoms of
apparent disease.
It is recommended that each laboratory establishes its own
reference values.

* CE mark pending 861261024 / 01 p. 6/9

 LINIA PŁYNNA

Amilasa 405
Nr kat. 1021404 Nr kat. 1009603
C Kinetyczna metoda przy 405 nm dla oznaczania amylazy
AA
Nr kat. 1009243 Nr kat. 1009910 w surowicy, osoczu, lub moczu. Substrat CNPG3
Nr kat. 1009326 Nr kat. 1008142

WSTĘP klinicznych.
Amylaza jest głównie produkowana przez trzustkę jako Odczynniki i materiał badany powinni być odrzucone zgodnie
wydzielina egzokrynna oraz przez ślinianki, trawi wiązania z lokalnymi przepisami.
á-1-4 glikozydowe polisacharydów (skrobii i glikogenu).
Poziom amylazy wzrasta u pacjentów z ostrym zapaleniem TRWAŁOŚĆ I WARUNKI PRZECHOWYWANIA
trzustki, osiągając najwyższe wartości pomiędzy 24 a 30 Dostarczone odczynniki: stabilne w lodówce (2-10oC) do
godziną od rozpoczęcia się procesu i powraca do normy końca daty ważności umieszczonej na opakowaniu.
w ciągu następnych 24 do 48 godzin. W takich sytuacjach
pojawia się również zwiększone wydzielanie enzymu z BRAK TRWAŁOŚCI I POGORSZENIE JAKOŚCI
moczem, hyperamylazuria trwająca od 3 do 5 dni, podczas ODCZYNNIKÓW
gdy poziom w surowicy krwi osiąga wartości prawidłowe. W Odczynniku A  może pojawić się zabarwienie żółtawe
Podniesione wartości możemy otrzymać również w i nie wpływa to na jakość testu. Należy podejrzewać
przypadku "ostrego brzucha" czy operacji jamy brzusznej pogorszenie jakości Odczynnika A gdy absorbancja jest
w okolicy trzustki. Ponadto bakteryjne zapalenia przyusznic wyższa od 0,500 O.D. (405 nm) po ustawieniu aparatu na
jak i nagminne zapalenie przyusznic, które prowadzi do zero przy wodzie destylowanej.
upośledzenia wydzielania amylazy ślinowej także prowadzą
do wzrostu enzymu w surowicy krwi. MATERIAŁ BADANY
Surowica, osocze z heparyną lub mocz.
ZASADA DZIAŁANIA a) Pobranie: pobrać zwykłą metodą jeśli używana jest surowica.
α-amylaza hydrolizuje 2-chloro-p-nitrofenylo-α-D- Oddzielić surowicę od skrzepu jak najszybciej. W przypadku
maltotriozyd (2-chloro-p-nitrophenyl-α-D-mal-totrioside użycia osocza, należy pobrać na heparynę. Jeśli używany jest
CNP-G3) uwalniając 2-chloro-p-nitrofenol (CNP), 2-chloro- mocz, analiza może być wykonana na dowolnej próbce moczu.
p-nitrofenylo-α-D-maltozę (CNP-G2), maltotriozę (G3) i b) Substancje dodatkowe: w przypadku użycia osocza, pobrać
glukozę. CNP absorbuje długość fali 405 nm i pojawianie krew na heparynę. Jeśli używany jest mocz, patrz punkt d).
się koloru jest wprost proporcjonalne do aktywności c) Znane interakcje: nie obserwuje się interakcji przy:
enzymatycznej. Zastosowanie substratu końcowego, bilirubinie do poziomu 22 mg/dl (220 mg/l), hemoglobinie do
substancji o znanej strukturze i masie cząsteczkowej, poziomu 180 mg/dl, trójglicerydów do poziomu 1400 mg/dl
pozwala na podanie wyniku w U/I i nie wymaga zastosowania (14 g/l), przy heparynie do poziomu 50 U/ml. Nie używać
dodatkowych enzymów. kwasu chlorowodorowego jako konserwantu przy badaniu
moczu. Sprawdź źródło: Young, D.S. w sprawie wpływu
DOSTARCZONE ODCZYNNIKI leków w tej metodzie.
A. Odczynnik A: roztwór zawierający 2,25 mmol/l CNP-G3, d) Trwałość i warunki przechowywania: w surowicy,
5 mmol/l chlorku wapnia, 70 mmol/l chlorku sodu, 900 mmol/l amylaza jest stabilna przez jeden tydzień w temperaturze
rodanku potasu i MES bufor pH 6, 100 mmol/l. pokojowej (pod warunkiem  uniknięcia  zanieczyszczenia
bakteryjnego) lub przez kilka miesięcy w lodówce.
INSTRUKCJA UŻYCIA Jeśli analizowana próbka moczu nie jest badana w tym samym
Odczynnik A: gotowy do użycia. dniu, wskazana jest zmiana pH na ok. 7 (wodorotlenkiem
sodowym) z kwaśnego pH w którym  dochodzi do
OSTRZEŻENIA nieodwracalnego zahamowania aktywności enzymu. Przy
Odczynnik A wyłącznie do użycia "in vitro". pH 7 próbkę będzie można przechowywać przynajmniej
H319 Działa drażniąco na oczy. P262 Chronić przed kon- przez 10 dni w lodówce bez utraty aktywności, pod
taktem ze skórą, oczami i odzieżą. P305 + P351 + P338 W warunkiem uniknięcia zanieczyszczenia bakteryjnego.
PRZYPADKU DOSTANIA SIĘ DO OCZU: Ostrożnie płukać
wodą przez kilka minut. Wyjąć soczewki kontaktowe, jeżeli WYMAGANE MATERIAŁY I SPRZĘT (niedostarczane)
są i można je łatwo usunąć. Nadal płukać. P302 + P352 W - spektrofotometr,
PRZYPADKU KONTAKTU ZE SKÓRĄ: Umyć dużą ilością - mikropipety i pipety do pomiaru objętości,
wody z mydłem. P280 Stosować rękawice ochronne/odzież - kuwety spektrofotometryczne,
ochronną/ochronę oczu/ochronę twarzy. - łaźnia wodna dla wybranej temperatury reakcji,
Stosować odczynniki zgodnie z procedurami dla laboratoriów - stoper.
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WARUNKI DLA PRZEPROWADZENIA TESTU * Wartości obliczone
- długość fali: 405 nm, ** Powyższe objętości referencyjne zostały otrzymane na
- temperatura reakcji: 25, 30 lub 37oC, zdrowej populacji (n=40), u obu płci, w wieku pomiędzy 17
- czas reakcji: 2 min. a 40 rokiem życia, przy zwykłej diecie oraz bez objawów
chorobowych.
Zaleca się dla każdego laboratorium ustalenie własnych
PROCEDURA wartości referencyjnych.
A) 25-30oC
W kuwecie w wybranej temperaturze umieścić: KONWERSJA JEDNOSTEK SI
Amylaza (U/I) x 0,017 = Amylaza (ukat/l)
Odczynnik A 2 ml
Inkubować wstępnie przez 3-4 minuty. Następnie dodać: OGRANICZENIA PROCEDURY
Patrz znane interakcje z innymi substancjami w rozdziale Materiał.
Materiał 100 ul
Nie pipetować ustami.
Natychmiast wymieszać i odczytać absorbancję po 1 i 2 Zabrudzenia odczynnika A śliną stanowią przyczynę
minutach. Ustalić różnice pomiędzy drugim a pierwszym fałszywych wyników, z powodu wysokiej aktywności amylazy.
odczytem. Użyć tę wartość do obliczeń. Objętości mogą W takim przypadku nie używać Odczynnika.
być proporcjonalnie zmniejszone przy użyciu 1 ml Unikać kontaktu z elementami gumowymi (gumowe
Odczynnika A i 50 ul Materiału. uszczelki, przykrywki) które pogarszają jakość Odczynnika A.
B) 37oC
W tej temperaturze aktywność jest najwyższa, zastosować CHARAKTERYSTYKA TESTU
50 ul MateriałuPostępować jak w procedurze wskazanej a) Powtarzalność: równocześnie w tym samym dniu ten sam
w A). Objętości mogą być zredukowane używając 1 ml materiał został poddany badaniu, otrzymano następujące wartości:
Odczynnika A i 20 ul Materiału. Poziom S.D. C.V.
51 U/l ± 0,978 U/l 1,9 %
467 U/l ± 2,139 U/l 0,46 %
OBLICZENIA
b) Czułość: zależy od używanego fotometru. W spektrofo-
Amylaza (U/I)= ∆A/min x współczynnik*
tometrze przy długości fali 405 nm (z kuwetą kwadratową
Temperatura Odczynnik A Materiał o długości optycznej 1cm) dla ∆A/min 0,001, najmniejsza
Współczynnik
badany wykrywalna zmiana aktywności wynosi 4 U/l (w temp. 37oC).
c) Liniowość: reakcja jest liniowa do 2000 U/l aktywności
25-30oC 2 ml 100 ul 1628
amylazy. Dla wyższych wartości należy rozcieńczyć materiał
1 ml 50 ul 1628
roztworem soli fizjologicznej, powtórzyć badanie i pomnożyć
37oC 2 ml 50 ul 3178 wynik przez współczynnik rozcieńczenia.
1 ml 20 ul 3953
*Współczynniki obliczane są zgodnie z następującą regułą: PARAMETRY DLA ANALIZATORÓW AUTOMATYCZNYCH
Należy zapoznać się z instrukcją obsługi celem
TV programowania analizatorów automatycznych.
współczynnik =
SV x b x εCNP x 10-3 WIENER LAB DOSTARCZA
gdzie: - 1 x 37 ml (Nr kat. 1008142).
TV: total volume - całkowita objętość - 3 x 10 ml (Nr kat. 1021404).
SV: sample volume - objętość materiału - 3 x 10 ml (Nr kat. 1009326).
b: light pass - przechodzące światło - 4 x 20 ml (Nr kat. 1009243).
ε : CNP milimolar absorption coefficient - współczynnik - 4 x 20 ml (Nr kat. 1009603).
CNP
absorbancji milimolowej - 4 x 20 ml (Nr kat. 1009910).
dla CNP przy długości fali 405 nm.
10-3: conversion factor - współczynnik konwersji (milimol do mikromol) ŹRÓDŁA
- Rauscher, E. et al - Clin. Chem. 31/1:14, 1985.
METODA KONTROLI JAKOŚCI - Tietz, N. - Clinical Guide to Laboratory Tests - W.B. Saunders Co., 1983.
W trakcie przeprowadzania badania za każdym razem - Lorenzo, L.; Demaría, I.; Setta, F.; Taborda, M. - 44th Na-
należy przeprowadzić analizę jakości na dwóch poziomach tional Meeting, AACC, 19-23 julio, 1992, Chicago, Illinois.
(Standatrol S-E 2 niveles) ze znaną aktywnością amylazy. Clin. Chem. 38/6:935, Abs. 3, 1992.
- Sociedad Espańola de Bioquímica Clínica y Patología
WARTOŚCI REFERENCYJNE Molecular - Química Clínica 15/1:51, 1996.
Temperatura 25oC 30oC* 37oC - Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
Surowica aż do 84 U/l 100 U/l 125 U/l AACC Press, 4th ed., 2001.
Dowolna próbka - NCCLS document “Evaluation of the Linearity of Quantita-
455 U/l 540 U/l 680 U/l
moczu aż do ** tive Analytical Methods”, EP6-P (1986).

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SÍMBOLOS // SÍMBOLOS // SYMBOLS // OZNACZENIA
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnóstico de Wiener lab. // Os seguintes símbolos
são utilizados nos kits de reagentes para diagnóstico da Wiener lab. // The following symbols are used in the packaging for
Wiener lab. diagnostic reagents kits. // Następujące symbole są zastosowane na opakowaniach zestawów odczynników
diagnostycznych.
Este producto cumple con los requerimientos previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios para el diagnóstico

C "in vitro"// Este produto preenche os requisitos da Diretiva Europeia 98/79 CE para dispositivos médicos de diagnóstico "in vitro"//
This product fulfills the requirements of the European Directive 98/79 EC for "in vitro" diagnostic medical devices// Ten produkt spełnia
wymagania Dyrektywy Europejskiej 98/79 EC dla wyrobów medycznych używanych do diagnozy "in vitro"
P Representante autorizado en la Comunidad Europea// Representante autorizado na Comunidade Europeia// Authorized representative
in the European Community// Autoryzowany przedstawiciel we Wspólnocie Europejskiej
V Uso diagnóstico "in vitro"// Uso médico-diagnóstico "in vitro"// "In vitro" diagnostic medical device// Wyrób do diagnostyki "in vitro"
Contenido suficiente para <n> ensayos// Conteúdo suficiente para <n> testes// Contains sufficient for <n> tests// Zawartość wystar-
X czająca dla <n> badań

Fecha de caducidad// Data de validade// Use by// Użyć przed

H
Límite de temperatura (conservar a)// Limite de temperatura (conservar a)// Temperature limitation (store at)// Ograniczenie dopusz-
l czalnych temperatur

 No congelar// Não congelar// Do not freeze// Nie zamrażać

Riesgo biológico// Risco biológico// Biological risks// Ryzyko biologiczne

F
Volumen después de la reconstitución// Volume após a reconstituição// Volume after reconstitution// Objętość po rozpuszczeniu

Cont. Contenido// Conteúdo// Contents// Zawartość

g Número de lote// Número de lote// Batch code// numer serii

M Elaborado por:// Elaborado por:// Manufactured by:// Wytwórca

Nocivo// Nocivo// Harmful// Substancja szkodliwa

Corrosivo / Cáustico // Corrosivo / Caústico // Corrosive / Caustic// Substancja żrące

Irritante// Irritante// Irritant// Substancja drażniąca

i Consultar instrucciones de uso// Consultar as instruções de uso// Consult instructions for use// Przed użyciem zapoznać się z instrukcją

Calibr. Calibrador// Calibrador// Calibrator// Kalibrator

b Control// Controle// Control// Próba kontrolna

b Control Positivo// Controle Positivo// Positive Control// Próba kontrolna dodatnia

c Control Negativo// Controle Negativo// Negative Control// Próba kontrolna ujemna

h Número de catálogo// Número de catálogo// Catalog number// Numer katalogowy

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.

Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina

Wiener lab.
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
PM-1102-196 2000 Rosario - Argentina
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